PROTOCOLO DE EXTRAO DE DNA EM CLULAS VEGETAIS Objetivo: Aplicar a tcnica de extrao de DNA em clulas vegetais.

Procedimento: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. Amasse a banana e o morango, separadamente, com o auxlio de um graal e do pistilo; Corte a cebola em pedaos pequenos (aproximadamente 0,5 cm); Identifique 3 Beckers e 3 tubos de ensaio com as letras A, B e C; Nos 3 Beckers identificados, prepare a soluo contendo 10 mL de detergente comercial, 3g de NaCl e complete com gua destilada at 100mL; Misture bem a soluo, com o auxlio de um basto de vidro; Adicione ao Becker B a banana amassada; Adicione ao Becker C a cebola picada; Na sequncia, leve ao banho-Maria (60) por 15 minutos; Adicione ao Becker A o morango amassado e misture bem a soluo; Aps os 15 minutos ao banho-Maria, resfrie rapidamente a mistura, colocando os Beckers B e C em um recipiente com gelo; Aps resfriada, filtre as solues A, B e C utilizando gaze; Descarte o resduo e coloque o lquido resultante (filtrado) nos tubos de ensaio A, B e C respectivamente; Despeje delicadamente, com o auxlio de uma pipeta Pasteur, lcool comercial, previamente resfriado, sobre o filtrado contido no tubo de ensaio; Faa movimentos lentos com o tubo, de forma que o DNA passe para a fase alcolica; Observe que o DNA passa do aspecto viscoso para o de um chumao de algodo; Se desejar, remova-o da soluo com o auxlio de um basto de vidro ou pipeta Pasteur, fazendo movimentos circulares dentro da soluo de modo que o DNA se enrole no basto, em seguida coloque em uma lmina, core com uma gota de corante, cubra com a lamnula e observe ao microscpio.

Preencha os espaos em branco: Para extrao do DNA necessrio primeiro separ-lo do restante da clula. Para isso, utiliza-se ____________________________, que dissolve lipdios e desorganiza as ____________________________, liberando assim o contedo nuclear e citoplasmtico. Para facilitar este processo aumenta-se a energia cintica da reao a fim de favorecer o choque entre as molculas. Para isso, a temperatura deve ser ____________________________. Depois de liberado do ncleo, o DNA deve ser precipitado. Em condies normais, o esqueleto externo de fosfato com suas cargas negativas que promove a repulso entre as molculas de DNA. Sua precipitao ento favorecida pela neutralizao destas cargas negativas, que ocorre com a utilizao de ____________________________, promovendo assim agregao das molculas. Nesta etapa o DNA apresenta-se quase que completamente nu, ou seja, constitudo de molculas lineares, descompactadas e praticamente desprovidas de protenas. Esta situao facilita a ao de enzimas especficas para cidos nuclicos, denominadas de endonucleases. A temperatura ____________________________ diminui a energia cintica, diminuindo a repulso entre as molculas o que aumenta as interaes DNA-DNA, impedindo a ao das endonucleases. O aspecto do DNA nesta fase viscoso e leitoso. Isto se deve ao fato da gua ser um composto polar, favorecendo a interao entre soluto e solvente. O acrscimo de ____________________________ ao meio diminui a polaridade deste possibilitando a completa precipitao do DNA.