CicloCelular:Introduo

RodrigoMartins
ICB_LaNCE_HU rodrigomartins@ufrj.br

Clulassogeradasapartirdeclulaseanica maneiradesefazernovaclulaaDIVISOde umaclulaprexistente

Debactriasamamferosmulticelulares

Ciclossucessivosdeduplicao

Quandonapresenadeestmulosadequadosas clulaspodemsemultiplicar atravsde repetidosciclosdeproliferaoediviso celular,queemfunodessanaturezacclica, esseciclodevidadasclulasproliferantesfoi denominadoCICLOCELULAR

>ProliferaoCelularvs.CrescimentoCelular >Nemtodasasclulasprecisamcrescerparasedividir

DivisoCelularemBlastmeros

Roteiro
FasesdoCicloCelular RelevnciadaPesquisasobreCicloCelular Histrico OsArtistasdoEspetculo:CiclinaseCDKs MtodosdeEstudodoCicloCelular

Copiaresegregar/dividirmaterialgenmicodemodoperfeito!

Fases doCiclo Celular

>Mitose pode ocorrer sem citocinese >Formao declula commuitos ncleos >Embries deDrosophila

Particularidades do Ciclo Celular durante a Organognse/ Desenvolvimento de Organismos Multicelulares

Mitose G0 G1
(ps-mittica) Nascimento

G2

Ciclo Celular est Acoplado a Mecanismos de Diferenciao Celular

**divises simtricas vs. assimtricas

Sntese de DNA (S)

Diviso Meitica Gera Clulas Germinativas Haplides

Relevncia doEstudo doCiclo Celular

BiologiadoDesenvolvimento

wt

Sox2

Microftalmia
Fantesetal.NatureGenet.33:4612,2003 Olenaetal.GenesandDev.20:118702,2006

A Retina de Vertebrados

Coordenao entre Proliferao, Sada do Ciclo e Diferenciao Crucial para Formao da Retina

Mitose

Desenvolvimento
Proliferao SadadoCicloCelular EspecificaodoTipoCelular MorteCelular

Fase S

Migrao Sinaptognese

Particular Importncia do Controle de Ciclo Celular para o Desenvolvimento da Retina

SadaPrecocedoCiclo

Functional Retina Retinoblastoma

SadaTardiadoCiclo

ImportnciaClnicadoEstudodoCiclo: BiologiadoCncer
Sadadeumestadoquiescenteparaumestadodeproliferaocelular ativaumprrequisitoparaformaodediversostumores

Necessidade de Controle Inequvoco do Estado Ps-mittico

ClulasTroncoeTerapiasCelulares
ClulasMultipotentescomcapacidade degerardiferentestiposcelulares/tecidos/rgos

Teratomas

PrmioNobel
O Nobel em Fisiologia ou Medicina de 2001 foi dado a pesquisadores que fizeram descobertas sobre os mecanismos moleculares do ciclo celular (protenas cdk e ciclina e seus mecanismos de ao).

LelandHartwell

TimHunt

PaulNurse

Evans,R.,Rosenthal,E.T.,Youngblom,J.,Distel,D.&Hunt,T.Cyclin:aproteinspecifiedbymaternalmRNAinseaurchineggs thatisdestroyed ateachcleavagedivision.Cell33,389396(1983) Nurse,P.etal.GeneticcontrolofthecelldivisioncycleinthefissionyeastSchizosaccharomycespombe.Mol.Gen.Genet.146,167178(1976). Hartwell,L.H.,Culotti,J.,Pringle,J.R.&Reid,B.J.Geneticcontrolofthecelldivisioncycleinyeast.Science183,4651(1974). Hartwell,H.L.,Culotti,J.&Reid,B.Geneticcontrolofthecelldivisioncycleinyeast.IDetectionofmutants.PNAS66,352359(1970).

Peridicos Internacionais Especializados

Desde2002 www.landesbioscience.com/journals/cc/

Histrico

Omniscellulaecellula
Todaclulaseoriginadeoutraclulasimilarprexistente. 1858

RudolfVirchow,1821 1902

RobertRemak,18151865

NavidadaparaoXX, adivisocelularfoiestudada emdetalheporembriologistasemicroscopistas

EduardStrasburger(1875),botnico,eWaltherFlemming(1979),queestudavaclulas animais,soconsideradososdescobridoresdaMITOSE; Flemmingdescreveuacromatinaeambosdeduziramqueoncleoestariarelacionadocom hereditariedade;

WaltherFlemming,1843 1905

EduardStrasburger,1844 1912

 Nas dcadas de1970e1980,novasmetodologias debiologia molecular permitiram os pesquisadores dasreas debiologia celular,bioqumica e gentica,deformaconjunta, elucidar os mecanismos moleculares de controle dociclo celular;

Novamente,oprogresso cientfico foi fruto daspesquisas edescobertas terem sido feitas em diversos organismos vivos cada umcomsuas vantagensbiolgicas ou metodolgicas;

Embriologistas vs.Geneticistas Embriologistas Anfbios,Ourio domareoutros invertebrados marinhos Geneticistas Leveduras

CellCycleClassics

Pesquisasemleveduraslevaramadescobertade GenesessenciaisparaoCicloCelular
Reproduorpida Genomarelativamentepequeno(emtornode1%donosso) Fcilmanipulaogentica Rpidaidentificaoecaracterizaodemutantesgenticos;

GenesCdc (Celldivisioncycle)
Buscasistemticapormutaesqueinativavamgenes necessriosparaociclo/divisocelular

Cdc15selvagem

Cdc15mutante

MuitasDescobertassobreaBioqumicadoCiclo foramfeitasEstudandodeOvcitosAnfbios
1ovcitodeXenopus tem1mmdedimetroeumvolumedecitoplasma100.000 vezesmaiorqueumaclulahumana; FertilizaodisparaDivisoporClivagem*doovcito; Totalde4096clulasem7horas(~15minutosdefaseSeM) FasesG1eG2indetectveis; Fcildeinjetarsubstnciasnasclulaseobservarefeitosnociclo.

DescobertadoMPF(Maturationpromotionfactor)
Maturao=induodeentradaemmeiose MPF=complexoproteicoformadopelasptns: CinaseCdc2(hojetambmchamadadeCdk1) e CiclinaB2

Masui e Markert, 1971 - J. Exp. Zool. 177: 129-146

AnaturezadoMPF(Maturationpromotionfactor)
COMPORTAMENTO CCLICO DO MPF ATIVIDADE DO MPF DEPENDE DE SNTESE PROTICA

Gerhart, J.; Wu, M. & Kirschner, M. J. Cell Biol. 98: 1247-1255, 1984

Newport, J.W. & Kirschner, M. Cell 37: 731-742, 1984

IDENTIFICAO DE CICLINAS EM OVOS DE INVERTEBRADO MARINHO

MPF E CICLINAS

Hunt, T.; Luca, F.C. & Ruderman, J.V. J. Cell Biol. 116: 707-724, 1992

Cdc2=CDK1!! Alguns dosgenesessenciais para diviso dasleveduras codificavam exatamente protenas que mediavam aatividade bioqmica/biolgica doMPF

MPFwasfirstknownforitsfunction,thenasaproteinandfinallyasa gene.Incontrast,CDC28(S.cerevisiae)orcdc2(S.pombe)wasfirst describedasagenewithaknownfunctionandonlylaterwasthe proteinidentified.Cyclinwasfirstdiscoveredasaprotein,thenasa geneandfinallyitsfunctionwasknownasacomponentofMPF

OsArtistasdoEspetculo:CiclinaseCDKs
Ciclinas Protenascujaexpressovariadeforma dependentedafasedociclocelular

CDK(cinasesdependentesdeciclina) 1 Protenascinase capazesdetransferirradicaisfosfatoparaseussubstratos(vdeo) 2 CDKssoserinatreoninacinases 3 AtividadedecinasedasCDKdependedeassociaocomasciclinas 4 Eventospstraducionaisdefosforilaoedefosforilaocontribuemparaa ativaoplenadasCDK

MolculasReguladorasdoCiclosoextremamente conservadasevolutivamente

Emcamundongos,porexemplo,existemaproximadamente20enzimasCDK,massomente algumasregulamatransioentreasfasesdociclocelular(ex:CDK1,CDK2,CDK4,CDK6eCDK7

AfosforilaodedezenasdesubstratoscelularesporenzimasCDKsespecficasemestgios especficosdociclocelularinduzmodificaesfuncionaisdosdiferentessubstratos Eventoscomoadesmantelamentodamembrananuclear,condensaodacromatina,induo dareplicaodoDNAemontagemdosfusosmitticosdependemdasfosforilaesmediadas pordiferentesCDKs AlteraescclicasnaatividadedasCDKsdependedaassociaodessascinasescomas ciclinas.AocontrriodasCDK,cujaexpressonovariamuito,aexpressodasciclinasmuda dependendodafaseciclocelular. Atransioentreas fasesdociclocelular reguladapordiferentes complexosciclina/CDK

 Comoasclulasconseguemvariaraquantidadedas ciclinas ?
TranscrioGnicaeSntesedeprotenas vs. ProteliseControlada
UbiquitinaoeDegradaoproteossomal

CDK1regulaMitoseetemdegradao mediadapelocomplexoAPC(anaphasepromotingcomplex)

AlmdaExpressodeCiclinas(transcricionalvs. protelise)aatividadedasCDKstambmregulada poreventosPSTRADUCIONAIS

RegulaoPstraducionaldaAtivaodeCDK1

Wee1 CAK (MO15, Cdk7/CycH) Cdc25

Regulao Simplificada da Transio G1-S do Ciclo Celular

G0
(Ps-mittica)

Reguladores Upstream

Rb
G1

Protooncogenes(MYC)

Ciclina/CDK

Ativaodeviasdesinalizaopor Mitgenos

Rb Ciclina / CDK
Entrada na fase S Ciclina D1 CDK4/6 Ciclina D3 CDK2 Ciclina E

Rb=Rb,p107oup130

Protenas Rb: Supressores de Tumor que controlam o Ciclo Celular

RBL: Terceiro tipo de cncer peditrico mais comum

Enucleao: Perda de viso

Rb1 +/-

Somente ~10% de sobrevivncia quando ocorre metstase

ProtenasCKI(CDKinhibitor)InibemasCDKs

Regulao Simplificada da Transio G1-S do Ciclo Celular

G0
(Ps-mittica)

Reguladores Upstream

Rb
G1

Protooncogenes(MYC)

Ciclina/CDK CKI

SupressoresdeTumor(p53/Arf)

Rb
Entrada na fase S

CKI
Kip p21 p27 p57 Ink p15, p16 p18, p19

Ciclina / CDK
Ciclina D1 CDK4/6 Ciclina D3 CDK2 Ciclina E

Rb=Rb,p107oup130

PontosdeChecagemouCheckpoints

necessrioumcontroledequalidadeda replicaodoDNA

Aperfeionadivisomitoticacrucialpara queoscromossomosduplicadossejam corretamentedistribudosparaasclulasfilha

Oambienteestpropcioparaqueaclula continueseproliferandoeentrenafaseS novamente?

Mecanismos Moleculares deCheckpoints regulam diretamente aatividade dasCDKs

TcnicasdeEstudo
Comodeterminaremquefasedociclocelularumaclulaest?
AnlogosdetimidinasoincorporadosaoDNA nafaseSdoCiclo

Timidina Tritiada 3[H]

Bromodeoxi-Uridina BrdU Iododeoxi-Uridina - IrdU

Citofluorometria

Uso de mltiplos marcadores de Fase S permite detectar Re-Entrada no Ciclo Celular

P30p107single
Invivo
BrdU 24h

Invivo
intervalo 48h

Invitro
3[H]timidina

24h

Comparando a Quantidade Total de Clulas Proliferantes

3[H]thymidine

retinas

3[H]thymidine H3-thymidine

RB1 Rb

Proportionofprogenitors dividingatthat developmentalstage foreachanimal

3[H]thymidine H3-thymidine

p27 Kip1 p27

Kip1

time (hr)

EstudodaCinticadeProgressonoCicloCelular: SadadoCicloCelularouAumentodotempodeCiclagem? (ExitorLengthening?)

Proporodeclulas proliferantesse dividindo Velocidadedeprogresso nociclocelular

time (hr)

Infeco por Retrovrus Incompetente de Replicao no Estudo da Proliferao Celular (Expanso Clonal)
E14.5

retinas

retina

10diasdecultura

RetrovrusIncapazdeReplicao

1 1 2 4 3 15 6 7 8 9

Clonede9clulas

ModelosdeEstudomaisModernos
Reprterfluorescentedasdiferentesfasesdociclocelularinvivo

SakaueSawanoetal.,2008Cell.132(3):48798. Visualizingspatiotemporaldynamicsofmulticellularcellcycleprogression

MaisInformaes
MolecularBiologyofTHECELL Cap17 http://www.hchs.hunter.cuny.edu/wiki/index. php?title=19th_Century_Science http://www.nature.com/ncb/journal/v3/n1/fu ll/ncb0101_e1.html