CULTIVO DE HONGOS Y LEVADURAS

Meza Ortega Nataly Yisel, Melo Guerrero Mara Camila, Portilla Jaime, Williams Ramos *maria.camy28@hotmail.com Programa de Ingeniera Agroindustrial Cuarto semestre FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL Universidad de Nario, San Juan de Pasto Noviembre 16 de 2011

INTRODUCCIN. El reino de los hongos perteneciente al grupo de las eucariotas esta constituido por dos grandes grupos que son hongos microscpicos y macroscpicos, al primer grupo pertenecen los unicelulares como las levaduras, y al segundo grupo aquellos que son pluricelulares como las setas, al igual que las bacterias estos organismos son causantes de enfermedades provocando grandes perjuicios en la vida del ser humano, los animales y plantas de la misma manera estos toman importancia en la industria farmacutica ya que a partir de estos se fabrican antibiticos, drogas, tonificantes, entre otros. la complejidad que estos presentan dentro de estructura metablica, reproductiva y otras caractersticas que son nicas de este reino proporcionan las caractersticas de las levaduras que son idneas para los procesos de fermentacin de bebidas, han sido de gran importancia para la industria alimentaria a la cual se vinculan la existencia de una gran variedad de hongos comestibles para los cuales se realizan estudios para la mejora de estas cepas que garanticen mayor eficiencia, la industria agrcola tambin a presentado inters por en estudio de este reino ya que presentan una relacin biolgica para el tratamiento de bacterias insectos, como tambin la produccin de fertilizantes. Normalmente se los considera como paracitos y causantes de determinadas enfermedades en las plantas provocando deterioros en cosechas. Aunque tambin pueden formar mecanismos simbiticos, entre estos el mutualismo que se presenta con las hifas del hongo y las races de las plantas (micorrizas), tambin son responsables de la desintegracin de la materia orgnica, esto conlleva a pensar que los hongos se encuentran en constante relacin con la vida del ser humano por ende su importancia. La mayora de los hongos tienen aspecto filamentoso, a los filamentos individuales se les denomina hifas y al conjunto de hifas micelio, el cual por su posicin puede ser profundo y areo, el primero se encuentra sumergido en el sustrato desempeando las funciones de absorcin y sostn, tambin se le conoce como micelio vegetativo, el micelio areo emerge del sustrato donde se desarrolla siendo este el que da lugar alas hifas o cuerpos fructferos formadores de esporas por lo que tambin se le conoce como micelio

reproductivo en cada especie de hongo las hifas vegetativas, crecen se ramifican y entretejen en forma mas o menos constante, lo que determina la formacin de colonias con caractersticas tpicas de la especie, las hifas reproductivas pueden permanecer diferenciadas ( esporangioforos, conidioforos ) al igual que las hifas vegetativas las reproductivas se pueden agrupar en una estructura especializada llamada cuerpo fructfero en estos la agrupacin de hifas puede quedar directamente expuesta al medio ( coremio ) o protegida dentro de un contenedor ( picnidos esporodoquios ) o formar parte de un cuerpo altamente diferenciado( ascocarpos y basidio carpos ).este tipo de reproduccin depende de cada especie de hongo puede tratarse de esporas asexuales como clamidosporas, conidiosporas o conidios y esporangiosporas, en la practica de laboratorio trabajamos con el gnero Penicillum spp presenta conidiosporas. estas se caracteriza por presentar una forma semejante a la de un pincel ramificado, termina en clulas conidiogenas llamadas fialides, Para determinar el tipo de estructura de que presenten los hongos se pueden realizar diferentes procesos que conlleva a la determinacin de los cuerpos reproductivos de los hongos como la vista al microscopio de una muestra de la parte superior del micelio y observando la estructura completa que se puede rescatar de la siembra microscpica del hongo ya que esta se esparce por todo el portaobjetos Muchos de los hongos existentes en el ambiente son de gran poder patgenos los cuales causan terribles enfermedades al ser humano, en el caso del genero penicillium produce como metabolitos secundarios diferentes micotixinas como cido ciclopiaznico, cido peniclico, cicloclorotina, citroviridina, citrinina, griseofulvina, ocratoxina A, patulina, penitrem A. Todas estas substancias son originadas por los hongos para afianzarse en su ambiente natural inhibiendo a otros organismos que compiten por el substrato. Las micotoxinas tienen diversa estructura qumica, su peso molecular es relativamente bajo y se difunden en el medio. Algunas existen en cantidades significativas en el ambiente natural como para influir en la salud del hombre y otros animales, pero es prcticamente imposible inactivarlas por los tratamientos trmicos que se aplican corrientemente en la elaboracin y conservacin de los alimentos, por ende se debe de tener cierto grado de proteccin en el diario vivir para as evitar complicaciones en la calidad de vida.

PROCEDIMIENTO 1) tomamos dos cajas Petri una para macrocultivo y la otra para microcultivo del hongo penicillium 2) para el macrocultivo se toma con el aza recta esterilizada una porcin del cultivo y se pincho en el centro de la caja con agar sabouraud hasta el fondo 3) para el microcultivo se coloca papel absorbente en la caja Petri estril se agrega unas gotas de agua estril 4) se coloca un porta objetos estril sobre dos palillos que se ubican dentro de la caja Petri 5) colocamos un cuadrado del agar sabouraud sobre el porta objetos estril 6) con el aza de punta estril se realiza pinchazos en las cuatro esquinas del agar

7) se coloca el cubre objetos sobre el cuadro de agar y posteriormente se tapa la caja 8) se deja encubar a temperatura ambiente 9) se realiza la observacin de las estructuras reproductivas al microscopio del macrocultivo y del microcultivo

RESULTADOS. MACROCULTIVO. PENICILLIUM. 1. DESCRIPCIN MACROSCOPICA. Del hongo penicillium que se sembr en el agar sabouraud se observo: En su parte frontal : - Forma: Rendondeada. - Aspecto superficial : Con Ondas en su interior. - Color: En el centro presento un color verde debido a las esporas. - Consistencia: polvoriento. - Elevacion: presento elevaciones. - Borde: Blanco y algodonoso debido a la presencia de hifas

En su parte trasera. - Forma: Redondeada. - Aspecto superficial: con ondas en su interior. - Color: Blanco. - Consistencia: seca. - Elevacin: presento elevaciones. - Borde: redondo.

2. OBSERVACIN MICROSCOPICA. Para la observacin microscpica se tomo una muestra del macrocultivo del hongo penicillium y con la ayuda de azul de lactofenol donde el fenol destruye la flora acompaante y el cido lctico conserva las estructuras fngicas al provocar un cambio de gradiente osmtico con relacin al interior del fngico generando una pelcula, el Azul de algodn posee la capacidad de adherirse a la quitina presente en las hifas y conidios y de los hongos microscpicos. Se observo en el microscopio a 40x que haba la formacin de hifas en forma de ramas alargadas las cuales se encontraban ramificadas y se identifico sus extremos FIALIDES O ESTERIGMAS donde se originaban CONIDIFOROS que es el lugar donde se desarrollan las esporas o tambin llamados CONIDIOS que poseen una forma ovalada y son las estructuras de reproduccin asexual. Resultados observados:

 MICROCULTIVO. 1. DESCRIPCIN MACROSCOPICA. Con la tcnica de Ridell se observo la esporulacin del hongo penicillium el cual creci alrededor del agar mirando as que posean un color verde debido a sus esporas y en su alrededor un color blanco debido a la presencia de hifas donde su estructura y consistencia eran iguales a las observadas en el macrocultivo.

2. DESCRIPCIN MICROSCOPICA. Para observar el desarrollo de la esporulacin del penicillium se selecciono al cubreobjetos que contena las esporas de manera ms completa y perfecta que en el macrocultivo y al igual que en el macrocultivo se le adiciono unas gotas de azul de lactofenol y con ayuda de estos al observar al microscopio a 100x se identifico en el borde su estructura reproductiva (conidios o esporas) y que estos se encontraban en una estructura llamada fialides y estas a su vez se hallaban en los extremos de las hifas que eran parecidas a unas ramas. Resultados observados:

CUESTIONARIO 1. Los hongos son organismos muy eficientes y abundantes en la naturaleza. Existen en dos formas: levaduras e hifas. Algunas hifas se reproducen mediante esporas que se dispersan en el aire, el agua, insectos o animales. Estas esporas pueden actuar como alergenos, y al ser inhalados pueden producir fuertes sntomas alrgicos en personas predispuestas. Aunque la erradicacin completa de los hongos es imposible, si se sigue algunas precauciones se puede ayudar a reducir la concentracin de los hongos. Algunas precauciones son 7: - el uso de deshumidificadores y fungicidas. - Cualquier pared u objeto infectado con hongos debe ser reemplazado. - Todos los cuartos especialmente laboratorios, stanos, baos y cocinas, necesitan ventilacin y limpieza constante para impedir el crecimiento de hongos, una solucin de limpieza preparada con un 5% de blanqueador o vinagre y un poco de detergente, es eficaz para lograrlo. Cuando se utiliza estos limpiadores, ventile bien esas reas. - Reparar y sellar rpidamente los techos o tuberas con fugas, evita el crecimiento de hongos, ya que este es un ambiente propicio e ideal para su crecimiento. - Usar pinturas antifngicas o aerosol de fungicidas si hay zonas con tendencia a presentar humedad. - Eliminar las bolsas de basura diariamente. - Procurar que el lugar donde se quiera evitar contaminacin con hongos del ambiente ya sea por evitar enfermedades o donde se realicen procesos

microbiolgicos o industriales, sean lugares amplios para el numero de personas que se van a encontrar o trabajar en estos, a fin de reducir al mnimo los desplazamientos en el aire. Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer completamente cerrada. Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la sesin prctica. Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos. Hablar slo lo indispensable, no comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios.

2. el micelio es la masa de hifas que constituye el cuerpo vegetativo de un hongo. Dependiendo de su crecimiento se clasifican en reproductores (areos) o vegetativos. Los micelios reproductores crecen hacia la superficie externa del medio y son los encargados de formar los orgnulos reproductores (endosporios) para la formacin de nuevos micelios y de dispersin de la especie mediante esporas.. Los micelios vegetativos se encargan de la absorcin de nutrientes, crecen hacia abajo, para cumplir su funcin 8. 3. QU SON LAS LEVADURAS? * Hongos microscpicos unicelulares * Importantes por su capacidad de fermentacin * Produciendo distintas sustancias. * Las levaduras son abundantes en la naturaleza * Se encuentran en el suelo y sobre las plantas * Hongo perteneciente al phylum Ascomycota. * Su reproduccin se da por gemacin. PARA QUE SIRVEN * Produccin de vino * Alimentos fermentados (pan, cerveza derivados lcteos) * La biotecnologa, es decir, la utilizacin de organismos vivos o de sus partes en procesos industriales, es casi tan antigua como el hombre. LEVADURAS EMPLEADAS EN LA INDUSTRIA La mayor parte de las levaduras empleadas en la industria Hemiascomycetales del gnero Saccharomyces9.

4. Hongos del ambiente del laboratorio: - a mayora de los hongos presentes en los ambientes internos son saprofiticos, porque ellos obtienen lo que necesitan para su metabolismo de materiales muerto, materia orgnica o sustratos como la madera, papel, pintura, suelo, polvo, piel y alimentos - HONGOS ( Eumycota ) Importancia econmica y ambiental Son importantes para los seres humanos por sus beneficios o perjuicios. Desempean un papel de primer orden en la descomposicin de residuos orgnicos en el ambiente, poniendo a disposicin: carbono, nitrgeno, fsforo y otros nutrientes esenciales. - el Aspergillus sp - Rhizopus sp los cuales son en general los hongos ms frecuentemente hallados en nuestro medio. - Los hongos de los phyla: Zygomycota, Ascomycota y Basidiomycota, pueden crecer en las reas menos pensadas, los nicos requisitos para ellas son: ambiente condiciones clido, mojado y hmedo, adems que ste presente sustratos. Dentro de estos phyla los hongos ms comunes son: *Aspergillus sp. * Penicillium sp. * Cladosporium sp.

* Mucor sp. * Alternaria sp.

CONCLUSIONES. El desarrollo a decuado para el crecimiento de los hongos y levaduras parte de la correcta siembra, inoculacin y pinchazo de la bacteria en los puntos especficos para evitar la contaminacin ambiental y artificial. La tcnica de hacer estras para crear una especie de dilucin, que entre ms la realicemos ms limpio ser nuestro cultivo, es de vital importancia para poder aislar un microorganismo, por lo tanto siempre y en todo momento, debemos tener la precisin para saber donde depositamos la primer estra, pues en esta prctica paso que la primer estra se realizo correctamente sin embargo, las siguientes al no tomar muestra de la primer estra, no crearon ninguna colonia. El microcultivo presenta una esporulacin y con la coloracin de azul de lactofenol se evidencia la forma de los conidios tpico en las levaduras Con la adicion de KOH y lactofenol sobre un portaojetos nos ayuda a evidencar claramente los hongos que presentan septos y a diferenciarlos de acuerdo a sus estructuras, forma, color y tipo de colonia que presentan, al igual de manera analtica sus componentes nutricionales y forma de cultivo. Las estructuras de un cultivo en hongo siempre depende de las concentraciones de agua, humedad relativa estimada, la temperatura de incubacin y de lectura y de las concentraciones de acidez para el crecimiento optimo A partir de un micelio, otras hifas buscan buscan la superficie donde forma esporas o conidios que son pigmentosos, que le permiten la dispersin del hongo en nuevos hbitats, adems se concluyo que la presencia de conidios da a la masa micelial que es una apariencia de una capa en forma de polvo sobre el hongo cultivao Las levaduras al ser hongos unicelulares presentan forma esfrica o en forma cilndrica. Los hongos macroscpicos presentan setas y forman los cuerpos fructferos. ANEXO IMAGEN

REFERENCIAS 1. Bansal R. K., R. K. Walia and D. S.Bathi Evaluation of some agroindusrial waste for mass propagatrion of the nematode parasitic fungus Pacilomyces lilacinus . Nematol Medit. 16:135-138, 1988 2. Cory J. SD. M. J. Balley and S. Highs in Enviromental Biopesticides Theory and Practices Ed. by Enstwiistle 250p. 1993 3. Chet. J. Trichoderma .Applications , mode of action and potential as biological control agents of soilborne pathogen fungi. Cap 6. Ed. Viley Interscience Pub. . p46. 1987 4. Beretta B et al. 2000. Patulin in apple-based foods: occurrence and sfety evaluation. Food Additives and Contaminants 17: 399 -406. 5. Betina V. Thin-layer chromatography of mycotoxins. Journal of Chromatography 334: 211 - 276, 1985 6. Bissessur J et al. 2001. Reduction of patulin during apple juice clarification. Journal of Food Protection 64: 1216-1219. 7. como evitar el contacto con caros y hongos, recuperado el 13 de Noviembre del 2012, a las 2:55 pm, de http://www.airepuro.cl/como_evitar_el_contacto_con__acaros_y_hongos.html. 8. Introduccin a la microbiologa, recuperado el 13 de Noviembre del 2012, a las 3:34 pm, de http://www.monografias.com/trabajos16/microbiologia/microbiologia.shtml. 9. [PDF] Uso de levaduras industriales, recuperado el 13 de Noviembre del 2012, a las 3:59 pm, de www.respyn.uanl.mx/especiales/2010/ee-10-2010/.../05.pdf