UNIVERSIDAD DE CIENCIAS APLICADAS Y AMBIENTALES U.D.C.A.

FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGIA BIOQUIMICA -ENFERMERA

PRACTICA DE LABORATORIO 1 RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS INTRODUCCION:

Profesora: CLARA ANDREA RINCON CORTS.

Las biomolculas son compuestos de carbono con una variedad de grupos funcionales y se encuentran jerrquicamente organizados en las clulas. La versatilidad de los tomos de carbono para formar enlaces covalentes sencillos y dobles principalmente, es de gran importancia biolgica porque a partir de ellos se establecen unidades monomricas como los monosacridos, que son los compuestos orgnicos ms abundantes de la biosfera y a su vez los ms diversos. Normalmente se los encuentra en las partes estructurales de los vegetales y tambin en los tejidos animales, como glucosa o glucgeno. Estos sirven como fuente de energa para todas las actividades celulares vitales. De acuerdo a su estructura se pueden dividir en dos grupos; los monosacridos con funcin aldehdo se llaman aldosas y los monosacridos con funcin cetona se llaman cetosas y segn la longitud de la cadena carbonada se distingue entre aldo- y cetotriosas (3-Carbonos), aldo- y cetotetrosas (4-Carbonos), aldo- y cetopentosas (5-Carbonos) y las aldo-cetohexosas (6-Carbonos). Por otro lado gracias a la polimerizacin de estas unidades monomricas primarias permite la aparicin de un segundo nivel de complejidad al que pertenecen macromolculas como son los polisacridos, que se caracterizan por ser las fuente, ms importantes y como materia prima para la obtencin de energa. Los mas importantes son, el almidn y el glucgeno. En los vegetales el almidn constituye el polisacrido de reserva ms abundante, sintetizndose en los cloroplastos de las clulas fotosintticas y en los amiloplastos de las clulas del parnquima de almacenamiento y el glicgeno es la forma principal de almacenaje de carbohidratos en los animales, se encuentra en proporcin mayor en el hgado (hasta 6%) y en el msculo, donde rara vez excede de 1%. Sin embargo, debido a su masa mayor, el msculo almacena tres a cuatro veces la cantidad de glucgeno que tiene el hgado como reserva. MATERIALES: 5 Tubos de ensayo 1 Gradilla 1 Pinza para tubos de ensayo 1 Mortero y mazo Bao de mara - 5 Mecheros - 5 Beakers - 5 Termmetros - 5 Trpodes y 5 mallas

REACTIVOS: Solucin de Benedict Solucin de nihidrina Solucin de Glucosa Solucin de Almidn Agua destilada - Solucin de Lugol - Solucin de metionina - Soluciones de prolina - Soya - Higuerilla -

Solucin de Biuret Solucin de cido palmtico Solucin de Albmina Cloroformo Anhdrido Actico Acido Sulfrico Concentrado
Solucin de casena

Huevo Gelatina sin sabor Aceite vegetal Grasa animal Suero Fisiolgico

- Fruta, Papa, Pan -

Reactivo de Sudan III o IV

METODOLOGA 1. Reconocimiento de monosacridos y polisacridos: Prueba de Benedict: Coloque en un tubo de ensaye 1ml del reactivo de Benedict y 2ml de solucin de glucosa. Caliente a ebullicin y deje enfriar a temperatura ambiente. Un precipitado cuya coloracin vara desde amarillo hasta rojo, con decoloracin de la solucin, indica prueba positiva.

i.

Clara Andrea Rincn Corts Lic. Qumica MsC Biologa Bioqumica 2012

ii. iii. iv. v. vi.

Prueba de Lugol: Agregue en un tubo de ensayo limpios 2ml de la solucin de almidn y agregue dos gotas de la solucin de Lugol. (observe lo ocurrido). Posteriormente caliente el tubo hasta ebullicin por dos minutos, deje el tubo de ensayo en reposo hasta que se enfre. Deposite dos gotas de Lugol en una solucin acuosa de un macerado de pan y de papa y realice a cada muestra cada una de las muestras anteriores. Macere un pedacito de fruta madura y realice las pruebas de Benedict y Lugol como se describi anteriormente. En dos tubos de ensayo agregue 1ml de leche descremada en uno de los tubos y en el otro agregue 1ml de zumo de maracay y realice los puntos A, B. En cada uno de los procedimientos registre lo observado y las pruebas positivas resultantes.

2. Reconocimiento de Lpidos: i. ii. iii. Coloque en un tubo de ensayo 3ml de agua. Agregue una pizca del reactivo Sudan III agite. En el mismo tubo de ensayo adicione 1ml de aceite vegetal, agite nuevamente y deje en reposo por unos minutos. Luego observe y anote los resultados. En otro tubo de ensayo coloque 2ml de grasa animal y agregue una pizca de Sudan III. Si la grasa est solidificada caliente un poco para derretirla. Agite y anote los resultados, comparndolos con el anterior. Reaccin de Lieberman Burchard para colesterol: Diluya una parte de la yema de huevo en 10ml de cloroformo. Tome 1ml de la solucin clorofrmica y colquelo en un tubo de ensayo limpio y seco, posteriormente adicione 1ml de anhdrido actico y 3 a 4 gotas de cido sulfrico concentrado, agite suavemente y observe los cambios de coloracin.

3. Reconocimiento de Aminocidos: i. Adicione 1ml de las diferentes soluciones de aminocidos en un tubo de ensayo, mas 1ml de solucin de nihidrina a cada uno de estos, por ultimo caliente las muestras en bao de maria hasta observar cambios en las soluciones. ii. Repita el procedimiento anterior pero esta vez utilizar extractos de soya y higuerilla en vez de las soluciones de aminocidos. 4. Reconocimiento de Protenas: i. Adicione 1ml de solucin de albmina al 2% en un tubo de ensayo y aada dos gotas de la solucin de sulfato de cobre al 0,5% y 1ml de la solucin de hidrxido de sodio al 10%. Observe y registre sus resultados. ii. Diluya la clara de huevo en 50ml de suero fisiolgico o en agua destilada, tome de esta solucin 1ml de la solucin anterior (clara de huevo en agua); adicione dos gotas de la solucin de sulfato de cobre al 0.5% y 1ml de la solucin de hidrxido de sodio al 10%, Se produce algn cambio? iii. En un tubo de ensayo, coloque 2ml de solucin de gelatina sin sabor, adicione dos gotas de la solucin de sulfato de cobre al 0.5% y 1ml de la solucin de hidrxido de sodio al 10%, agite y registre los resultados
CUESTIONARIO: 1. 2. 3. En la leche se encuentra un disacrido, llamado lactosa, Cual es la composicin de este disacrido y como se puede comprobar su presencia en los alimentos que la contienen? Investigue las tcnicas empleadas para la determinacin de glicgeno en tejidos animales. Cual es la importancia de los monosacridos y polisacridos en la dieta humana y que implicaciones o enfermedades se desarrollan por la falta y/o el exceso en el consumo de estos compuestos.

4. Investigue las diferentes tcnicas para la determinacin de protenas y lpidos de forma cuantitativa en la clara de huevo y en la yema del huevo. 5. Cual es la principal fuente proteica y lipidica utilizada por las clulas animales y vegetales. 6. Cual es la importancia de los lpidos y protenas en la dieta humana y que implicaciones o enfermedades se desarrollan por la falta y/o el exceso en el consumo de estos compuestos.
BIBLIOGRAFIA: BOHINSKY R. Bioqumica. Quinta edicin. Editorial ADDISON-WESLEY IBEROAMENRICANA. 1991. KARP, G. Biologa Celular y Molecular. Editorial McGraw-Hill Interamericana. 1998. MATHEWS, C., HOLDE, K., AHERN, K. Bioqumica. Tercera Edicin. Editorial Addison Wesley. 2002. MELO, V., CUAMATZI, O. Bioqumica de los Procesos Metablicos. Editorial REVERTE, S.A. 2006.

Clara Andrea Rincn Corts Lic. Qumica MsC Biologa Bioqumica 2012