Curvas de Calibración METROQUIMICA

Metroqumica: La Calidad en el Laboratorio Analtico
N8 Ao 2. Marzo-Abril de 2005
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N8. Ao 2. Marzo-Abril de 2005.

Publicacin gratuita dirigida a clientes, profesionales, estudiantes y pblico en general, que se
desempean en el mbito de los laboratorios de ensayo y calibracin y reas afines.

Este newsletter es un producto argentino de Lic. Sergio Chesniuk Consultora y
Teleconsultora Independiente en Metrologa para el Anlisis Qumico que se dedica a la
divulgacin de los conceptos y herramientas prcticas relacionadas con el aseguramiento de la
calidad en los laboratorios de anlisis qumicos y clnicos. Se trata de un vnculo hacia
profesionales altamente especializados, quienes suministran asistencia tcnica a laboratorios
qumico-analticos de la Republica Argentina y del resto de los pases de habla hispana.

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En este Nmero:

1 Editorial: Anlisis de regresin en el anlisis qumico instrumental. Parte I.
2 Software: Analyse it
3 Recomendacin: Gua para el desarrollo de la documentacin del sistema de
gestin
4 Nuestro curso a distancia: ELEMENTOS PARA LA VALIDACION DE METODOS
ANALTICOS.
5 Cursos presenciales y a distancia en la FUNDACIN JULIO PALACIOS
6 Nuestro curso gratuito a distancia, BASES PARA EL ASEGURAMIENTO DE LA
CALIDAD.
7 Momento de reflexin: Editoriales del Dr. Jorge Guala Valverde en el sitio web de la
Fundacin Julio Palacios.
8 Hasta el prximo numero.

1 Editorial: Anlisis de regresin en el anlisis qumico instrumental. Parte I.

Estimado Colega:

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Estamos hacindole llegar esta publicacin con cierto retraso. Ello debido a la enorme cantidad
de trabajo que da a da debemos ejecutar. Pero como se suele decir, ms vale tarde que
nunca, he aqu nuestras lneas:
El anlisis de regresin es utilizado para estudiar la relacin entre dos o ms variables. Esta
relacin se expresa como una funcin matemtica, para estudiar la dependencia entre una
variable no controlada y otra que si lo est durante el experimento.
El modelo de regresin mas simple y utilizado supone que la variable independiente no esta
sujeta a error (Modelo 1). Una de las aplicaciones de dicho modelo se denomina calibracin
donde la respuesta instrumental se relaciona con las concentraciones conocidas del analito en
los patrones o estndares de calibracin.
En cambio un modelo de regresin que tome en cuenta el error asociado a ambas variables es
un tanto mas complicado de ejecutar (Modelo 2), esta tcnica es mas ampliamente utilizada
cuando se necesita comparar dos mtodos obviamente afectados de error. Es decir, existirn
errores de medicin en ambos mtodos (ejes).

Volviendo al modelo al Modelo 1

bx a v + =
Modelo 1

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Figura: Curvas de regresin Modelo 1- a) Curva de regresin verdadera (nunca puede conocerse con
exactitud, solo puede estimarse) b) Curva de regresin estimada.

La lnea estimada se calcul mediante el mtodo de cuadrados mnimos, que minimiza la suma
al cuadrado de los residuales. El residual el e
i
es la desviacin del valor, medido y
i
respecto al
valor v
predicho por la recta de regresin:

i i i
v v e

=

Las ecuaciones para a y b son:

( )( )
( )
estimada linea la de pendiente
2

=
x x
v v x x
b
i
i i

estimada linea la de origen al ordenada x b v a =

media y
n
v
v
i
=

media x
n
x
x
i
=

La varianza de los residuales es:

( )
2
2
2
n
v v
s
i i
e

Observe que en los clculos de regresin lineal, el nmero de grados de libertad es n 2, esto
refleja el hecho de que para representar una recta se necesitan solo dos puntos.
Esta varianza es una medida de la dispersin de las mediciones alrededor de la lnea de
regresin, tambin es denominado error experimental puro.

Anlisis de regresin en el anlisis instrumental. Curvas de Calibracin

El anlisis de regresin lineal es un mtodo ampliamente utilizados en el campo del anlisis
instrumental. Entre otras cosas nos permite trabajar en un intervalo relativamente amplio de
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concentraciones. Adems los resultados y los errores aleatorios se calculan y se evalan de
una manera diferente a la que se utiliza cuando se repite una sola medicin varias veces.
En la figura de abajo podemos observar una curva donde se representa: en ordenadas, la
seal instrumental medida (absorbancia, cuentas, corriente elctrica, carga elctrica, etc) y en
abscisas, la concentracin del analito (ng / L, moles / L, ppm, etc).
Este tipo de grfico es denominado comnmente curva de calibracin, puesto que, para
patrones cuya concentracin de analito conocemos, obtenemos una seal de nuestro
instrumento que intentamos en principio, presente una respuesta lineal.

En el grafico anterior vemos nuestros puntos experimentales (medidos) y una recta que intenta
pasar a travs de ellos (la recta que mejor se ajusta o lnea estimada). Los parmetros de esta
lnea estimada bx a v + =
, b y a (pendiente y ordenada al origen respectivamente), se

calculan por el mtodo de los cuadrados mnimos como describimos al comienzo del apartado.

En la curva anterior tambin podemos observar el proceder para obtener la concentracin de
nuestro analito en una muestra cuya concentracin es desconocida. Primeramente obtenemos
la seal que nos da el instrumento para la muestra incgnita (signal) y luego, utilizando el
grfico o las ecuaciones de la recta, interpolamos a abscisas (concentration) donde
encontramos el valor de concentracin del analito en nuestra muestra incgnita.

A la hora de efectuar un anlisis empleando regresin lineal debemos tener en cuenta lo
siguiente:

la concentracin de muestras incgnita se determina generalmente por
interpolacin y no por extrapolacin.
ha de incluirse una muestra blanco.
necesitamos conocer el grado de linealidad en nuestro intervalo de trabajo (ver mas
abajo).
Los lmites de confianza para la pendiente y la ordenada al origen de la recta (ver
mas abajo).
Los errores aleatorios y lmites de confianza para la concentracin determinada de
una muestra incgnita (ver mas abajo).
El lmite de deteccin del mtodo (menor concentracin de analito que se puede
detectar con un nivel de confianza predeterminado) (ver mas abajo).

Adems, el anlisis por regresin lineal utiliza dos suposiciones bsicas:

los errores aleatorios en la calibracin slo ocurren en los valores de ordenadas
(seal). Esta de mas decir que nuestro instrumento arroja un valor de seal que
posee, como todo instrumento de medida, una dispersin asociada. No obstante,
en el eje de abcisas (concentracin) tambin suceden errores aleatorios, puesto
que los patrones utilizados (comerciales o no) tienen asociada tambin una
dispersin. Generalmente los errores asociados a las concentraciones de los
patrones suelen ser generalmente inferiores a los errores inherentes al instrumento
de medida.
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la magnitud de los errores aleatorios en ordenadas es independiente de la
concentracin de analito. Esta afirmacin no siempre es cierta, ya que en la
prctica sueles encontrarse algunas relaciones funcionales.

El grado de linealidad de una curva de calibracin.

Existe un parmetro, el coeficiente de correlacin para regresin lineal, r, que nos permite
visualizar el grado de linealidad de una curva. Viene dado por la siguiente expresin:

Observamos en la ecuacin que 1 r 1. Si la recta es perfectamente lineal y adems b > 0
entonces r = 1 (figura a). Si por el contrario, la recta es perfecta y b < 0, r = -1 (figura b). Si no
existe linealidad alguna, r = 0, (figura c).

En muchos casos el valor de r calculado puede generar una interpretacin errnea respecto de
una curva. Veamos los grficos siguientes:

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En (a) se observa a simple vista que la curva no es lineal aunque el valor de r no se aleja
demasiado de 1 (0.986). En (b), un r = 0 no significa que no exista correlacin entre los datos
sino que en realidad existe una relacin, pero esta no es lineal. Por ello, siempre se hace
necesario elaborar una grfica que acompae a r.
Un test estadstico puede ayudarnos tambin a decidir acerca de la linealidad de una curva de
calibracin. La siguiente expresin nos da un valor para t en funcin de r:

luego se compara t con el valor tabulado para el nivel de significacin deseado usando un
prueba t de dos colas y (n-2) grados de libertad.
Para ello planteamos la hiprtesis nula:
H
0
: no existe correlacin entre x e y.

Si t
cal
> t
tab
, H
0
debe rechazarse y por lo tanto si existe una correlacin lineal entre los datos.

Errores aleatorios en la pendiente y en la ordenada al origen. Sus lmites de confianza.

Ya que suponemos que existen errores solo en ordenadas, es obvio que los mismos se van a
propagar a la pendiente, b, y la ordenada al origen, a. Veamos el grfico que se muestra abajo:
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donde:
x
1
, x
2
...x
6
son los valores de x carentes de error
y
1
, y
2
...y
6
son los valores de y obtenidos experimentalmente
6 2 1
y` ... y` , y` son los valores de y obtenidos desde la curva ajustada

Tenemos ahora, el estadstico s
y/x
:

que nos sirve para expresar s
b
, la desviacin estndar de la pendiente y s
a
, la desviacin
estndar de la ordenada al origen respectivamente:

Ahora ya estamos en condiciones de establecer los lmites de confianza para la pendiente y la
ordenada al origen:

b
ts b
y
a
ts a

para un nivel de confianza deseado y n-2 grados de libertad.

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Clculo de la concentracin y error asociado

En el clculo de la concentracin utilizamos la siguiente expresin derivada directamente de la
ecuacin de la recta:

( )
b
a v
x

=
0
0

donde
0
x es la concentracin de la muestra incgnita e
0
v es la seal que general la misma
muestra.

Es complicado obtener una expresin simple a los fines de calcular el error asociado a
0
x . Una
buena aproximacin lo dan las siguientes expresiones:

Para una sola lectura de
0
v

Para m lecturas de
0
v

Entonces los lmites de confianza se calculan como:
0 0 x
ts x , con (n-2) grados de libertad
para los niveles de confianza deseados.
En la grfica de abajo se muestra la forma general de los lmites de confianza para una
concentracin dada empleando una recta de regresin simple.

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Podemos observar que si nuestra calibracin no es buena obtendremos un valor elevado de
0
x
s lo que va
en desmedro de nuestro anlisis. La pregunta es: Cmo disminuir
0
x
s , al nivel de confianza deseado?
De las expresiones anteriores podemos apreciar que
0
x
s disminuye cuando:
Aumenta b, es decir, aumenta la pendiente o sensibilidad del instrumento.
Aumenta n, es decir, aumenta el nmero de patrones utilizados en la calibracin. Este
incremento va tambin acompaado en el valor de t utilizado para determinar el intervalo de
confianza.
Aumenta m, en el caso de
0
x
s para m lecturas de y0.
y0 (lectura de la muestra incgnita) cae aproximadamente en la mitad de la curva de
calibracin; entonces ( )
2
0
v v se hace pequeo.

contina en la prxima edicin de este boletn electrnico
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Si necesita informacin adicional respecto a este y otros temas, no dude en consultarnos:
info@chesniuk.com.ar.

Como siempre quedamos atentos a sus crticas y/o sugerencias y lo invitamos a continuar con
la lectura de esta publicacin, la que esperamos sea de su agrado y utilidad.

Lic. Sergio Chesniuk
sergio@chesniuk.com.ar

2 Software

Analyse it, un interesante add-in para Excel con casi todas las herramientas estadsticas
que suelen aplicarse en el laboratorio analtico, puede descargarse la versin de prueba
totalmente funcional (por tiempo limitado) desde su propio website:

http://www.analyse-it.com/

3 Recomendacin: Gua para el desarrollo de la documentacin del sistema de
gestin

Si est comenzando a desarrollar el sistema de gestin de la calidad en su laboratorio de
ensayos bajo ISO/IEC 17025:1999, no se pierda esta publicacin de la Universidad Nacional
del Litoral, Santa Fe, Argentina:
Gua para el desarrollo de la documentacin del sistema de gestin de la calidad para
los laboratorios. Segn Norma IRAM 301:2000, ISO/IEC 17025:1999. Ana L. Laffitte,
Mara Julia Martnez. 2004.
http://ediciones.linuxsantafe.com/coleccion.php?ID=1&desde=100

4 Nuestro nuevo curso: ELEMENTOS PARA LA VALIDACION DE METODOS
ANALTICOS... Su Aplicacin Inmediata en el Laboratorio Qumico.

Tenemos el agrado de invitarle a nuestro nuevo curso continuo a distancia:

"Elementos para la Validacin de Mtodos Analticos. Su aplicacin inmediata
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en el Laboratorio Qumico"

A dictarse desde: www.evma.chesniuk.com.ar

Modalidad y aranceles: http://www.chesniuk.com.ar/evma.htm
Contenidos: http://www.chesniuk.com.ar/evma/contenidos.htm
Inscripcin: http://www.chesniuk.com.ar/evma/F2_EVMA.htm

Consultas: info@chesniuk.com.ar.

5 Cursos presenciales y a distancia en la FUNDACIN JULIO PALACIOS, Neuqun,
Argentina.

Le invitamos cordialmente a participar de los siguientes cursos y seminarios brindados
por esta prestigiosa Fundacin.

Para mas informacin ingrese en:

http://www.cjb.cc/members/fundacionjuliopalacios/cursos_2005.htm

Sistema de Gestin de la Calidad - ISO 9001:2000, a Distancia, Inscripcin Continua

Sistema de Gestin Ambiental - ISO 14001:2004, a Distancia, Inscripcin Continua

Seguridad en Laboratorios Qumicos y Microbiolgicos, Presencial: 18 de mayo de
2005, a Distancia: Inscripcin Continua

Los Alimentos: Qumica, Consumo y Salud, a Distancia, Inscripcin Continua

Los Materiales: sus propiedades y sus usos, a Distancia, Inscripcin Continua

Seminario de Propagacin de enfermedades, Presencial 16 de Julio de 2005,

6 Nuestro curso gratuito a distancia

Si an no forma parte de nuestra lista de alumnos, lo invitamos a inscribirse en el curso gratuito
a distancia para profesionales y estudiantes "Bases para el Aseguramiento de la Calidad en el
Anlisis Qumico". Para mas detalles ingrese en: www.chesniuk.com.ar/cursog.htm

7 Momento de reflexin: Editoriales del Dr. Jorge Guala Valverde en el sitio web de
la Fundacin Julio Palacios.

Salgamos un poco del laboratorio y nos aboquemos unos minutos a la lectura de los editoriales
de este prestigioso y singular cientfico.

Ingrese en: http://www.cjb.cc/members/fundacionjuliopalacios/editoriales.htm

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8 Hasta el prximo nmero

Como siempre agradecemos muy especialmente el tiempo que nos ha brindado e, insistimos, si
tiene alguna inquietud, idea, proyecto, aviso comercial o consulta tcnica y la desea publicar
gratuitamente en nuestro boletn y a travs de l, hacerla llegar a nuestra creciente comunidad
de usuarios, lo estimulamos a envirnosla a metroquimica@eListas.net .

En cambio, si lo que quiere es contactarnos y que este contacto no trascienda mas all de los
limites de nuestra consultora, envenos un email a consulta@chesniuk.com.ar . A la misma
direccin electrnica debe dirigirse si desea que tratemos algn tema de su preferencia en una
futura edicin de nuestro newsletter.

Un fuerte abrazo desde la ciudad de Crdoba, Argentina, y hasta el prximo nmero.

Lic. Sergio Chesniuk
Consultora y Teleconsultora Independiente
en Metrologa para el Anlisis Qumico
Url: www.chesniuk.com.ar
Email: info@chesniuk.com.ar
Telfono y fax: +54 0351 4717303
Telfono mvil: +54 0351 155915918
MSN: laboratorio@chesniuk.com.ar

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predicho por la recta de regresin:

, b y a (pendiente y ordenada al origen respectivamente), se

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