PRACTICA

N 6

FOTOSINTESIS Y EXTRACCION DE PIGMENTOS VEGETALES I. INTRODUCCION

La fotosntesis es el proceso que permite, a los vegetales, obtener la materia y la energa que necesitan para desarrollar sus funciones vitales; se lleva a cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos jvenes de pigmentos, capaces de captar la energa qumica. Estos pigmentos son: La clorofila, que se encuentra en los cloroplastos de cada clula en las partes verdes de la planta. Este pigmento es indispensable para que se lleve a cabo la fotosntesis Los carotenos, es un pigmento amarillo anaranjado que se encuentra en ciertas clulas vegetales y da su color a la zanahoria. Las xantofilas, son unas sustancias cristalinas de color amarillo oscuro, que se encuentra juntamente con la clorofila en los cloroplastos de las plantas. En la fotosntesis se reconocen dos fases sucesivas: una dependiente de la luz o reacciones luminosas (fase luminosa) y otra que no depende de ella, reacciones oscuras (fase oscura) En la fase luminosa, la luz que incide (fotones) es absorbida por la clorofila a la que excita, provocando que sta libere electrones cargndose as positivamente. Por cada fotn de luz se libera un electrn. Simultneamente los fotones provocan la ruptura de la molcula del agua (fotolisis) en dos subproductos: oxgeno, que se libera al medio y los protones (H+). Los electrones liberados por la clorofila activada son captados por los protones a travs de unos transportadores, de manera que se forma el hidrgeno molecular (H2) que se utiliza para que la molcula de NADP (Nicotidamina adenina dinucletido) se reduzca a NADP2. Los protones que se acumulen en el estroma pueden comportarse como <<enzimas activos>> catalizando la formacin de molculas de ATP a partir de ADP y P i. En resumen: en la fase luminosa de la fotosntesis el impacto de los fotones de luz sobre la clorofila y la fotolisis del agua son el origen de un estado de desequilibrio molecular (fenmeno qumico) que se reequilibra constantemente gracias al flujo de protones a travs de la membrana de los tilacoides (fenmeno fsico) La fase oscura es indiferente a la presencia de luz y sus reacciones tienen lugar en el estroma de los cloroplastos. En ella se utiliza la energa qumica almacenada en el ATP y el poder reductor del NADPH2, sintetizados en la fase luminosa, para la fijacin del O2 atmosfrico. ste es incorporado a una molcula de 5 tomos de carbono: la ribulosa 1-5 difosfato que abunda en el estroma. El resultado, tras una molcula inestable de 6 tomos de carbono, es el cido 3-fosfoglicrico. Entre los distintos mtodos que existen para separar y obtener los pigmentos de la clorofila se encuentra el de la cromatografa, que es una tcnica que permite la separacin de las sustancias de una mezcla y que tiene una afinidad diferente por el disolvente en que se encuentran. De tal manera que al introducir una tira de papel en esa mezcla el disolvente arrastra con distinta velocidad a los pigmentos

segn la solubilidad que tengan y los separa, permitiendo identificarlos perfectamente segn sea su color.

II.

OBJETIVOS
Comprender el papel imprescindible de los pigmentos vegetales, principalmente de la clorofila, en el metabolismo vegetal. Extraer y separar los pigmentos fotosintticos mediante la tcnica de cromatografa en papel.

III.

MATERIALES Hojas frescas de espinaca y geranio Papel cromatogrfico Wathman o papel filtro, mortero y piln, embudo, Placas petri de 15 cm de dimetro, tubos de ensayo estndar, micropipeta o capilar, tijeras, gasa, algodn. Reactivos: Etanol, bencina, acetona.

IV.

DESARROLLO EXPERIMENTAL SEPARACION DE PIGMENTOS 1. Lavar las hojas frescas de espinaca o geranio y escurrir el agua. 2. Colocar en un mortero las hojas frescas y aadir hasta 5ml de etanol y triturar hasta obtener una suspensin o extracto homogneo. 3. Filtrar el extracto con la ayuda de un embudo, gasa y algodn. 4. Por cada ml de filtrado agregar 2ml de bencina luego agitar. 5. Inmediatamente colocar la mezcla en una placa petri y luego disponer encima un tringulo de papel filtro; obtenido de de cortar por la mitad un cuadrado de 10 cm del papel filtro. 6. Observar la migracin y separacin de los distintos pigmentos vegetales sobre el papel.

V.

CONCLUSIONES

VI.

CUESTIONARIO 1. Cules son las estructuras responsables de la fotosntesis en las hojas? 2. Explque brevemente la tcnica de separacin de molculas por cromatografa. 3. Cuntos pigmentos ha observado que se han separado y averigue la estructura qumica de cada uno de ellos? 4. Cul tipo de pigmento corre ms veloz en el papel filtro y cul se mueve menos, por qu?

VII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

BECKER, W.M.; L. J. Kleinsmith; j. Hardin. EL MUNDO DE LA CELULA. 6ta Edicin. Pearson Educacin, S. A. Madrid. 2007. COOPER, Geoffrey M. y HAUSMAN, Robert E. LA CELULA. Marban Libros, S.L. 3ra edicin 2006

M. Villavicencio. 1994. Bioqumica. A&B Editores. MADER, Sylvia S; BIOLOGIA. McGraw-Hill Interamericana Editores S. A. 2008. SADAVA, D; HELLER, H; ORIANS, G; PURVES, W: HILLIS, D. Vida, la ciencia de la biologa. 8va Edicin. Editorial Mdica Panamericana. 2009. SOLOMON, Eldra P.; Berg, Linda R.; Martn, Diana W. BIOLOGA. McGraw Hill Interamericana Editores. 5ta. Edicin 2001. STARR, Cecie y TAGGART, Ralph. BIOLOGIA. La Unidad y Diversidad de la Vida. Internacional Thomson Editores. 2004

PRACTICA

N 7

DIVISION CELULAR: MITOSIS

I.

INTRODUCCION

El ciclo celular es un conjunto ordenado de sucesos secuenciales de Interface y Mitosis que conducen al crecimiento de la clula y a la divisin en dos clulas hijas respectivamente. Las etapas de la interface son G 1-S-G2. El estado G1 quiere decir "Gap 1" (Intervalo 1). El estado S representa "Sntesis". Este es el estado cuando ocurre la replicacin del ADN. El estado G 2 representa "Gap 2" (Intervalo 2). Mitosis es la divisin nuclear ms citocinesis y produce dos clulas hijas idnticas pasando periodos de profase, metafase, anafase y telofase. La mitosis completa que produce clulas genticamente idnticas, es el fundamento del crecimiento, de la reparacin tisular y de la reproduccin asexual. La otra forma de divisin del material gentico de un ncleo se denomina meiosis y es un proceso que, aunque comparte mecanismos con la mitosis, no debe confundirse con ella ya que es propio de la divisin celular para la formacin de los gametos sexuales (produce clulas genticamente distintas y, combinada en la fecundacin, es el fundamento de la reproduccin sexual y la variabilidad gentica).

II.

OBJETIVOS
Comprender los procesos del ciclo celular y su regulacin Observar y reconocer cada una de las fases de la mitosis e interfase.

III. MATERIALES

Cultivo de meristemos de raz en bulbos de cebolla o semillas de haba en germinacin. Hojas de Guillet, pinzas, estiletes, papel filtro, Lminas portaobjeto, laminillas cubreobjetos, lunas de reloj o placas petri pequeas. Mechero de alcohol Colorante Orcena Actica Clorhdrica al 2% IV. DESARROLLO EXPERIMENTAL
PROCEDIMIENTO 1. Cinco das antes de la prctica, colocar un bulbo de cebolla en un frasco mediano transparente con agua, de modo que la zona de la raz este contacto con el agua. 2. Cortar las races que han crecido y colocarlas en una luna de reloj que contenga Orcena Actica Clorhdrica al 2 %. 3. Calentar la muestra con un mechero de alcohol hasta 60C (momento en que se desprende vapores blanquecinos) y luego dejar enfriar; esta operacin se repite unas cuatro veces; no debe hervir la preparacin. 4. Coger una lmina portaobjeto y colocar aqu la punta de una raz (aproximadamente 5 mm) que se calent previamente y luego adicionar una gota del colorante frio. 5. Cubrir la muestra con laminilla cubreobjetos y luego aplicar golpes en movimiento circular sobre la laminilla. 6. Luego con la ayuda del papel de filtro u otro papel absorbente secar el colorante en exceso y de inmediato con el dedo pulgar ejercer presin sobre la muestra con la ayuda del papel filtro (squash). 7. Observar al microscopio a 10X y 40X 8. Reconocer cada una de las fases del Ciclo celular.

V. CONCLUSIONES
..

VI. CUESTIONARIO
1. Por qu los meristemos de cebolla deben estar frescos para analizarlos? 2. Explique brevemente la accin que desempean cada uno de los componentes del colorante Orecena Aceto Clorhdrica 2% en la observacin del ciclo celular. 3. Cules son los eventos ms caractersticos de la Metafase y de la Anafase? 4. Cules son las principales diferencias entre la clula vegetal y animal durante la mitosis? 5. Qu ocurrira si se adiciona colchicina (frmaco inhibidor de la polimerizacin de los microtbulos) al recipiente con agua en el cual crecen los meristemos de cebolla?

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

BECKER, W.M.; L. J. Kleinsmith; j. Hardin. EL MUNDO DE LA CELULA. 6ta Edicin. Pearson Educacin, S. A. Madrid. 2007. COOPER, Geoffrey M. y HAUSMAN, Robert E. LA CELULA. Marban Libros, S.L. 3ra edicin 2006 M. Villavicencio. 1994. Bioqumica. A&B Editores. MADER, Sylvia S; BIOLOGIA. McGraw-Hill Interamericana Editores S. A. 2008. SADAVA, D; HELLER, H; ORIANS, G; PURVES, W: HILLIS, D. Vida, la ciencia de la biologa. 8va Edicin. Editorial Mdica Panamericana. 2009. SOLOMON, Eldra P.; Berg, Linda R.; Martn, Diana W. BIOLOGA. McGraw Hill Interamericana Editores. 5ta. Edicin 2001. STARR, Cecie y TAGGART, Ralph. BIOLOGIA. La Unidad y Diversidad de la Vida. Internacional Thomson Editores. 2004