LUIS F. GUTIRREZ M.1; CARLOS A. CARDONA A.2; SCAR JULIN SNCHEZ T.

3 Grupo de Investigacin en Procesos Qumicos, Catalticos, y Biotecnolgicos Universidad Nacional de Colombia Sede Manizales e-mail: 1 ccardonaal@unal.edu.co , 2 llfgutierrezm@unal.edu.co , 3 ojsanchezt@unal.edu.co Resumen: En este trabajo se desarroll un procedimiento general para la evaluacin terica y el diseo de procesos de fermentacin extractiva. Lo anterior se logr integrando tcnicas basadas en mtodos cortos con simulacin rigurosa. Este procedimiento se aplic a la fermentacin alcohlica y a la obtencin de cido lctico. Keywords: Fermentacin extractiva, etanol, cido lctico. 1. INTRODUCCIN Los procesos simultneos combinan operaciones de reaccin qumica y separacin en una unidad. La reaccin puede ser combinada con tcnicas de separacin como destilacin, cristalizacin, extraccin, adsorcin y separacin por membranas, para conseguir ciertas ventajas, como reducir la inversin de capital o sobrepasar las limitaciones del equilibrio impuestas por las reacciones reversibles, lo que no se puede conseguir con los procesos convencionales [Pisarenko, 2001]. La sinergia existente en la unidad de proceso entre la reaccin qumica y la separacin del producto in-situ (transferencia de masa), asegura la optimizacin de la conversin y/o selectividad, criterios claves para la reduccin de los costos de operacin. La reaccin extractiva es un proceso simultneo que involucran la reaccin y la separacin simultnea de fases lquido-lquido. Comprende los procesos de extraccin reactiva, ampliamente estudiada a nivel terico [Pai, 2002] y experimental [Bora 1997, Malinowski 2000], fermentacin extractiva [Hatzinikolau 1992, Kollerup 1986] y reaccin extractiva [Samant 1998, Minotti 1998]. En estos procesos, la inmiscibilidad de las fases lquidas se puede dar naturalmente dentro del sistema de reaccin (formacin de un producto parcialmente miscible con los reactivos) o la segunda fase puede ser introducida con la adicin de un solvente [Samant, 1998]. La reaccin extractiva puede ser utilizada efectivamente para aumentar de manera significativa el rendimiento, la selectividad a productos deseados y la facilidad de separacin de productos secundarios. Adems tiene ventajas adicionales como la disminucin en los costos de separacin de productos y de tratamiento del agua de desecho, y la disminucin del flujo de reciclo de reactivos no convertidos debido al incremento del rendimiento por paso. 2. FERMENTACIN EXTRACTIVA En los ltimos veinte aos, ha resurgido el inters por la produccin de grandes volmenes de compuestos qumicos por fermentacin, pero los problemas que se presentan en la separacin de los productos del caldo de cultivo aumentan los costos operativos y dejan en desventaja econmica a los procesos biotecnolgicos. Por tal razn para lograr franquear esta limitante es indispensable explorar alternativas que logren disminuir la complejidad de la separacin y aumenten la eficiencia del proceso de fermentacin. La fermentacin extractiva es un proceso que combina la biorreaccin y la extraccin del metabolito principal o secundario. Es un proceso unificado muy promisorio para aumentar la produccin de productos de origen biolgico como antibiticos, vitaminas, alcoholes, cidos orgnicos y solventes.

TEORA Y DISEO DE PROCESOS DE FERMENTACIN EXTRACTIVA

Esta tcnica ha encontrado aplicacin en sistemas donde el crecimiento microbiano y por ende la generacin de producto se ve inhibido por la concentracin del producto en el fermentador, fenmeno conocido como inhibicin por producto final (end product inhibition), o por algn otro metabolito indeseable. La recuperacin del producto por extraccin es de particular inters para tales sistemas, ya que permite la remocin in situ del agente inhibidor [Hatzinikolaou, 1992]. El fenmeno de extraccin simultneo del agente inhibidor aumenta la velocidad del crecimiento celular, lo que hace posible tratar mezclas ms concentradas en sustrato y aumentar la productividad del proceso de fermentacin [Maiorella et al, 1984], adems se logra una disminucin en los costos de recuperacin de producto, en los costos de tratamiento de agua de desecho y en el consumo de energa. La extraccin se consigue generando una segunda fase con el uso del contacto continuo de un solvente orgnico inmiscible en el caldo de fermentacin, que por lo general es de naturaleza acuosa. Esto provocar una menor concentracin inhibidora del producto en el caldo, haciendo mayor la velocidad de reaccin. Existen muchos ejemplos donde se presenta el fenmeno de inhibicin por producto final como la fermentacin alcohlica para la produccin de etanol, fermentacin para la produccin de cidos orgnicos como el actico, lctico y butrico. La principal diferencia entre la fermentacin extractiva y la reaccin extractiva radica en que la fermentacin extractiva debe llevarse a cabo teniendo como prioridad conservar la viabilidad de las clulas, lo cual incluye el uso de un solvente que sea biocompatible con la biomasa. De esta necesidad se nota claramente que la mayor limitante para implementar esta tcnica es la bsqueda e identificacin de un solvente adecuado. As, el solvente a utilizar debe cumplir con las caractersticas fisicoqumicas que logren extraer selectivamente el producto de inters y adems, caractersticas biolgicas que se relacionan con la biocompatibilidad [Wang 2002]. Esta caracterstica es importante debido a que se requiere un buen contacto entre el solvente extractor y el caldo, para asegurar la transferencia de masa sin recurrir a la separacin de microorganismos antes de la extraccin, ya que no resultara econmico en procesos a gran escala. Otro factor a tener en cuenta en los procesos de fermentacin extractiva es el rango de operacin de pH. El pH extremo inhibe el crecimiento de biomasa y por consiguiente afecta la velocidad de formacin de producto. La alta dependencia de la cintica de la fermentacin y de la eficiencia de la extraccin en el pH, puede tenerse en cuenta incluyendo un modelo que prediga su perfil durante la operacin. La pureza del extracto que es determinada por la selectividad del solvente puede bajo ciertas condiciones cambiar drsticamente con el pH de la fase acuosa y la efectividad de la separacin puede verse reducida o incrementada en alto grado [Hatzinikolau, 1992]. 3. MTODO DE DISEO DE LOS PROCESOS DE FERMENTACIN EXTRACTIVA En algunos casos las operaciones de fermentacin extractiva pueden no resultar factibles, por ejemplo, a altas tasas de flujo de solvente que resultan prohibitivas. En otros casos las ventajas obtenidas sobre el proceso convencional, en el rango de operacin factible, no son lo suficientemente significativas para justificar el uso de la fermentacin extractiva. Por esta razn, es esencial, para el desarrollo de procesos exitosos, tener un procedimiento para sintetizar los diagramas de flujo y evaluar si se consiguen los objetivos deseados. El anlisis del equilibrio termodinmico es el mtodo que permite evaluar y examinar las alternativas del proceso y a la vez permite verificar si el proceso de fermentacin extractiva es posible de implementar. Existen dos enfoques para atacar el problema del modelamiento del equilibrio qumico y de fases simultneo el modelo de equilibrio [Minotti, 1998] y el modelo de no equilibrio [Pai, 2002]. La

diferencia principal entre los dos radica en que el modelo de no equilibrio tiene en cuenta consideraciones de transferencia de masa. En este trabajo se implement el modelo de equilibrio. 3.1. Modelo de Equilibrio El sistema reactivo tiene dos (o ms) fases lquidas en equilibrio y es representado por un CSTR con las fases separadas por una interfase muy bien definida. Ambas fases, extracto y refinado estn perfectamente agitadas, y las corrientes efluentes se encuentran en equilibrio simultneo de fases y qumico. El desarrollo del modelo de equilibrio para el sistema de fermentacin extractiva de la Figura 1 o para una etapa ideal (en equilibrio) de un Reactor Extractor Multietapa (REME), comprende los balances de masa, las relaciones de equilibrio fsico y qumico y las sumatorias de las fracciones molares [Snchez et al., 2006]. En un sistema de c componentes con r reacciones qumicas independientes se satisfacen c relaciones de equilibrio de fase lquido lquido simultneamente con r ecuaciones de equilibrio de reaccin.

Figura 1. Reactor Extractor Simple Agitado

( i xi )
ra =

= ( i xi )
dCa dt

II

i = 1, 2,..., c

(1) (2)

donde los superndices I y II indican las fases lquidas extracto y refinado respectivamente. Para resolver el sistema de ecuaciones se deben realizar balances de masa alrededor del bioreactor y dentro del equilibrio lquido-lquido. Los balances de masa para resolver el equilibrio lquido corresponden a los implementados en un flash isotrmico. Obtenindose la funcin de recurrencia.

1 + ( D 1) = 0
i

zi ( Di 1)

(3)

Y las ecuaciones de balance de masa alrededor del bioreactor:

Q A X + V A rX = 0
FA S 0 QA S V A rS = 0

(4) (5) (6) (7)

*

FE P Q A P QE P + V A rP = 0
* 0

FA + FE Q A Q E = 0

Las ecuaciones 1, 2, 5, 6 y 7 acopladas se resuelven segn el algoritmo de la figura 2.

Figura 2. Algoritmo de solucin para procesos de fermentacin extractiva [Snchez et al., 2006].

PRODUCCIN DE ETANOL La fermentacin alcohlica es un proceso que se inhibe por la concentracin de etanol en el caldo de cultivo. Esta caracterstica permite valorar la posibilidad de implementar un proceso de fermentacin extractiva para reducir la inhibicin por producto. Para implementar el proceso de fermentacin extractiva es necesario seleccionar el solvente adecuado. Gyamerah y Glover (1996), utilizaron como solvente al n-dodecanol por su baja toxicidad para con los microorganismos y su alta selectividad con el etanol. Las ecuaciones cinticas de la fermentacin alcohlica fueron tomadas de [Leksawasdi, et al 2001]. Este modelo describe el consumo de dos sustratos contenidos en la lignocelulosa hidrolizada: glucosa y xilosa por la bacteria Zymomonas mobilis. El modelo describe adems el crecimiento de biomasa y la produccin de etanol. Las ecuaciones del modelo consideran la inhibicin por producto y por sustrato. La solucin del sistema de ecuaciones 1,2 5-7, permite conocer los valores lmite de operacin de la relacin alimentacin/solvente (R=F/S), en los cuales la fermentacin extractiva pude realizarse. Los lmites de R delimitan la zona de operacin del proceso, lo que hace posible acotar el espacio de investigacin experimental y reducir los esfuerzos de clculo riguroso. El sistema de ecuaciones se solucion Utilizando el programa ModELL-R, Este software permite acoplar las ecuaciones del balance de masa con el algoritmo para el clculo del equilibrio lquido-lquido, el programa permite utilizar diferentes modelos de actividad para la fase lquida involucrada (NRTL, UNIFAC, UNIQUAC).En un trabajo previo [Snchez et al., 2006] se simul en ModELL-R la obtencin continua de etanol aplicando el modelo UNIFAC. La simulacin utiliz una taza de dilucin de 0.265 h-1 obtenindose el comportamiento mostrado en la figura 3.
25 PrT, PrE [g.L -1.h -1] 20 15 10 5 0 1.3 3.3 5.3 R = F A /F E PrT PrE S1 S2 7.3 40 35 30 25 20 15 10 5 0
(a)
35

S 1, S 2 [g.L -1]

100 80

30 25 20 15 10

S1, S2 [g/L]

60 40 20 0 0.05

5 0 0.4

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

D A (i) [1/h]
S1 S2 P P*

P, P* [g/L]

Figura 3. Efecto de R sobre el desempeo de la fermentacin extractiva continua con ndodecanol a una tasa de dilucin de 0.265 h-1. S1 glucosa, S2 xylosa, productividad total de etanol (PrT), y productividad por etanol recuperado de la fase solvente (PrE). [Snchez et al., 2006]

Figura 4. Efecto de la tasa de dilucin Dai sobre S1 glucosa, S2 xylosa, etanol en la fase acuosa P, etanol en la fase solvente P*. [Snchez et al., 2006]

Los mejores resultados fueron obtenidos para valores de R mayores a 4, el cul corresponde a un incremento en la cantidad de sustrato consumido. La productividad total y la productividad referida a etanol recuperado en la fase solvente son prcticamente constantes para valores de R mayores a 4. Se encontr adems que para valores de R superiores a 7 e inferiores a 1.29, el sistema se ubica dentro de la regin homognea sin la posibilidad de implementar extraccin lquida-lquida. Tambin se observ el comportamiento del proceso para R igual a 2 (ver figura 4), como se observa en la figura 4, la concentracin de etanol en la fase acuosa es mayor que la concentracin de etanol en la fase orgnica, pero la concentracin de biomasa y el consumo de sustrato se incrementan en comparacin con el proceso de fermentacin alcohlica convencional.

PRODUCCIN DE CIDO LCTICO El cido lctico es un hidroxicido que puede polimerizarse consigo mismo o con muchos otros compuestos qumicos para producir un gran nmero de compuestos industriales. Lo interesante del cido lctico es que tiene la capacidad de formar biopolmeros como el polihidroxi-butilato y policrilato. Sin embargo, la produccin del cido lctico en cultivos microbiales es severamente inhibido por la acumulacin del cido en el caldo de cultivo. Algunos grupos de investigacin han propuesto soluciones al problema de la inhibicin como biorreactores de membrana y electrodilisis para separar el lactato del medio de cultivo, pero en stos, como en otros intentos se hace necesaria una etapa de filtracin que redunda en una disminucin de la efectividad del proceso [Hiroyuki et al., 1995]. Otra opcin es la fermentacin extractiva del lactato. Por este mtodo la concentracin del cido lctico en el caldo puede mantenerse a niveles bajos, y consecuentemente se alcanza una alta rata de produccin de cido lctico. El proceso de obtencin de cido lctico fue modelado en un reactor batch. Las ecuaciones que describen el proceso se listan a continuacin
dX = rx = max X dt
1 dS = rS = max X dt Y XS

(8) (9) (10)

dP = rP = YPX max X dt

donde rx es la velocidad de crecimiento celular (g.L-1.h-1), velocidad especfica de crecimiento, X concentracin de la biomasa (g.L-1), rs es la velocidad de consumo de sustrato (g.L-1.h-1), Yxs es coeficiente de rendimiento de biomasa (gramos de biomasa formada/gramos de sustrato consumido), rp es la velocidad de generacin de producto (g.L-1.h-1), Ypx es el coeficiente de rendimiento de producto por gramo de biomasa obtenido (gramo de producto formado/gramo de biomasa formada). La expresin y las constantes para la cintica de conversin de lactato a cido

lctico fueron tomadas de Burgos et al., 2000. En el modelo de Burgos, se utiliza lactosa como sustrato. Las ecuaciones 8-10 junto con la ecuacin 1 se resuelven simultneamente utilizando el mtodo numrico Runge Kuta de 4 orden para solucionar las ecuaciones diferenciales del modelo cintico y el mtodo de Newton Raphson para resolver el equilibrio lquido-lquido, el sistema fue simulado en el software ModELL-R utilizando UNIFAC como modelo de actividad.
5 [] Producto (g/l) 4 3 2 1 0 0 0.5 1 1.5 2 Tie mpo (h) P fase acuosa (g/L) P fase orgnica (g/L) 2.5 3 3.5 4

(a) (b) Figura 5. (a) Perfiles de concentracin del cido lctico en las dos fases lquidas. (b) Influencia de R y el tiempo de fermentacin sobre la extraccin de cido lctico [Hernndez et al., 2006]

Los perfiles de concentracin de biomasa, sustrato y producto en la fase acuosa y la fase solvente fueron calculados. Los solventes 1-octanol y metil isobutil cetona fueron probados para verificar su efectividad en la extraccin del cido. La influencia de la relacin R y el tiempo de operacin sobre la cantidad de cido extrado para 1-octanol se presentan en la figura 5. Considerando los perfiles de concentracin para el proceso convencional sin solvente, se observa que el tiempo en el cual el sustrato se consume en fermentacin extractiva es menor que el de la operacin convencional (7 horas). Esta disminucin en el tiempo de fermentacin esta relacionado con la remocin in-situ del cido lctico y por ende, con la reduccin del efecto inhibitorio sobre el crecimiento de la biomasa.

CONCLUSIONES El anlisis del equilibrio lquido-lquido acoplado a la cintica de fermentacin es un mtodo corto extendido que proporciona conocimiento bsico de los procesos de fermentacin extractiva. La metodologa de diseo expuesta permite encontrar las relacin alimentacin/solvente en la cual el proceso de fermentacin extractiva puede llevarse a cabo. Esta informacin es valiosa para acotar el rango de trabajo experimental y generar las primeras aproximaciones a la simulacin rigurosa. REFERENCIAS
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