Cultivos celulares

* Conjunto de mtodos y tcnicas * Mantenimiento de clulas, tejidos (animales y vegetales) u rganos in vitro * Preservar y mantener sus propiedades fisiolgicas, metablicas y genticas Tipos 1. Cultivos celulares 2. Explantes 3. Organot Organotpicos

Lenguaje com comn CULTIVO CELULAR: CELULAR el crecimiento de clulas in vitro, incluyendo el cultivo de clulas aisladas. Las clulas no estn organizadas en verdaderos tejidos

CULTIVO PRIMARIO: PRIMARIO El cultivo iniciado a partir de clulas, tejidos u rganos tomados directamente de un organismo. Un cultivo 1 debe ser considerado como tal hasta que se subcultive (o repique) con xito por 1 vez. En ese momento se considera una lnea celular

LINEA CELULAR: Una lnea celular se origina a partir de un cultivo 1 en el momento del 1er subcultivo exitoso. Los trminos finita o continua son usados como prefijo si se conoce el estado del cultivo. Si no, el trmino lnea es suficiente. El trmino lnea continua reemplaza al trmino lnea establecida. DENSIDAD DE SATURACION: SATURACION El mx. n de clulas mantenibles bajo condiciones especficas de cultivo en un recipiente. Se expresa - como el n de clulas por cm2 en una superficie de cultivo - o el n de clulas por cm3 en un cultivo en suspensin EFICIENCIA DE SIEMBRA (ADHESION): El porcentaje de clulas sembradas que se adhieren a la superficie del recipiente de cultivo en un tiempo determinado. Siempre establecerse las condiciones bajo las cuales se realiz la determinacin. MEDIO QUIMICAMENTE DEFINIDO: Una solucin nutritiva para cultivo de clulas siendo conocida la estructura qumica de cada componente. Aunque se sabe que an los compuestos qumicos puros pueden tener algunos contaminantes, se deben usar compuestos qumicos de alta calidad con datos analticos, si es posible, de los contaminantes.

PASE (REPLAQUEO): La transferencia o trasplante de clulas, con o sin dilucin, de un recipiente de cultivo a otro. Siempre que las clulas se transfieren de un recipiente a otro,.una cierta porcin de stas se pierde y que por lo tanto, se produce la dilucin de las clulas en forma deliberada o no. Sinnimo del trmino subcultivo. NUMERO de PASES (NUMERO de REPLAQUEOS): El n de veces que las clulas en cultivo han sido subcultivadas. 1. Cultivos celulares primarios * Cultivos celulares obtenidos a partir de tejidos normales o patolgicos mediante disgregacin (mecnica o enzimtica) o explantes de tejidos u rganos. -Poder limitado de proliferacin celular -Poder limitado de expansin (N limitado de generaciones)

Lnea Celular Primaria

2. Cultivos celulares estables CONTINUOS * Cultivos celulares obtenidos a partir de lneas celulares primarias, que hayan sufrido un fenmeno de transformacin (natural o iatrognica).

Lnea Celular Estable (o Continua)

- Poder ilimitado de proliferacin celular - Poder ilimitado de expansin (nmero ilimitado de generaciones) - Inmortalizacin celular

* Diferenciaci Diferenciacin Indica la adquisicin de las propiedades diferenciales de un tipo celular en cultivo * Desdiferenciaci Desdiferenciacin Indica la prdida, de forma irreversible, de propiedades diferenciales de un tipo celular en cultivo * Desadaptaci Desadaptacin Implica que las caractersticas especializadas de determinados tipos celulares se encuentran reguladas por factores que puedenintroducirse de forma controlada en los cultivos celulares

Ejemplos de lneas celulares continuas: BHK: Fibroblastos de rin de hamster sirio dorado CrFK: Fibroblastos de rin de gato domstico MDCK: Epitelio de rin canino (Cocker Spaniel) CHO: Epitelio de ovario de hamster chino VERO: Fibroblastos de rin de mono verde africano HeLa: Epitelio tumoral de cuello uterino humano MDBK: Epitelio de rin de bovino adulto HUVEC: Endotelio de vena umbilical humana FHBE: Endotelio de corazn fetal bovino Etc., etc.,

Colecciones internacionales ms importantes Sigla ATCC Nombre u organismo American Type Culture Collection Human and Animal Cell Cultures European Collection of Cell Cultures Istituto Giannina Gaslini Ciudad, pas Minassas, USA Braunschweig , Alemania Salisbury, Wiltshire, UK Genova, Italia

DSMZ

ECACC

GEIMM

Fuente: www.biotech.ist.unige.it/cldb/indexes.html

Enzimas empleadas en la disgregacin tisular (I) a. Colagenasa, b. Tripsina,. c. Elastasa, d. Hialuronidasa. e. Papana. f. DNAsa I. g. Pronasa. Enzima bacteriana h. Dispasa. i. EDTA. cido etilendiaminotetraactico. j. Inhibidor de tripsina (soja).

Separacin celular A. Sedimentacin. B. Centrifugacin. C. FACS. D. Magnetic beads. E. Muerte selectiva. F. Clonaje.

Lavado y esterilizacin