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Mutacin Activadora de la tirosin-cinasa JAK2 en Policitemia Vera, Trombocitemia Esencial y Metaplasia Mieloide con Mielofibrosis.

Marcos Antonio Gutirrez Moscoso Seminario Hematologa 25 de Junio de 2012

Hitos Histricos de MPD Ph(-)

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Alteraciones Moleculares MPD

Caractersticas del Estudio

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JAK2V617F: Activacin Va JAK2-STAT

Adaptado de Trends Mol. Med (2005)11:546-554

Mutacin gnica JAK2: Sustitucin

Mutacin Molecular o Puntual Sustitucin de GUANINA por TIMINA en nucletido 1849 del exn 14. Se traduce en un cambio del aa VALINA por FENILALANINA en codon 617.

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Mutacin JAK2V617F en Policitemia Vera

Secuenciacin ADN Mucosa Bucal: Ausencia Granulocitos: Heterocigota 49% pacientes Enf. Somtica o Adquirida

Mutaciones JAK2V617F en Policitemia Vera

Secuenciacin ADN Mucosa Bucal: Ausencia Granulocitos: Homocigota 25% pacientes Somtica Mayor gravedad y duracin PV

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Mutaciones JAK2V617F en Policitemia Vera

Secuenciacin ADN Mucosa Bucal: Heterosigota Granulocitos: Homocigota 4% pacientes Posible lnea Germinal Revisin Antecedentes Familiares

Estado Mutacional segn MPD

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Anlisis genotpico del alelo JAK2V617F

MALDI-TOF MS PV Mutacin JAK2V617F Heterocigota Alelo V617 Homocigoto Normal

Prdida de Heterocigosidad
Secuenciacin Exn 6 de 2 pacientes JAK2V617F Homocigoto Mucosa Bucal: Heterocigoto Granulocitos: Prdida de Heterogocidad

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Prdida de Heterogosidad por Recombinacin Mittica

PCR cuantitativa locus JAK2 JAK2 wild-type (verde) JAK2V617F heterocigoto (azul) JAK2V617F homocigtico (amarillo) Anlisis FISH: Dos copias del locus JAK2

Locus genmico JAK2: Cromosoma 9 24p

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Estructura JAK2

Adaptado de Protein Eng (2001) 14:27-37

Estructura JH2 de JAK2V617F

Modelo dominio JH2 (pseudokinasa) de JAK2 humana Funcin: Inhibir el dominio cinasa JH1 interaccionando con el bucle de activacin. Mutacin produce actividad cinasa constitutiva de JAK2. Ubicacin Val 617 en superficie. La sustitucin por fenilalanina no altera la arquitectura molecular, pero s su funcionalidad por cercana con bucle de activacin.

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Funcionalidad JAK2V617F

Western blot clulas 293T Marcado incremento en expresin de autofosforilacin en JAK2V617F

Funcionalidad JAK2V617F

300 ng JAK2V617F 0, 300, 600 y 900 ng JAK2 Mantenimiento de fosforilacin. JAK2 WT sn actividad inhibitoria.

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Funcionalidad JAK2V617F

Hipersensibilidad a eritropoyetina. Independencia de factores de crecimiento hematopoyticos.

Funcionalidad JAK2V617F
HEL: Mutacin JAK2V617F homocigoto Fosforilacin de quinasas JAK2, STAT5 y ERK1/2 en HEL Inhibicin del crecimiento HEL dosis dependiente de Inhibidor JAK. No inhibe K562 BCR-ABL (+)

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JAK2V617F: Hipersensibilidad EPO-Fosforilacin

Actividad Inhibidor JAK2

Reduccin en fosforilacin de JAK2 e inhibicin de la fosforilacin de STAT5 en HEL Induccin de la apoptosis:

HEL:15% 46% K562: 2% 3.1 %

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Importancia de la descripcin de JAK2V617F

Conocimiento de la patogenia Valor Diagnstico: Marcador Clonal. Superposicin fenotpica requiere mayor certeza. Criterio Mayor en PV (OMS 2008). Valor Teraputico en MPD: Target Molecular. La inhibicin farmacolgica de protena con actividad tirosin cinasa aumentada en forma constitutiva es actualmente eficaz en el tratamiento de LMC Ph+. Imatinib (Gleevec )

OMS 2008: Modificacin de la Clasificacin

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JAK2V617F en Algortmo Diagnstico PV

N Eng J Med (2007); 365:5

Criterios Diagnstico PV antes de JAK2V671F

Adaptado de Leukemia (2008) 22: 14-22

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Criterios Diagnstico PV despus de JAK2V617F

Adaptado de Leukemia (2008) 22: 14-22

Inhibidores JAK2

Hematology (2008); Jan:83-91

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Referencia: Cancer Cell (2005) 7:387-397

Gracias por su atencin!

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