Apostila Botanica No Inverno 2012

UNIVERSIDADE DE SO PAULO INSTITUTO DE BIOCINCIAS
Organizadores
Adne Abbud Righi Aline Tiemi Matsumura Aline Siqueira Nunes Beatriz Nogueira Torrano da Silva Carlos Eduardo Amancio Cintia Iha Emmanuelle da Silva Costa Janana Morimoto Meyer Jos Hernandes Lopes Filho Kleber Alves Gomes Leonardo Hamachi
Professor Responsvel
Cludia Maria Furlan
Autores
Adne Abbud Righi Alejandra Matiz Lopez Alice Nagai Aline Tiemi Matsumura Aline Siqueira Nunes Andrs Ochoa C. Edgar Augusto Csar de Barros Tomba Beatriz Nogueira Torrano da Silva Bruna Silvestroni Pimentel Carmen Eusebia Palacios Jara Carlos Eduardo Amancio Carolina Anglica Araujo de Azevedo Carolina Krebs Kleingesinds Carolina Lopes Bastos Cintia Iha Emmanuelle da Silva Costa Fabio Nauer da Silva Fernanda Mendes de Rezende Giuliano Maselli Locosselli Guilherme Marcello Queiroga Cruz Janana Morimoto Meyer Janana Pires Santos Jenifer de Carvalho Lopes Jos Hernandes Lopes Filho Jonas Weissmann Gaiarsa Juliana Hanna Leite El Ottra Keyla Rodrigues Kleber Alves Gomes Leonardo Hamachi Lucas Macedo Felix Luiza Teixeira-Costa Mariane Souza Baena Mariana Crotti Franco Natlia Ravanelli Paula Natlia Pereira Paulo Tamaso Mioto Paulo Marcelo Rayner Oliveira Rafael Cruz Sarah Aparecida Soares Vitor Baro
So Paulo 2012
Botnica no Inverno 2012 / Org. de Adne Abbud Righi...[et al.]. So Paulo : Instituto de Biocincias da Universidade de So Paulo, 2012. 183 p. : il.
ISBN 978-85-85658-29-8
1. Botnica. 2. Extenso. 3. Ps-Graduao. I. Righi, Adne Abbud. II. Ttulo.
ndice
ndice...............................................................................................................................i Apresentao.................................................................................................................iii 1 Estrutura e Desenvolvimento.............................................................................................1 Estrutura e desenvolvimento da raiz..............................................................................3 O Caule: um enfoque na atividade cambial.................................................................11 Folha: desenvolvimento, estrutura e funo................................................................23 Estruturas reprodutivas em angiospermas..................................................................43 Fitormnios no desenvolvimento vegetal.....................................................................55 Metabolismo Secundrio..............................................................................................57 2 Diversidade e Evoluo....................................................................................................65 Interaes Planta-Ambiente.........................................................................................67 Interao Planta-Planta................................................................................................77 Plantas Parasitas..........................................................................................................83 A origem do cloroplasto e a evoluo dos eucariontes fotossintetizantes..................89 Biodiversidade e Ecologia de Macroalgas Marinhas Brasileiras.................................97 Estratgias de defesa antioxidantes em macroalgas................................................105 O trabalho na taxonomia vegetal e seus principais mtodos.....................................111 3 Recursos.........................................................................................................................117 Estrutura genmica, sequenciamento e elementos de transposio........................119 Biomassa como Fonte de Energia: Biocombustveis.................................................127 Bioinformtica.............................................................................................................133 Organismos Geneticamente Modificados no contexto da Botnica..........................139 Organismos geneticamente codificados e a cultura de tecidos.................................147 Biologia Sinttica........................................................................................................155 Plantas e Sociedade...................................................................................................159 Ficocolides: Polissacardeos das algas marinhas...................................................169
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BOTNICA NO INVERNO 2012
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Apresentao
O Departamento de Botnica do Instituto de Biocincias da Universidade de So Paulo (IB-USP) cenrio de constante aprendizado, troca de conhecimentos, fluxo intenso de alunos de graduao e ps-graduao e muitas, muitas histrias!!! Desde professores eternizados em nomes de plantas aos recm-contratados (que j comeam a deixar seus vestgios pelos andares), todos, em unssono aos alunos de ps-graduao, buscam contribuir para o desenvolvimento cada vez maior da nossa segunda casa! E por que no tornar nossa casa mais acolhedora nos glidos dias de inverno da capital paulista? E por que no alunos de ps-graduao tornarem-se professores e orientadores por 15 dias apresentando as diversas linhas de pesquisas desenvolvidas ao longo de tantos anos? Assim comeou um curso de extenso universitria do departamento: Botnica no Inverno. Na primeira edio do curso a iniciativa dos alunos de ps-graduao logo teve apoio unnime dos docentes do departamento de Botnica, bem como do ento diretor do IB-USP, Prof. Dr. Wellington Braz Carvalho Delitti. O empenho de todos (professores e alunos) durante a primeira edio foi tamanha que culminou em enorme sucesso! Neste ano de 2012 contamos com apoio de toda equipe do IB, o atual diretor Prof. Dr. Carlos E. F. da Rocha, o coordenador da ps-graduao Prof. Dr. Renato de Mello-Silva, a chefe do departamento Profa. Dra. Marie-Anne Van Sluys, bem como dos demais docentes, funcionrios e discentes. O resultado deste entrosamento de sucesso extrapolou as vagas oferecidas. Contamos com 449 inscritos de quase todo territrio nacional!!! E tambm alcanamos outros pases da Amrica Latina!! Alm de promover o contato dos alunos de graduao e recm-graduados com laboratrios e linhas de pesquisa do Departamento de Botnica IB- USP, o curso busca revisar, com os alunos de graduao e recm-graduados, conceitos fundamentais de Anatomia Vegetal, Sistemtica e Taxonomia, Fisiologia Vegetal, Ficologia, Biologia Molecular, Biologia Celular e Fitoqumica, e ressaltar as intercomunicaes de cada subrea! E, finalmente, o Botnica no Inverno uma tentativa de auxiliar futuros acadmicos e interessados na rea a elaborar perguntas cientficas relevantes nos diversos campos da Botnica, tendo em mente sua aplicao em pesquisa cientfica de base ou aplicada. Desejamos a todos um excelente aproveitamento do curso e seus desdobramentos!!!
Comisso Organizadora do II Botnica no Inverno
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Estrutura e Desenvolvimento
1 Estrutura e Desenvolvimento
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Estrutura e desenvolvimento da raiz

Aline Tiemi Matsumura Paulo Marcelo Rayner Oliveira
Na condio de organismos ssseis, os vegetais apresentam limitaes nos mecanismos de fuga, na capacidade de luta, na aquisio de recursos hdricos e nutrientes, alm de outras condies adversas impostas pelo ambiente circundante. Dentre estas condies destacam-se os fatores nutricional e hdrico. Em geral as plantas retiram grande parte dos nutrientes do solo, assim como a gua. Em grande parte das plantas, a principal regio responsvel pela absoro de gua e nutrientes o sistema radicular. Ele tambm responsvel pelo armazenamento e conduo destes, alm de ter como funo a fixao da planta em seu substrato. Entretanto, cabe ressaltar que, dependendo da espcie, bem como seu habitat, a raiz pode perder parte de suas funes ou adquirir novas. Podemos citar como exemplo as plantas epfitas (como diversos membros da famlia Bromelliaceae), as quais possuem um sistema radicular rudimentar que confere apenas sustentao, sendo assim toda parte de absoro de gua e nutrientes realizada por outros rgos como folhas e caule. Em alguns casos extremos como no caso de algumas orchidaceaes, a parte area da planta reduzida a tal ponto que as razes so as responsveis pela fotossntese. O crescimento e desenvolvimento do sistema radicular pode sofrer influncia de vrios estmulos ambientais tais como a gravidade, luz, umidade, nutrientes, temperatura e resistncia fsica do solo. Dessa forma, a planta deve apresentar caractersticas que lhe permitam adaptar-se s condies ambientais impostas, garantindo o mximo de vantagem para seu crescimento e desenvolvimento. Desde o estudo pioneiro de Darwin (1880), estudos fisiolgicos e anatmicos acerca do comportamento da raiz modulados por estmulos fsicos vm sendo realizados. fato que nas plantas praticamente todos os eventos relacionados ao crescimento e desenvolvimento so regulados por pequenas molculas orgnicas coletivamente denominadas fitormnios, sendo os principais as auxinas, citocininas, giberelinas, cido abscsico e o etileno. Ao contrario dos animais, no existem nas plantas rgos especializados para a biossntese hormonal, embora possam existir diferenas na capacidade biossinttica de cada rgo. Os efeitos dessas molculas podem ser altamente complexos, pois uma nica clula pode responder a vrios hormnios simultaneamente e um nico hormnio pode atuar em vrios tipos de tecido.
Desenvolvimento do sistema radicular

A raiz um rgo que tem sua formao ainda no estgio embrionrio da planta. Esta raiz embrionria chamada de radcula, que surge atravs da diferenciao celular que origina o eixo hipoctilo/radcula. Aps a germinao e a emergncia da radcula, tem incio o desenvolvimento e o crescimento do rgo. A raiz pode ser dividida em trs partes: a zona meristemtica, zona de alongamento e zona de maturao. A origem destes tecidos est em um grupo de clulas localizados no meristema apical da raiz, denominado centro quiescente regio com clulas de baixa taxa mittica que circundado por uma camada de clulas que apresentam altas taxas de
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1. Estrutura e Desenvolvimento
divises mitticas. Acima deste grupo de clulas inicia-se a diferenciao nos diferentes tecidos da raiz de acordo com sua posio. Abaixo do centro quiescente forma-se a coifa, um tecido de consistncia mucilaginosa com funo de proteo do meristema apical radicular. A zona meristemtica a regio responsvel pelo crescimento do rgo. constituda pela protoderme, meristema fundamental e procmbio, que do origem, respectivamente, epiderme, crtex e ao cilindro vascular. A epiderme o tecido de revestimento da raiz. Acima da zona de diviso celular (quando o xilema se encontra parcialmente maduro) ocorre a expanso das clulas epidrmicas em pelos radiculares, que aumentam a superfcie de contato otimizando a absoro. O crtex origina a exoderme (abaixo da epiderme) e a endoderme (camada mais interna), esta ltima apresentando uma faixa de suberina denominada estria de Caspary, responsvel por impedir a passagem de gua e solutos entre as clulas. Tanto a epiderme quanto o crtex so perdidos em plantas que apresentam crescimento secundrio. No cilindro vascular o tecido mais externo o periciclo, de onde se originam as razes laterais. A maturao tanto do xilema quanto do floema centrpeta. O xilema forma projees em direo ao periciclo (protoxilema) e diferencia-se em metaxilema no centro. Os polos de protoxilema se revezam na extremidade com o protofloema. Em alguns casos, quando o xilema no se diferencia no centro este ocupado pela medula (tecido meristemtico).
Figura 1 - Esquema geral dos tecidos da raiz primria. Ao lado direito esquema simplificado de um corte transversal na zona meristemtica (abaixo) e aps a maturao dos tecidos vasculares (acima).
Sabe-se que o crescimento radicular deriva-se de dois eventos primrios bsicos: de um lado as divises das celulares meristemticas apicais, e de outro pelo processo de
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alongamento das clulas filhas. No nvel fsico das clulas o alongamento celular direcionado pela interao entre a turgescncia e a expanso da parede celular, evento este mediado pelo hormnio auxina. A auxina tida como hormnio do crescimento, por ser uma das suas principais funes. Na raiz, sua atuao pode variar de acordo com o local em questo. Na regio apical, a auxina atua no controle do processo de diviso das clulas que circundam o centro quiescente e na diferenciao celular. No entanto na zona de alongamento, como o prprio nome sugere, a auxina desempenha o seu papel principal que promover o alongamento das clulas. Alm disso, a auxina participa na organognese. No sistema radicular este hormnio promove a iniciao das razes laterais. Este processo ocorre a partir do transporte polar de forma baspeta deste hormnio, ou seja, da parte area para a parte radicular. Este transporte feito atravs de transportadores que promovem dois eventos, o influxo e o efluxo. O influxo de auxina mediado por protenas denominadas AUX/LAX, enquanto que o efluxo mediado por protenas denominadas PIN. Sabe-se que a auxina induz a sntese de um outro hormnio chamado etileno, que se apresenta na forma de gs. Em virtude do transporte polar da auxina, ocorre um aumento no gradiente de deste hormnio, induzindo por sua vez a sntese de etileno. Isto gera um acmulo de etileno na regio prxima ao meristema. Por consequncia, tem-se uma reduo na capacidade de difuso da auxina ocasionando tambm um acmulo deste hormnio na regio. Em resposta a este acmulo de auxina algumas clulas do periciclo, responsivas a este hormnio, entram em processo de diviso e diferenciao, dando origem ao primrdio radicular. Entretanto, no somente a auxina e o etileno participam deste processo, sendo outro hormnio participante a citocinina. Na raiz este hormnio atua de forma antagnica auxina. Isso impede que uma quantidade de auxina alm do necessrio chegue ao pice meristemtico e provoque fortes alteraes na regio. Todavia vale lembrar que o antagonismo ou a sinergia entre a auxina e a citocinina dependente do balano endgeno destes dois hormnios. Sabe-se que o principal centro produtor de citocinina na planta so as razes, da mesma forma que acontece com o cido abscsico (ABA). O ABA uma molcula produzida principalmente quando a planta se encontra em uma situao que possa comprometer o seu crescimento e/ou desenvolvimento como, por exemplo, submetida ao dficit hdrico, altas concentraes de sal, baixas temperaturas, entre outros. Uma das mais clssicas atuaes do cido abscsico a sinalizao para o fechamento estomtico.
Coordenao no crescimento do sistema radicular

Ao fazer uma analise comparativa entre a parte area e a parte radicular, notvel a existncia de eventos bastante similares como, por exemplo, os tropismos. Dentre todos sero destacados o gravitropismo (crescimento em resposta gravidade), o tigmotropismo (crescimento em resposta ao toque, ou seja, resposta s barreiras mecnicas) e o hidrotropismo (crescimento em resposta aos nveis de gua disponveis). Em uma primeira anlise temos o hidrotropismo, que o crescimento direcionado a regies com maior contedo disponvel de gua. Nesta mesma vertente, temos o tigmotropismo, que o direcionamento do crescimento em sentido contrrio a barreiras
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mecnicas como solos compactados, rochas ou at mesmo razes de outras plantas. De um modo mais detalhado temos o gravitropismo. A percepo do estmulo gravitrpico medida pelos estatlitos, amiloplastos especializados na percepo do estmulo gravitacional. Da mesma forma, existem clulas especializadas na percepo da gravidade, as quais alocam os estatlitos, denominadas estatcitos. Basicamente, a percepo do estmulo resposta gravitrpica gerenciada pela sedimentao dos estatlitos na superfcie inferior dos estatcitos. Estas estruturas esto presentes principalmente na coifa. O principal hormnio que atua na resposta gravitrpica a auxina. At onde se sabe, o transporte lateral da auxina gera uma taxa de alongamento celular diferenciada. Em sntese, o lado onde h uma menor concentrao de auxina cresce mais do que o lado de maior concentrao. Isso ocorre devido ao fato de que a concentrao hormonal que induz o alongamento celular estaria supra-timo, acarretando uma inibio do alongamento celular e, consequentemente, moldando a raiz e gerando uma curvatura que vai direcionar o crescimento do rgo. Outro elemento que tambm parece ser um fator bastante importante o nvel de clcio. Acredita se que o clcio possa provocar um rearranjo dos transportadores de auxina, direcionando o fluxo deste hormnio para a parte inferior da raiz, resultando na resposta gravitrpica. Com tudo isso, notvel a complexidade do processo de crescimento e desenvolvimento do sistema radicular. Ainda h muito a se fazer para que novos avanos sejam feitos e uma gama de dvidas sejam solucionadas no que se refere aos processos fisiolgicos envolvidos na morfologia e anatomia das razes, assim como as interaes ambientais que medeiam tais processos.
Absoro de gua e manuteno do potencial hdrico em razes

Diversos eventos da planta dependem da absoro e transporte de gua. A gua possui propriedade polar que a torna um excelente solvente. Alm disso, ela permite a estabilidade da temperatura da planta, j que a gua exige uma alta energia para sua temperatura ser alterada. A transpirao (evaporao das molculas da superfcie que acumulam energia do sol) tambm um importante componente para a termorregulao das plantas, necessria tambm para absoro de CO2 e transporte de nutrientes. A gua se direciona no solo e na planta guiada pelo potencial hdrico. O potencial hdrico a energia potencial da gua em relao a um estado padro. A gua migra de uma regio de maior potencial para uma menor. O potencial hdrico a soma do potencial de massa ou presso hidrosttica (depende do volume de gua em um mesmo espao; positiva quando a clulas est trgida, por exemplo) e o potencial de soluto ou presso osmtica (quanto maior a concentrao de soluto menor o valor, pois ele reduz a energia da gua). Como citado anteriormente, as razes possuem pelos que aumentam a superfcie de absoro. Em geral, a absoro maior nos tecidos prximos aos pices (tecido mais jovem), permitindo que novas razes sejam capazes de buscar e absorver gua. Uma vez dentro da raiz a gua pode entrar pela raiz de 3 formas (ver figura 2):
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Apoplstica: neste caso, a gua no atravessa membranas, passando pelas paredes celulares ou qualquer espao extracelular. Simplstica: a gua passa via plasmodesmas (extenses da membrana que conectam os
citoplasmas da clula). Transmembrnica: a gua atravessa a membrana semipermevel, sem o auxlio de plasmodesmas.
Figura 2: Possveis rotas de absoro de gua.
Ao chegar na endoderme, a gua deve passar obrigatoriamente pela estria de Caspary, j mencionada, que impede o transporte via apoplasto, forando a passagem pela membrana plasmtica. Uma vez no xilema, ela encaminhada para as folhas, por onde perdida na forma de vapor pelo estmato. Os espaos intercelulares na mesofilo (ver captulo de Folha) facilitam o direcionamento da gua contra a gravidade, pois geram uma diferena de potencial hdrico. O xilema facilita o transporte porque suas clulas sofrem morte programada e espessamento da parede, permitindo que a planta suporte altas presses. As clulas so conectadas via pontoaes (falta de parede secundria que permite a conexo entre clulas via plasmodesmas), facilitando a passagem de gua. Quando o ar consegue passar pela endoderme pode ocorrer interrupo do fluxo de gua (cavitao), neste caso ela passa por outra conexo da clula adjacente. Um fenmeno comum durante a noite a presso positiva da raiz. Neste caso, as razes acumulam solutos no xilema, forando a gua a migrar para dentro pelo potencial de soluto. Essa presso gerada pode desobstruir as clulas que sofreram cavitao. Esse fenmeno pode ser observado nas folhas no incio do dia, quando a seiva do xilema exsudada pelos poros nas folhas.
Absoro e transporte de nutrientes

Alm de transportar gua, as razes tambm transportam outros nutrientes juntos. Podemos separ-los em orgnicos (mais utilizado na agricultura) e inorgnicos. Os nutrientes inorgnicos so mais comuns no solo, pois em geral a presena de diversos microorganismos que competem pelos nutrientes orgnicos os tornam menos disponveis. Os principais nutrientes para as plantas, considerados essenciais por participarem do metabolismo ou estrutura da planta, podem ser classificados em macronutrientes, presentes em grandes concentraes no tecido vegetal (N, K, Ca, Mg, P, S e Si) e micronutrientes, necessrios em menores concentraes (Cl, Fe, B, Mn, Na,
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Zn, Cu, Ni, Mo). Os obtidos pelo gs carbnico ou gua geralmente no entram nesta classificao (C, O, N). A falta ou excesso destes nutrientes costumam acarretar sintomas na planta. Reconhecer qual mineral est provocando o distrbio na planta essencial para a agricultura, entretanto, no algo to simples, na medida em que a falta de um componente pode induzir deficincia ou acmulo de outro no organismo. No caso da deficincia, uma pista importante a mobilidade dos nutrientes na planta, pois os imveis geram deficincia local enquanto os mveis so visveis em tecidos mais velhos, j que eles remobilizam os nutrientes escassos para os tecidos jovens. Dependendo da espcie e do nutriente, podem existir diferenas de qual regio cada um deles absorvido pela raiz. A morfologia da raiz tambm depende da disponibilidade destes nutrientes. Sabe-se que o nitrognio e o fsforo so os principais macronutrientes limitantes ao crescimento. A disponibilidade de nitrognio e fsforo podem alterar a arquitetura da raiz inibindo ou promovendo o crescimento da raiz principal e o crescimento e formao de razes laterais. Em Arabidopsis thaliana, altas concentraes globais de nitrognio inibem o crescimento tanto da raiz primria como laterais, enquanto sua falta promove o alongamento de razes laterais. Entretanto, altas concentraes locais so capazes de promoverem o crescimento da raiz lateral. Cabe ressaltar que o efeito da falta ou excesso de nitrognio depende da sua fonte (nitrato, amnio, compostos orgnicos etc), do ambiente e da espcie de planta a ser estudada. O principal hormnio envolvido neste processo a citocinina, que sinaliza o estado nutricional da planta para a parte area, desta forma modulando seu crescimento em funo da disponibilidade de nitrognio. O excesso de fsforo promove o desenvolvimento da raiz primria, enquanto sua falta promove o desenvolvimento de razes laterais. Como o fsforo um nutriente de baixa mobilidade, sua disponibilidade no solo reduzida, justificando as mudanas que sua falta causa na arquitetura da raiz. Entretanto, pouco se sabe ainda sobre os mecanismos de regulao envolvidos neste processo. Dependendo do ambiente, as plantas possuem algumas adaptaes para captao de nutrientes. Um exemplo so plantas carnvoras, que obtm os nutrientes escassos no solo atravs de armadilhas que capturam pequenos animais. Outro so plantas que se associam com fungos ou bactrias. Em troca de carboidratos, as plantas recebem nutrientes ou gua, caracterizando uma relao simbitica. A associao com fungos denominada micorriza, ocorre em condies naturais e distribuda em quase todos os grupos. J na associao com bactrias o caso mais comum so o das plantas leguminosas, que formam ndulos nas razes da planta hospedeira e fornecem compostos nitrogenados fixados do ar atmosfrico. A nvel celular, os nutrientes entram nas clulas vegetais atravs de protenas transportadoras. Apenas a gua e muito raramente ons so capazes de atravessar as camadas de fosfolipideos, o restante sendo transportado por protenas inseridas nestas camadas. O transporte pode ocorrer por 3 formas: Dependente de energia (ATP), sendo chamadas de ATPases ou bombas de ATP. Canais, ou protenas transmembranas nas quais molculas e ons podem se difundir. Cotransportadores, protenas que no atravessam completamente a membrana e so mais seletivos. O transporte por canais sempre passivo, ou seja, sem gasto de energia. A nica forma de regulao a abertura e o fechamento, que dependem de sinais como luz ou hormnios. Um canal muito estudado so as aquaporinas, que permitem a passagem de gua para dentro das clulas de forma acelerada. Sabe-se atualmente que elas no so especficas para molculas de gua, podendo transportar desde
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gases a pequenas molculas de outras substncias, como a uria. O transporte por cotransportadores dependem da sua ligao com o substrato. Em geral, a taxa de transporte neste caso muito mais lenta que seu transporte pelo canal. A ligao do soluto gera uma mudana na conformao na membrana, permitindo sua entrada na clula. O transporte pode ser passivo ou ativo. No transporte ativo a molcula entra na clula contra o seu gradiente de concentrao. A energia vem de uma diferena de potencial eltrico ou qumico, provindo de um segundo soluto. Em geral, o nitrato, o cloro, o fosfato e o sulfato entram na clula por transporte ativo, enquanto o sdio, magnsio e clcio entram de forma passiva.
Bibliografia
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O Caule: um enfoque na atividade cambial

Carolina Lopes Bastos Giuliano Locosselli
Seja ele uma estrutura de morfologia complexa, com diferentes padres anatmicos e mltiplas funes, ou apenas um rgo de sustentao para as pores fotossintetizantes e reprodutivas das plantas, o caule uma estrutura de grande importncia no contexto da biologia vegetal. So diversos os estudos da anatomia, fisiologia, e morfologia externa deste rgo, que pode estar altamente modificado em sua estrutura, assumir funo fotossintetizante, crescer em espessura e formar madeira, ou continuar herbceo durante todo o desenvolvimento da planta. Neste captulo, algumas caractersticas caulinares sero abordadas, com um enfoque na atividade do cmbio vascular, seja ela padro ou variante, e nos hormnios responsveis por essa atividade, bem como no registro dendrocronolgico da atividade deste tecido to importante.
Crescimento primrio
O caule em crescimento primrio formado por trs sistemas de tecidos: drmico, constitudo pela epiderme; fundamental, que no caule corresponde ao crtex, composto por parnquima, colnquima e/ou esclernquima, e medula, formada principalmente por parnquima medular; e o vascular, composto por xilema e floema primrios (Esau, 1974). No caule, a epiderme permanence como tecido de revestimento at que seja substituda pela periderme em plantas com crescimento em espessura (crescimento secundrio) ou se mantm dessa forma durante todo o desenvolvimento do vegetal, em plantas herbceas. O crtex caulinar comea logo abaixo da epiderme e tem no periciclo (a camada mais externa do cilindro vascular) o seu limite; pode ser composto por clulas parnquimticas, geralmente com cloroplastos; um colnquima tambm pode estar presente, em geral externo ao parnquima, com espessamentos na parede primria de diversos tipos em suas clulas; e em alguns grupos, pode haver esclernquima no crtex, ou mesmo escleredes de diversos tipos dispersos por esta regio do caule. A endoderme tambm est presente no caule, com ou sem estria de Caspary, como a camada mais interna do crtex. J a medula formada por clulas parenquimticas em maioria, com espaos intercelulares amplos em geral, e pode conter tambm estruturas secretoras, como tambm pode ocorrer no crtex (Esau, 1974). O cilindro vascular caulinar composto por xilema e floema primrios, bem como periciclo, neste estgio do desenvolvimento do vegetal. A forma como estes tecidos esto organizados no cilindro vascular, desde o periciclo at a medula, quando presente, conhecida por estelo, e permite-nos esquematizar a estrutura do caule e da raiz em crescimento primrio, alm de estudar comparativamente a diversidade desta estruturao.
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Figura 1 - Esquema exemplificando dois dos tipos de estelos mais comuns em Dicotiledneas e Monocotiledneas. Note que existem mais tipos de estelos para ambos os grupos, como protostelos, do tipo haplostelo, actinostelo e plectostelo, sifonostelos ectoflicos e anfiflicos, dictiostelos, atactostelos, etc., que no foram mostrados no esquema com fins de simplificao (Esquema: Bastos, CL).
Atividade cambial
Com a colonizao do ambiente terrestre pelas plantas, uma srie de mudanas estruturais e funcionais ocorreu nos vegetais. Devido imobilidade e s novas demandas ambientais, sistemas de proteo contra a dessecao, de absoro de gua e nutrientes do solo, de transporte eficiente de assimilados e suporte mecnico se desenvolveram. O sistema vascular foi uma das principais inovaes para o sucesso do estabelecimento e expanso das plantas superiores. Nas dicotiledneas lenhosas e conferas, o xilema e floema secundrios so produzidos pela atividade do meristema lateral denominado cmbio. O cmbio formado por uma camada de clulas denominadas iniciais cambiais, que so divididas em duas categorias, as iniciais fusiformes e as radiais. As iniciais fusiformes so clulas alongadas no eixo axial, que se dividem e formam as clulas do sistema axial pertencentes ao floema e ao xilema. No floema, as clulas derivadas das iniciais fusiformes formaro os elementos de tubo crivado, clulas companheiras e clulas parenquimticas em dicotiledneas lenhosas, e clulas crivadas, clulas de Strasburger e clulas parenquimticas em conferas. J no xilema, as iniciais fusiformes formaro elementos de vaso, fibras e clulas do parnquima axial nas dicotiledneas lenhosas e traquedes e clulas do parnquima axial nas conferas. Por outro lado, as iniciais radiais formaro as clulas que compem o raio parenquimtico, tanto nas dicotiledneas lenhosas quanto nas conferas. Estas clulas especializadas que se originaram a partir das iniciais cambiais possuem
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um importante papel na manuteno das espcies no ambiente terrestre. Elas garantem a conduo contnua de gua desde o solo at as folhas, permitem que os foto-assimilados possam ser transportados a diferentes partes do vegetal e ainda garantem o suporte mecnico de toda a poro area das plantas.
Variaes cambiais
Tipos de variaes Alm de sua atividade padro no caule, de produo de clulas do xilema secundrio para o interior do rgo e clulas do floema secundrio para o exterior, o cmbio vascular pode desempenhar sua funo de outras formas, ou mesmo estar ativo em vrios locais ao mesmo tempo. As variaes cambiais podem ser de vrios tipos, e podem ocorrer em rvores, como Avicennia (Acanthaceae), arbustos (algumas espcies de Bignonicaeae, Menispermaceae, etc), herbceas (a raiz da beterraba, Beta vulgaris (Amaranthaceae), por exemplo), mas principalmente em lianas (a ordem Fabales, Sapindaceae, Bignoniaceae, Malphighiaceae, Menispermaceae, Apocinaceae, Rubiaceae, Icacinaceae, Acanthaceae, entre outras famlias) (Esau, (1974), Angyalossy et al. (2012)). As variaes cambiais esto presentes ao longo da filogenia das plantas vasculares, segundo Angyalossy e colaboradores (2012), sendo encontradas desde Gnetales at Magnolideas e Eudicotiledneas, mas de formas diferentes em cada grupo. As variaes cambiais so divididas em dois grupos principais: variaes originadas de um nico cmbio, ou aquelas advindas de mltiplos cmbios (Angyalossy et al., 2012). No primeiro tipo, em que apenas um cmbio responsvel pela variao encontrada, temos ainda subtipos (Angyalossy et al., 2012): a) Cmbio regular, com atividade normal, mas com conformao irregular ou desigual, gerando um caule de formato irregular. Famlias em que ocorre: Apocynaceae, Leguminosae and Rubiaceae.
Figura 2. Aspidosperma sp. (Apocynaceae) e outra liana ilustram a variao cambial produzida por um nico cmbio de produo padro mas forma irregular (Fotos: Bastos, CL, material gentilmente cedido por Angyalossy, V)
b) Xilema interrompido por arcos ou cunhas de floema. Famlias em que ocorre: Bignoniaceae, Celastraceae, Malpighiaceae e Icacinaceae.
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Figura 3. Lianas de Bignoniaceae ilustrando a variao cambial do tipo cunhas de floema (Fotos: Bastos, CL, material gentilmente cedido por Angyalossy, V).
c) Segmentos compostos por elementos axiais do xilema e do floema separados por largas pores de raios floemticos e xilemticos. Famlias em que ocorre: Aristolochiaceae e Menispermaceae.
Figura 4. Exemplo de lianas com variao cambial em que o xilema e o floema ficam segmentados, por conta dos largos raios. esquerda, Aristolochiaceae, e direita, outra liana com a mesma estruturao (Fotos: Bastos, CL, material gentilmente cedido por Angyalossy, V).
d) Floema incluso no xilema, derivado de um nico cmbio. Famlia em que ocorre: Acanthaceae.
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Figura 5 - Esquema ilustrando um caule com floema incluso (Esquema: Bastos, CL)
No segundo tipo, em que mltiplos cmbios so responsveis pela formao da variao encontrada, existem dois sub-tipos, segundo Angyalossy et al. (2012): a) Cmbios sucessivos. Famlias em que ocorre: lianas de Menispermaceae e algumas Fabales.
Figura 6. Exemplos de cmbios sucessivos em uma Leguminosa (esquerda) e outra liana em que este tipo tambm ocorre (Fotos: Bastos, CL, material gentilmente cedido por Angyalossy, V).
b) Cilindros vasculares compostos. Famlia em que ocorre: exclusivo de Sapindaceae.
Figura 7. Caules compostos em Sapindaceae (Fotos: Bastos, CL, material gentilmente cedido por Angyalossy, V).
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Podem acontecer tambm combinaes de mais de um tipo de variao cambial. Alguns exemplos citados por Angyalossy et al. (2012) so: Bignoniaceae e Malpighiaceae com cunhas de floema e partes do xilema dispersas por proliferao de parnquima; em Piperaceae, elementos vasculares axiais em segmentos combinados a cilindros secundrios externos, entre outros exemplos.
Figura 8 - Exemplo de combinao de variaes cambiais em Leguminosae. Caule de formato irregular (achatado) e com cmbios sucessivos (Fotos: Bastos, CL, material gentilmente cedido por Angyalossy, V)
Cabe ressaltar que, para algumas famlias, algumas variaes cambiais podem ser utilizadas para fins taxonmicos, como acontece em Sapindaceae, Menispermaceae, e lianas de Bignoniaceae (Angyalossy et al., 2012).
A fisiologia da variao cambial: injrias e flexibilidade Como j mencionado acima, as variaes cambiais so mais comuns em lianas que em espcies de qualquer outro hbito. Enquanto a maioria das rvores exibe um modelo padro de crescimento secundrio, com um nico cmbio produzindo floema para o exterior e xilema para o interior, as lianas apresentam vrias configuraes vasculares alternativas (Schenck, 1893; Pfeiffer, 1926; Obaton, 1960). Em estudos realizados por Putz & Holbrook (1991), comparando-se lianas e plntulas de espcies arbreas, as lianas mostraram-se trs vezes mais flexveis em experimentos de toro que as arbreas. A capacidade das lianas de manter o xilema funcional aps uma deformao (sua resistncia), tambm foi muito maior nas lianas que em espcies arbreas (Putz & Holbrook, 1991). A compartimentalizao dos caules das lianas, onde tecidos lignificados, relativamente inflexveis, esto associados a tecidos no lignificados (macios), pode permitir s lianas funcionar mais como cabos do que como cilindros slidos (Obaton, 1960; Putz & Holbrook, 1991), garantindo flexibilidade e maior resistncia dobras e contores que ocorrem durante seu crescimento em direo ao dossel (Ewers & Fisher, 1991) Em uma reviso de trabalhos acerca de injrias naturais ou induzidas experimentalmente em caules de lianas, Fisher & Ewers (1991) atestaram que esta anatomia caulinar anmala de algumas famlias permite a diviso ordenada do caule e a rpida reparao de interrupes vasculares causadas por injrias, alm do aumento da flexibilidade j comentada. Ou seja, a presena de variaes cambiais pode ser associada a diversas funes nos vegetais; alm das j citadas, podemos adicionar a melhor conduo de fotossintatos (Pace et al., 2011) e o desenvolvimento xilemtico (Lima et al., 2010).
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Controle hormonal da atividade cambial

Como em todo processo de desenvolvimento, a atividade cambial finamente regulada pelos sinais hormonais. A atividade cambial sinalizada pela presena integrada de, principalmente, auxina (AIA) giberelinas (GA) e citocininas. Cada um destes hormnios produzido em uma parte da planta e transportado at a regio cambial, onde modular a atividade deste meristema secundrio. A auxina produzida especialmente pelas folhas jovens. Este hormnio move-se de forma polarizada nos tecidos vasculares, em especial, atravs do cmbio e elementos vasculares em diferenciao. O movimento baspeto da auxina cria um gradiente de concentrao ao longo do cmbio, sendo as regies mais prximas a fonte, as com a maior concentrao, e as mais distantes, com a menor contrao de auxina. A auxina um dos principais hormnios responsveis pela atividade cambial. A presena deste hormnio induz o incio das divises celulares das iniciais cambiais. O desenvolvimento das clulas derivadas, provenientes da diviso das iniciais cambiais, e as caractersticas das clulas maduras depende pode depender da ao de outros hormnios, que somente agem na presena da auxina. Os produtos da atividade cambial, floema e xilema secundrios, dependem da concentrao da auxina na zona cambial. Altas concentraes de auxina determinam a produo de floema preferencialmente. Por outro lado, concentraes menores de auxina resultam numa produo maior de xilema. Diferenas nas concentraes de auxina, alm de determinar o produto da atividade cambial, tambm influenciam as caractersticas das clulas produzidas. Uma concentrao relativamente maior de auxina estimula o rpido amadurecimento das clulas produzidas pelo cambio, o que significa uma deposio acelerada da parede secundria e lignina. Com a deposio da lignina, a expanso celular fica mais restrita j que diminui a plasticidade das clulas derivadas. Como um resultado do estimulo do amadurecimento das clulas, o gradiente de concetrao de auxina, desde a fonte at os drenos, resulta num gradiente de variao dos tamanhos das clulas produzidas pelo cmbio, em especial as clulas condutoras do xilema.
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Figura 9 - Esquematizao do gradiente de concentrao de auxina dentro de uma rvore, aos drenos. A) Representao de uma rvore, contendo a copa, o tronco principal e Representao da do gradiente de concentrao de auxina. C) Representao da dimenses dos elementos de vaso em diferentes pores do xilema, conforme o concentrao de auxina.
desde a fonte as razes. B) variao das gradiente de
J as giberelinas so produzidas pelas folhas maduras, e so transportadas atravs do floema para outros rgos das plantas. As giberelinas possuem um importante papel no estimula da atividade cambial, sendo relacionada formao e ao desenvolvimento de fibras no xilema. Uma maior concentrao de giberelinas estimula a formao de uma maior quantidade de fibras a partir das iniciais cambiais. Porm, a giberelina somente age na presena de uma concentrao mnima de auxina. Por fim, as citoquininas possuem um papel sobre a atividade cambial considerado incerto at o momento. A citoquinina produzida nos pices radiculares transporta pelo fluxo de gua no xilema resultante da transpirao foliar.
Registro do produto da atividade cambial e dendrocronologia

A interao entre as aes de cada hormnio produzido em diferentes partes das plantas modula os produtos da atividade cambial, ficando assim, a fisiologia da planta registrada especialmente no lenho. A anatomia pode ser considerada como uma evidncia, e um registro, da fisiologia da planta num determinado momento de sua vida. Esta relao temporal do registro fica mais evidente quando so analisadas sob a perspectiva dos anis de crescimento presentes no xilema. A dendrocronologia tem como objetivo primordial estudar a sequncia de anis de crescimento em plantas lenhosas para determinar o ano calendrio de formao de cada um deles (Stokes & Smiley 1996). Por mais trivial que seja este objetivo, a datao dos anis de crescimento abre um leque de possibilidades, j que as plantas podem manter, no lenho, um registro biolgico de grande parte dos eventos que influenciaram o seu crescimento ao longo da vida. Como registro natural, os anis de crescimento so considerados um dos mais
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precisos. Esta confiana na datao provm da elaborao das cronologias de crescimento baseadas na replicao populacional e em mtodos estatsticos robustos. A dendrocronologia uma cincia recente, em amplo desenvolvimento. Seus primeiros laboratrios foram estabelecidos na Amrica do Norte e na Europa por volta da dcada de 1920, os quais tinham como principal objetivo datar artefatos histricos e arqueolgicos com base nas sequncias de anis de crescimento. A partir da dcada de 1970, a dendrocronologia passou a ser utilizada para responder uma variada gama de questes cientficas, desde compreenso da ecologia de algumas espcies, at a reconstruo climtica do ltimo milnio, sob o olhar das mudanas climticas (Scweingtruber 1996).
Pressupostos da dendrocronologia
Anis de crescimento visveis Qualquer estudo de dendrocronologia inicia-se com a identificao dos anis de crescimento. Esses so camadas sucessivas, concntricas, presentes na madeira, demarcada por variaes na anatomia do lenho. Basicamente, so demarcados por traquedes achatadas e de parede mais espessa nas conferas, e por uma disposio variada de estruturas anatmicas nas angiospermas (Figura 10). Estas disposies podem ser caracterizadas por uma reduo gradual, ou abrupta, dos dimetros dos vasos, ou pela presena de uma faixa de parnquima marginal, ou uma camada fibrosa, entre outras. Os anis podem ser delimitados pela presena de uma ou mais destas caractersticas.
Figura 10- Exemplos de anis de crescimento em uma espcie de confera: Podocarpus lambertii Klotzsh ex Endl. (A preparao histolgica e B preparao macroscpica) e numa espcie de angiosperma: Hymenaea courbaril L. (C preparao histolgica e D preparao macroscpica).
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Anis de crescimento anuais Para que uma espcie possa ser utilizada num estudo de dendrocronologia, ela precisa possuir anis de crescimento que so formados a cada ano. Somente assim, a atribuio de um ano calendrio ao anel de crescimento poder ser realizada. Anis de crescimento sensitivos Os anis de crescimento podem ser classificados quanto sensitividade: em complacentes e sensitivos. Os anis considerados complacentes possuem pouca variao no tamanho ao longo de uma srie de crescimento, enquanto que os anis sensitivos possuem uma grande variao na dimenso ao longo do lenho. Ambientes com condies de crescimento prximas do timo induzem um crescimento anual praticamente constante, o que resulta em anis complacentes. J ambientes com uma condio mais estressante de crescimento tendem a produzir anis mais sensitivos. Como exemplos de ambientes que produzem anis sensitivos (ideais para coleta de amostras), podem ser listados: locais com grande drenagem (encostas de morro, solos com altas concentraes de silte e areia, solos rasos), ambientes com grande demanda evaporativa (cerrado e caatinga), solos pobres em nutrientes, locais com propenso ao congelamento, entre outros. Este parmetro pode ser medido e indexado com o clculo da sensitividade mdia, a qual uma medida da varincia do tamanho dos anis de crescimento. A sensitividade mdia varia numa escala de 0 a 1, na qual os valores entre 0 e 0.19 so considerados baixos, e portanto os anis tendem a ser complacentes. Valores entre 0.20 e 0.29 so considerados intermedirios, e acima de 0.30, so sensitivos e ideais para uma anlise dendrocronolgica.
Figura 11 - Comparao entre anis de crescimento considerados sensitivos e os complacentes (modificado, Stokes & Smiley 1996).
Sinal comum Os anis de crescimento sensitivos precisam possuir um padro de crescimento (tambm definido como sinal) comum numa populao. Este padro de crescimento o
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utilizado na datao cruzada, para a atribuio de um ano calendrio a cada anel de crescimento. Datao cruzada O processo de datao cruzada o cerne de qualquer trabalho de dendrocronologia. O objetivo dela a identificao do padro comum de crescimento na populao, o qual resulta na construo de uma cronologia mestre para a datao. Durante este processo, h apenas dois problemas que podem ser enfrentados, a presena de anis de crescimento faltantes ou a presena de anis de crescimento falsos. A identificao e correo destes dois problemas so essenciais ao sucesso do processo de datao cruzada. Anel confluente Anel falso
6 anos 9 anos
7 anos
8 anos
Figura 12. Tipos de problemas que podem ser identificados em cronologias de anis de crescimento: anis faltantes (no caso confluentes) e anis falsos (camadas de crescimento que foram formadas em algum momento durante a estao de crescimento).
Bibliografia Sugerida
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Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Aline Siqueira Nunes Leonardo Hamachi Mariane Sousa Baena Paula Natlia Pereira Paulo Tamaso Mioto Rafael Cruz
A folha um rgo de grande importncia para a planta por ser o principal responsvel pela realizao da fotossntese. Ao longo do Curso de Inverno, sero abordados vrios de seus aspectos, em dois mdulos subsequentes: na Parte I trataremos da estrutura foliar, com consideraes sobre a evoluo, ontognese, forma e anatomia desse rgo; na Parte II ser visto sua funo com abordagens sobre o papel da folha no corpo vegetal. A aula comear abordando o surgimento das folhas nas primeiras plantas terrestres e, ento, como as folhas se desenvolvem a partir do meristema apical caulinar, realizam suas funes quando completamente desenvolvidas e, por fim, como se d o processo de senescncia foliar. Ao considerarmos a planta como um todo, observamos que h um perodo inicial no qual a folha necessita de um aporte de energia e matria orgnica para que possa crescer. Aos poucos ela passa a ser capaz, atravs da fotossntese, de produzir carboidratos que sero enviados para o restante da planta. A partir de certo ponto a folha comea a entrar em processo de senescncia, no qual a maior parte dos seus componentes exportada para tecidos mais jovens. Todos esses processos so finamente regulados nas plantas, o que permite que elas mantenham sua homeostase.
Parte I
Origem das plantas terrestres e as primeiras folhas As primeiras evidncias de vegetais terrestres encontradas so esporos, datados de 460 milhes de anos, cuja morfologia sugere que foram produzidos por plantas parecidas com hepticas. Por volta de 420 milhes de anos atrs, fsseis mostram que as plantas ainda apresentavam uma estrutura bastante simples com ramos areos j providos de clulas condutoras de gua, sendo um fssil de Cooksonia o primeiro registro de planta vascular encontrado. As primeiras plantas terrestres no possuam folhas, sendo compostas apenas de estruturas caulinares e, de acordo com a teoria do teloma de Zimmermann, as folhas teriam surgido atravs de uma reduo de um sistema de ramos laterais. Primeiramente, houve uma modificao da estrutura dicotmica para a formao de um eixo principal e ramos laterais (overtopping). Em seguida, os ramos que se posicionavam formando uma estrutura tridimensional ficaram restritos a apenas um plano ( planation) e, por fim, tecido parenquimtico fotossintetizante comea a se formar entre os ramos, ligando-os ( webbing), Figura 1.
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Figura 1-Esquema ilustrando o surgimento das folhas a partir de uma planta ancestral que apresentava apenas ramos segundo a teoria do teloma. A. Planta formada apenas por ramos, com padro de ramificao dicotmico. B. Planta formada de um eixo principal e ramos laterais. C. Os ramos sofrem uma modificao em sua estrutura, estando agora posicionados em apenas um plano. D. Concrescimento de tecido parenquimtico (em cinza) entre os ramos, formando a lmina foliar.
Plantas com folhas evoluram h 410 milhes de anos e os microfilos de Baragwanathia longifolia foram as primeiras estruturas foliares encontradas no registro fssil. Durante o perodo Devoniano (~420-350 milhes de anos) ocorreu uma exploso de diversidade nas plantas e surgiram caractersticas que possibilitaram que plantas terrestres, antes ocupando apenas reas midas, pudessem colonizar reas mais secas. Nesse perodo, folhas de formas mais complexas evoluram a partir de folhas incipientes e, como conferiam uma vantagem adaptativa ao ambiente terrestre, foram mantidas ao longo da evoluo. Atualmente podemos dividir as folhas em simples ou compostas, sendo que as folhas simples possuem lminas foliares inteiras e as folhas compostas apresentam a lmina subdividida em fololos. A subdiviso da lmina foliar em fololos maximiza a rea fotossinttica e diminui a tenso mecnica potencial que uma superfcie nica e inteira, como as lminas simples, sofreria. Atualmente, quase todas as plantas vasculares possuem folhas e as espcies afilas (sem folhas) evoluram atravs de perda secundria a partir de um ancestral que possua folhas. Entretanto, as plantas afilas, em geral, desenvolveram outras estratgias fotossintticas como caules ou razes fotossintetizantes. Diferentemente dos animais, que apresentam crescimento fechado e determinado, os vegetais apresentam crescimento aberto e indeterminado. A forma geral que vemos nos animais adultos determinada no incio do desenvolvimento e uma vez que os animais se tornam adultos (capazes de se reproduzir), sua forma no mudar muito ao longo de sua vida. Por outro lado, as plantas continuam a crescer por toda a vida e sua forma geral no definida na fase embrionria. Dessa forma, seu desenvolvimento dito indeterminado. Alm disso, seu nmero de partes no fixo (, na maior parte das vezes, impossvel predizermos quantos galhos ou folhas uma rvore adulta possuir) sendo assim tambm denominado aberto. Os animais, ao contrrio, tm uma forma corporal pr-programada e com nmero de partes definido (por exemplo, seres humanos tero cinco dedos em cada mo), sendo considerados, portanto, de crescimento fechado. As plantas tm essa capacidade de crescer durante toda a sua vida devido reteno, na fase adulta, de regies meristemticas com potencial pra se multiplicar e formar tecidos. Essas zonas meristemticas, denominadas meristema apical caulinar (MAC) e meristema apical radicular so posicionadas cedo no desenvolvimento. Um embrio vegetal muito simples quando comparado ao de um animal,
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consistindo basicamente da radcula, hipoctilo, cotildones, meristema apical caulinar e meristema apical radicular. a partir da atividade desses dois meristemas apicais que todo o corpo da planta adulta se forma aps a germinao da semente e mutaes que suprimem a formao de um deles, em geral, so fatais. Especificamente, a arquitetura primria das partes areas da planta derivada do meristema apical caulinar, o qual produz folhas, interns e gemas axilares. Diferenas aparentemente simples na iniciao do rgo a partir do MAC podem resultar em morfologias dramaticamente divergentes. Dessa maneira, a organizao e manuteno do meristema continuam a ser uma questo fundamental nos estudos de desenvolvimento das plantas. Ontognese foliar O desenvolvimento foliar pode ser dividido em quatro estgios: iniciao, diferenciao inicial, desenvolvimento do eixo da folha e, por fim, origem e histognese da lmina foliar. A iniciao da folha ocorre por meio de divises que ocorrem em um pequeno grupo de clulas lateralmente situadas em relao ao pice do caule, o que resulta na formao do primrdio foliar. Este primrdio, que consiste em uma protoderme, uma regio central de tecido fundamental e procmbio tem a forma de um pequeno cone, com a face adaxial achatada. As clulas apicais do primrdio foliar apresentam diferenciao relativamente rpida, sendo grande parte do crescimento no sentido prximo-distal dado por crescimento intercalar. O crescimento em comprimento do eixo acompanhado pelo aumento na largura, como resultado de divises celulares na regio adaxial, proporcionando um aumento em volume do primrdio foliar. Feixes vasculares acessrios podem se desenvolver a partir dessa regio. O desenvolvimento da lmina foliar ocorre durante o crescimento em comprimento e espessura do primrdio por meio de clulas das margens que continuam a se dividir, formando a blastozona/meristema marginal. O crescimento marginal varia entre as regies do primrdio foliar de modo que, nas folhas pecioladas, tal crescimento reprimido na base, da qual se originar o pecolo. A partir de divises de clulas iniciais marginais, originam-se os tecidos da lamina foliar (epiderme, mesofilo e tecidos vasculares). Trabalhos recentes, com base em anatomia e biologia molecular, tm descrito etapas em trs fases: iniciao, morfognese primria e expanso e morfognese secundria. A iniciao foliar a partir dos flancos do meristema apical caulinar um processo ainda no completamente entendido, porm sabe-se que mutaes que o afetam tm um impacto dramtico na forma final da folha e que muitos aspectos da morfologia foliar so determinados nessa fase inicial de desenvolvimento. As primeiras mudanas detectadas no MAC so um pico de auxina e um afrouxamento das microfibrilas de celulose da parede celular na regio do meristema onde estar posicionado o futuro primrdio. Essa mudana na consistncia das microfibrilas se deve a expresso aumentada de genes ligados produo de expansina, uma protena que regula a extensibilidade da parede celular, e necessria para que o primrdio foliar possa emergir do meristema. Outro marcador do local de iniciao so os genes KNOX, que se expressam no MAC, porm so reprimidos no local da iniciao do primrdio na fase em que nenhuma mudana morfolgica observada ainda no MAC. O meristema apical caulinar uma estrutura radialmente simtrica e a iniciao de rgos laterais, num padro filottico, implica na quebra dessa simetria, o que segundo as teorias mecnicas da filotaxia (mechanical phyllotactic theories) ocorreria devido a uma diferena
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de tenso entre a camada L1 e os tecidos subjacentes. De acordo com essas teorias, as foras mecnicas teriam um papel fundamental na definio do local de iniciao do primrdio. Porm, para entender as foras de tenso necessrio entender o papel do turgor, as propriedades da parede celular, a arquitetura do citoesqueleto e o processo de crescimento de uma maneira geral. Entretanto, entender a regulao gentica de todos estes processos tem se mostrado uma tarefa bastante complicada. Desta forma, no um consenso entre pesquisadores que a contribuio das foras mecnicas na determinao da filotaxia seja fundamental. O termo morfognese primria usado para descrever os processos que estabelecem a forma bsica da folha, relacionada sua simetria e sub-regies. Na fase de expanso e morfognese secundria ocorre aumento na superfcie e no volume final da folha, cuja expanso pode ser isomtrica ou alomtrica, podendo o rgo manter ou alterar a forma estabelecida durante a morfognese primria.
Figura 2-Seco longitudinal do pice caulinar de Coleus sp., mostrando o meristema apical, primrdios foliares e gemas axilares.
Gentica molecular do desenvolvimento foliar Recentemente muitos progressos tm sido feitos no entendimento dos mecanismos moleculares que regulam o desenvolvimento das folhas. Duas famlias de fatores de transcrio so conhecidas por estarem envolvidas no controle do desenvolvimento foliar, os genes KNOTTED-like da classe 1 (KNOX1) e os genes LEAFY/FLORICAULA (LFY/FLO). Os genes KNOX1 so conhecidos por seu papel importante na manuteno da indeterminao dos tecidos do MAC (sua expresso mantm os clulas em estado meristemtico), porm anlises moleculares indicam que os genes KNOX1 tambm se expressam durante o desenvolvimento de folhas compostas. Neste tipo de folha a expresso dos genes KNOX1 faz com que os tecidos se mantenham por mais tempo em estado meristemtico, conferindo s folhas uma capacidade maior de crescimento indeterminado. Este tempo mais longo de indeterminao do primrdio necessrio para que as elaboraes da lmina, como fololos e lobos, possam se desenvolver. Os genes KNOX1 esto envolvidos no desenvolvimento das folhas compostas de quase todas as linhagens de eudicotiledneas analisadas at o momento e uma exceo importante nessa tendncia de expresso do gene KNOX1 no primrdio de folhas compostas observada em Pisum (ervilha), onde este gene no se expressa nos primrdios nem em folhas mais velhas. Em Pisum, os tecidos so mantidos em estado indiferenciado por mais tempo atravs da expresso do gene LFY/FLO e
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mutaes neste gene fazem com que a folha de ervilha se torne simples. Existem vrios genes que so antagonistas ao KNOX1 e LFY/FLO, pois promovem a diferenciao dos tecidos onde se expressam. Este o caso dos genes que controlam o estabelecimento da polaridade abaxial-adaxial nas folhas. As folhas possuem tecidos bastante diferentes nas faces abaxial e adaxial, que desempenham funes distintas. Na face adaxial, comumente, encontra-se uma camada de parnquima palidico, que otimiza a fotossntese e uma camada espessa de cutcula sobre a epiderme. Em geral, na face abaxial encontra-se o parnquima lacunoso e um maior nmero de estmatos, que regulam as trocas gasosas e a transpirao. Toda essa diversidade de tecidos gerada a partir da expresso de muitos genes, que alm de serem antagonistas ao KNOX1 e LFY/FLO tambm so antagonistas entre si. Em geral, genes que se expressam na face adaxial reprimem a expresso de genes que se expressam na face abaxial e vice-versa. Mais especificamente a polaridade abaxial-adaxial estabelecida pela represso mtua entre os genes HD-ZIPIII e o gene KANADI. Experimentos mostram que mutantes que no expressam algum dos genes de identidade abaxial ou adaxial desenvolvem folhas que no possuem lamina foliar e so aciculiformes (que lembram gavinhas ou espinhos). Assim, o estabelecimento correto da polaridade abaxial-adaxial necessrio e, pode-se dizer, um pr-requisito para que ocorra a expanso da lmina foliar. A expanso da lmina foliar e tambm a diferenciao dos tecidos diversos que a compem foram adaptaes que maximizaram a fotossntese ao mesmo tempo em que minimizaram a perda de gua para o ambiente, sendo assim importantes inovaes para a conquista do ambiente terrestre pelas plantas. A forma da folha Embora alguns padres do desenvolvimento foliar paream ser comuns em plantas vasculares, diferenas na ontognese, em vrios aspectos, levam a uma gama de formas finais distintas que tornam a folha o rgo vegetativo mais plstico dentre as traquefitas, adquirindo grande importncia em estudos taxonmicos, ecofisiolgicos e na rea de gentica molecular do desenvolvimento, visto que um timo modelo para investigar a regulao gnica fina devido a toda a variao de formas. Na maioria das plantas vasculares encontramos associada axila da folha uma gema de estrutura semelhante ao pice caulinar, podendo assumir atividade semelhante a este e dar origem a um ramo. Ela pode ser facilmente identificada vista desarmada ou com o auxlio de uma lupa tornando-se a melhor estrutura capaz de individualizar uma folha morfologicamente. Esta caracterstica, no entanto, surgiu tardiamente dentro da filogenia das traquefitas e plantas como as licfitas, monilfitas e cicadfitas no apresentam gemas axilares. Consequentemente, tambm no possuem este tipo de ramificao. Uma vez individualizada, a forma da folha pode ser melhor entendida subdividindo-a em uma poro conhecida como lmina (mais apical e geralmente expandida) e uma poro conhecida como base (associada insero da folha no caule) morfoanatomicamente distintas. A base da folha comumente cilndrica em no monocotiledneas, sendo chamada de pecolo (e, mais especificamente, de estipe nas samambaias). Em monocotiledneas a base costuma ser expandida e envolvente, sendo chamada bainha. Ambas as estruturas podem co-ocorrer na base (uma bainha proximal e pecolo distal) e no so exclusivas destes grupos (h monocotiledneas pecioladas e no monocotiledneas com bainhas). A base ainda pode ser imperceptvel morfologicamente e a folha assim chamada sssil. Projees laterais da base podem surgir nos primeiros estgios de formao da folha, sendo chamadas
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de estpulas, que podem assumir diversas funes. Geralmente ocorrem aos pares, mas possuem morfologia bastante varivel. Em gramneas comum ainda o surgimento de uma projeo adaxial entre a bainha e a lmina foliar conhecida como lgula, tambm de morfologia varivel. Em algumas plantas, principalmente leguminosas e marantceas, um intumescimento do pecolo conhecido como pulvino ocorre e est relacionado ao movimento da lmina foliar de velocidade varivel, desencadeado por higroscopia e/ou potencial eltrico, relacionado proteo da folha ou melhor captao de luz. A lmina foliar pode assumir diversas dimenses, de milmetros a metros. Varia muito em sua simetria, podendo ser desde perfeitamente simtrica bilateralmente at completamente assimtrica. Algumas folhas so curtas, semelhantes a escamas e relacionadas proteo de gemas: os catafilos. Outras acumulam uma grande quantidade de gua, sendo suculentas. Algumas so cilndricas, o que muitas vezes est relacionado a um crescimento adaxial muito incipiente durante a ontognese. Folhas relacionadas a estruturas reprodutivas muitas vezes so diferentes das demais e chamadas de brcteas. Numa lmina foliar expandida geralmente o tecido vascular facilmente perceptvel, traando vrios padres. Numa primeira classificao, podemos dividi-las em grandes grupos: folhas uninrveas (uma nica nervura, como geralmente presente nas licfitas), com venao dicotmica (comum nas plantas com sementes, exceto em angiospermas), com venao reticulada (geralmente com uma nervura central distinta e nervuras laterais que partem desta e se conectam, formando uma trama com terminaes livres, comuns em angiospermas no monocotiledneas) e com venao paralela (as nervuras correm paralelamente da base ao pice da folha com poucas conexes entre ela e sem terminaes livres, condio comum em monocotiledneas). A folha como um todo ou suas partes (lmina, fololo, estpulas) podem sofrer modificaes muito especializadas a determinadas funes. Estas modificaes podem ser as gavinhas, geralmente alongadas, cilndricas e, muitas vezes, com crescimento helicoidal, relacionado escalada em um suporte (plantas trepadeiras). Podem tambm ser cilndricas e alongadas, mas muito lignificadas e geralmente pontudas, relacionadas proteo e conhecidas como espinhos. Espinhos podem facilmente ser confundidos com acleos, tambm pontudos, que so apenas projees da epiderme e tecido subjacentes, mas no relacionados modificao de um rgo como um todo e, portanto, sem topologia to bem definida como os espinhos. Em plantas carnvoras, a lmina foliar pode ser modificada em armadilhas de invertebrados apressrias, adesivas, suctrias ou em forma de jarro e liberam enzimas proteolticas necessrias para a carnivoria. As estruturas foliares podem ser glabras ou possurem um grande nmero de tricomas (pilosas), de funes diversas. Seus pigmentos podem estar regularmente presentes em toda a lmina dando-a uma cor geralmente verde, devido clorofila. No entanto, com a presena de outros pigmentos e disposio diferencial destes, de plastdeos e de tricomas, que influenciam na reflexo luminosa, a folha pode apresentar cores diferentes na face abaxial e adaxial. As diferenas de cores ainda podem formar manchas, listras, pontos ou outras formas em uma mesma face e a folha dita variegada. Ao longo da evoluo, em diversos momentos, a lmina foliar sofreu diviso, individualizando fololos e dando origem s folhas compostas. Uma folha com dois ou trs fololos dita bi ou trifoliolada, respectivamente. Se a folha tem mais de trs fololos, eles podem partir todos de um mesmo ponto e a folha palmada (em forma de palma) ou possurem um eixo cilndrico alongado (raque) no qual os fololos se inserem sendo pinada
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(em forma de pena). Se uma folha pinada tem fololos terminais pares, paripinada. Se possuir um nico fololo terminal, imparipinada. H ainda folhas com um nico fololo, denominadas unifolioladas, derivadas evolutivamente de uma condio composta, com uma articulao na base do fololo como testemunha desta reduo de nmero de fololos. Filogeneticamente as folhas compostas podem ter origem por lobao gradual da lmina foliar com um aprofundamento to intenso dos lobos que estes atingiram a nervura principal gerando os fololos (diviso), outra hiptese que elas tenham surgido por homeose. Diz-se que ocorreu homeose quando no local de formao de um determinado rgo, outro rgo ou caractersticas de outro rgo so expressos. Dessa maneira, as folhas compostas teriam surgido atravs de uma alterao no padro de desenvolvimento das folhas simples, e vrias estruturas simples (fololos) teriam se formado onde uma lmina foliar nica deveria ser produzida (multiplicao). Nesse caso, as estruturas simples seriam como folhas simples sendo produzidas por uma estrutura caulinar, assim caractersticas caulinares estariam sendo expressas no desenvolvimento das folhas compostas, que por sua vez teriam uma identidade mista, sendo um rgo intermedirio entre caule e folha. Assim como a lmina simples pode portar modificaes da base, os fololos podem ter modificaes de segunda ordem associadas a eles, como peciololos, pulvnulos e estipelas (respectivamente pecolos, pulvinos e estpulas de segunda ordem). No pice caulinar, os espaos entre o surgimento de um primrdio e outro subsequente podem vir a se alongar, dando origem, na maturao a um intern, que na planta adulta pode ser identificado como as regies caulinares que separam os pontos de insero de folhas: os ns. No entanto, alguns desses espaos podem no vir a se alongar e mais de uma folha pode ocupar o mesmo n. A esta disposio chamamos de filotaxia e pode ser alterna (uma folha por n), oposta (duas folhas por n, sendo geralmente uma folha posicionada a 180 em relao outra do mesmo n) ou verticilada (trs ou mais folhas por n). Uma folha alterna pode estar disposta em relao anterior em um mesmo lado do caule (monstica), em dois ou trs lados do caule (dstica ou trstica) ou em tantos lados que chegam a formar uma espiral, vista do alto do ramo (espiralada, comumente presente em rosetas). Em folhas opostas, comumente os pares de folhas esto posicionados a 90 em relao ao anterior, vistas do alto do ramo (opostas cruzadas) ou no mesmo plano (opostas dsticas). Uma planta pode apresentar regularmente folhas muito semelhantes ou estas podem variar em forma (junto ao n e interns associados) e neste caso, a planta apresenta heterofilia. Se a variao em relao idade da planta (por exemplo, indivduos juvenis apresentam uma determinada morfologia e indivduos adultos, outra) a planta apresenta heteroblastia. Deve-se atentar ao fato de que condies intermedirias no s existem como so bastante comuns na natureza e as categorizaes humanas no conseguem refletir toda a magnitude realstica existente. Toda esta diversidade morfolgica est relacionada s funes fisiolgicas da planta, determinada por processos evolutivos atuantes ao longo de milhes de anos e foi gerada por alteraes nos padres de ontognese das primeiras plantas vasculares. Anatomia foliar As folhas, de modo geral, compartilham muitas similaridades quanto aos tecidos que as formam, de modo que a diversidade anatmica observada entre os diversos tipos foliares est principalmente relacionada organizao desses tecidos na constituio do rgo. Em
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linhas gerais, a anatomia foliar consiste em sistema de revestimento composto por epiderme, tecido fundamental da lmina foliar diferenciado predominantemente em mesofilo parenquimtico e sistema vascular distribudo na forma de nervuras. Embora a maior parte das folhas apresente uma lmina ampla e relativamente fina, algumas podem apresentar caractersticas muito diversas, podendo ser espessas e suculentas ou mesmo tubulares, como a cebolinha. Toda gama de formas e modos de vida tm sua correspondncia na anatomia, mas ainda que sejam encontradas diversas particularidades entre os tipos foliares observados na natureza, a anatomia foliar reflete as principais atribuies desse rgo: fotossntese e respirao. Epiderme: clulas de paredes anticlinais justapostas sem espaos intercelulares, superfcie externa recoberta por cutcula e presena de estmatos configuram as principais caractersticas da epiderme foliar (Figura 3A). Como regio limtrofe entre os tecidos foliares e o ambiente externo, a epiderme possibilita penetrao da luz para a realizao da fotossntese e trocas gasosas com o meio ao mesmo tempo em que protege os tecidos internos de agresses externas, como injrias e principalmente perda de gua por transpirao. Frequentemente formada por uma nica camada de clulas isodiamtricas, com parede celular primria e delgada que pode ter contorno retilneo ou sinuoso em maior ou menor grau, dependendo da espcie, da face da folha, ou mesmo das caractersticas ambientais s quais est exposta. Entretanto, podem ocorrer folhas com epiderme multisseriada e com paredes lignificadas, neste caso, com a funo de refletir ao ambiente o excesso de radiao solar recebida em sua superfcie. Tricomas tectores e glandulares so estruturas frequentes geralmente relacionadas proteo (Figura 3B). Os tricomas tectores apresentam grande diversidade de formas e funes variadas, como proteo contra o dessecamento e radiao solar excessiva; os glandulares apresentam clulas que produzem e/ou armazenam substncias qumicas que em muitos casos configuram proteo herbivoria. Existem, ainda, estruturas com funes mais especficas, como os tricomas escamiformes das bromlias, que tm a funo de captar vapor de gua disperso no ar. Estmatos ocorrem mais comumente na face abaxial das folhas (hipostomticas), como uma forma de minimizar a transpirao excessiva, mas h espcies com folhas anfietomticas (Figura 3C) e epiestomticas. Algumas xerfitas apresentam cutcula notavelmente espessa (Figura 3A) e estmatos localizados no interior de invaginaes da epiderme (criptas), o que ajuda a minimizar os efeitos da baixa humidade relativa do ar. Mesofilo: principal tecido fotossintetizante das folhas. predominantemente parenquimtico e apresenta abundncia de cloroplastos, podendo ter aspecto homogneo ou estar organizado em parnquima palidico e lacunoso (Figura 3). O parnquima palidico formado por uma ou mais camadas de clulas prismticas alongadas e densamente agrupadas, dispostas perpendicularmente superfcie da lmina (Figura 3A e D). Em muitas mesfitas o parnquima palidico localiza-se justaposto ou prximo epiderme na face adaxial da folha, sendo esta denominada dorsiventral (Figura 3A e D). Em folhas de xerfitas, esse tecido pode ocorrer em ambas as faces da lmina, o que a caracteriza como isobilateral. O parnquima palidico aparenta ser um tecido arranjado em clulas bem justapostas quando observado em uma seco transversal de folha, mas a partir de cortes paradmicos podemos observar que este apresenta arranjo mais frouxo, e dessa forma, possibilita a passagem de parte da luz recebida pela superfcie para os demais tecidos foliares.
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O parnquima lacunoso apresenta clulas de formatos variados e vacolos grandes e um sistema de amplos espaos intercelulares (Figura 3 A, D e G). Esta disposio favorece a passagem da luz captada pela superfcie adaxial e sua distribuio entre o parnquima clorofiliano, mas a principal caracterstica desse tecido que o arranjo espaado entre as clulas amplia a superfcie de contato entre estas e o ar presente no interior da folha, o qual est em continuidade com a atmosfera atravs, principalmente, dos estmatos. Em crassulceas notvel a presena de mesofilo homogneo na regio da face adaxial formado por clulas prismticas finamente justapostas, sem espaos intercelulares expressivos (Figura 3E). As clulas deste tipo foliar apresentam vacolos especialmente grandes, dispondo-se em um arranjo compactado. Neste caso, h otimizao no uso do gs carbnico produzido durante a fotossntese, reduzindo a necessidade de liberao ao meio externo. Em folhas suculentas comum a presena de mesofilo disposto em muitas camadas de clulas, com regio central ocupada por parnquima armazenador de gua, rodeado por parnquima clorofiliano (Figura 3F); em algumas espcies o parnquima armazenador pode estabelecer contato com a epiderme no pice da folha, constituindo um verdadeiro tnel translcido que permite a passagem de luz e sua captao pelo tecido clorofiliano circundante. Esta estrutura uma caracterstica das chamadas window leaves (folhas-janelas) e de grande importncia especialmente para plantas que vivem em ambientes ridos e apresentam a maior parte de seu corpo enterrada no solo, para proteger-se do calor excessivo. Sistema vascular: ocorre na forma de nervuras interligadas e entremeadas no mesofilo, compostas predominantemente por feixes colaterais de xilema e floema primrios. No padro reticulado caracterstico de folhas que apresentam lmina ampla (como a maioria das angiospermas no monocotiledneas) em seco transversal observamos, geralmente, uma nervura central de grande dimenso e nervuras secundrias perifricas relativamente menores (Fig. 3G e H). O padro de venao paralela observado em folhas longas (Figura 3I), tpicas de monocotiledneas, nas quais observamos, em seco transversal, feixes vasculares semelhantes entre si dispostos lado a lado por toda a extenso do corte. Em muitos casos h feixes de fibras alternados com os feixes vasculares, dando maior sustentao ao rgo. Os feixes vasculares foliares apresentam normalmente xilema primrio voltado para a face adaxial, como uma continuidade do trao foliar observado no caule. Em folhas pecioladas, os feixes vasculares da lmina podem confluir em um nico feixe em direo ao pecolo. Muitas vezes ocorrem cordes de esclernquima associados aos feixes vasculares formando projees que fazem conexo com a epiderme em ambas as faces da folha (Figura 3J). Os feixes vasculares paralelinrveos so envolvidos pela bainha do feixe, composta de parnquima (Figura 3I) podendo apresentar esclernquima. comum a presena de colnquima ou esclernquima nas regies da nervura central em continuidade com o pecolo e no bordo foliar, com a funo de sustentar uma ampla lmina foliar (Figura 3 G, H e J).
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Figura 3-Seces transversais de diferentes tipos foliares. A e B Capparis yco (Capparaceae), regio do mesofilo; C Drosera sp. (Droseraceae), regio da nervura central; D Avicennia sp. (Acanthaceae), regio do mesofilo; E Encholirium sp. (Bromeliaceae); F (Xanthorrhoeaceae); G Guatteria sp. (Annonaceae); H C. yco, nervura central; I Zea mays; J C. yco, regio do bordo foliar.
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Parte II
A fotossntese Um dos principais processos fisiolgicos que ocorre na folha madura a fotossntese, fonte de quase toda a biomassa existente no planeta. Os primeiros experimentos com plantas relacionados a este fenmeno datam de 1648, quando Johannes Baptista Von Helmont colocou uma rvore de choro (Salyx sp.) com aproximadamente 2 kg para crescer em um pote contendo 90 kg de terra (a terra pesada seca). Depois de cinco anos a rvore pesava 72 kg, mas ele no detectou diferenas de massa nos 90 kg de terra seca. Sua concluso (parcialmente correta) foi de que, para crescer, a planta retirou toda sua massa da gua. Apesar de Von Helmont receber o crdito por um dos primeiros experimentos envolvendo fotossntese, alguns historiadores argumentam que essa foi uma imitao de outro experimento feito cerca de 200 anos antes por Nicolau de Cusa. Quase um sculo depois, em 1771, Joseph Priestley deixou uma planta dentro de um frasco vedado com uma vela queimando. Aps pouco tempo a vela apagou e no podia mais ser acesa. Depois de esperar por quase um ms, ele acendeu a vela (usando a luz do sol refletida em espelhos) e ela queimou normalmente. Sua concluso foi que, de alguma forma, as plantas alteram a composio do ar. Foi dele tambm o famoso experimento de colocar um camundongo em um frasco vedado e observar que ele morria rapidamente (deixando o ar viciado, segundo as palavras dos cientistas da poca). Ao colocar o camundongo junto com uma planta notou-se que ele vivia por mais tempo. Concluiu-se que as plantas tinham a capacidade de desviciar o ar do frasco. Quinze anos mais tarde, baseado nesses experimentos, Jan Ingen-Housz descobriu que se o frasco fosse coberto de modo a no deixar entrar luz, a planta tambm viciava o ar. Concluso: para que a planta possa desviciar o ar necessrio que haja luz no escuro ela se comportaria de maneira semelhante a um animal. Assim, j no final do sculo XVIII, as bases para entender a fotossntese haviam sido lanadas, relacionando o consumo de CO 2 e a emisso de O2 das plantas com a luz. Hoje em dia j existe um vasto conhecimento acerca do processo de fotossntese, englobando as mais diversas reas da Biologia. Apesar de comumente ser resumido a uma reao qumica, o processo da fotossntese muito mais complexo. Didaticamente, esse fenmeno pode ser dividido em duas etapas: a etapa fotoqumica e a etapa bioqumica. importante ressaltar que, apesar dessa diviso, os dois processos no so independentes. No entanto, para facilitar a compreenso, as duas etapas sero abordadas separadamente. A etapa fotoqumica acontece nos tilacoides, que so estruturas formadas por um sistema de membranas presente nos cloroplastos. De fato, esse processo no poderia ocorrer em outro lugar, porque envolve um represamento de prtons (H+) no espao interno dos tilacoides para impulsionar a formao de ATP. O ATP gerado aqui vai ser usado junto com o NADPH na etapa bioqumica, abordada a seguir. Mas como esses compostos, to custosos em termos de energia, so gerados? Nas membranas dos tilacoides existem dois complexos proteicos denominados fotossistema I e fotossistema II, baseado na ordem em que foram descobertos. Cada fotossistema composto de um grupo de molculas chamado de complexo antena e um centro de reao. Quando a luz incide nos pigmentos contidos nos complexos antena, ftons se chocam com os eltrons dessas molculas deixado-os energizados. A energia ento
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transferida para o centro de reao. Com essa grande quantidade de energia que chega, a molcula de clorofila que a se encontra perde um eltron, que ter que ser reposto imediatamente. No caso do fotossistema II, que onde a cadeia comea, o eltron ser proveniente da fotoxidao de uma molcula de gua. Com a quebra dessa molcula, ocorrer a liberao do oxignio observada j h tanto tempo. O eltron perdido pelo fotossistema II vai passar por vrias protenas de membrana, perdendo energia. Quando chegar ao fotossistema I ganhar um novo impulso at ser incorporado a uma molcula de NADP+, gerando NADPH. A energia dissipada no transporte dos eltrons vai ser usada no bombeamento de H+ para o espao interno dos tilacoides, gerando um forte gradiente eletroqumico. Esse gradiente vai sendo desfeito por uma protena que tambm est na membrana dos tilacoides, chamada H+-ATPase. A ATPase vai desfazer o gradiente de H + e usar essa energia para a sntese de ATP. Ao final da etapa fotoqumica, portanto, teremos a produo de ATP e NADPH. A ordem da cadeia de transporte de eltrons, incluindo os carregadores de eltrons que no foram citados acima a seguinte: fotossistema II plastoquinona citocromo b6f plastocianina fotossistema I ferredoxina ferredoxina-NADPH redutase NADP+. Uma vez gerados, o ATP e o NADPH sero usados para impulsionar a etapa bioqumica da fotossntese, tambm conhecida como ciclo de Calvin. nesta etapa que ocorre a assimilao do CO2, atravs da ao da enzima ribulose 1,5 bifosfato carboxilase oxigenase (abreviada para Rubisco). Ao final desse processo, sero geradas molculas com trs carbonos chamadas de trioses-fosfato que mais tarde sero convertidas em acares (com seis carbonos). Note que depois de assimilado o CO 2, a primeira molcula estvel que se forma contm trs carbonos. Por isso as plantas que operam exclusivamente nesse tipo de fotossntese so chamadas de C3. Porm, a Rubisco no tem apenas a funo de carboxilase. Ela tambm pode funcionar como oxigenase, sendo que essas duas funes competem pelo mesmo stio ativo da enzima. Quando a Rubisco funciona como oxigenase, ela desencadeia um ciclo que desperdia cerca de 25% do CO2 assimilado, chamado de fotorrespirao. Esse processo intrigante, j que, apesar de ningum saber exatamente a sua funo, parece ser indispensvel para as plantas. Existem outros dois tipos de fotossntese nos quais o primeiro composto estvel formado tem quatro carbonos: a fotossntese C 4 e o metabolismo cido das crassulceas (CAM). A fotossntese C4 um mecanismo de concentrao de CO 2, que aumenta a eficincia de carboxilao da Rubisco porque diminui a sua atividade de oxigenase (Imagine um cabo de guerra entre a concentrao de CO2 e de O2 quando uma delas aumenta muito, a atividade da Rubisco vai acabar pendendo para esse lado). comum em plantas pioneiras ou de crescimento rpido. Para que o ciclo C 4 ocorra, necessrio que a planta tenha uma anatomia especial, chamada de anatomia Kranz (coroa, em alemo). Nessas plantas, os cloroplastos (e, consequentemente, a clorofila) so mais abundantes em clulas que esto na regio da bainha vascular. As clulas ao redor dessas (clulas do mesofilo) so capazes de assimilar o CO2 na forma de cido orgnico, que levado at as clulas da bainha e descarboxilado l, liberando novamente o CO 2. A enzima que faz a primeira assimilao do CO2 no mesofilo a fosfoenolpiruvato carboxilase e a enzima responsvel pela descarboxilao dos cidos orgnicos , na maioria dos casos, a enzima mlica. Assim, as clulas da bainha ficam com uma concentrao muito alta de CO 2, minimizando a fotorrespirao. O CAM um mecanismo dedicado principalmente conservao de gua. muito
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comum em ambientes com limitao de gua no s desertos, mas ambientes nos quais a planta no tem contato com a gua do solo, como o ambiente epiftico. Essas plantas so capazes de abrir os estmatos somente noite (quando a umidade relativa do ar mais alta) e assimilar CO2 na forma de cidos orgnicos. Os cidos acumulados durante a noite sero descarboxilados de dia, provendo as clulas com CO 2 mesmo com os estmatos fechados. interessante que essas plantas utilizam as mesmas enzimas de carboxilao e descarboxilao das plantas C4, a fosfoenolpiruvato carboxilase e a enzima mlica. Como essas plantas abrem os estmatos apenas nos perodos de maior umidade, a perda de gua drasticamente reduzida. O controle estomtico, portanto, um processo que est intimamente ligado fotossntese e capacidade de sobrevivncia das plantas. Rotas Fonte Dreno A folha atinge sua maturidade fotossinttica ainda jovem, quando seu desenvolvimento se encontra a aproximadamente de 30 a 50% completo. Nesse estgio o rgo em questo passa a desempenhar o papel de uma folha ou rgo-fonte, pois capaz de produzir fotossintatos, principalmente carboidratos e compostos nitrogenados, suficientes para a sua manuteno e para exportar a todos os outros rgos que no so capazes de atender s suas prprias demandas metablicas, denominados dreno. Nesse momento, a entrada de fotoassimilados na folha-fonte bloqueada e novas vias de transporte so abertas para suprir os drenos. Esse processo se inicia na poro apical da folha e se estende sentido base a medida que os tecidos se tornam maduros. Sendo assim, ao nvel de rgo, a poro apical da folha passa a exportar seiva elaborada para a poro basal imatura da folha. Enquanto, ao nvel de organismo, as folhas maduras exportam para folhas que se encontram em fase inicial de desenvolvimento e todos os outros drenos da planta. Convencionou-se chamar esse trajeto da seiva elaborada de rotas fonte-dreno. Essas rotas dependem de alguns fatores como (1) a proximidade: as folhas maduras superiores exportam seiva para o meristema apical caulinar em crescimento e folhas jovens imaturas, folhas inferiores exportam para o sistema radicular enquanto folhas intermedirias exportam em ambas as direes. (2) O desenvolvimento: durante o desenvolvimento da parte vegetativa da planta os principais drenos so os pices caulinares e radiculares, durante a fase reprodutiva, os principais drenos so as flores e os frutos. (3) As conexes vasculares: as folhas esto geralmente conectadas a rgos superiores e inferiores dentro de um certo limite de distncia ao longo do eixo longitudinal da planta que depende da espcie, essa ligao chamada de orststico. A perda de alguma folha, por predao ou poda, por exemplo, pode resultar em modificaes na rota de seiva. Nesse caso, se folhas dreno prximas a uma folha fonte for perdida, as ltimas podero suprir folhas mais distantes com seiva elaborada. Isso ocorre devido ao fato de, existirem interconexes vasculares em, ou anastomoses, entre as vias do floema alm das conexes diretas entre os rgos. Relaes hdricas da folha A folha tem papel fundamental no transporte de gua ao longo de todo organismo da planta. Do solo, a gua absorvida pelas razes, passando pelo xilema radicular, xilema caulinar e chegando folha, onde a tenso superficial da gua em evaporao nas paredes das clulas do mesofilo gera um potencial hdrico intenso o suficiente para que a gua seja transportada at mesmo ao longo de grandes organismos como as arbreas. Finalmente, a
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gua atravessa os estmatos, presentes na epiderme foliar, e alcana a atmosfera. Para se entender como formada uma presso negativa e intensa nas folhas capaz de gerar potencial hdrico suficiente para mover a gua em grandes distncias, mesmo sob influncia da gravidade, necessrio o estudo da dinmica da gua no interior das folhas. No mesofilo a gua proveniente do xilema em contato com as clulas do parnquima e suas respectivas paredes celulares forma interfaces curvas ar/gua. medida que a gua evapora, o raio dessas pores curvas da molcula diminui, o que resulta numa presso negativa segundo a equao:
= - 2T/r
Sendo T a tenso superficial da gua (7,28 x 10 -8 MPa x m) e r, o raio das interfaces curvas ar/gua. Aps a evaporao, a gua no espao intercelular ser perdida para a atmosfera atravs do processo da difuso dado pela equao:
Js = - Ds x cs/x
Sendo que Ds a densidade da gua, cs a variao da concentrao de gua entre os locais onde ocorrer o processo e x, a distncia que ser percorrida pela gua. A esse fenmeno d-se o nome de transpirao, que pode ser dividido em dois outros fenmenos: a transpirao cuticular, na qual a planta perde apenas 5% da gua total pela cutcula e a estomtica, na qual a maior parte da gua perdida pelos estmatos. A ocorrncia da transpirao estomtica depende de dois fatores. O primeiro a diferena de concentrao do vapor d'gua entre a atmosfera e as lacunas do mesofilo, sendo que esse parmetro varia com a temperatura. O segundo a resistncia difuso que, por sua vez, composta por duas outras variveis. A resistncia difuso pelo poro estomtico, denominada resistncia estomtica e a resistncia da camada de ar esttica que se forma ao redor da folha, ou resistncia da camada limtrofe. Como a espessura da camada limtrofe e a temperatura da atmosfera no esto sob o controle das plantas, o controle biolgico em curto prazo da resistncia estomtica depende exclusivamente da abertura e do fechamento dos estmatos. A atividade estomtica Os estmatos so estruturas presentes nas plantas terrestres. Na maioria das espcies, eles se distribuem, preferencialmente, na face abaxial da folha. Contudo, na maioria das monocotiledneas observada uma densidade similar de estmatos nas faces adaxial e abaxial. Os estmatos so formados pelas clulas-guarda que margeiam o poro estomtico (ostolo) e em muitas espcies, essas so circundadas pelas clulas subsidirias. As clulasguarda so classificadas em dois tipos: tipo elptico, comum maioria das plantas e outras do tipo halter, encontradas, principalmente, nas gramneas. A mudana no formato das clulasguarda est associada parede espessa ao redor do ostolo e a presena de microfibrilas de celulose dispostas radialmente (tipo elptico) ou obliquamente (tipo halter) ao poro estomtico. Dessa forma, quando trgidas, h a abertura do ostolo e quando flcidas, o poro estomtico se fecha. Esses processos ocorrem em resposta entrada ou sada de gua das clulas-guarda. Quando o poro estomtico se abre, h um aumento na presso hidrosttica e no potencial de turgor. Por outro lado, quando esse se fecha ocorre uma reduo na presso de turgor e de suas paredes. Com o desenvolvimento das clulas-guarda so formadas as cmaras subestomticas no mesofilo foliar, adjacentes ao complexo estomtico, cuja funo
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armazenar gases de modo a maximizar a difuso do CO 2 e reduzir a perda de gua no mesofilo foliar. Durante o processo de abertura dos estmatos, a luz azul ativa H +-ATPase na membrana plasmtica pelo fotorreceptor fototropina. Essa ativao faz com que prtons sejam bombeados para o apoplasto. Dessa forma, gerada uma diferena de concentrao de prtons (H+) entre o lado interno e externo da membrana. O excesso de prtons no lado externo da membrana faz com que o interior da membrana das clulas-guarda fique com uma carga mais negativa que o lado externo, processo conhecido como hiperpolarizao da membrana. A hiperpolarizao da membrana estimula a abertura de canais de influxo de K + para o interior das clulas-guarda por meio do gradiente eletroqumico atravs da membrana dessas clulas. O aumento na concentrao de H+ fora da clula contribui para a entrada de Cl-, por cotransporte do tipo simporte. Nesse transporte, cada prton que entrar na clula, seguindo o gradiente eletroqumico, carrega consigo um on Cl -. Alm dos ons descritos acima, durante a abertura estomtica, tambm ocorre um aumento nos nveis de malato -2, que sintetizado no citoplasma das clulas-guarda, a partir de esqueletos carbnicos gerados na hidrlise do amido. A abertura dos estmatos mantida pelo aumento no contedo de sacarose (proveniente da fotossntese). Dessa forma, o aumento nos nveis de K +, Cl-, malato2 e sacarose promovem a reduo dos potenciais osmtico e hdrico e favorecem a absoro de gua e, consequentemente, o aumento no turgor das clulas-guarda. No processo de fechamento dos estmatos ocorre o aumento nos nveis de clcio +2 (Ca ) no citoplasma das clulas-guarda estimulado pelo aumento do CO 2 e do hormnio vegetal, cido abscsico (ABA). Elevados nveis de Ca +2 nas clulas-guarda inibe H+-ATPase na membrana plasmtica estimulando canais de efluxo de Cl- e malato-2, o que promove a reduo desses ons nessas clulas. A reduo nos nveis de K +, Cl- e malato-2 promove o aumento nos potenciais osmtico e hdrico fazendo com que a gua saia das clulas-guarda diminuindo, dessa forma, o potencial de turgor. Portanto, a folha mantm um rigoroso controle sobre a abertura estomtica, envolvendo uma sinalizao que engloba a planta inteira (o ABA que causa o fechamento estomtico, por exemplo, pode ser produzido pelas razes, assim que elas percebem a falta de gua). No entanto, aps um tempo de vida til da folha, ela comea a entrar em um processo denominado senescncia. A senescncia o processo natural (e muito bem regulado) de morte da folha, que termina na sua absciso. Absciso foliar A absciso o termo usado para descrever o processo de separao natural de rgos da planta-me. Isso pode ocorrer por parte de um desenvolvimento altamente programado da planta ou em resposta a determinados estresses ambientais. A absciso ocorre em camadas de clulas denominadas zona de absciso, as quais se diferenciam durante o desenvolvimento do rgo. Esse processo depende da ativao de determinados genes que codificam enzimas hidrolticas da parede celular, como a poligalacturonase (PG) ou pectinase. A PG quebra a pectina na lamela mdia e permite a separao celular. Alguns trabalhos tm mostrado a existncia de PGs especficas ao processo de absciso e que se diferem das PGs associadas a outros eventos do desenvolvimento que requerem a separao celular, tal como o amadurecimento dos frutos. De modo geral, a absciso pode ser dividida nas seguintes etapas: 1 A folha se mantm ligada planta-me devido a um gradiente de auxina da lmina
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foliar para o caule, diminuindo a sensibilidade das clulas dessa regio ao etileno. 2 Com a maturidade celular e estresses ambientais ocorre uma diminuio no gradiente de auxina, elevando a sensibilidade dessas clulas ao etileno. 3 O aumento na sntese de etileno, promovido pela maior sensibilidade a esse hormnio nessa regio, estimula a sntese de enzimas hidrolticas da parede celular, causando a separao da folha da planta-me. 4 Aps a absciso, as clulas prximas ao caule aumentam o tamanho e se suberificam formando uma camada de proteo externa. As auxinas (AIA) e o etileno so importantes classes hormonais que regulam esse processo fisiolgico. O AIA o retarda, enquanto o etileno um potencial acelerador desse processo. De modo geral, se o fluxo de auxina para a zona de absciso mantido, a separao celular inibida e a absciso no ocorre. Os nveis de auxina na zona de absciso controlam a sensibilidade dessas clulas ao etileno. Portanto, qualquer fator que afete o suprimento de auxina na zona de absciso ir tambm afetar a sensibilidade ao etileno. Por outro lado, o etileno um potencial inibidor do transporte de auxina e pode aumentar a sensibilidade a ele mesmo na zona de absciso, aumentando a destruio, inativao de auxina, alm de interferir no seu transporte. Porm, outros fatores certamente esto envolvidos nesse processo, uma vez que a prpria auxina tambm pode estimular a produo de etileno e acelerar a absciso, quando aplicada em estgios mais avanados do desenvolvimento da planta. Dentre muitos fatores ambientais que regulam a absciso, os mais discutidos em revises de fisiologia vegetal sero descritos a seguir. 1. Fotoperodo A percepo do fotoperodo curto pode ser um sinal para a mudana da expresso de genes que codificam enzimas requeridas na fotossntese para a expresso de genes que codificam protenas associadas absciso e senescncia. Tratamentos de escuro ou baixa luminosidade aumentam a absciso de flores, folhas e frutos. Esse efeito parece ser mediado pela auxina, uma vez que em folhas de Coleus foi observado um aumento de trs vezes na produo de auxina livre em resposta ativao do fitocromo (Fve) promovida pela diminuio de luz vermelho-extremo e aumento de luz vermelho. 2. Estresse hdrico Condies de seca e outros estresses que causam a deficincia hdrica, como estresse salino e altas temperaturas, podem promover a absciso como resultado da diminuio no crescimento e vigor da planta. A seca promove um rpido declnio na expanso da folha associado com a diminuio nos nveis de auxina, concomitante reduo na taxa fotossinttica e fechamento dos estmatos. Os estmatos, por sua vez, podem promover o atraso na senescncia e absciso da folha como consequncia da regulao da transpirao e da fotossntese. 3. Ferimento e ataque de patgeno O ferimento causado por herbivoria ou outro dano mecnico pode permitir a entrada de patgenos, de modo que a planta induza uma resposta de defesa envolvendo a alterao substancial na expresso gnica. Se a resposta de defesa no tiver sucesso e ocorrer a invaso do patgeno, a absciso do rgo infectado a nica forma da planta evitar a disseminao
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da infeco para outros rgos e para os seus vizinhos.
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Estruturas reprodutivas em angiospermas

Jos Hernandes Lopes-Filho Juliana El Ottra Keyla Rodrigues
Os estudos da flor dentro do contexto dos estudos de biologia comparativa tiveram seu inicio com os trabalhos de J. W. von Goethe, na rea da morfologia, e com C. K. Sprengel, na rea de biologia floral. Passados cerca de dois sculos desse incio, os estudos sobre a flor hoje abrangem diversas reas da biologia, como a anatomia, desenvolvimento, biologia da polinizao, biologia reprodutiva, gentica, biologia molecular, paleobotnica e estudos de diversidade e evoluo. Com o avano da tecnologia nas ltimas dcadas, notadamente com a microscopia eletrnica e com o desenvolvimento de novas metodologias nos estudos de gentica e biologia molecular, novas e fascinantes descobertas tem sido feitas. Dado que so diversas as reas que estudam a flor, difcil sintetizar tudo o que se conhece hoje sobre essa estrutura to importante para a reproduo em Angiospermas. Assim sendo aqui daremos destaque, sobretudo para os estudos sobre morfologia, anatomia, desenvolvimento, polinizao e evoluo floral.
Morfologia
A flor um ramo altamente modificado, apresentando apndices especializados. uma estrutura vegetal bastante complexa, na medida em que esta apresenta diferentes rgos e regies, com estrutura e funes diversas. Basicamente uma flor madura possui trs principais conjuntos: perianto (spalas e ptalas), o androceu (estames) e o gineceu (carpelos), estando estes rgos organizados de maneira verticilada (mais comum) ou espiralada (comum em Angiospermas basais). As spalas so localizadas mais externamente na flor, seguida mais internamente das ptalas, depois estames e no centro da flor localizamse os carpelos. Carpelos e estames so os verticilos frteis da flor, na medida em que estes portam os microgametfitos e os megagametfitos, os quais produzem os gros de plen e a oosfera, respectivamente. A grande diversidade de formas florais encontradas em Angiospermas prove das variaes encontradas dentro do plano morfolgico bsico supracitado. Assim as flores podem ser solitrias ou agrupadas em inflorescncias, sendo que o nmero e o arranjo dos rgos florais, bem como sua forma e fuses entre rgos, determinam em grande parte as diferentes arquiteturas florais. Tambm a diferenciao de estruturas acessrias na flor pode ocorrer, como a presena de coronas (apndices petalares e/ou estaminais, comum em grupos como Velloziaceae, Passifloraceae e Apocynaceae) e estruturas secretoras da flor, como nectrios. Os rgos florais podem apresentar-se livres ou fundidos, sendo conatos quando a fuso ocorre no mesmo verticilo e adnatos, quando a fuso ocorre em verticilos diferentes. Como resultado da unio dos rgos florais, arquiteturas bastante complexas podem ser geradas, e adicionalmente s mudanas de forma no desenvolvimento, torna-se s vezes difcil o reconhecimento da identidade de cada um dos quatro verticilos florais na estrutura floral madura. Como exemplos desses casos, pode-se citar: o ginostmio das Orchidaceae, resultante da fuso do androceu e estilete; a flor de Canna indica (Cannaceae) onde o estilete petalide unido ao estame; e o ginostgio de muitas Apocynaceae, resultante da unio das
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anteras com o estilete. Adicionalmenteas alteraes na arquitetura floral, as coloraes dos rgos florais so tambm notavelmente diversas. O verticilo de ptala o que comumente apresenta maiores variaes de cor dentre as Angiospermas, sendo tal fato associado atrao visual de certos polinizadores. A colorao nas ptalas pode ser gerada pela presena de antocianinas, antoxantinas ou ainda betalanas, dentre outras substncias, acumuladas no vacolo, ou ainda carotenos e xantofinas presentes no interior dos cromoplastos ou cloroplastos, no citoplasma. Geralmente as clulas que apresentam estes pigmentos localizam-se na epiderme. Outros mecanismos que tornam as ptalas mais vistosas so a presena de espaos intercelulares que refletem a luz, ou ainda superfcies com papilas e concavidades gerando o efeito aveludado da superfcie.
Desenvolvimento
O meristema apical caulinar (MAC) pode ser vegetativo (Figura 1), quando d origem aos tecidos e rgos vegetativos, ou reprodutivo, quando sofre modificaes induzidas por uma cadeia de estmulos, originando os tecidos e rgos florais. As clulas do meristema em geral caracterizam-se por terem tamanho comparativamente menor, e por possurem parede primria, plastos indiferenciados e citoplasma denso. A transio de um meristema vegetativo para um floral envolve modificaes morfoanatmicas conspcuas, sobretudo relacionadas interrupo do crescimento indeterminado, caracterstico do estdio vegetativo, e a produo dos apndices florais.Nesta transio,notam-se caractersticas marcantes, como ainterrupodo crescimento indeterminado do pice vegetativo, bem como da produo de folhas vegetativas e ocorrnciade um maior alongamento dos entrens. No crescimento vegetativo, aps a formao de cada folha, o meristema cresce de forma a restaurar o tamanho original antes da formao da prxima folha. No entanto, durante o desenvolvimento da flor o meristema diminui gradualmente aps a formao de cada pea floral, at ser completamente diferenciado na formao do ltimo verticilo, embora algumas espcies possam reter um resqucio de tecido meristemtico que permanece inativo (Figura 2). Durante o desenvolvimento, os rgos florais surgem no pice do meristema floral de modo ordenado, muitas vezes refletido em um rpido alongamento do eixo, que formar a inflorescncia, seguido pela ampliao e achatamento dos meristemas que daro origem s flores. As peas florais se encontram dispostas tipicamente em uma ordem especifica, o padro mais comumente encontrado o surgimento dos primrdios dos rgos em sequncia centrpeta e acrpeta, com a formao em ordem, de spalas, ptalas, estames e carpelos (Figura 2). Contudo, variaes nesse padro podem ser encontradas.Os primrdios de todos os rgos florais tem aspecto de um domo semi-esfrico ou estes so lateralmente achatados, sendo estes estgios iniciais similares para todos os tipos de rgos. A iniciao dos primrdios visvel histolgicamente como reas intensamente coradas no meristema floral (Figura 2). A formao do primrdio de um rgo induz a diferenciao de um feixe procambial, que mais tarde se tornar o feixe vascular principal (mediano ou dorsal) do rgo. O feixe procambialrecm formado se conecta com um ou mais feixes vasculares mais desenvolvidos, localizados mais abaixo na base da flor ou pedicelo. Durante o crescimento do rgo, mais feixes de procmbio podem se diferenciar.
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Muitas vezes os primrdios florais de um mesmo verticilo podem surgir inicialmente unidos como uma projeo anular do meristema floral (e.g.: tubo corolino), resultante da fuso dos meristemas individuais de cada rgo.Este tipo de fuso denominado de fuso congnita, e evidente somente nos estgios iniciais de desenvolvimento floral.Diferente da unio congnita dos primrdios florais, outra, por meio da unio posgnita, tem sido observada nos diferentes verticilos florais, que ocorre quando os rgos se tornam unidos aps surgirem e experimentarem o desenvolvimento como peas livres, ocorrendo apenas posteriormente a unio por meio da adeso dos das margens dos rgos, podendo ocorrer ou no a fuso completa destas (falsa simpetalia: e.g. ptalas de Correa, Oxalis, Conhocarpus; anteras de Asteraceae). Spalas e ptalas tm ontogenias diferentes: enquanto que o surgimento dos primrdios do clice ocorre em sequncia espiral, as ptalas apresentam surgimento verticilado de seus primrdios. Quanto vascularizao, spalas geralmente apresentam trs feixes vasculares, enquanto que ptalas possuem apenas um, podendo se ramificar em maior nmero posteriormente, havendo variados desvios a esse padro. Os estames, aps o desenvolvimento de seu primrdio, diferenciam primeiramente a regio da antera para apenas depois diferenciar a poro do filete. Estes so vascularizados por apenas um feixe vascular por estame. Nos casos onde ocorre polistmonia ( i.e.: nmero de estames muito superior ao merismo bsico da flor, mais que o dobro do nmero de ptalas) o desenvolvimento dos primrdios ocorre por fragmentao do nmero bsico inicial dos primrdios de estame. Quanto ao desenvolvimento do carpelo, este apresenta inicialmente uma zona de cruzamento, que corresponderia margem foliar onde o vulo se desenvolve em sua superfcie interna, e uma zona secundria, onde as demais pores se desenvolvero. Quando desenvolvido o carpelo apresenta duas regies bsicas: a poro plicada, correspondente regio do estilete e estigma (geralmente de formato mais ou menos cilndrico), e a poro ascidiada, correspondente ao ovrio (formato arredondado). Mas h exceesa esse padro, por exemplo, em Austrobaileyaceae o carpelo no possui zona plicada (no h um estilete e estigma diferenciado), sendo o fechamento do carpelo incompleto e o pice com um estigma funcional secretor. Ainda que a caractersticas mais marcantes de Angiospermas seja a presena de vulos protegidos por carpelos, muitas vezes o fechamento da folha carpelar ocorre apenas durante as etapas finais de sua ontogenia.
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Primrdios Foliares
Figura 1-Meristema apical caulinar vegetativo de Asclepiascurassavica (foto de Diego Demarco)
Quanto vascularizao, o carpelo apresenta geralmente trs feixes vasculares, um dorsal (que se prolongam at o estilete, podendo ocorrer ramificaes) e dois ventrais (que irrigaro o vulo), no entanto variaes quanto ao nmero e posio de feixes podem ocorrer. O gineceu pode ser unicarpelar, proveniente do desenvolvimento de apenas um primrdio, como por exemplo em Leguminosae, bem como pode ser pluricarpelar, sendo gerado a partir de vrios primrdios. Neste ltimo caso os primrdios dos carpelos podem ser livres e os carpelos denominados de apocrpicos (e.g.: Dilleniaceae) ou unidos de variadas formas e por diferentes extenses, sendo denominados de carpelos sincrpicos (e.g.: Bromeliaceae, Bignonicaceae), sendo que estas unies podem ocorrer de maneira congnita ou posgnita. Mais comumente so encontrados carpelos sincpicos com poro basal unida congenitamente e pores apicais unidas posgenitalmente.
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Spalas
Estames
Ptalas
Figura 2-Boto floral jovem de Asclepiascurassavica (foto de Diego Demarco)
Mecanismos moleculares responsveis pelo desenvolvimento floral

Com o advento da biologia molecular, alguns dos principais mecanismos de controle do desenvolvimento vegetal foram elucidados. No que se refere ao desenvolvimento reprodutivo, muito do que se conhece hoje foi obtido com estudos realizados com Arabidopsis thaliana (Brassicaceae) e Antirrhinum majus (Plantaginaceae), chamadas de plantas modelo. O estudo exaustivo, sobretudo de linhagens mutantes dessas plantas, resultou na descoberta de muitos genes e seus modos de atuao no desenvolvimento vegetal. Os tpicos abordados a seguir so vlidos, sobretudo para estas plantas modelo, mas em grande parte so conservados ao longo das angiospermas e muitas vezes podem ser extrapoladas para diversos de seus grupos.
Induo floral
A florao um fenmeno que ocorre de forma coordenada na vida da planta e depende de uma srie de fatores, sejam endgenos (nveis de expresso de determinados genes), ou exgenos (temperatura, fotoperodo, hormnios). O fotoperodo, ou seja, a durao do ciclo claro/escuro, um dos mais importantes mecanismos, conhecido h bastante tempo como fator crucial na determinao da induo floral. Desta maneira, algumas plantas so classificadas como de dias curtos, isto , florescendo quando os dias so curso e as noites longas (inverno), enquanto outras so de dias longos (vero). Atravs de diversos experimentos, foi constatado que a percepo do fotoperodo
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ocorre nas folhas e de alguma maneira essa informao transmitida at os meristemas vegetativos, onde desencadeia mudanas que resultam na formao de flores. Foi ento estabelecido o conceito de florgeno, um hormnio que seria responsvel por esta transmisso de informao.Por muito tempo, diversos pesquisadores buscaram por este elusivo hormnio sem sucesso. Contudo, recentemente foi elucidado o mecanismo pelo qual o fotoperodo influencia na florao. Resumidamente, a florao depende de um relgio circadiano endgeno que controla a variao expresso de uma rede de genes. O gene diretamente ligado ao relgio TIMING OF CAB EXPRESSION1 (TOC1) oscila sua expresso conforme o mesmo, independente do ciclo de luz. Contudo, um dos genes controlado por TOC1, transcreve para a protena CONSTANS (CO), que degradada durante a fase escura do ciclo (Figura 3). Por fim, CO induz a expresso de outro gene, FLOWERING LOCUS T (FT), que transportado das folhas at os meristemas. Desta maneira,em plantas que florescem em dias curtos, FT age como indutor de florao, enquanto que em plantas de dias longos, FT atua como repressor.
Figura 3-Representao esquemtica da expresso de CO e FT em diferentes regimes de fotoperodos. Dia curto: embora CO expresse normalmente, sua protena degradada durante a noite, no sendo capaz de induzir FT. Dia longo: No hpa alterao na expresso de CO, mas sua protena capaz de se manter ntegra, promovendo a expresso de FT.
Alm do fotoperodo, geralmente em regies que passam por um perodo severo de inverno, importante um mecanismo que assegure que a florao ocorra apenas aps o inverno. O processo pelo qual a temperatura atua na florao denominado de vernalizao, e seu mecanismo no to bem conhecido quanto ao do fotoperodo, embora parea estar ligado a mudanas na expresso gnica devido condensao da cromatina durante os perodos de frio mais intenso. Por fim, muitas plantas podem entrar em florao independentemente dos estmulos exgenos devido a um aumento, intrnseco e constante durante seu desenvolvimento, na expresso de genes responsveis pela induo floral, especialmente o gene LEAFY (LFY).
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Identidade e manuteno do meristema floral

Como mencionado anteriormente, o MAC pode possuir diferentes identidades, sendo elas: (1) meristema vegetativo (MV); (2) meristema da inflorescencia (MI); (3) meristema floral (MF). Sendo que na prtica, o que diferencia esses meristemas o comportamento de sua atividade, sobretudo no que diz respeito ao tipo de primrdios produzidos. Desta maneira, um MV caracterstico por produzir folhas (com seus respectivos meristemas axilares), enquanto um MI produz brcteas e/ou meristemas florais. O MF por sua vez produz os rgos florais (spalas, ptalas, estames e carpelos) e finalmente cessa sua atividade. Como normalmente as flores so produzidas em inflorescncias, geralmente o processo de florao envolve os dois processos de transio meristemtica (MVMIMF), que so caracterizados por mudanas na expresso de genes regulatrios da atividade do meristema e da manuteno ou no de uma populao de clulas com caractersticas meristemticas. Os genes responsveis pela transformao e manuteno do meristema floral so chamados de floral meristem identity (FMI) genes (genes de identidade do meristema floral), sendo os principais: LFY, APETALA1 (AP1), CAULIFLOWER (CAL) e FRUITFULL (FUL). Todos esses genes codificam para protenas que agem como fatores de transcrio, regulando a expresso de uma infinidade de genes, e que resulta por fim no desenvolvimento adequado dos rgos reprodutivos. O gene LFY parece ser o piv na transio para o meristema floral, sendo observado um aumento drstico em sua expresso, que ocorre de maneira uniforme em todo o meristema. Este gene atua como fator de transcrio para uma srie de outros genes relacionados florao, em especial AP1, AP3 e AGAMOUS (AG), genes do modelo ABC (ver prximo tpico).Uma vez que AP1 tambm induz a expresso de LFY, uma rede de feedback positiva criada, assegurando que, uma vez desencadeado, o processo de estabelecimento do MF mantido at o final. Outros genes tambm atuam de forma crucial para a atividade do meristema floral, como AG, que promove o fim da proliferao de clulas meristemticas aps o desenvolvimento dos carpelos. Por fim, embora desempenhe papel antagonista aos de identidade floral, reprimindo a expresso de LFY e AP1, o gene TERMINAL FLOWER 1 (TFL1), desempenham papel fundamental para o desenvolvimento reprodutivo. Entre outras atividades, TFL1 impede que LFY e AP1 transformem um MI em MF. Desta maneira, muitas das arquiteturas de inflorescncia observadas na natureza resultam do balano entre as expresses dos genes de identidade floral (LFY e AP1) e seu repressor TFL1.
Determinao dos rgos florais e o modelo ABC

A partir de estudos baseados em plantas modelo, foram descobertas linhagens de mutantes que exibiam mutaes hometicas em suas flores. Mutaes hometicas so aquelas que produzem um rgo onde normalmente se encontrariam outro. Aps o estudo de diversas linhagens, notou-se que as mutaes hometicas em flores sempre afetavam dois verticilos adjacentes, e nunca um apenas. Embora muitos mutantes tenham sido reconhecido, todos se encaixavam em 3 categorias: (A) spalas e ptalas eram substitudas por carpelos e estames, respectivamente; (B) ptalas e estames eram substitudos por spalas e carpelos; e
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(C) estames e carpelos eram substitudos por ptalas e spalas. Desta maneira, foi estabelecido o chamado modelo ABC da determinao dos rgos florais (Figura 4). O modelo prope que a expresso de genes classe A determina a formao de spalas; a atividade conjunta de A e B especifica a formao de ptalas; B e C combinados determinam estames e a atividade de apenas C resulta na formao de carpelos. O modelo tambm prope uma regulao negativa entre A e C, e a expresso de B nos verticilos 2 e 3 independentemente dos outros fatores do prprio modelo.
Figura 4-Representao esquemtica do modelo ABC em Arabidopsis thaliana. A combinao de diferentes classes de genes responsvel pela determinao dos gos florais.
Em Arabidopsis, os genes APETALA1 (AP1) e APETALA2 (AP2) correspondem funo de A; APETALA3 (AP3) e PISTILLATA (PI) funo de B; AGAMOUS (AG) para a funo de C. Posteriormente, com a descoberta de outros genes envolvidos, foram incorporadas ao modelo as funes D, relacionada identidade de vulos, e E, necessria para a formao de todos os rgos florais, estames e carpelos. Em Arabidopsis a funo D realizada pelo gene SEEDSTICK (STK), em redundncia com os genes SHATTERPROOF1 (SHP1), SHP2 e AG. J funo E realizada pelos genes SEPALLATA1 (SEP1), SEP2 e SEP3. Hoje, sabemos que muitos desses genes so fatores de transcrio que orquestram a expresso de uma infinidade de outros genes responsveis por desenvolver corretamente cada rgo floral. Sabemos ainda que muitos desses genes atuam conjuntamente formando
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heterodmeros. Desta maneira, um complexo formado por protenas AP1 e SEP, por exemplo, responsvel pela regulao de genes que no final resultaro no desenvolvimento de uma spala. Por fim, estudos com o silenciamento de genes da classe E ( SEPALLATA) mostram que na ausncia do mecanismo que leva formao dos rgos florais, os primrdios derivados do meristema floral transformam-se em flores com quatro verticilos de rgos morfolgicamente semelhantes folhas. Tal resultado corrobora as teorias anteriormente propostas por sobre a homologia dos rgos florais com as folhas do corpo vegetativos da planta. Notavelmente a equivalncia entre folhas e flores foi primeiramente propostas pelo filsofo alemo J. W. Goethe, em 1790.
Estruturas Secretoras Florais

A flor, assim como as demais partes das plantas, podem apresentar estruturas secretoras nos diferentes verticilos florais, bem como na inflorescncia. Estas secrees (ou exsudatos) so provenientes de processos metablicos, que incluem os processos de sntese, isolamento de substncias e posterior liberao, tanto nos espaos extracelulares no interior do rgo em que esta formada, como para o exterior da planta. Estes exsudatos apresentam composies qumicas bastantes variadas, podendo apresentar, por exemplo, gua, protenas, leos, nctar, ltex, substncias salinas e resinas etc. As clulas secretoras presentes no rgo onde so produzidos estes exsudatos geralmente apresentam caractersticas histolgicas, como ausncia de parede celular secundria, citoplasma de aspecto denso a hialino e ncleo relativamente grande, em relao ao citoplasma. As estruturas secretoras podem apresentar-se como uma clula individualizada (idioblastos) ou em uma estrutura multicelular (tricomas, emergncias, cavidades e canais), sendo tais estruturas de reconhecida importncia taxonmica e filogentica, uma vez que certos tipos so caractersticos de grupos de plantas, e servem como evidncia de parentesco prximo entre as mesmas. As estruturas secretoras florais podem possuir diferentes classificaes quanto sua posio e/ou funo, no havendo s vezes universalidade quanto utilizao dos mesmos termos na literatura. Assim, quando localizada no interior da flor, comumente chamada de estrutura secretora floral (e.g.: nectrios florais) e quando localizada em outra regio ou nas proximidades da flor (inflorescncias), ou ainda externamente ao clice, pode ser chamada de extrafloral (e.g.: nectrios extraflorais). De modo semelhante, quando a funo da estrutura est relacionada polinizao, denominada de nupcial (e.g.: nectrio nupcial), e quando no apresenta tal funo, extranupcial (e.g.: nectrios extranupciais), podendo estar relacionada ento a outras funes, como por exemplo, mecanismos de defesa antiherbivoria. Muitas vezes a confuso no uso destas terminologias provm da ausncia de dados de funo das estruturas secretoras florais. Nas flores, vrias estruturas secretoras so conhecidas, as mais comumente encontradas so: Os nectrios, que so tecidos especializados na produo de nctar. Estes apresentam uma ampla gama de estruturas, morfologicamente e anatomicamente diversas, mas frequentemente os nectrios intraflorais apresentam-se em forma de um anel basal contnuo ao redor do ovrio.
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A composio do nctar varivel, porm este constitudo geralmente por sacarose, glicose e frutose, mas mucilagem, aminocidos, protenas, ons minerais, vitaminas, enzimas e cidos orgnicos tambm podem ser encontrados. A presena do nctar floral est tradicionalmente associada a atrao de polinizadores nectarvoros, no entanto pode apresentar outras funes como induo da germinao dos gros de plen dentro da cmara estigmtica, bem como sua presena em nectrios no clice tem o potencial de atrair formigas protetoras contra herbvoros. O tecido transmissor, que o tecido atravs do qual os tubos polnicos crescem at chegar micrpila do vulo, havendo uma relao nutricional ou fisiolgica com os tubos polnicos. definindo como uma parte do gineceu que se estende do estigma ao ovrio, podendo ser parcial ou inteiramente secretor e composto por trs regies: estigmtica, estilar e ovariana. Embora a presena de tecido transmissor e o caminho percorrido pelo tubo polnico atravs do gineceu de flores sejam bem conhecidos, h raras informaes estruturais sobre estes tecidos e quase nenhuma sobre as secrees produzidas por eles, sendo que h relatos de presena de secreo mucilaginosa tanto na regio estigmtica como na estilar. Alm das estruturas secretoras florais acima citadas, h tambm outras como elaiforos, colteres, laticferos, osmforos, bem como tecidos secretores de resina. Estas geralmente produzem secrees relacionadas atrao e nutrio de visitantes florais ou atrao de formigas protetoras da planta. Os estudos comparativos das estruturas secretoras florais em diversos grupos de plantas permitem-nos compreender no apenas os aspectos funcionais destas secrees, mas tambm as alteraes graduais que ocorreram nestas estruturas ao longo da histria evolutiva, como por exemplo, alteraes na localizao do nectrio, composio do nctar e seu local de acmulo em relao s diferentes sndromes de polinizao; tambm, na evoluo de carpelos apocrpicos para sincpicos ou parcialmente sincrpicos, foram observadas alteraes nos tecidos transmissores e consequentemente no direcionamento dos tubos polnicos, podendo promover a fecundao dos vulos de um ou mais lculos do ovrio devido ao surgimento de um compitum (unio de todos os tecidos transmissores dos carpelos).
Evoluo floral e as Sndromes de Polinizao

A diversidade de formas florais de Angiospermas vem impressionando botnicos desde os tempos de Goethe. Tendo em vista a existncia de tal variao na estrutura da flor, o principal objetivo dos estudos sobre evoluo floral tentar compreender como se deu a evoluo de tal diversidade. Nos estudos de evoluo com enfoque ecolgico, verifica-se que a estrutura floral pode ser influenciada por vrios fatores, sendo a presso seletiva por parte dos polinizadores de grande importncia em espcies polinizadas por agentes biticos. Estudos realizados com diversos grupos de plantas mostram que polinizadores exercem presses seletivas considerveis sobre um conjunto de caracteres florais relacionados polinizao. A seleo de tais feies florais pode estar diretamente relacionada especiao e diversificao dos txons por afetarem o sucesso reprodutivo das plantas. Desse modo, a gerao de tais caractersticas morfolgicas notvel exemplo da ao da seleo natural e de seus produtos adaptativos. As evidncias dos estudos de adaptao floral em relao aos seus vetores de plen
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levaram ao surgimento do conceito de sndromes de polinizao, que consiste na convergncia das formas florais em linhagens de plantas filogeneticamente distantes, e sua associao previsvel com certos polinizadores. Assim so reconhecidos basicamente seis tipos de sndrome de polinizao: miofilia (polinizao por moscas), psicofilia (polinizao por borboletas), falenofilia (polinizao por mariposas), quiropterofilia (polinizao por morcegos), ornitofilia (polinizao por aves) e melitofilia (polinizao por abelhas). O conjunto de atributos florais que caracterizam flores mifilas basicamente: cores claras e opacas, ou cores escuras, odor desagradvel, nctar de livre acesso. J as flores melitfilas so caracterizadas por apresentarem cores azuis, amarelas ou por refletirem UV, guias de nctar so frequentemente encontrados, bem como, nctar de difcil acesso e aroma agradvel. Flores psicfilas apresentam cores chamativas, nctar escondido em tubo floralestreito ou esporo (clcar), flores de orientao eretas, com plataforma de pouso e odor fraco. Diferentemente as flores falenfilasapresentam cores brancas ou plidas, odor forte e agradvel, flor tubular ou em forma de estrela, nctar escondido no fundo de um tubo floral ou de um esporo, s vezes com estames e estilete bem exsertos e flor orientada geralmente na vertical. Para as sndromes por polinizao por vertebrados temos a quiropterofilia e a ornitofilia, sendo esta ltima caracterizada por flores de colorao chamativa, frequentemente vermelhas, nctar abundante e escondido (tubo floral ou outras estruturas), aroma floral ausente, orientao vertical, com ou sem plataforma de pouso (ausente no caso de flores polinizadas por beija-flores); diferentemente a quiropterofilia caracterizada pelas flores de colorao no chamativas, nctar abundante e escondido, aroma desagradvel, orientao horizontal ou flores pendentes. Apesar do conceito das sndromes de polinizao ter sido amplamente utilizado no passado, estudos mais recentes, no entanto, tm argumentado que a ocorrncia de tal fenmeno no universal, uma vez que em certos grupos de plantas nota-se uma fraca associao entre um grupo particular de polinizadores e a morfologia floral. O que tem se observado atualmente que o fenmeno das sndromes de polinizao deve ser analisado com critrio, uma vez que se sabe que outros fatores podem influenciar a evoluo floral num grupo, notavelmente as restries filogenticas, que limitam a convergncia dos estilos florais. Tambm estudos de polinizao vmdemonstrando que certas espcies investem na polinizao por uma ampla gama de polinizadores, apresentando assim um sistema de polinizao considerado generalista. No entanto, no se deve descartar o conceito de sndromes florais, uma vez que estas so teis para gerao de hipteses testveis em campo.
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Fitormnios no desenvolvimento vegetal
Fitormnios no desenvolvimento vegetal

Lucas Macedo Flix
Os hormnios vegetais so mensageiros qumicos, produzidos em clulas ou tecidos, que modulam os processos celulares em outras clulas, interagindo com protenas especficas chamadas receptores. Assim como em clulas animais, a maioria desses hormnios sintetizada em concentraes extremamente baixas nos tecidos, muitas vezes atuando em tecidos diferentes queles onde foi produzido. Estes so substncias orgnicas que desempenham uma importante funo na regulao do crescimento vegetal podendo atuar promovendo, inibindo ou modificando processos morfolgicos e fisiolgicos de desenvolvimento. Atualmente aceita a existncia de cinco classes principais de hormnios vegetais. Estas classes hormonais so agrupadas com base nas suas semelhanas estruturais e de seus efeitos sobre a fisiologia da planta. Cada classe hormonal possui efeitos tanto promotores quando inibitrios em processos vegetais de desenvolvimento e normalmente estes fitormnios atuam em conjunto nestes processos. As cinco classes principais de hormnios vegetais, auxinas, citocininas, giberelinas, cido abscsico e etileno, sero detalhadas a seguir. As auxinas exercem importante papel na regulao do crescimento e desenvolvimento vegetal. Estudos apontam que este fitormnio sintetizado a partir do amino cido triptofano e sua biossntese se da em locais de diviso celular rpida, como o meristema apical caulinar, folhas jovens, frutos em desenvolvimento e sementes. Embora tambm possa ser produzida em nveis inferiores em folhas maduras e pices radiculares. Seu transporte polar unilateral, ocorrendo no sentido pice/base do vegetal de clula a clula. Elas esto envolvidas no processo de diviso, expanso, alongamento e diferenciao celular, assim como nos processos de manuteno da dominncia apical e crescimento da gema axilar, formao dos primrdios foliares e filotaxia, formao do gancho apical, desenvolvimento radicular, absciso foliar e tropismos. Os principais centros produtores das citocininas so as razes, no entanto, sua biossntese pode ocorrer em outros tecidos meristemticos, como os pices caulinares. O transporte deste hormnio vegetal feito via xilema, no sentido base/pice. As citocininas so conhecidas sobretudo por atuarem no processo de diviso celular, como tambm, na diferenciao celular, estabelecimento de drenos, retardamento da senescncia foliar, fotomorfognese e na quebra da dominncia apical. As giberelinas cumprem importante papel no controle do desenvolvimento da planta, sendo sua ao normalmente conjugada a outro hormnio vegetal. Este hormnio sintetizado nas sementes, frutos em desenvolvimento e tecidos vegetativos em rpido crescimento, e seu transporte ocorre principalmente via floema. A regulao da expresso das giberelinas parece estar relacionada com as protenas DELLA, que agem como reguladores negativos da transcrio nuclear desse hormnio. Elas so conhecidas por seus efeitos no alongamento e crescimento caulinar, na induo floral, no controle da diferenciao do meristema apical caulinar, na promoo da germinao de sementes e no estabelecimento e desenvolvimento de frutos. O etileno um hormnio vegetal gasoso sintetizado em taxas reduzidas em diversos tecidos. Sua produo dependente do tipo de tecido e do estgio de desenvolvimento da
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planta, sendo intensificada sob condies estressantes. Por ser um hormnio gasoso, este possu fcil difuso entre os tecidos, podendo muitas vezes ser perdido para o ambiente. Muitos efeitos do etileno tm sido descritos no controle do desenvolvimento de plantas, dentre eles destaca-se a inibio da atividade do meristema apical caulinar, inibio da diviso celular e alteraes no balano de outros hormnios. Este tambm est intimamente relacionado ao amadurecimento de frutos, senescncia e morte celular programada, crescimento e diferenciao de razes e epinastia das folhas. Por fim, o cido abscsico um fitormnio que regula vrios processos do ciclo de vida da planta. Este hormnio est envolvido nas respostas a estresses ambientais, como alta salinidade, baixa disponibilidade de gua e baixas temperaturas. Acredita-se que sua biossntese possa ocorrer em quase todos os tecidos da planta e seu transporte realizado via floema, xilema e clulas parenquimticas. Possu efeitos no fechamento estomtico (estresse hdrico) e na dormncia de gemas e sementes. Estes fitormnios atuando em conjunto, formam uma eficiente e sensvel rede de comunicao entre clulas, tecidos e rgos das plantas, agindo como sinalizadores e decodificadores de sinais externos provenientes dos diferentes meios em que elas se encontram.
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Metabolismo Secundrio
Augusto Csar de Barros Tomba Fernanda Mendes Rezende Janana Morimoto Meyer Sarah Aparecida Soares
As plantas esto cercadas por vrias fontes de injria, bem como potenciais aliados em seu ambiente. Atravs das mutaes nas vias biossintticas bsicas e interaes com diferentes fatores no meio, foram selecionadas diversas substncias que aparentemente no apresentam funo nos processos de crescimento e desenvolvimento vegetal (fotossntese, respirao, translocao, sntese de protenas, assimilao de nutrientes, diferenciao ou sntese de carboidratos, protenas e lipdeos), estas molculas foram classificadas como metablitos secundrios ou produtos naturais. Estes compostos conferem aos vegetais maior capacidade adaptativa ( fitness) e maior vantagem para sua sobrevivncia atravs de interaes com receptores especficos em outros organismos, resultando em respostas fisiolgicas muito caractersticas, num processo que podemos denominar, de modo mais realista que audacioso, de co-evoluo. A maioria dos metablitos secundrios possui distribuio bem restrita entre os vegetais, sendo encontrados em uma espcie ou em um grupo de espcies relacionadas, diferentemente dos metablitos primrios que so encontrados em todo o reino vegetal. Assim, das substncias produzidas para processos fisiolgicos e ecolgicos, antes consideradas de menor relevncia, esto includos os aromas, sabores e cores mais variados e intensos, assim como os princpios ativos que definem uma planta como sendo medicinal ou txica. Mas o que so esses princpios ativos das plantas medicinais? Sabemos que so produtos do metabolismo vegetal, no diretamente relacionados com os chamados processos primrios para a planta, como fotossntese, respirao e formao do protoplasma. Da, esse conjunto de vias biossintticas ter recebido o nome de metabolismo secundrio. luz do conhecimento atual, as substncias oriundas dessas vias so vitais para as plantas, apresentando funes como: defesa contra herbvoros e patgenos, alelopatia, proteo contra raios UV e poluio, atrao de polinizadores e dispersores, regulao do metabolismo, sinalizao molecular, processos nada secundrios para a vida e perpetuao das espcies vegetais.
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Figura 1- Vias do metabolismo secundrio e exemplos das principais classes
Os metablitos secundrios so divididos em quatro grupos principais: derivados de cidos graxos, compostos fenlicos, terpenos e nitrogenados (Figura 1). Mais detalhes sobre as rotas biossintticas e seus papis na sobrevivncia das plantas sero expostos nos pargrafos que seguem.
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Terpenos
Os terpenos constituem um grupo grande e diverso de produtos secundrios, compostos por unidades de isopreno (C5; Figura 2) agrupadas de diversas maneiras. As substncias desta classe so hidrofbicas e sintetizadas a partir de pelo menos duas vias biossintticas: da acetil-CoA (via do cido mevalnico) ou intermedirios glicolticos Figura 2-Isopreno (via do metileritritol fosfato) veja Figura 3. As reaes da via do cido mevalnico ocorrem no citossol, onde trs molculas de acetil-CoA so ligadas para formar o cido mevalnico, esta molcula passa por reaes de pirofosforilao, descarboxilao e desidratao para produzir o isopentenil difosfato (IPP). O IPP tambm pode ser sintetizado atravs da via do metileritritol fosfato (MEP) que ocorre no cloroplasto e em outros plastdeos. O IPP e seu ismero dimetilalil difosfato (DMAPP) se unem formando o geranil difosfato (GPP), uma molcula de 10 carbonos, a partir do qual so formados os monoterpenos. O GPP pode se ligar a outra molcula de IPP, formando um composto de 15 carbonos (farnesil difosfato - FPP), precursor da maioria dos sesquiterpenos. A adio de outra molcula de IPP ao FPP forma o geranilgeranil difosfato (GGPP), composto de 20 carbonos, precursor dos diterpenos, e por ltimo o FPP e o GGPP podem se juntar para formar triterpenos (C30) e tetraterpenos (C40), respectivamente (Figura 3). Mono e sesquiterpenides so substncias presentes nos leos volteis, e conferem a determinadas plantas seu aroma caracterstico (como as Lamiaceae, Ocimum sp. por exemplo). Essas substncias esto associadas a defesa e sinalizao molecular nas plantas e tm atividades antimicrobianas. O fitol, que faz parte da molcula da clorofila, um dos mais simples e abundantes diterpenos. Giberelinas, hormnios vegetais envolvidos na regulao de diversos processos como alongamento celular e senescncia, tambm tm origem diterpnica. Outra substncia interessante relacionada aos diterpenos o taxol, usado no tratamento de diversos tipos de cncer. Triterpenides e esterides possuem origem biossinttica comum o esqualeno, formado de 6 unidades de isopreno. Triterpenides como os do tipo ursano, lupano e oleanano, podem ser encontrados nos mais diversos grupos de plantas. Recentemente atividades anticancergenas tm sido reportadas para esses compostos. Essas substncias tambm so frequentemente encontradas na forma de saponinas (do latim: sapo = sabo) que possuem propriedades surfactantes. Limonoides, que so triterpenoides modificados, tm reconhecida atividade inseticida. So atribudas a esses compostos as propriedades do leo de Neem (Azadirachta indica, Meliaceae). Esterides so comuns nas plantas tambm como parte estrutural da membrana celular. So comuns sitosterol, estigmasterol e campesterol. Fitoesterides so utilizados na dieta humana para diminuir a quantidade de colesterol absorvido. Carotenoides ou tetraterpenoides, derivados de 8 unidades de isopreno, em geral so pigmentos relacionados fotoproteo e atrao de polinizadores nas plantas; so precursores da vitamina A, cuja deficincia pode causar problemas de viso nos humanos.
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Figura 3-Representao simplificada das vias metablicas geradoras dos terpenos
Derivados de cidos Graxos

O papel destes compostos para a planta de extrema importncia, pois so constituintes de cera cuticular. As ceras funcionam como uma barreira entre o meio interno e externo da planta, revestindo todos os rgos areos confere proteo contra os raios UV, entrada de patgenos, poluio e principalmente contra o dessecamento. O surgimento desta camada protetora foi um dos importantes fatores para a conquista do ambiente terrestre. As ceras so misturas complexas de hidrocarbonetos alifticos de cadeia longa com srie homloga (por exemplo, n-alcanos, lcoois, aldedos, cidos graxos e steres), que podem apresentar pequenas quantidades de terpenides e derivados de cido cinmico. A quantidade de cera nas folhas varia com a espcie e gentipo, idade da folha, e condies ambientais. O incio da sntese desses compostos se d no plastdio onde ocorre a formao de cidos graxos C16 e C18 a partir de unidades de malonil CoA e acetil CoA. Esses cidos so transportados para o retculo endoplasmtico onde sofrem diversas reaes de elongao formando cidos graxos de cadeia longa (C20-C40), a descarboxilao leva a formao de alcanos que sofrem reaes que do origem aos alcois secundrios e cetonas. Ainda obscura a sntese dos aldedos, acredita-se que possam surgir de reaes enzimticas com os
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alcanos ou diretamente pelos cidos graxos. Dos cidos graxos de cadeia longa tambm podem ser formados steres e alcois primrios
Compostos Fenlicos
Compostos fenlicos so encontrados praticamente em todas as plantas e incluem diversas substncias simples ou com diversos graus de polimerizao, com pelo menos um anel aromtico no qual ao menos um hidrognio foi substitudo por um grupo hidroxila. Podem ser encontrados na forma livre (agliconas; apolares), ligados a acares (glicosdeos; polares), protenas, isoprenoides, entre outros. Sua origem biossinttica est relacionada a duas rotas metablicas: Via do cido chiqumico e via do acetato-malonato. So classificados de acordo com sua cadeia principal, que constituir o anel benznico e uma cadeia substituinte. Sendo divididos em dois grandes grupos: os cidos fenlicos (cidos benzico, cinmico e seus derivados), quinonas, fenilpropanides, cumarinas, os flavonides, taninos e ligninas. A biossntese dos compostos fenlicos ocorre pela via do cido chiqumico que a responsvel pela formao da maioria dos fenlicos. Algumas estruturas so exclusivas desta via, como as encontradas nos cidos fenlicos (C6-C1) e nos fenilpropanides (C6-C3). Outras classes de fenlicos como os flavonides (C6-C3-C6) so provenientes de biossntese mista, na qual a via do cido chiqumico fornece um anel C6-C3 enquanto que a via do acetato malonato oferece o outro anel C6. Os flavonoides so substncias que compreendem, em geral, pigmentos que, alm de proteger os tecidos vegetais da ao mutagnica dos raios UV, participam da atrao de polinizadores e dispersores. Os flavonoides possuem uma estrutura bsica formada por C6C3-C6, sendo os compostos mais diversificados do reino vegetal. Neste grupo encontram-se as antocianidinas, flavonas, flavonois e, com menor frequncia, as auronas, chalconas e isoflavonas, dependendo do lugar, nmero e combinao dos grupamentos participantes da molcula. Existem outros flavonoides com distribuio mais restrita como as xantonas, antraquinonas, fenois simples e naftoquinonas. Alguns compostos fenlicos no se apresentam em forma livre nos tecidos vegetais. So aqueles presentes sob a forma de polmeros, na qual esto os taninos e as ligninas. Os taninos classificam-se em dois grupos, baseados em seu tipo estrutural: taninos hidrolisveis e taninos condensados. As ligninas so polmeros complexos de grande rigidez e resistncia mecnica, e sua hidrlise alcalina libera uma grande variedade de derivados dos cidos benzico e cinmico. Para os humanos, os flavonoides e substncias biossinteticamente relacionadas, como os taninos condensados e antocianidinas, tm recebido muita ateno devido a suas propriedades teraputicas. Compostos Nitrogenados Compostos nitrogenados so defesas qumicas anti-herbivoria. As trs classes mais importantes dos compostos nitrogenados so: 1) alcaloides; b)glucosinolatos; c)glicosdeos cianognicos. Alcaloide o nome dado a um grupo de substncias bastante heterogneo, predominantemente sintetizadas por plantas (dos 27.000 alcaloides conhecidos no momento,
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21.000 so de origem vegetal), tendo em comum o carter bsico, conferido pela presena de um ou mais tomos de nitrognio, podendo haver um ou mais heterociclos. So substncias reconhecidas pelo seu amplo espectro de atividades biolgicas, por isso correspondem a princpios ativos comuns em plantas medicinais. o caso da papoula (Papaver somniferum, Papaveraceae), que contm morfina, codena e papaverina; do caf (Coffea arabica, Rubiaceae), que contm cafena; de Chondodendron tomentosum (Menispermaceae), da qual se extrai o curare, potente relaxante muscular utilizado como veneno de flecha por indgenas sul-americanos, que apresenta importantes atividades anestsicas. Outro alcaloide muito conhecido a nicotina (presente no fumo, Nicotiana tabacum, Solanaceae). Glicosdeos cianognicos possuem um resduo de acar e um grupamento nitrila. So armazenados em vacolos e quando a planta atacada, os glicosdeos cianognicos so hidrolisados pela enzima que se encontra no citoplasma. Quando hidrolisados produzem cianeto, substncia altamente txica. Glucosinolatos so derivados da glicose e de aminocidos e contm enxofre e nitrognio na molcula. Ocorrem em quase todas as espcies de Brassicaceae e so responsveis pelo sabor picante do agrio, rabanete etc. Ao serem hidrolisados pelas mironase produzem isotiocianato que serve como defesa para a planta.
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Diversidade e Evoluo
2 Diversidade e Evoluo
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Interaes Planta-Ambiente
Carmen Eusebia Palcios Jara Carolina Krebs Kleingesinds Alejandra Matiz Lopez Fernanda Mendes Rezende Paulo Tamaso Mioto
Introduo
Como a planta percebe o ambiente? Essa uma questo com uma resposta to complexa que, quanto mais se estuda, mais perguntas aparecem. Diferente dos animais, as plantas esto expostas diariamente s mais diversas condies ambientais elas no podem sair correndo para escapar das situaes adversas. Aparentemente, as respostas das plantas envolvem mais sinalizao bioqumica do que eltrica e, como diversos sinais so processados na mesma clula, possuem um alto nvel de interao e superposio. Estudar sinalizao em plantas, portanto, estudar uma complexa rede, na qual inmeros componentes se relacionam de vrias maneiras. um grande desafio da botnica atual. As plantas esto imersas em um ambiente complexo, com vrios sinais simultneos que, freqentemente, levam a um grande conjunto de respostas. Para facilitar o entendimento, os sinais so divididos em dois grandes grupos: abiticos e biticos. Os sinais abiticos incluem a interao da planta com o ambiente no vivo. Neste curso sero abordados a luz, temperatura, gua e nutrientes. Os fatores biticos so interaes com outros seres vivos, sejam elas benficas ou nocivas s plantas. Ao longo do curso sero discutidas as relaes de simbiose e parasitismo. importante ressaltar que, na prtica, as plantas esto expostas a vrios fatores simultaneamente, tanto biticos como abiticos. Para saber o que ocorre no ambiente, a planta precisa perceber os sinais ambientais, como luz, gua, nutrientes, microorganismos e vrios outros. Quando o sinal percebido, ele vai desencadear uma srie de respostas, em vrios nveis organizacionais da planta, englobando desde uma clula at o indivduo como um todo. Os hormnios vegetais so intermedirios importantssimos entre a percepo do ambiente e a resposta da planta. Alm dos cinco grupos hormonais clssicos (auxinas, citocininas, giberelinas, etileno e cido abscsico), h novas molculas consideradas hormnios. Entre os mais citados esto os jasmonatos, brassinosterides e estrigolactonas. Frequentemente, as condies s quais as plantas esto submetidas tornam-se extremas, podendo ocasionar uma situao desfavorvel a elas. Nesses casos, diz-se que a planta est sob estresse, este termo tem origem na fsica e, nesta cincia, estresse seria uma tenso produzida no interior de um corpo pela ao de uma fora externa. Para a planta, portanto, o estresse seria um conjunto de respostas a um fator externo que exerce uma influncia desvantajosa. importante ressaltar que o fato de a planta estar ou no sob estresse depende tanto dela quanto do ambiente. O conceito de estresse intimamente ligado ao de tolerncia ao estresse, que seria a adaptao para enfrentar um ambiente desfavorvel. Quando h aumento de tolerncia como consequncia de exposio anterior a uma situao de estresse, ocorre a aclimatao do indivduo. J adaptao se refere a uma resistncia gentica conferida por um processo de seleo ao longo de geraes. Assim como os fatores, os estresses podem ser biticos ou abiticos. O estresse abitico relacionado aos fatores
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2. Diversidade e Evoluo
ambientais como seca, calor, frio, geada, radiao, sombra, altitude, poluio, falta ou excesso de nutrientes. J o bitico est relacionado presena de patgenos e herbvoros.
Luz
A luz indispensvel para a vida das plantas, uma vez que possibilita a fotossntese. Mas os efeitos que a luz causa na planta no se resumem unicamente possibilidade de realizar fotossntese, ela pode prover informaes importantssimas do status do ambiente no qual a planta est inserida. Com base na luz as plantas percebem o horrio do dia, perodo do ano, presena de outras plantas no ambiente e vrias outras coisas. Sendo assim, para uma planta sobreviver, ela deve possuir um sistema muito sensvel de percepo de luz, capaz de diferenciar durao, intensidade e qualidade. Um dos comprimentos de onda melhor percebidos pelas plantas fica na faixa do vermelho visvel, at porque esse comprimento de onda influencia fortemente na fotossntese. Mesmo assim, elas possuem receptores para perceber outros comprimentos de onda, incluindo praticamente todo o espectro visvel e chegando at o ultravioleta. O primeiro fotorreceptor descoberto nas plantas foi o fitocromo. Essa molcula possui uma capacidade muito interessante de mudar de conformao conforme o comprimento de onda da luz que a irradia. Assim, quando irradiado com luz vermelha (em torno dos 660 nm) ele fica na sua forma ativa e ao ser irradiado com vemelho extremo (em torno dos 720 nm), ele se converte novamente na forma inativa. Apesar da nomenclatura, as duas formas do fitocromo so capazes de desencadear respostas. Tambm existem vrios tipos de fitocromo, especficos de certos rgos ou fases do desenvolvimento. Portanto, as respostas das plantas luz vermelha e vermelho extremo podem variar conforme o rgo ou mesmo a idade. Alm do vermelho e do vermelho extremo, os fitocromos tambm possuem alguma absoro de luz na faixa do azul, podendo ser responsveis por parte da absoro de luz dessa cor. Muito menos conhecidos so os receptores que captam a luz azul e o UV-A, conhecidos como criptocromos e fototropinas. Os criptocromos so sensores que se encontram no ncleo das clulas e, portanto, parecem estar intimamente envolvidos com a transcrio de genes. No se sabe ao certo o mecanismo de funcionamento dos criptocromos, mas parece que, ao serem ativados por luz azul, eles so capazes de transferir um eltron para outras molculas, ativando-as tambm. Essa ativao parece ser revertida por luz verde. J as fototropinas, apesar de serem estimuladas tambm no azul e UV-A, parecem no ter a reversibilidade na presena de luz verde. O mecanismo de ao delas, tambm no muito bem compreendido, parece ser atravs de auto fosforilao, desencadeando uma cascata. Os receptores de UV-B ainda no foram identificados, mas se sabe que exposio de plantas luz desse tipo pode desencadear respostas fotomorfognicas. O UV-B tambm estimula a produo e ativao de enzimas de reparo do DNA, apesar de no se saber ao certo se esse efeito seria resultado de uma sinalizao direta ou uma resposta da planta ao dano no DNA causada nesse comprimento de onda.
Temperatura
A temperatura tambm um importante indicativo ambiental de horrio do dia e perodo do ano. Pouco se sabe sobre o sistema de percepo de temperatura nas plantas, uma vez que muitas das respostas temperatura se confundem com seus
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efeitos termodinmicos atrasando ou acelerando reaes qumicas, por exemplo. Mesmo assim, no h dvidas de que as plantas possuam mecanismos complexos de percepo e adaptao do metabolismo temperatura. Pensa-se que a planta poderia sentir mudanas de temperatura diretamente, atravs de, por exemplo, mudanas na fluidez dos componentes celulares, principalmente a membrana. No entanto, j foi proposto um possvel papel dos fitocromos gerando cascatas de sinalizao provocadas por mudanas de temperatura. J h algum tempo, na dcada de 60, foi notado que em algumas plantas, os efeitos da luz vermelha eram similares aos efeitos do frio, enquanto que efeitos causados por vermelho extremo eram parecidos com os de altas temperaturas. Sugeriu-se ento que, no escuro, a interconverso das formas dos fitocromos se daria por variaes de temperatura. Apesar de se conhecer pouco sobre esse assunto, parece que os cinco tipos de fitocromos encontrados em Arabidopsis thaliana (fitocromos A, B, C, D e E) esto envolvidos com a percepo de temperatura em diferentes faixas. Resultados obtidos com mutantes deficientes em cada um dos fitocromos apontam para uma importncia maior do fitocromo E em temperaturas prximas aos 16oC e dos fitocromos B e D na faixa dos 22oC. O fitocromo A parece ser importante em todas as faixas de temperatura. Do fitocromo C nem perguntem. Respostas fisiolgicas desencadeadas por percepo de temperatura incluem germinao, florescimento, tuberizao, senescncia das folhas e vrias outras. A temperatura tambm tem forte influncia sobre a taxa fotossinttica, assim como luz e concentrao de CO2. Nas plantas C3, a assimilao do CO2 em condies saturadas desse gs proporcional ao aumento da temperatura (embora apresente um limite). Acredita-se que essa resposta temperatura se deva ao processo de fotorrespirao. A enzima Rubisco pode catalisar tanto as reaes de carboxilao quanto as de oxigenao da RuBP (ribulose-1,5-bifosfato). Quando a Rubisco catalisa a oxigenao da RuBP, a planta entra no processo de fotorrespirao. Sob temperaturas moderadas (de 20 a 25 C), a Rubisco fixa o CO2 na taxa de 3:1. Nas reaes da RuBP, os sustratos CO2 e O2 so competitivos, tanto que aumentando a concentrao de CO2 possvel inibir a oxigenao e vice-versa. Ambientes com temperaturas elevadas promovem a oxigenao e, portanto, a fotorespirao, por dois principais motivos: 1) a solubilidade do CO2 em meio aquoso diminui mais rapidamente em relao do O2 e por isso a fotorespirao favorecida e 2) os parmetros cinticos mudam e a especificidade da Rubisco diminui com um aumento da temperatura acima dos 35 e 40C. Nas plantas oleaginosas entre elas a soja, girassol, canola, mamona, palma, gergelim e dend, a temperatura regula diretamente o perfil lipdico. O perfil dos lipdios armazenados em sementes de espcies oleaginosas que crescem em temperaturas baixas mostra uma grande quantidade de cidos graxos poliinsaturados (com duplas ligaes na cadeia carbnica) e aquelas que crescem em temperaturas elevadas produzem mais cidos graxos saturados (de cadeia linear). As insaturaes nas cadeias carbnicas dos lipdios aumentam sua fluidez. Por exemplo, a margarina possui lipdios com cadeias mais lineares do que o leo. Temperaturas elevadas (acima de 45C) causam morte na maioria dos tecidos vegetais; porm sementes e gros de plen de algumas espcies chegam a suportar 120C e 70C respectivamente. Um dos riscos das plantas crescerem em altas temperaturas de aumentar a permeabilidade celular tornando-lo mais fluido membrana celular provocando maior perda de ons e outros compostos celulares. Nesses casos, os cidos graxos saturados manteriam a estabilidade da membrana. Exposies breves e peridicas a altas temperaturas que seriam letais podem induzir aclimatao. Plantas adaptadas a baixas temperaturas apresentam baixa resistncia a altas temperaturas. Sob elevada temperatura, a planta
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apresenta fotossntese inibida, interferncias na estabilidade das membranas e alteraes na expresso gnica. Para reduzir os danos causados pelo aquecimento excessivo as plantas apresentam diversas adaptaes: reflexo da radiao atravs de tricomas e cera cuticular, enrolamento foliar e orientao foliar vertical, folhas pequenas altamente divididas para maximizar a perda de calor por conveco e conduo, produo de protenas que protegem a estrutura celular (protenas de choque trmico- HSP's). Baixas temperaturas tambm podem induzir o estresse. Plantas de regies tropicais e subtropicais so mais suscetveis ao dano por resfriamento, pois so adaptadas a temperaturas elevadas. Quando elas sofrem resfriamento, apresentam um crescimento mais lento, podendo surgir descoloraes ou leses nas folhas, a folhagem parece estar encharcada (como se tivesse sido embebida em gua por muito tempo) e murcham (mas apenas se a raiz tambm sofrer resfriamento). Os danos podem ser minimizados se a queda de temperatura for lenta e gradual. Alm desses sintomas visveis a planta pode sofrer outros danos como alterao na propriedade das membranas, inibio da fotossntese, translocao mais lenta de carboidratos, taxas respiratrias mais baixas, inibio da sntese e aumento da degradao de protenas. Pode ocorrer tambm um estresse devido ao congelamento, que ocorre em temperaturas abaixo do ponto de congelamento da gua.
gua
As plantas, como todos os seres vivos, precisam de gua para que o seu metabolismo e desenvolvimento funcionem normalmente. A gua dentro das clulas vegetais participa diretamente em muitos processos. Alm disso, o contedo hdrico de uma clula influencia a estrutura de suas protenas, cidos nuclicos, polissacardeos e outros constituintes. A presena de uma parede celular nas clulas vegetais permite que estas consigam resistir a grandes presses de turgor que resultam da fora exercida pela gua sobre elas. Este tipo de presso necessrio para diferentes processos fisiolgicos, como o transporte de solutos no floema e xilema, assim como para a rigidez e estabilidade mecnica dos tecidos vegetais no lignificados. Para sobreviver no ambiente, as plantas precisam continuamente regular seus teores de gua. Essa regulao se d principalmente por meio de uma comunicao entre as razes e a parte area. Neste processo, a regulao estomtica de vital importncia, j que os estmatos so a principal via de perda de gua por transpirao. Em compensao, essas estruturas tambm constituem o principal local de entrada de CO2. Visto que as plantas precisam de CO2 para realizar a fotossntese, elas devem balancear a perda de gua e a absoro de CO2. A regulao da abertura estomtica depende das concentraes de vapor de gua, CO2 e das variaes da presso de turgescncia das clulas guarda. Quando procuram evitar um estado de seca, as plantas otimizam os seus processos de absoro e reteno de gua, por meio do desenvolvimento das razes permitindo o aumento da rea de captao de gua e rpidas respostas de fechamento estomtico, como uma forma de evitar o estresse. Adicionalmente, existe um aumento no depsito de cera cuticular nas folhas, o que reduz ainda mais a perda de gua. Numa condio de dficit hdrico a planta sofre perda de gua devido a uma maior taxa de transpirao, quando comparada quela de absoro de gua. Em resposta a isso se d o fechamento dos estmatos, mediado principalmente pelo cido abscsico (ABA), um hormnio vegetal. O ABA pode ser produzido em resposta a um declnio de turgor percebido diretamente pelas clulas da folha
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ou ainda recepo de sinais provenientes das razes. Ainda no se sabe ao certo como se d essa integrao entre a percepo mecnica da falta de gua e o ABA, mas aps a percepo do estresse, se iniciar uma cascata de transduo de sinal. Essa cascata de sinais termina com a ativao ou inativao de genes de tolerncia, como a modulao da produo de ABA, a expresso de aquaporinas (protenas de transporte de gua), protenas LEA (Late Embryogenesis Abundant- envolvidas na estabilizao de outras protenas quando o teor de gua na clula reduzido) e de osmoreguladores de efeito protetor. Esses ltimos, muito importantes na resposta de tolerncia seca, so compostos orgnicos capazes de alterar o potencial osmtico da clula vegetal (diminuindo-o), ajudando a manter o turgor e a entrada de gua na clula sem prejudicar as atividades das enzimas presentes no citossol. Cabe salientar que cada vez mais se evidencia que a funo dos osmlitos no puramente osmtica. Dentre as funes de osmoprotetores como a prolina, se destaca o papel na preveno da produo de radicais livres ou no seqestro de espcies reativas de oxignio (ROS, por suas siglas em ingls), que caracterizam um estresse secundrio: o estresse oxidativo. Cabe salientar que o dficit hdrico no somente acontece pela insuficincia de gua no solo. Em ambientes com temperaturas muito baixas, por exemplo, as plantas ficam impossibilitadas de absorver gua devido ao congelamento do solo. Em ambientes com elevada salinidade, os sais dissolvidos na soluo do solo tornam seu potencial osmtico mais negativo, diminuindo, conseqentemente, a disponibilidade da gua para a planta. Os casos anteriormente descritos constituem a conhecida seca fisiolgica, j que desencadeiam respostas muito similares quelas do dficit hdrico tradicional (seca). O outro extremo de um estresse hdrico seria uma condio de alagamento. A principal dificuldade encontrada pelas plantas lidar com os baixos nveis de oxignio. Em resposta, as plantas produzem sinais metablicos de vrios tipos. Nos perodos de alagamento elas alteram sua arquitetura, anatomia, metabolismo e crescimento como estratgia de sobrevivncia. A privao do oxignio interfere na taxa respiratria da raiz induzindo uma respirao anerbica, esta devido alta fermentao leva a uma reduo nos contedos de carboidratos de reserva. Como uma forma de adaptao, muitas espcies que vivem em regies alagadas so capazes de acumular carboidratos em seus tecidos durante o perodo de seca.
Nutrio
As razes so os principais rgos onde acontece a absoro de nutrientes, sendo elas as primeiras em perceber a falta ou excesso de determinado composto. A disponibilidade dos nutrientes para a planta vai depender de vrios fatores, como o pH, umidade, temperatura, areao e mobilidade dos compostos entre as partculas do solo (interaes com argilas e a matria orgnica). Cada nutriente tem principalmente quatro faixas de concentrao com efeitos na planta, sendo que a amplitude delas varia conforme a espcie vegetal. A primeira faixa aquela onde o elemento encontra-se abaixo das necessidades fisiolgicas da planta para sua manuteno e crescimento. Uma segunda na qual a planta consegue se desenvolver sem restries nutricionais, aumentando sua massa seca. Uma vez atingido um mximo de crescimento por concentrao do nutriente, a planta entra na terceira faixa, conhecida como "consumo de luxo", na qual a planta acumula nutrientes quando a disponibilidade deles alta, liberando-os gradualmente em outros momentos, quando a absoro insuficiente para suportar o crescimento. Por fim, quando o nutriente supera a faixa de "consumo de luxo", a
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planta exposta a um estresse por toxidez, ocasionando geralmente a senescncia da planta. Nesses casos, as altas quantidades de solutos nas razes resultam em um potencial osmtico baixo, reduzindo o potencial hdrico do solo. Muitas das respostas acabam sendo similares de um dficit hdrico, como: reduo de rea foliar, crescimento das razes e fechamento dos estmatos. Alm disso, solos com altas quantidades de ons podem causar uma toxicidade inica que ocorre quando concentraes prejudiciais de Na+, Cl- e SO42- acumulam-se nas clulas. O desbalano nas quantidades de Na+ e K+ e concentraes altas de ons totais alteram os processos de ao de enzimas (inativando- as) e reduzem a sntese de protenas, alm de inibir a fotossntese. Porm, em condies naturais, mais comum a falta de minerais do que o excesso deles. Os sistemas de absoro so um dos principais controles da planta para a entrada do elemento. Estes sistemas so classificados em sistemas de baixa afinidade e de alta afinidade. Ambos os tipos de transportadores permitem otimizar a nutrio da planta, atuando de maneira dependente das quantidades de nutrientes disponveis tanto no meio ambiente quanto dentro da planta. Os transportadores de alta afinidade trabalham sob concentraes reduzidas do elemento e envolvem gasto de energia por parte da planta, j que seu transporte se d contra o gradiente de concentrao. Quando as concentraes do elemento aumentam, este tipo de transportadores inibido. Os transportadores de baixa afinidade, por sua vez, funcionam em concentraes altas do nutriente (no txicas) e o transporte a favor do gradiente de concentrao, o que evita gasto de energia. O controle destes sistemas no somente depende das concentraes dos elementos a serem transportados, mas tambm dos sinais internos da planta. Por exemplo: o nitrato, dependendo da sua concentrao, pode sinalizar o crescimento da parte radicular ou area da planta. Sob baixos teores de nitrato demonstrou-se que um dos seus transportadores de alta afinidade, o NRT1.1, expresso. Esse transportador tambm possui a capacidade de transportar auxina em direo raiz, estimulando seu crescimento. Quando a planta encontrar reas com teores mais elevados de nitrato no solo, o NRT1.1 para de funcionar e perde sua capacidade para transportar auxina. Concomitantemente, os transportadores de baixa afinidade so ativados e induz-se a sntese de citocininas, as quais so transportadas em direo ao pice, estimulando o crescimento da parte area.
Fatores biticos
As plantas estabelecem diversas interaes com outros seres vivos. Dentre estes, podem ser citados animais polinizadores, herbvoros, outros vegetais e microorganismos. Neste captulo ser abordada a relao de bactrias e fungos com as plantas. Os primeiros relatos sobre a existncia de microorganismos no patognicos aos vegetais comearam a surgir aps a segunda metade do sculo XIX com a verificao da presena de bactrias em plantas que no apresentavam danos visivelmente aparentes. Ao final do referido sculo foram isolados microorganismos fixadores de nitrognio de ndulos de leguminosas. Por muitos anos a grande maioria dos trabalhos referentes a relaes benficas entre plantas e microorganismos se concentrou nas leguminosas com ndulos desenvolvidos e funcionais. Contudo, passou a se observar que em cultivos contnuos de cana-de-acar no havia o decrscimo de nitrognio no solo que seria esperado e a partir dessas constataes teve incio o estudo sobre a presena de bactrias fixadoras de nitrognio na regio exterior e interior dos tecidos de cana-de-acar (sem haver formao de ndulos). Essas pesquisas foram crescendo a
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partir da dcada de 80 do sculo XX sendo lideradas por Johanna Dbereiner. Nessa mesma poca outros estudos sobre relaes entre plantas e microorganismos ganharam importncia: a pesquisa de presena de potenciais microorganismos promotores de crescimento tambm se estendeu para outras espcies vegetais. Apesar disso, a grande maioria desses trabalhos continua sendo sempre voltada para a agricultura. Apenas alguns microorganismos dentro dos procariotos sintetizam a enzima nitrogenase e reduzem o N2 atmosfrico a NH4+. Essas bactrias fixadoras de nitrognio atmosfrico tambm so denominadas por diazotrficas. Alm de disponibilizar nitrognio para as plantas, as bactrias podem: produzir e liberar aminocidos e fitormnios; ser potenciais agentes de biocontrole; aumentar a resistncia a estresses hdricos e osmticos e ainda proporcionar aos vegetais outros benefcios. No so apenas os microorganismos diazotrficos que podem agir como promotores de crescimento da planta. Outras bactrias e tambm fungos podem beneficiar os vegetais. Na regio do solo em que h influncia das razes (rizosfera), o nmero de microorganismos encontrados de 10 a 100 vezes maior em relao s outras reas do solo. Os microorganismos so atrados pelos exudatos das razes, secrees e deposio de material vegetal, podendo interagir com a planta, colonizando-a. No entanto, nem todos os microorganismos conseguem se estabelecer no interior ou mesmo exterior das plantas. Para esse estabelecimento, h uma intensa troca de sinais qumicos entre plantas e microorganismos. Aqueles que colonizam o interior do vegetal penetram nos tecidos atravs das reas de emergncia de razes, feridas, lenticelas e estmatos ou ainda por penetrao ativa na epiderme da raiz com secreo de enzimas hidrolticas. Com relao aos fungos, alm do interesse por pesquisas com espcies que se estabelecem no interior do vegetal e podem trazer benefcios como a reduo de ataques de insetos s plantas, uma relao muito estudada a simbiose de micorrizas arbusculares. Essas ltimas representam o tipo mais comum de micorrizas. Elas so formadas entre uma ampla variedade de espcies vegetais com fungos pertencentes diviso Glomeromycota. Esses fungos precisam necessariamente se associar a uma raiz vegetal para completar o seu ciclo de vida. Os fungos disponibilizam para as plantas nutrientes como o potssio (que pode ter baixa mobilidade no solo) e o vegetal fornece carbono por meio de acares transferidos para o fungo que posteriormente vo utilizar esse elemento para a constituio do miclio (conjunto de hifas), aumentando assim a possibilidade de explorao do substrato. Em geral, essas associaes apresentam pouca especificidade entre as espcies e ocorrem com grande freqncia. Em solos pobres em nutrientes, as micorrizas arbusculares so uma relao mutualstica, porm, em solos muito ricos, pode se estabelecer um parasitismo. Ao se analisar, em geral, as relaes de microorganismos e plantas, deve-se considerar que um microorganismo promotor de crescimento em uma espcie vegetal pode no promover benefcios em outra. Inclusive, um determinado microorganismo pode estabelecer diferentes graus de relao com uma planta dependendo da fase de desenvolvimento e condies a que o vegetal se encontra. Sendo assim, diferentes relaes podem ser estabelecidas, com a possibilidade de os microorganismos serem neutros, benficos ou patognicos para as plantas. Tendo em vista o grande nmero de pequenos organismos no entorno de uma planta h necessidade da presena de mecanismos de defesa para a sobrevivncia do vegetal. O prprio tecido da epiderme da planta uma barreira fsica a entrada de
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microorganismos. Essa barreira mais ou menos eficiente dependendo de fatores como a quantidade e qualidade de cera e cutcula, da grossura e dureza da parede exterior da epiderme. Contudo, como citado anteriormente, existem aberturas que servem como porta de entrada para os microorganismos. Na parte area, em presena de bactrias, h evidncias de fechamento dos estmatos para evitar a sua entrada. Porm muitos patgenos desenvolveram fatores de virulncia que causam a reabertura estomtica. Alm das barreiras fsicas, as plantas desenvolveram mecanismos de defesa bioqumicos que produzem compostos txicos ao patgeno ou impedem o seu desenvolvimento no interior do vegetal. Apesar dos exudatos dos vegetais atrarem muitos microorganismos, neles tambm esto presentes substncias que tem ao antimicrobiana. Alm de liberar ao ambiente esses compostos, certas plantas contm em suas clulas compostos que podem inibir o crescimento de possveis patgenos (taninos, vrios compostos fenlicos e alguns cidos graxos so exemplos). H tambm defesas que so induzidas aps a planta reconhecer molculas especficas do patgeno: uma srie de reaes bioqumicas e mudanas estruturais ocorrem nas clulas das plantas para combater o agente causador de danos. Existem sinais que so transmitidos intracelularmente (ex: protenas cinase, ons clcio, perxido de hidrognio, etileno, etc.) e tambm sistemicamente (ex: cido saliclico, cido jasmnico, etileno, etc.). Assim a planta pode adquirir resistncia sistmica. Existem respostas de defesa que abrangem estruturas citoplasmticas, outras que envolvem a parede celular, outras esto relacionadas com produo de camadas de separao entre tecido infectado e sadio ou mesmo o desenvolvimento de uma zona de absciso para as clulas injuriadas. Tambm pode haver produo de goma ao redor das clulas infectadas e desenvolvimento de protuberncias nos vasos xilemticos para prejudicar o deslocamento do patgeno. Por fim, a prpria planta pode causar a morte das clulas assim que ocorre a invaso, para evitar que a infeco se espalhe (resposta de hipersensibilidade). Nesse ltimo caso, uma rea relativamente extensa de necrose impossibilita a nutrio do patgeno e ainda h uma concentrao de compostos txicos ao invasor. Concluindo, o meio ambiente em que a planta se encontra repleto de organismos diversos que podem interagir com as plantas por meio de trocas de sinais qumicos. Os vegetais, por sua vez, desenvolveram estratgias de defesa que podem variar de acordo com o tipo de patgeno e planta. muito interessante o estudo dos mecanismos pelos quais uma planta permite a colonizao em seu exterior ou mesmo interior por microorganismos que so promotores de crescimento enquanto ela combate os microorganismos patognicos. Com relao aos promotores de crescimento, a ampla gama de possveis benefcios proporcionados planta ainda est sendo bastante pesquisada. Para o tema de interao plantas e microorganismos, no geral, ainda h muitas questes a serem elucidadas. Pesquisas nessa rea podem trazer importantes avanos na agricultura e na compreenso do desenvolvimento vegetal nos mais variados ambientes.
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Interao Planta-Planta
Alice Nagai Bruna Silvestroni Pimentel
Alelopatia
O termo alelopatia uma palavra de origem grega que significa allelon = de um para outro, pathos = sofrer. Pode ser definido como o efeito que uma planta causa em outra pela liberao de biomolculas no ambiente, especialmente os metablitos secundrios. Esse efeito pode ser estimulatrio ou inibitrio. Se os compostos liberados no ambiente influenciam negativamente o crescimento e desenvolvimento de outras plantas, no h a competio por gua, luz e nutrientes. Em contrapartida, uma planta atacada por herbvoros ou patgenos pode liberar compostos que sero utilizados como sinais para que outras plantas ao redor possam sintetizar metablitos de defesa. O efeito aleloptico depende do composto envolvido, da sua concentrao e estabilidade, alm da tolerncia da planta. Diversas so as classes de substncias consideradas como alelopticas. Nesse captulo, sero abordadas apenas algumas delas. cidos fenlicos Os cidos fenlicos so biossintetizados a partir da via do chiquimato. Nessa via, so produzidos aminocidos aromticos, como a fenilalanina e a tirosina. A partir da fenilalanina, produzido o cido cinmico que d origem ao cido -cumrico, enquanto que este sintetizado diretamente a partir da tirosina. O cido -cumrico precursor de diversos outros cidos fenlicos. Os cidos fenlicos e seus derivados podem ser encontrados em praticamente todos os solos terrestres. Dessa maneira, sua simples presena nesses ambientes no pode ser indicativa de que estejam agindo como alelopticos. Deve ser levado em conta seu estado qumico, concentrao e os organismos envolvidos para avaliar se h efeito inibitrio, estimulatrio ou at mesmo nenhum efeito. Devem ser obedecidos trs fatores para que os cidos fenlicos sejam considerados como alelopticos: 1. Estar na forma ativa, ou seja, livres e protonados. 2. Envolvimento em interaes qumicas mediadas por plantas, microorganismos ou planta/microorganismos. 3. Estar em concentrao suficiente para que seja possvel a modificao do comportamento, seja positiva ou negativamente, de plantas ou microorganismos. O efeito primrio causado por essas substncias a reduo da condutividade eltrica da gua e da absoro de nutrientes pelas razes. Secundariamente, h a reduo de fotossntese e da alocao de recursos para as razes, aumento nos nveis de cido abscsico e diminuio nas taxas de transpirao e na expanso da rea foliar. Alguns estudos demonstraram a ao aleloptica de cidos fenlicos em laboratrio, como por exemplo, a ao do cido -cumrico (Figura 1) obtido de extratos de Buchloe
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dactyloides Nutt (Engelm.) no crescimento de razes de Poa annua L. Entretanto, essa questo discutida entre os pesquisadores, uma vez que no campo essas substncias so utilizadas e transformadas pelos microorganismos do solo, alm de sofrerem processos como a ionizao, a oxidao e a soro em partculas do solo. Dessa forma, a ao aleloptica dessas substncias provavelmente no desempenhada por apenas uma, mas por uma srie de substncias.
COOH HO
Figura 1. Representao do cido -cumrico - um cido fenlico com efeitos alelopticos.
GLV (Green leaf volatiles) Os GLVs so molculas muito volteis, cuja importncia a sinalizao entre as plantas, alm de permitir o reconhecimento ou a competio entre elas e entre outros organismos que as cercam. Os GLVs so aldedos e alcoois com seis tomos de carbono (C6) e seus steres (Figura 2). So biossintetizados a partir do cido linolnico (C18:3) e linoleico (C18:2), que so cidos graxos de cadeia longa que sofrem ao de enzimas cido graxo hidroperoxido liase. A partir do cido linoleico, por exemplo, forma-se o n-hexanal que sofre ao de lcool desidrogenases, obtendo-se n-hexanol. Em tecidos intactos e sadios, a concentrao dessas substncias baixa, ocorrendo grande aumento caso o tecido seja lesionado. Entretanto, pode haver o aumento da concentrao dessas molculas em tecidos sadios. Por exemplo, se folhas localizadas na parte inferior da planta forem atacadas, folhas da parte superior da planta podem produzir os GLVs como forma de defesa. Isso ocorre, pois quando h ruptura de tecido a enzima que degrada os galactolipdeos posta em contato com esse substrato, proporcionando o aumento de cidos graxos livres que sero convertidos nos GLVs.
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Figura 2. Molculas de aldedos, alcoois e ster de 6 tomos de carbono, esquematizando os GLVs.
Os GLVs podem agir em microorganismos, insetos e em plantas, sendo esses ltimos organismos o foco desse captulo. Quando as plantas so expostas a essas molculas, h o disparo de diversas respostas de defesa. Uma delas a produo de fitoalexinas, que so substncias produzidas aps o ataque de um patgeno. Alm disso, se uma planta atacada por um herbvoro ou patgeno, ela libera os GLVs que so captados por plantas vizinhas, podendo acontecer dois tipos de resposta: 1. A planta adsorve as molculas sinalizadoras e subsequentemente as libera, atraindo predadores dos herbvoros, caracterizando um processo passivo ou; 2. A planta aumenta a taxa de emisso de volteis assim que infestada pelos mesmos herbvoros que atacaram as vizinhas, o que caracteriza um processo ativo. Para observao do efeito dos GLVs, foi feito um experimento no qual plantas de Phaseolus lunatus L. eram expostas a folhas que produziam volteis induzidos por herbvoros e a folhas que no foram infestadas por herbvoros (caros - Tetranychus urticae). Foi observado que as plantas expostas a folhas produtoras de volteis induzidos por herbvoros, produziram maior quantidade de outros volteis, como o ( E)--ocimeno, comparado a plantas expostas a folhas no infestadas e que no liberaram os volteis. Derivados do cido cinmico Dentre os derivados do cido cinmico, pode-se destacar os flavonoides (Figura 3) que so substncias biossintetizadas a partir de duas vias metablicas. Uma delas a via do cido chiqumico, da qual proveniente o anel B e os trs carbonos centrais; e a outra a via do cido malnico, de onde se origina o anel A.
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O
A C
O Figura 3. Representao do esqueleto bsico de alguns grupos de flavonoides. Alguns flavonoides possuem ao aleloptica por serem potentes inibidores do metabolismo energtico, bloqueando as funes das mitocndrias e cloroplastos. Eles so os segundos inibidores da captao de oxignio nas mitocndrias, perdendo apenas para as quinonas. A inibio da captao do oxignio ocorre, pois os flavonoides causam interferncias na organizao das membranas internas das mitocndrias, bloqueando o transporte de eltrons. Alm disso, eles tambm inibem a hidrlise de ATP catalisada pela Mg 2+ ATPase mitocondrial. Nos cloroplastos, h inibio da fotofosforilao. Foi constatado que flavonas de Carex distachya inibiram a germinao das plantas Dactylis hispanica, Petrorhagia. velutina e Phleum subulatum e algumas delas como o glicosdeo de apigenina apresentaram reduo do crescimento das espcies citadas. Terpenides Os terpenides so amplamente utilizados em fragrncias h mais de dois mil anos. Todos os terpenides possuem unidades repetidas de cinco carbonos chamadas isoprenos (Figura 4), que so provenientes da Via do Acetato Mevalonato e/ou da Via do Metileritritol Fosfato e so divididos em grupos de acordo com a quantidade de isoprenos/nmero de carbonos presentes em suas estruturas. Grande parte das substncias alelopticas Figura 4fitotxicas so derivadas das vias dos terpenoides e apenas uma pequena Representao da molcula de isopreno. parte dessas substncias possuem o modo de ao conhecido. No presente captulo citaremos apenas trs classes de terpenoides: monoterpenos, sesquiterpenos e diterpenos. 1.4.1. Monoterpenos Os monoterpenos so terpenoides que apresentam dez tomos de carbono em sua estrutura, ou seja, duas unidades de isopreno. Diversos monoterpenos so considerados fitotxicos e foram propostos como estruturas iniciais em potencial para herbicidas. No entanto, os nicos monoterpenos com estudos significantes so os cineis. Estudos demonstram que concentraes relativamente altas de 1,8-cineol inibem a respirao mitocondrial de organelas isoladas. Os leos volteis de Salvia leucophylla Greene e Artemisia californica Less. geram um efeito inibitrio intenso, impedindo o crescimento de outras plantas num raio de 1 a 2 metros, gerando zonas de solo nu em torno de arbustos. Estudos apontam os monotrepenos 1,8-cineol e cnfora ( S. leucophylla) e -tujona e isotujona (A. californica), entre outros, como as substncias responsveis por esse efeito inibitrio (Figura 5).
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Figura 5. Representao da a.isotujona, b.-tujona, c. 1,8 cineol e d.cnfora. 1.4.2. Sesquiterpenos Sesquiterpenos so terpenoides que apresentam quinze tomos de carbono em sua estrutura, ou seja, trs unidades de isopreno. Diversos trabalhos tm sido publicados com atividades fitotxicas dos sesquiterpenos, no entanto, h pouca literatura referente aos stios moleculares especficos dessas substncias. Artemisina (Figura 6) um sesquiterpeno altamente txico encontrado apenas nos tricomas glandulares de Artemisia annua L. e foi primeiramente testado como fitotoxina devido sua alta atividade contra Plasmodium spp, parasitas da malria. Outro teste realizado com a artemisina foi com razes de cebola e notou-se que esse composto inibia todas as fases da mitose.
H O O O H O O
Figura 6-Representao da molcula da artemisina
1.4.3. Diterpenos Diterpenos so terpenoides que apresentam vinte tomos de carbono em sua estrutura, ou seja, quatro unidades de isopreno. Existem poucos diterpenos relatados como fitotoxinas produzidos por plantas e muitos j descritos produzidos por fungos. Os diterpenos possuem efeito sobre a germinao e crescimento das plantas, mas no se sabe sobre seus modos de ao. Os mais estudados so as podolactonas (Figura 7) que inibem o crescimento e outros processos fisiolgicos, como por exemplo inibio da sntese de clorofila e do crescimento induzido por hormnios. Alguns desses compostos foram sugeridos como modelos de herbicidas devido a sua alta fitotoxicidade comparado aos herbicidas comerciais. O O O
HO H3C O
OH O
Figura 7 - Representao da nagilactona C, uma podolactona.
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Aplicaes da Alelopatia
Os herbicidas sintticos utilizados atualmente, alm de ser impactantes para o ambiente, esto ficando cada vez mais ineficientes. Em contrapartida, os compostos alelopticos agem de forma sistmica e so mais facilmente biodegradveis. Dessa maneira, a utilizao desses ltimos como forma alternativa de controle de plantas daninhas, por exemplo, contribuiria para a realizao de agricultura sustentvel. Outro ponto a ser enfatizado o conhecimento de plantas que liberam substncias alelopticas em locais de produo em que praticada a rotao de cultivos para que a cultura anterior no interfira de modo negativo na produo da prxima. Exemplos da ocorrncia disso so os restos de produo do trigo que retardaram o crescimento do algodo ou do arroz; e os restos da planta da soja que inibiram o desenvolvimento das razes do milho.
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Plantas Parasitas
Plantas Parasitas
Luza Teixeira Vitor Baro
Plantas parasitas sempre despertaram a curiosidade de observadores, sendo conhecidas e descritas pela humanidade h muito tempo. Entretanto, ainda hoje muitas observaes erradas so feitas a respeito dessas plantas. As confuses mais comuns envolvem epfitas em geral e lianas, alm de plantas saprfitas e at mesmo as plantas carnvoras. A Tabela 1 lista as principais diferenas entre esses diferentes tipos de plantas. Tabela 1. Comparao entre plantas frequentemente confundidas com parasitas
Grupo de plantas Exemplos Dependncia nutricional em relao outra planta Localizao das razes Fora do solo (sobre outra planta, rochas, etc.) Solo Fonte de energia
Orqudeas Epfitas Bromlias Lquens Lianas Cips No No
Auttrofa
Auttrofa Auttrofa (digerem pequenos invertebrados para obter nutrientes) Saproftica (alimentam-se de matria orgnica em decomposio) Auttrofa ou Hetertrofa
Carnvoras
Copo de macaco Drsera
No
Solo
Saprfitas
Planta fantasma Erva-depassarinho Cip-chumbo Sndalo
No
Em contato com alimento
Parasitas
Total, parcial ou facultativo
Em contato com tecidos da planta hospedeira
Tendo em vista esse tipo de confuso, Job Kuijt, em seu livro The Biology of Parasitic Flowering Plants (1969), define as plantas parasitas como aquelas que apresentam rgo denominado haustrio, responsvel pela conexo entre a parasita e sua hospedeira. O primeiro registro de uso deste termo atribudo a de Candolle, em 1813, para descrever a ponte anatmica entre uma parasita (Cuscuta sp.) e sua hospedeira. Embora essa seja a definio mais amplamente aceita na literatura, importante mencionar que o termo haustrio tambm empregado para diversas outras estruturas como, por exemplo, o tubo polnico (haustorial) presente em Ginkophyta. No caso da comunicao parasita-hospedeira, esse rgo atua, ento, como uma ponte fisiolgica entre as referidas plantas, permitindo a passagem de gua, nutrientes, hormnios, etc.
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Classificao
A primeira classificao das plantas parasitas foi proposta por Pfeiffer (1789), que as dividiu em trs grupos, utilizando caractersticas relacionadas ao hbito da parasita e morfologia da hospedeira. Atualmente, embora no haja uma classificao formal para essas plantas, costuma-se dividi-las de acordo com trs principais critrios, resumidos na Tabela 2. Tabela 2. Resumo das principais classificaes de plantas parasitas Critrio de classificao rgo parasitado na hospedeira Grau de dependncia em relao hospedeira Status fotossinttico Classes Caule Raiz Facultativo Obrigatrio Hemiparasitas Holoparasitas Exemplos Psittacanthus spp. Rafflesia spp. Triphysaria spp. Striga spp Viscum spp. Orobanche spp.
Quanto a esse ltimo critrio apresentado, importante notar que no se trata apenas de presena/ausncia de clorofila ou de atividade fotossinttica. Um dos mais conhecidos gneros de holoparasitas, o gnero Cuscuta, apresenta espcies nas quais j foi observada presena de clorofila funcional em plastdeos. Entretanto, embora seja capaz de produzir fotoasssimilados, tal produo ocorre em quantidade insuficiente para sua sobrevivncia. Por fim, outros tipos menos comuns de classificao para plantas parasitas podem envolver, como j mencionado, o hbito e tambm o grau especificidade do parasitismo. Em relao ao primeiro critrio, diversos hbitos so observados, desde ervas (ex. Rhinanthus spp.) e trepadeiras (ex. Cassytha spp.) at arbustos (ex. Olax spp.) e rvores (Santalum spp.). Quanto ao grau de especificidade, certas parasitas so conhecidas por sua ampla gama de hospedeiras, como Dendrophthoe falcata, com 343 hospedeiras listadas; enquanto outras so notveis por sua especificidade de hospedeiros, como Psittacanthus sonorae, observada apenas sobre Bursera sp. E Elaphrium sp. (ambas da famlia Burseraceae).
Diversidade e Evoluo
Independentemente da classificao adotada, notvel a grande diversidade apresentada pelas plantas parasitas, que podem ser encontradas em praticamente todos os locais do globo. Dentro do reino Vegetal, acredita-se atualmente que o hbito parasitrio tenha evoludo independentemente 12 vezes, sugerindo que diversas linhagens ancestrais tenham apresentado certa flexibilidade de desenvolvimento, possibilitando o surgimento
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Plantas Parasitas
desse modo de vida. Baseando-se na classificao proposta no APG III, as plantas parasitas esto distribudas em 20 famlias, com um total de aproximadamente 270 gneros, sendo 1% de todas as espcies de Angiospermas atualmente conhecidas. Dentre essas famlias, as principais com ocorrncia no Brasil so Loranthaceae, Viscaceae, e Apodanthaceae.
Relaes ecolgicas
Plantas parasitas apresentam reconhecida importncia em comunidades naturais, podendo atuar como espcies-chave em diversos nveis de interaes especficas e de dinmicas populacionais. Um dos efeitos mais notados refere-se promoo de ciclos de extino e reaparecimento local de espcies, o que pode favorecer o aparecimento, crescimento ou a disseminao de outra espcie na comunidade. Outro efeito, que vem sendo apontado em trabalhos recentes, aborda o papel das parasitas na ciclagem de nutrientes da comunidade. Durante seu ciclo de vida, uma planta parasita utiliza-se dos recursos captados pela hospedeira, sejam eles recursos minerais ou fotoassimilados. Quando ocorre queda das folhas da parasita, parte desses nutrientes ento transferida para o solo por sua decomposio, tornando-se disponvel para plantas do extrato herbceo. Quanto s relaes que apresentam com a fauna, muitas espcies de plantas parasitas constituem uma importante fonte de recursos, fornecendo alimento para animais desde insetos at pequenos mamferos, que podem consumir suas folhas (ricas em nitrognio), flores e frutos, atuando, em alguns casos, como polinizadores e dispersores. No caso particular do consumo de frutos, as amplamente conhecidas ervas-depassarinho, produzem frutos consumidos em larga escala por pequenos pssaros que, ao defecarem ou limparem o bico, depositam as sementes da parasita sobre os galhos de uma potencial hospedeira. As sementes, que desde o interior do fruto encontram-se envoltas em uma substncia mucilaginosa (viscina), ao serem depositadas nos galhos ficam firmemente aderidas, permitindo o desenvolvimento inicial da parasita. Curiosamente, alguns estudos atuais envolvendo a avifauna dispersora das ervas-depassarinho tm apontado um possvel efeito mutualstico na relao parasita-hospedeira. Nestes casos, em que parasita e hospedeira apresentam disperso de frutos realizada pela mesma espcie, a parasita pode atuar aumentando o fitness reprodutivo de sua hospedeira, atraindo um maior nmero de dispersores. Outro tipo interessante interaes de espcies envolvem duas plantas parasitas, que podem ser da mesma famlia e, at mesmo, do mesmo gnero. So os casos de hiperparasitismo (ou epiparasitismo), que geralmente envolvem espcies bastante especficas (baixa gama de hospedeiras), que utilizam outra parasita como sua hospedeira. Os exemplos concentram-se em membros da famlia Santalaceae, como Viscum loranthi (sobre espcies de Loranthaceae), Dendrophtora epiviscum (sobre outras espcies do mesmo gnero) e Phoradendron falcatum (sobre outras espcies do mesmo gnero). Por fim, h ainda casos no raros de autoparasitimo, que pode se originar do brotamento de um novo indivduo sobre os ramos da planta me, como observado em Viscum monoicum, ou se originar da simples conexo entre ramos do mesmo indivduo, como em observado Cuscuta reflexa e Struthanthus flexicaulis.
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Anatomia
Algumas holoparasitas passam a maior parte de seu ciclo de vida restritas ao interior do corpo de suas hospedeiras, sendo observadas facilmente apenas durante seu perodo reprodutivo, quando suas flores e frutos emergem atravs do caule ou da raiz da planta hospedeira. Endoparasitas, como so chamadas essas plantas, so constitudas basicamente por esse conjunto de tecidos localizados no interior do corpo da hospedeira, ao qual se d o nome de endfito. A estrutura geral do endfito costuma ser bastante simples, composta apenas por massas de clulas parenquimticas instaladas no interior dos tecidos das hospedeiras. At hoje relativamente pouco se conhece sobre as relaes entre o endfito e os tecidos da hospedeira, devido principalmente dificuldade de identificar anatomicamente quais clulas constituem tecidos da hospedeira e quais constituem tecidos da parasita. Algumas plantas ectoparasitas parasitas cujos tecidos encontram-se no exterior do corpo da hospedeira tambm podem apresentar endfitos, como , por exemplo, o caso de certas espcies do gnero Phoradendron (Viscaceae). Essas espcies apresentam tecidos que crescem entre o xilema e o floema da hospedeira, formando cordes de tecido da parasita que se podem se estender atravs do corpo da hospedeira e levar emerso de novas partes areas em pontos diferentes dos galhos. Como mencionado anteriormente, a conexo entre uma planta e sua hospedeira o que define o parasitismo. Essa ligao se d atravs de haustrios, que so estruturas especializadas na obteno de gua, minerais e, no caso das holoparasitas, fotossintetatos. Embora anlogos s razes, os haustrios nem sempre so homlogos a ela, resultando da diferenciao de rgos variados. Os haustrios so formados por clulas vasculares envolvidas em tecido parenquimtico, muitas vezes havendo tambm clulas secretoras associadas, responsveis pela produo de enzimas digestivas para a dissoluo das paredes celulares e penetrao no sistema vascular da hospedeira. As clulas diretamente envolvidas com a absoro de gua, sais e aucares so chamadas sinker cells e se conectam ao xilema apenas, no caso das hemiparasitas, ou ao floema e ao xilema, no caso das holoparasitas. Acredita-se que a passagem de seiva ocorra apenas por gradiente de potencial hdrico, sendo o potencial das parasitas mais negativo do que das hospedeiras. No entanto ainda h muitas dvidas e estudos sendo conduzidos sobre este assunto. O primeiro haustrio a se estabelecer, durante a instalao da plntula, chamado haustrio primrio e os demais, formados durante o desenvolvimento da planta, haustrios secundrios. Em algumas espcies ocorre formao apenas do haustrio primrio, enquanto outras apresentam vrias conexes, como por exemplo, Struthanthus vulgaris, que possui razes epicorticais: razes que crescem sobre os galhos da hospedeira, de onde se diferenciam muitos haustrios. Em algumas hospedeiras, a penetrao dos haustrios provoca a formao de galhas, que so definidas como um tecido quimrico formado na regio de infestao cujo crescimento provocado normalmente pela proliferao de tecido parenquimtico de ambas as plantas (parasita e hospedeira).
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Plantas Parasitas
As plantas parasitas consomem recursos das hospedeiras de diversas formas, o que pode significar prejuzos variados. Ervas de passarinho transpiram em geral mais do que suas hospedeiras, levando competio por gua. Por causa dessa demanda por gua, o sistema hidrulico submetido a condies mais extremas e, em alguns casos, pode sofrer alteraes anatmicas para que o sistema vascular continue funcional. Podem ocorrer tambm mudanas na densidade de vasos, no dimetro dos elementos condutores e no comprimento das fibras.
Impactos Econmicos e Controle

Embora as plantas parasitas apresentem importantes papis em comunidades naturais, como j mencionado, necessrio lembrar os impactos negativos que essas plantas podem causar agricultura e economia. Dados de diversos anos apontam perdas massivas de produo agrcola em pases dos Estados Unidos e da frica, podendo chegar a cerca de 90% de perda, causada principalmente por espcies dos gneros Orobanche, Phelipanche e Striga. Outros efeitos deletrios frequentemente mencionados incluem impactos causados ao crescimento e arquitetura hidrulica das hospedeiras. Tendo em vista as perdas mencionadas, diversas metodologias de controle e de erradicao de plantas parasitas vm sendo propostas e testadas, sendo que as mais simples incluem a poda seletiva de ramos parasitados e a remoo individual da parasita. Entretanto, tais metodologias apresentam baixa eficcia devido relao parasita-hospedeira, especialmente no que diz respeito aos fatores metablicos. Metodologias mais elaboradas procuram focar-se em caractersticas individuais da espcie parasita e, em alguns casos, da hospedeira, uma vez que a relao entre essas plantas pode variar amplamente entre um caso e outro. Dentre essas metodologias possvel mencionar o controle biolgico, utilizando fungos, bactrias e alguns artrpodes. Ainda dentro dessa temtica, pesquisas atuais, especialmente em Agricultura, tm se focado na elaborao de tcnicas de manejo baseadas no ciclo de vida das parasitas, utilizando-se de substncias qumicas sintetizadas a partir de hormnios vegetais. Uma melhor compreenso dos processos envolvidos nos estgios desde a germinao at o estabelecimento da parasita possibilita saber o melhor momento para que se empreguem tcnicas de controle.
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A origem do cloroplasto e a evoluo dos eucariontes fotossintetizantes

Cntia Iha Registros fsseis indicam que j havia vida na Terra h cerca de 3 bilhes de anos. Nessa poca, a nica forma de vida eram clulas procariticas, que viviam em um ambiente pobre em oxignio e rico em gs carbnico e outros gases. As primeiras evidncias concretas do aparecimento de organismos fotossintetizantes datam de 2,8 a 2,5 bilhes de anos atrs. As evidncias fsseis, geoqumicas e moleculares indicam que esses organismos eram semelhantes s cianobactrias atuais. Esses dados mostram que a origem das cianobactrias e da fotossntese oxignica foram concomitantes na histria da vida na Terra. As cianobactrias e a fotossntese oxignica permitiram grande modificao do ambiente. A reao da fotossntese absorve o gs carbnico atmosfrico e libera oxignio (Figura 1). Com o passar dos milhes de anos, o oxignio foi se acumulando e culminou na primeira grande poluio atmosfrica. A maioria dos organismos procariontes que existiam possuam um metabolismo redutivo anaerbio pouco eficiente e morreram por causa da oxidao, resultante do acmulo de oxignio. Essa oxidao do ambiente permitiu dois eventos muito importantes: o primeiro foi o aparecimento de um metabolismo muito mais eficiente a respirao aerbia (Figura 1); o segundo foi o consequente surgimento dos organismos eucariontes.
Fotossntese
6H2O + 6CO2
C6H12O6 + 6O2
Respirao
Figura 1. Fotossntese e respirao. Os reagentes da fotossntese so os produtos da respirao e vice-versa.
Os primeiros eucariontes apareceram h cerca de 1,5 bilhes de anos. O fato impressionante que a diversificao dos eucariontes ocorreu de forma bastante rpida, em comparao ao tempo entre do surgimento da vida at o aparecimento do primeiro eucarionte. Do aparecimento da vida at o surgimento da primeira clula eucaritica se passaram 2 a 1,5 bilhes de anos; do aparecimento do eucariotos at os dias de hoje, cerca de 1,5 bilhes de anos. A diversidade atual e j extinta de eucariontes enorme. Provavelmente esse bloom evolucionrio de eucariontes s foi possvel em decorrncia de um terceiro evento ocasionado pela oxidao da atmosfera: o surgimento da camada de oznio, que protegeu a vida contra os raios UV, que danificam a estrutura do DNA. O nosso planeta est repleto de vida fotossintetizante, sendo que os nicos
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procariontes fotossintetizantes conhecidos so as cianobactrias. Todas as outras formas de vida que fazem fotossntese so eucariontes. O surgimento do eucarionte fotossintetizante ocorreu graas a uma cianobactria que viveu simbioticamente dentro de uma clula eucarionte, at ento no fotossintetizante. Esse evento chamado de endossimbiose. O advento da endossimbiose deu capacidade s clulas eucariticas de captar luz e fixar carbono, gerando seu prprio alimento, o que foi vantajoso para elas. A cianobactria tambm se beneficiou, pois recebeu abrigo e proteo da clula eucaritica. Ocorreu ento uma coevoluo entre a clula hospedeira e a cianobactria intracelular, que evoluiu para organelas, hoje conhecidas como cloroplastos. Essa coevoluo permitiu a origem e o desenvolvimento das plantas e algas atuais. A ideia bsica sobre a origem dos cloroplastos parece muito simples: a endossimbiose de uma cianobactria dentro de uma clula eucaritica, em que ambas se beneficiam e podem coevoluir. Porm, a realidade muito mais complicada. Existem eucariontes fotossintetizantes de vrios tamanhos, desde as plantas terrestres e grandes macroalgas at unicelulares, como as microalgas. Alm disso, esses organismos podem ser ssseis ou mveis e ocupam todos os ambientes: terrestre, aqutico, do o equador aos polos. A diversidade de eucariontes fotossintetizantes enorme e muitos desses organismos no evoluram juntos. Esse captulo vai mostrar um panorama geral da origem do cloroplasto e como esse evento permitiu a diversidade de organismos eucariontes fotossintetizantes. As algas e sua diversidade Para tratar da evoluo do cloroplasto e dos organismos eucariontes fotossintetizantes necessrio ter uma viso geral da diversidade desses organismos. Tradicionalmente, as algas so todas as formas de vida fotossintetizante com clorofila a que no so as plantas terrestres. Essa viso era suficientemente ampla para incluir organismos to distintos como procariontes (as cianobactrias) e eucariontes. Dos eucariontes so considerados algas tanto organismos prximos s plantas terrestres como protozorios prximos a organismos no fotossintetizantes. De modo geral, as algas esto supostamente unificadas com base na fotossntese oxignica, apesar de essa habilidade no retratar uma evoluo originada de um mesmo ancestral comum. Todas as formas de vidas existentes hoje esto divididas em trs domnios: Bacteria e Archaea (procariontes) e Eukarya (todos os organismos eucariontes). A fotossntese oxignica est presente nos domnios Bacteria (apenas nas cianobactrias) e Eukarya, espalhada em diversos grupos. consensual que a origem dos eucariotos nica, ou seja, ocorreu apenas uma vez, porm existem vrias evidncias mostrando que os organismos eucariontes fotossintetizantes surgiram diversas vezes. Para entender essa diversidade dos eucariontes fotossintetizantes ser passado brevemente quem so esses organismos. Atualmente so reconhecidos cinco grandes grupos em Eukarya: Unicontes (dividido em Opistocontes e Amoebozoa), Archaeplastida, Rhizaria, Chromoalveolados (divididos principalmente em Alveolados e Estramenpilas) e Excavados (dividido em Excavados e Discicristados). Apenas um deles no possui representantes fotossintetizantes: os Unikontes (Figura 2). A primeira vez que ocorreu a endossimbiose foi com ancestral comum do grupo Archaeplastida (archae = antigo; plastida = cloroplasto). Esse evento ocorreu apenas uma vez e chamado de endossimbiose primria. Todas as espcies desse grupo so
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fotossintetizantes e existem fortes indcios de ser um grupo monofiltico. Existem trs grandes linhagens distintas: Rhodophyta, que so as algas vermelhas; Chloroplastida, que inclui as algas verdes e as plantas terrestres; e Glaucophyta. O grupo Rhizaria possui organismos que so majoritariamente ameboides e fazem parte, principalmente, do plncton do mar. Porm existem tambm organismos de gua doce e terrestres. Fazem parte desse grupo: Radiolaria, Foraminifera, Plasmodiophora, Heliozoa e Cercozoa. Apenas em Cercozoa existem organismos fotossintetizantes, as cloraraquinifitas (Chlorarachniophyta). Estas algas so unicelulares, marinhas. Apesar de elas serem fotossintetizantes, esto bastante relacionadas com organismos heterotrficos.
Figura 2-rvore filogentica de Eukarya, mostrando os grandes grupos. (Baudalf, 2008)
Estramenpilas fotossintetizantes constituem em torno de onze linhagens distintas, todas elas com cloroplasto com clorofila a e c. Entre elas esto dois grupos que so ecolgica e economicamente importantes: as diatomceas e as algas pardas, juntos formam o grupo heterocontes. As diatomceas so microalgas muito abundantes no plncton marinho e de gua doce. Possuem uma carapaa de slica bipartida que se encaixam como uma caixa com uma tampa. As algas pardas (Phaeophyceae) so macroalgas que esto amplamente distribudas no globo terrestre, principalmente nas regies temperadas. Existem espcies enormes, que podem chegar a 60 metros de comprimento e formam verdadeiras florestas subaquticas, conhecidas como florestas de kelps. Dentro do grupo dos alveolados, apenas os dinoflagelados possuem representantes fotossintetizantes, mesmo assim, no so todos. Dinoflagelados formam um grupo diverso, predominantemente unicelular. Apenas metade deles fotossintetizante, mas h indcios que o ancestral comum do grupo era capaz de realizar fotossntese e, ao longo da evoluo, uma parte perdeu essa capacidade. Apicomplexas so grupo-irmo dos dinoflagelados e inclui importantes agentes que causam doenas, como malria (Plasmodium) e toxoplasmose. Todos os apicomplexas, apesar de no fazerem fotossntese, possuem um cloroplasto vestigial chamado apicoplasto, sugerindo que o ancestral comum entre dinoflagelados e os
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aplicomplexas era fotossintetizante. As haptfitas e as criptfitas so algas evolutivamente prximas das estramenpilas. Elas tambm possuem cloroplasto com clorofilas a e c, o que sugere que o ancestral comum entre as estramenpilas, haptfitas e criptfitas j possua cloroplasto com clorofila c. Os nicos organismos fotossintetizantes dos excavados so as euglenfitas. Ainda assim, apenas uma parte delas possuem cloroplastos. As euglenfitas so unicelulares de vida livre que ocorrem nos ambientes marinhos e de gua doce.
Endossimbiose primria
Todos os organismos que fazem fotossintetizante oxignica possuem clorofila a como molcula principal para captao luz. Essa molcula est associada a um sistema qumico e fotoqumico to complexo que chega a ser inconcebvel a ideia de que ela possa ter surgido mais de uma vez no planeta. J foi dito anteriormente que a clorofila a surgiu nas cianobactrias, antes do aparecimento do primeiro eucarionte e que existem evidncias que sugerem veementemente que o cloroplasto dos organismos eucariontes surgiu com a endossimbiose de uma cianobactria dentro de uma clula eucarionte hospedeira. Com isso, a maior evidncia de que os eucariontes fotossintetizantes surgiram a partir dessa endossimbiose a origem nica da clorofila a. O cloroplasto dos eucariontes que evoluram da endossimbiose de uma cianobactria possui duas membranas. Esses cloroplastos so chamados de primrios ou simples. Existem duas explicaes para a presena dessas duas membranas. A hiptese mais comum que a membrana interna era a membrana plasmtica da cianobactria, enquanto que a membrana mais externa do fagossomo (vacolo digestivo) da clula eucarionte. A outra explicao que tanto a membrana interna como a externa pertenciam cianobactria original. Neste caso, assume-se que a membrana do fagossomo foi perdida. As cianobactrias so bactrias gram-negativas, isso , a parede celular delas constituda camada de peptidioglicano envolvendo a membrana plasmtica e, externamente a essa camada h outra membrana lipoprotica. Durante a evoluo dos cloroplastos, a camada de peptideoglicano foi perdida, mantendo-se as duas camadas lipoproteicas - a membrana plasmtica e a membrana lipoproteica mais externa da parede celular. De modo geral, a endossimbiose ocorre de forma bem corriqueira no planeta. Vrios casos podem ser citados, o mais comum dos recifes de corais. Os corais so cnidrios que possuem dentro de suas clulas endossimbiontes que so dinoflagelados, chamados zooxantelas. So as zooxantelas que promovem as cores dos corais. Elas realizam fotossntese e fornecem alimento para os cnidrios, que por sua vez, fornecem abrigo para elas. Quando h um desequilbrio ambiental, seja por poluio ou aumento da temperatura da gua, os cnidrios expulsam as zooxantelas de suas clulas, o que provoca o branqueamento dos corais. No caso das plantas e das algas, elas no so capazes de expulsar os cloroplastos de suas clulas. Ao longo da coevoluo das clulas vegetais e dos cloroplastos ocorreu uma transferncia lateral de genes. Ou seja, genes que pertenciam cianobactria foram transferidos para o ncleo da clula hospedeira. Esta, por sua vez, passou a produzir as protenas importantes para a vida da cianobactria, tornando-a dependente da clula hospedeira. Se a transferncia lateral de genes no tivesse ocorrido, provavelmente a cianobactria no iria coevoluir para o cloroplasto da clula vegetal. A clula hospedeira ancestral, que adquiriu o cloroplasto primrio, deu origem a trs
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linhagens bem definidas: as glaucfitas, as algas vermelhas e as algas verdes (que inclui as plantas terrestres). Esses trs grupos formam uma linhagem monofiltica chamada Archaeplastida. Todos os outros organismos fotossintetizantes adquiriram cloroplasto a partir de um eucarionte da linhagem Archaeplastida e no de uma cianobactria, esse evento chamado de endossimbiose secundria. As glaucfitas constituem um pequeno grupo de algas unicelulares de gua doce. O cloroplasto das glaucfitas, chamado de cianela, agrega vrias evidncias da endossimbiose primria. As cianelas ainda mantm vestgios da camada de peptideoglicano (componente da parece clula da cianobactria) entre as duas membranas. Os cloroplastos das algas vermelhas e as cianelas possuem pigmentos para captao de luz semelhante ao das cianobactrias atuais (clorofila a e ficobiliprotenas). As algas verdes, grupo diverso que inclui desde organismos unicelulares at as plantas terrestres, possui o cloroplasto mais diferenciado das cianobactrias. Esses cloroplastos perderam as ficobiliprotenas, desenvolveram a clorofila b e possui um complexo de membrana formando os tilacoides.
Endossimbiose secundria
Como j foi dito anteriormente, todos os outros organismos fotossintetizantes, que no fazem parte do grupo Archaeplastida, no possuem cloroplasto originado da endossimbiose primria, a partir de uma cianobactria. O cloroplasto desses grupos se originou a partir de clulas eucariontes que j possuam cloroplasto primrio, a chamada endossimbiose secundria. Diferente da endossimbiose primria, que ocorreu apenas uma vez na histria da evoluo, a endossimbiose secundria ocorreu diversas vezes, em vrios grupos diferentes. Os grupos que possuem cloroplastos secundrios so: euglenfitas, dinoflagelados, algas heterocontes (diatomceas e algas pardas), haptfitas, criptfitas, apicomplexas e cloraraquinifitas A primeira evidncia que indica a endossimbiose secundria a presena de mais de duas membranas nos cloroplastos desses grupos. As euglenas e os dinoflagelados possuem trs membranas e as algas heterocontes, as haptfitas, as criptfitas, os apicomplexas e as cloraraquinifitas possuem quatro membranas. Outra evidncia consistente da endossimbiose secundria a presena do ncleo vestigial (chamado de nucleomorfo) do eucarionte endossimbionte, presente nos grupos cloraraquinifitas, criptfitas, haptfitas e heterocontes. A explicao para as mais de duas camadas do cloroplasto secundrio que as duas camadas mais internas pertencem ao cloroplasto primrio, a terceira camada mais interna seria correspondente membrana plasmtica do eucarionte que foi engolfado e, por fim, a quarta camada, a mais externa, corresponde membrana do fagossomo. No caso do cloroplasto com trs membranas, mais provvel que o cloroplasto secundrio tenha perdido uma das membranas, que possivelmente era a membrana plasmtica do eucarionte endossimbionte. Assim como na endossimbiose primria, para que o eucarionte hospedeiro e o eucarionte endossimbionte coevoluam, foi necessria que a transferncia lateral de genes tivesse ocorrido. Dessa vez, no apenas genes do genoma do cloroplasto primrio do eucarionte endossimbionte tiveram que ser transferidos para o genoma nuclear do eucarionte hospedeiro, mas tambm genes nucleares do eucarionte endossimbionte tiveram que ser transferidos para o ncleo do hospedeiro.
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Os eucariotos que possuem cloroplastos secundrios so to diversos, assim como esses cloroplastos so diversos entre si, que bem aceito que a endossimbiose secundria tenha ocorrido algumas vezes. Existem dois principais tipos de cloroplastos secundrios: aqueles derivados da endossimbiose de alga verde e aqueles derivados de alga vermelha. A endossimbiose por alga verde ocorreu duas vezes de forma independente na histria da evoluo. Desses dois eventos, foram originadas as linhagens das cloraraquinifitas e das euglenfitas fotossintetizantes. A endossimbiose por uma alga vermelha mais complexa, pois no se sabe ainda se esse evento ocorreu apenas uma vez ou mais de uma. No cenrio atual, mais parcimoniosa a ocorrncia de uma nica vez da endossimbiose secundria de uma alga vermelha, que ramificou para os dinoflagelados, algas heterocontes, haptfitas, criptfitas e apicomplexas. Os cloroplastos originados pela endossimbiose secundria de uma alga verde possuem clorofila a e b. As cloraraquinifitas guardam bastante evidncia sobre a endossimbiose secundria. Esses organismos pertencem linhagem Cercozoa e existem poucas espcies reconhecidas. O cloroplasto possui quatro membranas, um citoplasma vestigial com ribossomos funcionais, um nucleomorfo e o cloroplasto primrio do eucarionte endossimbionte. As euglenfitas fotossintetizantes pertencem ao grupo dos Excavados e no so evolutivamente prximas s cloraraquinifitas, o que corrobora a hiptese de que ocorreram duas endossimbioses secundrias de alga verde. Alm disso, apenas uma parte das euglenfitas possui cloroplasto, indicando que a endossimbiose no ocorreu no ancestral comum do grupo, mas sim durante a sua diversificao. Inicialmente, acreditava-se que o cloroplasto das euglenfitas havia sido originado por uma endossimbiose primria, pois so bastante reduzidos. Esse cloroplasto possui trs membranas e no possui nucleomorfo, restando apenas o cloroplasto primrio do eucarionte endossimbionte. Uma origem do cloroplasto a partir de uma alga vermelha foi proposta inicialmente com os cloroplastos das criptfitas, que so as nicas algas que possuem cloroplasto com ficobiliprotenas e mais de duas membranas. Esses cloroplastos tambm possuem clorofila c, pigmento tambm encontrado nos cloroplastos das algas heterocontes, haptfitas e dinoflagelados. A hiptese mais parcimoniosa que a endossimbiose de uma alga vermelha ocorreu apenas uma vez na histria evolutiva e que desse ancestral, divergiu o grupo conhecido como Chromoalveolados. As criptfitas so organismos unicelulares marinhos ou de gua doce. O cloroplasto secundrio desse grupo tem quatro membranas, possui um citoplasma vestigial com ribossomos que podem armazenar reserva de amido. H tambm um nucleomorfo e o cloroplasto primrio contm tilacides. Como j foi dito, alm das clorofilas a e c, esto presentes ficobiliprotenas, pigmento presente nas algas vermelhas. A membrana mais externa do cloroplasto secundrio contnua com as membranas do retculo endoplasmtico que envolvem o ncleo. As algas heterocontes e as haptfitas possuem o cloroplasto com quatro membranas e so muito semelhantes. Perderam o nucleomorfo, mas esto localizadas no lmen do retculo endoplasmtico. Possuem clorofila a e c, mas perderam as ficobiliprotenas. As algas heterocontes constituem o mais diverso grupo de algas, que possui desde organismos unicelulares presentes no picoplncton at complexas macroalgas que chegam a muitos metros de tamanhos, as chamadas kelps. Uma histria evolutiva mais confusa a dos alveolados. Dentro desse grupo esto os
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dinoflagelados, que metade faz fotossntese, metade no faz. O cloroplasto dos dinoflagelados fotossintetizantes possuem trs membranas, no possui nucleomorfo e contm clorofila a e c. Estudos indicam que a metade heterotrfica dos dinoflagelados perdeu o cloroplasto ao longo da evoluo. O caso mais surpreendente da evoluo dos cloroplastos so os apicomplexas. Todos os apicomplexas so heterotrficos e muitos esto associados a doenas animais. Eles possuem um cloroplasto no fotossintetizante e reduzido de quatro membranas, que so chamados de apicoplastos. Esses cloroplastos perderam totalmente a capacidade de fotossntese, mas os vestgios de um ancestral fotossintetizante ainda esto presentes. A situao filogentica dos chromoalveolados ainda duvidosa e pouco resolvida. A hiptese mais parcimoniosa sugere o evento nico de uma endossimbiose secundria de uma alga vermelha, que coevolui, divergindo para os grupos das criptfitas, haptfitas, alveolados e estramenpilas. Ao longo da evoluo, grande parte das espcies desses grupos perdeu o cloroplasto, ou a capacidade de fazer fotossntese.
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Biodiversidade e Ecologia de Macroalgas Marinhas Brasileiras

Carolina A. A. Azevedo Fbio Nauer
O que so algas?
As algas no constituem uma categoria taxonmica definida, e sim um agrupamento de organismos com caractersticas e histricos evolutivos diferentes, e que, portanto, so classificados em reinos distintos. Em geral, o termo alga empregado para designar organismos fotossintetizantes, que contm clorofila a como principal pigmento fotossinttico, uni ou multicelulares, procariotos ou eucariotos, predominantemente aquticos, cujo talo no apresenta diferenciao em raiz, caule ou folhas. As macroalgas, por sua vez, so as algas macroscpicas, ou seja, organismos multicelulares que podem ser visualizados a olho nu, encontrados em ambientes aquticos marinhos e continentais. As macroalgas podem ser organismos simples de corpo chamado acelular, ou podem ser constitudas por vrias clulas agregadas, que formam estruturas consideradas tecidos simples.
Variedade de cores, tamanhos e formas das algas

Cores: Desde o sculo XIX, as algas so classificadas em trs grandes grupos ou filos de acordo com a colorao do talo: Rhodophyta (algas vermelhas), Chlorophyta (algas verdes) e Ochrophyta (algas pardas). No entanto, outros aspectos contribuem para as diferenas entre esses grupos, entre os quais possvel citar concentrao de pigmentos, substncias de reserva, composio da parede celular, presena ou ausncia de flagelos, ultra-estrutura da mitose, conexes entre clulas adjacentes e ultra-estrutura dos cloroplastos (Tabela 1). Considerando a concentrao de pigmentos, este aspecto pode variar inclusive dentro de um mesmo grupo, de acordo com a espcie ou com as condies ambientais. Os representantes de Rhodophyta, por exemplo, podem exibir diversas coloraes, como amarelada, azulada, esverdeada, amarronzada e enegrecida. Alm de pardas, as algas do filo Ochrophyta podem ser amareladas, douradas e at iridescentes.
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Tabela 1. Principais caractersticas dos trs grandes grupos de algas. Caracterstica Rhodophyta Clorofilas a Ficobilinas b-ficocianina b-ficoeritrina c-ficocianina c-aloficocianina c-ficoeritrina -caroteno Zeaxantina Antheraxantina Lutena Amido das flordeas -caroteno Lutena Violaxantina Zeaxantina Amido -caroteno Fucoxantina Violaxantina Zeaxantina Laminarina Manitol Celulose cido Algnico Chlorophyta a, b Ochrophyta a, c1, c2
Carotenides
Substncia de reserva Parede celular
Celulose Agar Carragenana
Celulose
Presentes em Flagelos Ausentes algumas fases;
Presente em gametas e/ou esporos; Nmero varivel Estrelados, cilndricos
Cloroplastos
Nmero varivel; Ovais, discides ou estrelados;
Nmero varivel;
Discides, reticulados, ou estrelados, laminares, lenticulados. em forma de fita etc.
Os estudos filogenticos mais recentes apontam que esses grupos se originaram por duas vias diferentes na cadeia evolutiva, sendo que as algas vermelhas e verdes so resultado de um processo de endossimbiose primria, enquanto que as algas pardas se originaram por endossimbiose secundria. Por essa razo, Rhodophyta e Chlorophyta so classificadas no reino Plantae, e Ochrophyta est includa no reino Chromista.
Tamanhos: As algas ocorrem em tamanhos variados, desde formas microscpicas at algas com mais de 60 m de comprimento, que so chamadas kelps.
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Formas: A forma bsica de uma alga o talo, entendido como um corpo vegetativo simples, relativamente indiferenciado. Os talos variam em complexidade, desde filamentos ramificados simples, at agregaes de filamentos ramificados que so chamados pseudoparnquima, pois se parecem com tecidos verdadeiros (Figura 1). No caso das algas pardas, so observados talos parenquimatosos, pois suas clulas se dividem em mais de um plano. Os talos das algas podem ser de diversas formas, tais como: a) Foliceos laminares: no so constitudos por medula nem crtex, e sim por algumas camadas de clulas, que exibem uma alta taxa rea/volume. Ex.: Ulva e Porphyra; b) Foliceos corticados: apresentam medula e crtex diferenciados. Ex.: Dictyota e Padina; c) Filamentosos: talos compostos por fileira nica de clulas. Ex.: Cladophora e Griffithsia; d) Filamentosos corticados: talos filamentosos que apresentam crtex diferenciado. Ex.: Ceramium e Centroceras. e) Cilndricos: talos de forma cilndrica, com medula e crtex diferenciados. Ex.: Gracilaria e Gelidium; f) Globosos: talos de formato esfrico. Ex.: Ventricaria e Valonia; g) Aspecto de rede: talos cujos filamentos se desenvolvem formando estruturas semelhantes a redes. Ex.: Microdyction; h) Calcrios articulados: talos eretos com segmentos recobertos por carbonato de clcio. Ex.: Jania e Halimeda; i) Crostosos: talos calcificados ou no, que se desenvolvem com aspecto de crosta que recobre o substrato. Ex.: Hildenbrandia e Ralfsia; j) Cenocticos: compostos por um aglomerado de ncleos e cloroplastos, como se fossem clulas gigantes. So tambm chamados de talos acelulares. Ex.: Codium e Caulerpa.
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Figura 1. Exemplos de Algas Marinha. A. Alga parda Padina, que possui forma folicea. B. Alga parda Spatoglossum. C. Alga verde Chaetomorpha, que possui forma filamentosa. D. Alga verde Caulerpa, que possui forma cenoctica. E. Alga vermelha Gracilaria, exemplo de forma cilndrica. F. Alga vermelha Ceramium, que possui forma filamentosa cortiada.
Fatores que determinam a ocorrncia e a distribuio das macroalgas

As macroalgas ocorrem na natureza tanto em ambientes tropicais quanto temperados, e so os principais componentes das comunidades de meso e infralitoral. As macroalgas ocorrem em diversos tipos de hbitat, tais como costes rochosos, manguezais, lagunas costeiras de gua salobra, atis, bancos arenosos, bancos arenolodosos, bancos de rodolitos, bancos de fanergamas, recifes de coral, recifes de arenito, esturios e substratos artificiais. Os principais fatores que influenciam a ocorrncia e distribuio de algas podem ser classificados em: a) Fatores fsicos: disponibilidade e tipo de substrato, temperatura, luminosidade, variao de mars e intensidade de ondas; b) Fatores qumicos: salinidade, disponibilidade de nutrientes e pH; c) Fatores biolgicos: herbivoria, competio, epifitismo, parasitismo, biota associada e
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doenas; d) Fatores artificiais: coleta para fins comerciais, coleta para fins cientficos, pisoteio, contaminao por efluentes. As macroalgas de maior porte e complexidade ocorrem ao longo da zona costeira rochosa. Em costes rochosos, durante mars baixas, possvel visualizar as faixas de diferentes composies de algas, o que resultado das diferenas entre as espcies em relao sua capacidade de sobreviver exposio atmosfrica. As algas que habitam a zona entremars so diariamente expostas a grandes variaes de umidade, temperatura, salinidade, luz e movimentao da gua. Alm disso, so consumidas por uma grande variedade de herbvoros, como peixes, ourios-do-mar, moluscos e tartarugas marinhas. Dessa forma, as caractersticas especficas de bioqumica, estrutura e histrico de vida so resultados de adaptao a todos esses aspectos fsicos e biolgicos.
Diversidade de macroalgas no mundo e no Brasil

H aproximadamente 11500 espcies de macroalgas descritas no mundo todo, sendo 6215 algas vermelhas, 1792 algas pardas e 3491 algas verdes. Em nvel mundial, no se observa um padro de diversidade de macroalgas em relao latitude, ou seja, em diferentes litorais, a riqueza pode aumentar ou diminuir em direo ao Equador, ou mesmo alcanar nveis mximos em latitudes intermedirias. Dessa forma, vrias regies temperadas apresentam diversidade de algas superior a algumas regies tropicais. A ausncia de padro pode ser explicada pela influncia de fatores locais, como presso de herbivoria, ausncia de substrato, turbidez da gua e correntes martimas. No Brasil, h registro de aproximadamente 650 espcies de macroalgas marinhas bentnicas. Atualmente, aceito que o pas apresenta trs zonas que diferem quanto diversidade e composio de algas, a saber: a) Zona tropical: corresponde aos litorais das regies norte e nordeste. A regio nordeste apresenta flora marinha rica, em virtude da disponibilidade de substratos adequados e da transparncia da gua; b) Zona de transio: constituda pelo Estado do Esprito Santo, esta zona apresenta a flora marinha mais diversa do pas, o que atribudo heterogeneidade ambiental, elevada transparncia da gua e influncia da ressurgncia de Cabo Frio; c) Zona temperada quente: abrange os litorais das regies sudeste e sul. Esta zona apresenta elevada diversidade em reas com abundncia de costes rochosos, que se constitui em substrato propcio s algas. No entanto, a diversidade baixa em regies onde predominam as praias arenosas.
Importncia ecolgica das macroalgas

A importncia ecolgica das algas pode ser resumida em quatro aspectos principais: a) Produo primria: so organismos fotossintetizantes, portanto contribuem significativamente para a produo de oxignio, o qual essencial sobrevivncia dos animais; b) Alimento para herbvoros: diversos organismos aquticos, como peixes, crustceos, mamferos e moluscos se alimentam de algas;
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c) Hbitat para animais: vrias espcies de vertebrados e invertebrados utilizam os bancos de algas, ou mesmo a estrutura do talo, como locais para abrigo e reproduo; d) Bioconstruo: as algas calcrias so chamadas de organismos bioconstrutores, pois apresentam carbonato de clcio em sua estrutura, o qual, quando depositado, contribui para a estruturao do hbitat.
Metodologias de estudos sobre ecologia de macroalgas

Os estudos ecolgicos sobre macroalgas so realizados com uso de metodologias destrutivas e no-destrutivas. a) Mtodos destrutivos: as amostragens destrutivas envolvem a retirada dos organismos de seu hbitat; b) Mtodos no-destrutivos: em amostragens no-destrutivas os organismos no so retirados do ambiente, e sim registrados atravs de anotaes, fotografias ou filmagens.
Importncia econmica
Os registros apontam que as macroalgas tm sido utilizadas pelas civilizaes orientais desde antes de Cristo. Atualmente, as algas so utilizadas pela humanidade para diversas finalidades: a) Alimentao humana: consumidas principalmente na culinria oriental, como saladas, sopas, sushi, entre outros. b) Produo de compostos bioativos: os ficocolides so largamente utilizados como espessantes e estabilizantes no preparo de gelatinas, pudins, sorvetes, cremes, sucos e sopas, e na produo de pastas dentais, shampoos, produtos cosmticos e cpsulas de medicamentos. So tambm utilizados como meio de cultura em microbiologia. Alm disso, as algas produzem compostos qumicos com ao anti-viral, vermfuga, anticoagulante etc; c) Uso como fertilizantes: algumas espcies de algas so utilizadas como fontes de nutrientes e substncias fungicidas em cultivos agrcolas, o que contribui para o incremento da produo. As algas calcrias, por apresentarem carbonato de clcio em sua estrutura, tambm so utilizadas na agricultura para correo de solos cidos; d) Alimentao animal: atividades pecurias e aqucolas utilizam rao a base de algas como alimento animal.
Ameaas biodiversidade:
Alguns aspectos antropognicos se constituem em perturbaes ao ambiente marinho e, portanto, so considerados danosos biodiversidade, tais como: a) Turismo e lazer desordenados; b) Navegao; c) Introduo de espcies exticas; d) Sobre-explotao de recursos; e) Descarga de efluentes contaminados;
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f) Explorao petrolfera.
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Estratgias de defesa antioxidantes em macroalgas

Janana P. Santos Emmanuelle S. Costa
Macroalgas marinhas so organismos fotossintetizantes e bentnicos, que possuem importante funo na produo primria do ambiente marinho, pois fixam uma quantidade significativa de dixido de carbono (CO2) dos oceanos. No entanto, fatores abiticos (ex: luz, radiao UV, temperatura, salinidade, entre outros) podem influenciar nas respostas fisiolgicas desses organismos. Os ambientes costeiros, nos quais podemos encontrar grande diversidade de macroalgas, so reas que apresentam grande variabilidade ambiental onde os componentes biticos e abiticos interagem e regem o funcionamento e a estabilidade de um ecossistema dinmico e complexo. Particularmente, os costes rochosos so sistemas de alta complexidade ambiental por posicionarem-se na transio entre os continentes e os oceanos, ou seja, entre os meios terrestres e aquticos. Dessa forma, os organismos que nele habitam respondem dinamicamente interao dos agentes terrestres, ocenicos e atmosfricos. A faixa do mediolitoral dos costes rochosos est sujeita condies abiticas extremas como: radiao solar, radiao UV, dessecamento, exposio ao oxignio, mudanas na temperatura e na salinidade, essas condies podem se alterar diversas vezes ao longo do dia. Desta forma, se as presses biticas e abiticas nos costes rochosos podem ser to intensas sobre as macroalgas como esses organismos conseguem sobreviver nestes ambientes? As macroalgas ao longo dos anos desenvolveram estratgias de defesa (estrutural, qumica, nutricional, crescimento, entre outras) para reduzir a sua vulnerabilidade aos danos gerados pelo ambiente, sendo que as defesas qumicas so os mecanismos mais utilizados pelas macroalgas. As macroalgas que ocorrem na regio do mediolitoral de costes rochosos esto submetidas diversas mudanas nas condies ambientais marinhas e, portanto, precisam de mecanismos qumicos eficientes para combater essas adversidades. Estas condies extremas a exemplo da radiao solar, radiao UV, dessecamento, constituem cenrios de estresse para esses organismos, provocando situaes que favorecem a formao de radicais livres e a condio celular oxidativa. O interesse inicial pelo estudo de substncias com atividade antioxidante (AAO) em algas surgiu no Japo, na busca de novos conservantes para alimentos, em substituio aos antioxidantes sintticos utilizados naquela poca como: o hidrixianisol butilado (BHA) e o hidroxitolueno butilado (BHT), que mostravam danos para a sade humana como, efeitos cancergenos, alteraes enzimticas e lipdicas em animais. O fato de algumas algas secas poderem ser estocadas por um longo perodo sem perigo de deteriorao oxidativa, despertou o interesse dos pesquisadores em relao ao mecanismo antioxidativo presente nessas algas. Assim, como descrito para plantas terrestres, substncias extradas de algas provenientes de diferentes ambientes tm despertado a ateno da cincia, por representarem uma possvel fonte de novos princpios ativos. As algas possuem a habilidade de lanar mo de novos mecanismos para adaptao e
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sobrevivncia ao ambiente marinho, que pode ser a biossntese de molculas por diferentes caminhos metablicos. Elas podem ser cultivadas facilmente e apresentam rpido crescimento quando comparadas com plantas terrestres o que as torna matria-prima interessante para indstrias alimentcias, assim como para farmacutica e cosmtica. Alm disso, podem estar associadas a um estgio evolutivo superior, levando a produo de diversificados metablitos secundrios e consequentemente expresso de diversas atividades biolgicas, sendo capazes de sintetizar metablitos halogenados que podem pertencer a praticamente todas as classes qumicas, desde os hidrocarbonetos de cadeia curta, cetonas simples e fenis at sofisticados terpenos. Muitos desses compostos j possuem atividade biolgica benfica para sade humana e animal comprovada. Alguns dos benefcios potenciais incluem envelhecimento da pele, controle do colesterol, trombose, tumores, diabetes, entre outros. Os radicais livres so molculas ou tomos com eltrons de valncia desemparelhados, com um nmero mpar de eltrons e, portanto, so altamente reativos. A produo excessiva ou acmulo destes radicais txico para as clulas e promovem a oxidao de membranas, protenas, lipdios, pigmentos e cidos nuclicos, afetando o crescimento e a sobrevivncia do organismo (Figura 1).
Figura 1-Formao de radicais livres.
A formao de espcies reativas (ERs) de oxignio (EROs) e de nitrognio (ERNs) ocorre durante os processos oxidativos biolgicos, sendo formados fisiologicamente nos sistemas biolgicos a partir de compostos endgenos que podem ser gerados no citoplasma das clulas vegetais pela atividade metablica de mitocndrias e peroxissomos. Por uma viso molecular os radicais livres agem na desrregulao da gerao de energia (ATP, NADH e NADPH), inibio do transporte de clcio e homeostase eletroltica, oxidao dos citocromos e clivagem do DNA e promoo de eventos mutagnicos. Da mesma forma, os radicais livres podem ter origem exgena, ou seja, a sua formao est relacionada a mudanas imposta na dinmica do ambiente ou por aes antropognicas como: a alta incidncia de radiao UV, emisso de CO 2, mudanas na salinidade e temperatura gerando assim diferentes radicais livres (Figura 2).
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Figura 2-Principais fontes endgenas e exgenas de radicais livres e os danos causados nas clulas das macroalgas.
Para combater a condio celular oxidativa e a formao de espcies reativas (ERs), os seres vivos em geral possuem diferentes mecanismos antioxidativos. Os antioxidantes so um conjunto heterogneo de substncias formadas por vitaminas, minerais, pigmentos naturais e outros compostos vegetais e, ainda, enzimas que neutralizam o efeito danoso dos radicais livres, mesmo presentes em baixas concentraes em relao ao substrato oxidante, podendo atrasar ou inibir as taxas oxidativas (Figura 3).
Figura 3-Esquema do mecanismo de neutralizao dos radicais livres pelos antioxidantes.
As EROs so substncias qumicas resultantes da ativao ou reduo do oxignio molecular (dioxignio, O2) ou derivados dos produtos da reduo. As principais EROs so: o radical nion superxido, o perxido de hidrognio, o dioxignio singleto e o radical hidroxilo. O peroxinitrito considerado por alguns autores uma espcie reativa de nitrognio (ERN) com a mesma importncia de reatividade e papel celular que as EROs. Na tabela 1 h exemplos das estruturas moleculares dos principais radicais livres.
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Tabela 1: Principais espcies reativas (radicais livres) derivados do oxignio e nitrognio. Espcies reativas de oxignio (EROs) e Nitrognio (ERN) Anion Superxido Perxido de Hidrognio Dioxignio singleto Radical Hidroxilo Peroxinitrito Frmula molecular O2H2O2 1O2 HO ONOO-
Existem vrios indcios de que as EROs esto envolvidas em processos patolgicos. A vida em aerobiose caracterizada pela constante produo destes radicais livres, que equilibrada pela produo equivalente de antioxidantes que visa combater os efeitos deletrios desses radicais. Quando esta neutralizao no possvel de ser balanceada, devido sobrecarga no mecanismo antioxidante, tal processo denominado estresse oxidativo, levando gerao de diversos danos aos sistemas biolgicos. A presena de radicais livres tem sido indiretamente associada a diversas doenas (Figura 4), mas no como agentes etiolgicos e sim como fatores que participam de forma direta nos mecanismos fisopatolgicos, os quais determinam a continuidade ou complicaes de diversos estgios patolgicos.
Figura 4- Patologias correlacionadas a presena de radicais livres.
Nas clulas de organismos fotossintetizantes esses mecanismos esto mais fortemente desenvolvidos em comparao a outras clulas, uma vez que as membranas fotossintetizantes, os tilacides, so o alvo primrio para os efeitos deletrios oxidativos, por conterem lipdeos no saturados como elementos estruturais majoritrios. Portanto, vrios mecanismos de proteo foram desenvolvidos por essas clulas. Os sistemas antioxidantes podem ser divididos em duas classes principais: os no enzimticos e os enzimticos. De acordo com a ao sobre os radicais livres os antioxidantes podem ser classificados como scavenger (seqestradores), quando ele age transformando um radical livre em outro menos reativo, ou quencher (dissipadores) quando consegue neutralizar completamente o radical livre atravs da absoro de toda energia de excitao.
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O sistema antioxidante no enzimtico inclui molculas que atuam diretamente na ao antioxidante, entre eles as vitaminas C e E (ex. tocoferol), os carotenides (ex. caroteno e licopeno) e as substncias fenlicas (ex. fenis, flavonides e outros polifenis). Os sistemas antioxidantes enzimticos so catalisados mediante a ao de enzimas especficas, como superxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GP) e ascorbato peroxidase (APX) (tabela 2). Tabela 2: Principais substncias que compoe os sistemas antioxidantes no enzimtico e enzimtico. No enzimtico - tocoferol (vitamina E) caroteno cido ascrbico (vitamina C) Flavonides Florotaninos Bromofenis Enzimtico Superxido dismutase (SOD) Catalase (CAT) Glutationa Peroxidase (GP) Ascorbato Peroxidase (APX) Quinona oxiredutase (NADPH)
As substncias antioxidantes ou fraes ativas isoladas de vegetais podem ser originrias tanto do metabolismo primrio, ou seja, decorrentes do metabolismo essencial como cidos graxos, carotenides, vitaminas e esterides, quanto do metabolismo secundrio que est relacionado produo de molculas induzidas por algum estmulo externo, como os flavonides, alcalides, entre outros. Os antioxidantes atuam em diferentes formas na proteo dos organismos. O primeiro mecanismo de defesa impedir a formao dos radicais livres principalmente pela inibio das reaes em cadeia com o ferro e o cobre.Os antioxidantes so capazes tambm de interceptar os radicais livres gerados pelo metabolismo celular ou de fonte exgenas, impedindo o ataque sobre lipdeos, os aminocidos das protenas e as bases do DNA, evitando a formao de leses e perda da integridade celular. As vitaminas A, C, E, os flavonides e carotenides produzidos pelas macroalgas so de grande importncia na interceptao dos radicais livres. Outro mecanismo de proteo o reparo das leses causadas pelos radicais. Esse processo est relacionado a remoo de danos no DNA e a reconstituio das membranas celulares. Produtos provenientes de algas marinhas tm atrado ateno de diversos setores como farmacolgico, cosmtico, mdico, esttico e alimentcio, entre outros, devido grande diversidade de classes de substncias produzidas por eles. Tais produtos podem agir de formas especficas sobre diferentes patologias sendo por tanto promissoras fontes de novos compostos e que precisam ser mais exploradas quanto a sua bioatividade.
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O trabalho na taxonomia vegetal e seus principais mtodos

Jenifer de Carvalho Lopes
A sistemtica a rea da cincia que estuda a diversidade de organismos. A sistemtica tem como principal objetivo a reconstruo da histria evolutiva da vida por meio das filogenias. Essa rea de estudo inclui tambm a taxonomia, responsvel por descrever, identificar, nomear e classificar os txons. Txons so grupos de organismos, idealmente, que possuam a mesma histria evolutiva. Desde de sempre o homem procurou categorizar objetos, animais e plantas para tornar mais fcil a comunicao com outros indivduos. Este justamente o objetivo principal da taxonomia, colocar uma ordem lgica na biodiversidade. Para tanto, necessrio, primeiramente, descrever os organismos, colocar em palavras as caractersticas que eles possuem. Em termos tcnicos as caractersticas de um determinado organismo so denominadas caracteres e cada carter possui estados. Por exemplo, as ptalas de uma flor podem ser amarelas ou vermelhas, assim, o carter cor das ptalas possui dois estados, amarelo e vermelho. Uma lista completa de caracteres das espcies til para a reconstruo da histria evolutiva desse grupo de espcies por meio das filogenias. Outro aspecto importante que est por trs do termo descrio o descobrimento de novas espcies, que propriamente a descrio da diversidade de organismos. Uma nova espcie descrita geralmente por pessoas que estudam a fundo um determinado grupo de organismos. Essas pessoas so denominadas especialistas. O especialista coleta novos espcimes, os espcimes so os indivduos, do seu grupo de estudos na natureza ou vai atrs dos j coletados e depositados em herbrios. Dessa forma, ele capaz de reconhecer diversas espcies do seu grupo de estudo. Se o especialista encontrar um indivduo com caractersticas muito diferentes daquelas que ele costuma encontrar nas espcies que ele conhece, ele pode verificar na literatura j produzida para seu grupo estudo e verificar se h uma espcie descrita que possui caractersticas como as que ele encontrou. Caso contrrio, trata-se de uma espcie desconhecida para a cincia e cabe a ele descrev-la e torn-la pblica para o meio cientfico. As chaves de identificao, so ferramentas para tornar mais fcil o processo deste especialista em identificar as espcies que ele estuda. Dessa maneira, no necessrio olhar caracterstica por caracterstica de cada espcie para identificar um espcime. As chaves de identificao utilizam-se apenas das caractersticas que permitem separar uma espcie da outra. Abaixo vejam um exemplo simples de chave de identificao: Chave de identificao para os personagens da Turma da Mnica 1. menina 2. Usa vestido vermelho e dentua ............................................................... Mnica 2. Usa vestido amarelo e no dentua .............. ......................................... Magali 1. menino 3. Usa sapato, tem o cabelo espetado e troca o R pelo L ............................. Cebolinha 3. No usa sapato, tem o cabelo crespo e no troca o R pelo L ........................ Casco
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Depois de descoberta uma espcie necessrio dar um nome a ela. Para tanto, necessrio seguir regras que esto descritas nos cdigos de nomenclatura. Cada rea de estudo tem um cdigo diferente, o cdigo de nomenclatura da botnica diferente do cdigo da zoologia e da microbiologia. Cada um desses cdigos so independentes entre si, portanto, as regras do cdigo de zoologia no se aplicam ao de botnica. O Cdigo Internacional de Nomenclatura de algas, fungos e plantas contempla alm desses organismos os fsseis de plantas. O cdigo pode ser alterado apenas durante o Congresso Internacional de Botnica que ocorre a cada seis anos. Durante o congresso h uma seo de nomenclatura que decide o que ser modificado no cdigo. Dessa forma, um cdigo novo lanado de seis anos em seis anos. O ltimo chamado de cdigo de Viena, pois foi elaborado durante o congresso que ocorreu nesta cidade em 2005. Em 2012, sair um novo cdigo, pois em 2011 ocorreu o XVIII Congresso Internacional de Botnica em Melbourne na Austrlia. Esse novo cdigo ser chamado de cdigo de Melbourne. O cdigo de nomenclatura botnica possui seis princpios bsicos que nos do uma ideia de como deve ser a aplicao dos nomes de plantas. O primeiro deles que os cdigo de nomenclatura zoolgica e botnica so independentes. O segundo diz que a aplicao dos nomes de grupos taxonmicos feita por meio de tipos nomenclaturais, dessa forma, necessrio indicar um espcime que represente a espcie e indicar em quais herbrios estes materiais esto depositados. O terceiro deles diz que a nomenclatura de um grupo taxonmico baseada na prioridade de publicao, assim, se dois pesquisadores descreverem a mesma espcie o nome a ser utilizado ser o que foi publicado primeiro. O quarto princpio fala que um determinado grupo taxonmico s possui um nico nome correto, dessa forma, o que foi publicado primeiro o correto e os demais so sinnimos. O quinto deles sobre os nomes cientficos que devem ser traduzidos para o latim. O ltimo princpio diz respeito as datas em que as regras devem ser aplicadas. Alm desses princpios h uma poro de regras e recomendaes, entre elas est o uso de um binmio para a nomeao de espcies. O ltimo dos objetivos da taxonomia a classificao. A classificao o ordenamento dos grupos taxonmicos hierarquicamente. Nesse aspecto a taxonomia e a sistemtica praticamente se fundem, pois desde o advento da sistemtica filogentica h uma preocupao dos cientistas em propor classificaes que reflitam a histria evolutiva do grupo. A proposio de classificaes so feitas h muito tempo, uma das mais clebres a de Lineu em sua obra Genera Plantarum. Nessa obra Lineu organizou os grupos de plantas com base nas caractersticas sexuais, como nmero de estames, nmero de carpelos entre outras. Assim como essa classificao, as que foram proposta antes do advento da sistemtica filogentica no eram baseadas na histria evolutiva do grupo, por isso, um dos trabalhos do sistemata, atualmente, reconstruir a filogenia dos txons e rever a classificao adotada para o grupo luz da sua histria evolutiva. Outro aspecto do trabalho do taxonomista ou sistemata o levantamento da biodiversidade, no s descrevendo novas espcies, mas tambm inventariando as espcies de determinadas regies. Esse tipo de estudo denominado de flora. As floras tratam de um determinado grupo, geralmente uma famlia, em uma determinada regio, como um parque, uma cidade ou at mesmo um estado ou pas. Nestes trabalhos alm da listagem de espcies que ocorrem no local, h tambm descries destas espcies, dos gneros que ocorrem na regio, chaves de identificao para os gneros e para as espcies e ilustraes cientficas das
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caractersticas que auxiliam na identificao das espcies. Para a realizao das floras necessrio o conhecimento do grupo de estudos e viagens para coletar as espcies na rea em que o inventrio ocorrer. Os espcimes coletados so prensados entre jornais e papeles e secos em estufas a cerca de 70C. Depois os ramos do espcime podem ser montados em cartolina e fichas com indicao do local de coleta e informaes importantes sobre a planta como hbito, altura e cores, que so perdidos com o processo de prensagem, podem ser anexados a estas exsicatas para posterior depsito nos herbrios. Com o material em mos possvel realizar a identificao das espcies, seja por chaves de identificao j existentes para o grupo ou por comparao com as espcies depositadas no herbrio. As floras so trabalhos tradicionais na taxonomia vegetal e so realizadas h muito tempo. No sculo XVIII o Frei Jos Mariano da Conceio Vellozo iniciou sua obra sobre a vegetao do Rio de Janeiro, a sua Flora Fluminensis. Essa obra foi finalizada em 1790 e conta com descries e ilustraes de 1.640 espcies e inclui inmeras indicaes ecolgicas e muitos nomes indgenas. uma obra notvel de um pesquisador brasileiro, porm o trabalho de Frei Vellozo s foi publicado 35 anos aps sua finalizao e, infelizmente, muitos dos nomes publicados na Flora Fluminensis perderam a prioridade de publicao, pois foram publicados depois dos trabalhos dos naturalistas estrangeiros como A. SaintHilaire e Martius. No sculo XIX, foi publicado o trabalho mais importante sobre a vegetao brasileira, a Flora Brasiliensis, obra de Carl von Martius. Neste sculo, muitos naturalistas de outros pases vieram em expedio ao Brasil por conta da abertura dos portos s naes amigas em 1808. Esse o caso de Martius que veio ao Brasil em 1817 na comitiva da grduquesa austraca Dona Leopoldina, que veio para se casar com Dom Pedro I. Durante o perodo que Martius esteve no Brasil, ele percorreu diversos estados no s coletando amostras de plantas, mas tambm entrando em contato com os povos indgenas. Sua expedio durou trs anos, tempo em que foram coletados a maioria dos materiais utilizados para a elaborao da Flora Brasiliensis. A Flora brasiliensis foi produzida entre 1840 e 1906 e teve como editores, alm de Martius, August Wilhelm Eichler e Ignatz Urban, contou com a participao de 65 especialistas de vrios pases. A obra contm tratamentos taxonmicos de 2.253 gneros, dos quais 160 novos e 22.767 espcies, das quais 5.689 novas, a maioria de angiospermas, reunidos em 15 volumes com um total de 10.367 pginas. J no sculo XX muitos trabalhos de floras regionais foram iniciados, como a Flora dos estados de Gois e Tocantins, a Flora do Distrito Federal, a Flora Ilustrada Catarinense e a Flora fanerogmica do estado de So Paulo. Alm das floras dos estados, o estudo da vegetao de regies menores tambm foram realizadas como de Unidade de Conservao, este o caso da Flora da Serra do Cip, da Flora de Gro-Mogol e do Parque Estadual do Ibitipoca, todas estas regies no estado de Minas Gerais. Em 2010, foi publicado os dois volumes do Catlogo de Plantas e Fungos do Brasil com o inventrio das espcies destes grupos na flora brasileira. Desde de a Flora Brasiliensis, as espcies de plantas do Brasil no foram levantadas novamente. Essa obra sem dvida uma importante iniciativa para o aumento do conhecimento da vegetao brasileira (Figura 1).
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Figura 1-Linha do tempo das floras no Brasil.
Sem dvida compreender melhor a nossa biodiversidade algo de extrema importncia atualmente, porque a devastao das reas de vegetao est se processando h sculos no nosso pas. Portanto, o estudo dos organismos em seu ambiente natural imperioso, pois pode mostrar quais reas so prioritrias para a conservao. Nesse sentido a sistemtica e a taxonomia contribuem apontando em quais reas ocorrem mais espcies endmicas, ou seja, espcies que ocorrem exclusivamente em um determinado lugar, e onde h maior diversidade de organismos. A Mata Atlntica e o Cerrado so exemplos de locais com muitas espcies endmicas, alta diversidade de organismos e que sofreram com o desmatamento. Por isso, esses dois domnios foram categorizados como prioritrios para a conservao e colocados entre os 25 hotspots de biodiversidade. A taxonomia e a sistemtica so reas bsicas na cincia, ou seja, sem a identificao precisa do objeto de estudo impossvel fazer qualquer tipo de trabalho. Alm disso, com o descobrimento das relaes filogenticas entre as espcies possvel ampliar os estudos, por exemplo, pode-se procurar uma substncia que sintetizada em uma determinada espcie nas espcies do mesmo gnero ou em espcies de gneros relacionados filogeneticamente. Portanto, essa rea da cincia est longe de ser esttica como se pensava antigamente.
Dicas de stios da internet:

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Recursos
3 Recursos
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Estrutura genmica, sequenciamento e elementos de transposio

Guilherme Marcello Queiroga Cruz
Estrutura genmica - Genes, quantos so e onde se encontram

Um cromossomo eucaritico possui dois tipos de cromatina, que so classificados de acordo com o seu nvel de compactao durante a interfase, eles so a heterocromatina (mais compacta) e a eucromatina (menos compacta). A eucromatina a regio mais ativa, apresentando at trs vezes mais genes e trinta e quatro vezes mais recombinaes do que a regio heterocromtica. Nas plantas a heterocromatina geralmente se encontra nos centrmeros, telmeros e regies pericentromricas (prximas ao centrmero). A distribuio da heterocromatina desigual, tanto ao longo das espcies, quanto ao longo de cromossomos de um mesmo indivduo. Apesar de a heterocromatina ser composta majoritariamente de DNA repetitivo, alguns genes esto presentes e ativos nesta regio. Genomas de plantas tm entre 25.000 (arabidopsis) e 30.000 (milho) genes aproximadamente, sendo a maioria destes presentes na regio eucromtica. O tamanho do genoma de diferentes angiospermas pode variar at 100 vezes, apesar de o nmero de genes no acompanhar necessariamente este aumento de maneira proporcional.
Complexidade - Paradoxo C
Quanto maior mais complexo? Pesquisadores adotaram o chamado valor-C para comparar tamanho de genoma de diferentes organismos. O valor-C mede o tamanho de um genoma nuclear em pictogramas. Sempre foi intrigante o fato de o tamanho de um genoma no corresponder complexidade do organismo. Uma salamandra, por exemplo, pode ter at 26 vezes mais DNA em seu ncleo do que um ser humano. Este curioso fato foi denominado paradoxo do valor-C. Ao longo dos anos este complexo paradoxo foi esclarecido, medida que novas perguntas surgiram. Com a ajuda de seqenciamentos de diversos genomas, ficou logo evidente que o aumento do tamanho de um genoma no correspondia proporcionalmente a um aumento no nmero de genes, uma vez que a maior parte do genoma no codifica genes. Assim, nos ltimos anos o termo paradoxo caiu em desuso, e para ilustrar a complexidade do assunto, foi adotado o termo enigma do valor-C. Agora abordando novas questes, como a razo para as diferenas de tamanho de genoma encontradas, e seus possveis impactos. Os dois principais motivos para a ocorrncia de aumento do valor-C so as poliploidias e o aumento do nmero de cpias dos elementos de transposio.
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Poliploidia
Poliplodia nas plantas Poliploidia a condio herdvel de possuir mais de dois sets de cromossomos. Poliploidizao em plantas so muito comuns, sendo as plantas com quatro conjuntos de cromossomos (tetraplides) as mais comuns. Tradicionalmente os poliplides so classificados em autopoliplides, originados pela duplicao de um mesmo genoma, e alopoliplides, originados pela duplicao de genomas diferentes, normalmente aps um evento de hibridao. Veja abaixo uma lista com alguns exemplos de plantas cultivadas e suas ploidias: Triplides: Ma, Banana, Gengibre, Melancia Tetraplides: Batata, Repolho, Tabaco, Amendoim Hexaplides: Trigo, Carvalho, Kiwi Octaplides: Morango, Cana-de-acar
Organismos poliplides garantem vantagens e desvantagens para os agricultores. As trs vantagens mais claras da poliploidia so heterose, redundncia gnica e o freqente ganho da capacidade de reproduo assexuada. Tanto a heterose quanto a redundncia gnica derivam da duplicao gnica. O termo heterose ou vigor hbrido utilizado por melhoristas para descrever um hbrido poliplide com desempenho superior a de seus parentais diplides. Enquanto a redundncia gnica protege os poliplides dos efeitos negativos de mutaes deletrias. Os mecanismos que tornam possvel a reproduo assexuada ou a auto-fecundao em organismos poliplides ainda no esto totalmente esclarecidos, mas a presena de uma destas caractersticas muitas vezes vantajosa para o agricultor. Como no caso da banana, onde a poliploidizao permite a propagao de variedades estreis. As desvantagens de culturas poliplides correspondem a vrios nveis de instabilidade em culturas que sofreram poliploidizaes recentes. Alguns fentipos alcanados atravs de poliploidizao induzida no produzem descendentes estveis nem por reproduo sexuada nem por assexuada. Poliploidia e evoluo Paleopoliploidia se refere a duplicaes de genomas que ocorreram a milhes de anos atrs. Devido a presso seletiva grande parte dos genes duplicados so perdidos, diminuindo a redundncia gnica. Com o passar das geraes, genomas paleopoliplides sofreram redues significativas, e so tratados hoje como diplides. Este evento se chama diploidizao. Mtodos de deteco de paleopoliplides envolvem a identificao de genes duplicados em blocos. Poliploidizaes so comumente relacionadas a especiaes, uma vez que genes duplicados sofrem menos presso seletiva e ocasionalmente originam novos genes. Trabalhos recentes sugerem que a alta variabilidade dos organismos poliplides conferiu a estes melhores chances de sobrevivncia aps o evento de extino do cretciotercirio.
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Elementos de transposio Histria e contribuio genmica

Barbara McClintock Descoberta dos TEs em milho Barbara McKlintock foi a primeira cientista a notar a presena de elementos mveis nos genomas eucariotos. Seu trabalho em citogentica de milho permitiu a ela em meados dos anos 50 a criar a hiptese que viria a ser a mais importante de sua carreira, a de que existiam genes com capacidade de se mobilizar nos genomas eucariotos. Esta observao foi confirmada por cientistas anos mais tarde, e ela recebeu um prmio Nobel em medicina em 1983. Classificao e estrutura Os elementos genticos mveis foram tratados por muito tempo como DNA lixo. Apesar de reconhecerem sua existncia e em parte sua importncia, grande parte da comunidade cientfica ainda desconhece a enorme diversidade estrutural e filogentica destes elementos. Para facilitar a sua anotao e estabelecer as bases de futuras anlises funcionais, foi proposto um sistema de classificao para TEs. Desde ento, se a fita intermediria de transposio de RNA este elemento chamado de retrotransposon, e pertence classe I. Sendo o intermedirio uma fita de DNA o TE chamado de transposon de DNA, e pertence classe II. Os elementos da classe I mais presentes nos genomas de plantas so os retrotransposons com LTR (LTR-retrotransposon). Um LTR-retrotransposon possui duas repeties terminais longas (LTR) cujo tamanho varia (~120-5200pb) e que so idnticas no momento da sua insero (Figura 1). Um LTR-retrotransposon possui duas ORFs, Gag e Pol. A Gag responsvel pela codificao do capsdeo, enquanto a Pol uma poliprotena que contm uma protease (Prot), reverso transcriptase (RT), RNAseH e Integrase (INT). O ciclo de replicao de um LTR-retrotransposon inclui a transcrio de um elemento previamente inserido no genoma hospedeiro. Este exportado para o citoplasma, onde pode ser traduzido para formar o capsdeo e todas as outras protenas, ou ento capturado por um capsdeo j formado e reinserido no ncleo para se reintegrar no genoma. Este ciclo muitas vezes descrito como copia/cola, uma vez que a insero original mantida e novas cpias so geradas. Acredita-se que este mecanismo seja um dos maiores responsveis pela expanso de alguns genomas vegetais. Dentre os elementos da classe II os transposons com repetio terminal invertida (TIR). Geralmente estes elementos codificam apenas uma transposase, esta protena a responsvel pela transposio deste elemento (Figura 1). Diferentemente dos elementos da classe I, os transposons de DNA so extrados de sua posio original e reinseridos em outra regio do genoma hospedeiro. Este mecanismo chamado de recorta/cola.
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LTR
Gag
Pol
(Prot-INT-RTRNAseH)
LTR
TI R
Transposase
TIR
Figura 1. Estrutura bsica de um LTR-retrotransposon e um transposon de DNA com TIRs.
Distribuio nos genomas Os TEs de classe I e II esto presentes nos genomas de todas as plantas, porm podem constituir diferentes porcentagens destes. Quando comparamos duas gramneas como arroz e milho observa-se que o arroz possui um genoma cinco vezes menor do que o milho. Mas enquanto no arroz os TEs correspondem a 40% do genoma, em milho estima-se que este nmero se aproxime dos 85%. Quando observamos os TEs como um todo no possvel distinguirmos stios ou regies preferenciais de insero. Mas quando estudamos cada famlia separadamente possvel encontrarmos alguns padres. Elementos da linhagem CRM da classe I so normalmente descritos como centromricos. Mas em estudo recente observou-se que algumas famlias dentro da linhagem CRM no possuem padro de localizao no genoma. Impacto na expresso gnica A insero de um TE prximo a um gene, ou dentro de seus domnios pode afetar sua expresso de diferentes maneiras (Figura 2). Posies em que um TE se insere e normalmente modificam a expresso de um gene so no promotor, em um exon, em um intron ou ainda anti-senso na jusante do promotor. Quando um TE se insere na regio promotora de um gene ele pode interromper a expresso deste ou ainda modular a expresso do gene com seu prprio promotor. A insero do TE em um exon pode provocar o surgimento de transcritos quimricos ou causar a interrupo da transcrio. Inseres em regies intrnicas podem passar despercebidas, sendo processadas e no constam no RNA maduro, mas tambm podem interferir no processo de splicing. Inseres na fita complementar podem gerar leituras anti-senso do gene prximo, e assim ativar a maquinaria de RNAi e silenciar o gene.
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Figura 2-Exemplos de transposies que podem afetar a expresso de um gene. As caixas representam o gene, sendo as verdes os exons e a vermelha a regio promotora. Os tringulos representam TEs, e seus possveis stios de insero. Os nmeros representam: 1- Insero na regio promotora, interferindo na modulao da expresso do gene. 2 Insero em um exon, gerando transcritos aberrantes ou interrupo da transcrio. 3 Insero em regio intrnica, pode alterar splicing. 4 Insero na fita complementar, este tipo de insero pode gerar transcritos anti-senso do gene em questo, levando ao seu silenciamento atravs da maquinaria de RNAi.
Interao com o genoma O hospedeiro ento beneficiado com a transposio de alguns elementos, uma vez que estes aumentam a diversidade gnica e podem causar mutaes benficas. Porm, um nmero muito alto destas transposies pode afetar a estabilidade do genoma hospedeiro, portanto existe uma interao muito complexa entre a planta e estes elementos. Na maior parte do desenvolvimento vegetal os TEs esto silenciados, pr ou pstranscricionalmente. Ambos os mecanismos se baseiam na maquinaria de RNA de interferncia (RNAi), tambm utilizada pela planta para se defender de alguns vrus. Sempre que um TE atinge um alto nvel de expresso ele aumenta a possibilidade de gerar transcritos anti-senso. Estes transcritos aberrantes complementam o RNA no aberrante gerando um RNA dupla fita (dsRNA). Os dsRNA so reconhecidos e processados pela Dicer (componente da maquinaria de RNAi) gerando siRNAs (small interfering RNAs). Estes seguem dois caminhos, eles podem ser capturados pelo complexo RISC e degradam RNAs no aberrantes, causando o silenciamento ps-transcricional. Ou podem ser capturados por um complexo anlogo, mas ainda no muito bem conhecido que leva metilao da poro de DNA que gerou este transcrito, levando ao silenciamento pr-transcricional.
Genmica avanos tecnolgicos e tendncias

Como era O processo mais tradicional para seqenciar DNA chamado de mtodo de Sanger. O mtodo foi idealizado por Frederick Sanger na dcada de 70. Ao longo dos anos 90 muitos projetos de pequena e mdia escala utilizaram este mtodo. A tcnica funciona como uma PCR normal, mas com a adio de no apenas deoxinucleotdeos (dNTPs), mas tambm dideoxinucleotdeos (ddNTPs) marcados radioativamente. Os ddNTPs so nucleotdeos sem o 3OH, que quando incorporados interrompem a reao. Esta reao de amplificao produz ento produtos com diversos tamanhos diferentes que so separados em um gel de poliacrilamida. O gel ento seco e colocado para expor por alguns dias em contato com um filme de autoradiografia. Depois o
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3. Recursos
filme revelado e a seqncia de aproximadamente trezentos nucleotdeos se torna visvel. Como foi Com o surgimento dos primeiros seqenciadores automatizados os primeiros projetos genoma se tornaram viveis. Estes aparelhos so uma alternativa mais rpida e precisa do que a corrida em um gel, alm de no utilizar acrilamida e radioativo (ambos so cancergenos) o que o torna mais seguro tambm. Apesar disso, o mtodo ainda baseado no desenvolvido por Sanger. Neste caso os ddNPTs so marcados atravs de fluorescncia, e lidos por um sistema ptico. O aparelho interpreta as leituras e exporta cromatogramas (Figura 3), contendo a seqncia em questo. Neste momento seqenciadores automatizados de Sanger so capazes de fazer leituras de at oitocentos nucleotdeos. Alm disso, eles suportam placas de 96 poos, e o tempo de espera chega a ser de uma hora por placa.
Figura 3-Exemplo de um cromatograma. Os nucleotdeos so representados por cores sendo: A Verde; T Vermelho; G Preto; C Azul.
Estes seqenciadores ainda esto em uso em muitos laboratrios, mas com o surgimento dos chamados seqenciadores de alta capacidade, ou de prxima gerao, estes aparelhos esto sendo utilizados cada vez mais para projetos menores. Como Os seqenciadores de ltima gerao so as grandes estrelas dos novos projetos genoma. Existem trs principais tecnologias concorrendo neste mercado: 454 (Pirossequenciamento), Illumina e Solid. A comparao de custos pode ser encontrada na Tabela 1.
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Tabela 1. Comparao de custo por tcnica, publicada em 2008. Mtodo 454 Illumina Solid Custo por megabase $6 $2 $2 Custo do aparelho $500,000 $430,000 $591,000 Tamanho da leitura 250pb 36pb 35pb Nmero de leituras 400.000 30.000. 000 100.000 .000
O 454 produz leituras de maior comprimento, mas o Illumina e Solid produzem uma quantidade enorme de pequenas leituras. Os grandes projetos de seqenciamento realizados atualmente utilizam uma combinao destas trs tecnologias. Estas tcnicas sero exploradas mais profundamente durante o curso, mas recomendamos a leitura do material complementar referente a esta sesso, para aprofundar a discusso. Como ser Diversas tecnologias esto sendo desenvolvidas na corrida pela prxima gerao de seqenciadores. Entre as mais avanadas se encontram as que se baseiam no seqenciamento de uma molcula de DNA (single strand DNA sequencing). Todas as tcnicas ainda esto em desenvolvimento, e estimativas de custo ainda so mera especulao. Em contrapartida, avanos em duas tcnicas esto colocando elas como favoritas, elas so: Nanopore sequencing Baseada na passagem de uma fita de DNA por uma membrana lipdica. Os poros da membrana so constitudos por protenas que contm uma abertura de ~1,5nm de dimetro. Cada lado da membrana recebe uma carga, e a corrente leva o DNA de um lado ao outro. Conforme este passa pelo poro, mudanas na condutncia da membrana acontecem, e estas podem ser detectadas por sensores, que seriam capazes de identificar qual o nucleotdeo que est passando pelo poro. Sequenciamento por sntese Parecido com o pirossequenciamento, mas com a capacidade de suportar centenas de milhes de leituras. Os fragmentos de DNA receberiam uma cauda poli-T, enquanto milhes de caudas poli-A esto ligadas em uma membrana slida. Os fragmentos aderem ento a essa membrana, e comea a sntese da fita complementar destes. Os nucleotdeos so marcados e ao serem incorporados emitem fluorescncia. Esta detectada por um leitor de imagem, o aparelho interpreta as imagens e gera um arquivo semelhante cromatogramas.
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Biomassa como Fonte de Energia: Biocombustveis

Carmen Eusbia Palacios Jara Janaina Morimoto Meyer O conhecimento botnico, desde a formao dos primeiros grupos humanos, sempre teve grande importncia tanto na alimentao quanto na descoberta de plantas com propriedades medicinais. A curiosidade e a experincia humana construram o atual conhecimento popular e cientfico nas inmeras reas da Botnica e assuntos a ela, relacionados. Recentemente, um dos temas interdisciplinares recorrentes nos trabalhos botnicos o efeito das mudanas climticas e do aquecimento global nas plantas e o uso das plantas como fonte de energia na forma de biomassa e na produo de biocombustveis, os quais reduzem as emisses de poluentes como NOx, SOx, CO e materiais particulados, e podem substituir as fontes de energia fssil muito utilizadas desde a Revoluo Industrial iniciada na Inglaterra no sculo XVIII. No cenrio mundial atual, as condies ambientais no so as nicas preocupaes que os governantes e a populao devem levar em conta ao criar uma estratgia energtica que ser utilizada para mitigar a poluio liberada por anos de abuso e uso inadequado de fontes no renovveis como carvo, petrleo e gs. Segundo dados da Agncia Internacional de Energia de 2011, cerca de 1,4 bilhes de pessoas no tm acesso a eletricidade e 3 bilhes de pessoas ainda utilizam biomassa de desmatamento para coco e aquecimento, portanto, ainda h a necessidade de garantir essas pessoas, acesso energia usando combustveis modernos, limpos e que minimizam os custos humanos e ambientais. Outro fator que deve ser levado em conta so os constantes conflitos polticos envolvendo os pases do Oriente Mdio, onde esto localizadas quase 80% das reservas comprovadas de petrleo no mundo, pois conferem instabilidade ao suprimento e aos preos deste combustvel.
Biomassa
O uso de biomassa para a gerao de energia renovvel diminui a emisso de carbono na atmosfera, reduz a dependncia por carvo e derivados do petrleo e pode criar novos mercados, gerando empregos para a populao rural. A biomassa definida como qualquer material biolgico derivado de organismos presentes na natureza ou gerada pelos animais, inclusive o homem. Muitos so os exemplos de biomassa: leos vegetais, resduos urbanos e agrcolas, combustveis produzidos a partir de produtos agrcolas como o lcool de cana-de-acar, os resduos do processamento da cana e de outros produtos agrcolas que so usados para gerao de energia nas indstrias, o carvo vegetal produzido a partir de madeira de reflorestamento que usado como matria prima na indstria siderrgica brasileira, entre outros. Karekezi et al. (2004), criaram trs categorias para agrupar os tipos de biomassa: tradicionais, aperfeioadas e modernas. A biomassa tradicional considerada uma fonte local de energia, que facilmente
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obtida na natureza e utilizada por uma poro significante da populao, particularmente pessoas pobres em reas rurais de pases em desenvolvimento da frica, Amrica Latina e sia. So considerados fontes tradicionais o carvo vegetal, a madeira, resduos agrcolas, animais e urbanos usados para a coco e aquecimento dos lares. Como estes materiais so queimados de forma ineficiente, no produzem toda a energia que tem potencial e, devido combusto incompleta, ainda liberam monxido de carbono, levando intoxicao de mulheres e crianas, principalmente. Alm disso, o uso de forma inconseqente contribui para o desflorestamento e degradao dos hbitat. O uso de tecnologias aperfeioadas contribui para o uso mais eficaz e menos poluente da biomassa. Por exemplo, foges domsticos que reduzem a perda de calor diminuem a poluio dentro das casas e aumentam a eficincia na combusto resultando em economias na quantidade de combustvel utilizado e em reduo dos investimentos em dinheiro. As tecnologias modernas para o uso de biomassa so consideradas pelos autores como potenciais para o uso de outras fontes de biomassa e de resduos agrcolas. A disponibilidade de energia gerada a partir de biomassa de baixo custo em reas rurais pode auxiliar no desenvolvimento local por criar servios de energia mais limpos e eficientes, e promover a proteo ambiental. Tecnologias bioenergticas baseadas em fontes de biomassa sustentvel so carbon neutral e reduzem as emisses de CO2 se usadas para substituir combustveis fsseis. Tais tecnologias podem contribuir com a reduo de lixo armazenado em aterros sanitrios, alm de ter grande potencial na gerao de empregos, o que as tornam atrativas em pases em desenvolvimento com altos nveis de desemprego. So exemplos de tecnologias modernas a gerao de energia a partir de madeira, resduos urbanos e rurais e biocombustveis como o etanol (de cana-de-acar, beterraba ou milho) e o biodiesel (de plantas oleaginosas e gordura animal). Apesar das vantagens da obteno de energia atravs de fontes renovveis, em 2010, apenas 2,7% da matriz energtica mundial utilizou biomassa com tecnologia moderna, destes, 0,6% inclui os biocombustveis, e 13% constitui biomassa tradicional, ou seja, madeira de desmatamento. Felizmente, devido ao apoio de governos como a China, EUA e Brasil, est sendo observado certo crescimento na produo e uso de biocombustveis no mundo.
Biocombustveis
Etanol de cana-de-acar Em 1975, foi criado o Programa Brasileiro de lcool (ProAlcool) com o objetivo de evitar o aumento da dependncia externa de divisas aps a crise do petrleo de 1973. De 1975 a 2000, foram produzidos cerca de 5,6 milhes de veculos a lcool hidratado. Acrescido a isso, o Programa substituiu por uma frao de lcool anidro (entre 1,1% a 25%) um volume de gasolina pura consumida por uma frota superior a 10 milhes de veculos a gasolina, evitando assim emisses de gs carbnico da ordem de 110 milhes de toneladas de carbono (contido no CO2), a importao de aproximadamente 550 milhes de barris de petrleo e, ainda, proporcionando uma economia de divisas da ordem de 11,5 bilhes de dlares (www.biodieselbr.com). Dependendo do tipo de acar (sacarose ou celulose/ hemicelulose), o lcool pode ser classificado em etanol de primeira ou segunda gerao. Atualmente, a tecnologia em estgio
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comercial para a produo de etanol a fermentao da sacarose, produzindo o etanol de primeira gerao. Apesar de este processo estar bem estabelecido no Brasil, com os menores custos, a maior produtividade e o melhor balano energtico do mundo, ainda h espao para crescimento e reduo de custos. Ainda necessrio investir no desenvolvimento de tecnologias de segunda gerao para produo de etanol como a hidrlise cida, hidrlise enzimtica ou a sntese de Fisher-Tropsch. A estimativa de que o aproveitamento do bagao e parte das palhas e pontas da cana-de-acar eleve a produo de lcool em 30% a 40%, para uma mesma rea plantada (Pacheco, 2011), pois, segundo Nastari (2005), a energia armazenada nas partes da cana de acar de 31,43% de sacarose, 34,71% no bagao, e 33,86% na palha e nas pontas. Apesar dos benefcios citados, alternativas de biocombustveis devem ser desenvolvidas para evitar a dependncia de somente uma matria prima e de apenas um biocombustvel para substituir as fontes de energia fssil. Biodiesel Vrios so os estudos que apontam o esgotamento das fontes de energia fssil para os prximos 40 ou 50 anos, destacando a necessidade de buscar outras fontes alternativas. Uma das alternativas s fontes de energia derivadas do petrleo o combustvel alternativo conhecido como biodiesel, o qual usualmente relacionado a uma fonte equivalente ao diesel, composto de uma mistura de steres monoalqulicos de cidos graxos de cadeia longa (C14-C22) derivados de fontes lipdicas renovveis como leos vegetais e gorduras animais, e mais recentemente, a obteno de biodiesel de microalgas tambm se tornou promisor. O Programa Brasileiro de Biodiesel estabelece que o biodiesel um combustvel com diferentes misturas, em diferentes propores, de diesel proveniente do petrleo e steres alqulicos de fontes biolgicas. Estes so obtidos atravs da reao de transesterificao de leos ou gorduras com alcois de cadeias curtas, principalmente o metanol e o etanol. Tal mistura, por conveno, tratada como Bxx, onde XX indica a porcentagem de biodiesel na mistura, por exemplo, B10 compe-se de 10% de biodiesel e 90% de diesel. A crescente preocupao com o meio ambiente e, em particular, com as mudanas climticas globais, coloca em xeque a prpria sustentabilidade do atual padro de consumo energtico. Essa circunstncia tem viabilizado economicamente novas fontes de biomassa em vrios pases do mundo. No caso do Brasil, a criao do Programa Nacional de Produo e Uso do Biodiesel (PNPB) foi a iniciativa mais recente no sentido de buscar fontes alternativas de energia, alm do etanol, para o pas. A preocupao com a proteo ambiental e escassez do diesel torna necessrio o desenvolvimento de combustveis alternativos aos combustveis convencionais. Uma vez que o leo diesel largamente utilizado nos setores de transportes, agricultura, comrcio, industrial e domstico para a gerao de energia, a substituio de uma frao do consumo total por fontes alternativas ter um impacto significante na economia e no meio ambiente. No mundo as reservas de leo so distribuidas segundo as caractersticas geolgicas que permite maior acumulao significativa. No Oriente Mdio concentra-se cerca de 65% das reservas mundiais, enquanto a Europa e Eursia tm o 11.7%, Africa com 9.5%, America Central e do Sul 8.6%, Norte America 5% e Asia e o Pacifco 3.4%.
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Combustveis alternativos devem ser pouco poluentes, economicamente competitivos e disponveis. Os triglicerdeos e seus derivados possuem tais caractersticas, pois os leos vegetais so produtos de uma grande variedade de fontes renovveis, possuem baixo ou nenhum contedo de enxofre e causam menos danos ambientais que o diesel. Alm disso, eles reduzem as emisses de gases que geram o efeito estufa, promovem o desenvolvimento regional e melhora da estrutura social, especialmente nos pases em desenvolvimento. Entretanto, diversas desvantagens do uso direto dos leos vegetais in natura so atualmente conhecidas. Algumas das desvantagens so: (a) a ocorrncia de excessivos depsitos de carbono no motor; (b) a obstruo nos filtros de leo e bicos injetores; (c) a solubilizao parcial do combustvel no lubrificante; (d) comprometimento da durabilidade do motor; (e) aumento considervel em seus custos de manuteno. Para contornar essas dificuldades, foi necessrio desenvolver uma metodologia de transformao qumica do leo para que suas propriedades se tornassem mais adequadas ao uso como combustvel. Assim, em meados do sculo passado, surgiram as primeiras propostas de modificao de leos vegetais atravs da reao de transesterificao, cujos objetivos eram os de melhorar a qualidade de ignio, reduzir o ponto de fluidez e ajustar os ndices de viscosidade e densidade especfica. Contudo, mais caractersticas devem ser analisadas quando consideramos combustveis alternativos, pois para ser um substituto vivel ao combustvel fssil ele no deve s possuir benefcios ambientais, como tambm deve ser competitivo economicamente, ser produzido em quantidade suficiente para ter impacto significativo sobre as demandas energticas e prover um ganho energtico superior s outras fontes de energia. Quanto aos benefcios sociais, a produo e o cultivo de matrias-primas para a fabricao do biodiesel podem ajudar a criar milhares de novos empregos na agricultura familiar, reduzindo disparidades regionais, foco do Programa Nacional de Produo e uso do Biodiesel, principalmente nas regies mais pobres do Brasil, como o Norte e o Nordeste. Assim, a gerao e a distribuio de renda passariam a caracterizar o produto como um Combustvel Social, selo criado pelo governo conforme Instruo Normativa n01, de julho de 2005. O programa do Biodiesel parte da poltica governamental brasileira de promover a produo de combustveis alternativos derivados de leos vegetais. As principais matrias primas para a produo nacional do biocombustvel so: soja, milho, girassol, amendoim, algodo, canola, mamona, babau, palma (dend) e macaba, entre outras oleaginosas cultivadas no pas. Em cada estado e regio do pas est sendo avaliado, pelo Ministrio da Agricultura, o desenvolvimento de cadeias produtivas de diferentes leos vegetais. Assim, a produo de biodiesel deve respeitar a especificidade de cada regio produzindo o que, de certa maneira, lhe proporcionar uma vantagem comparativa maior. Dessa forma melhoraria a qualidade do ar das cidades e sade das pessoas, j que poderia evitar milhares de doenas que acontecem todos os anos por conta da poluio atmosfrica. Alm disso, o biocombstivel capaz de contribuir na mitigao de um dos grandes problemas enfrentados pela humanidade como as alteraes do efeito estufa. Por outro lado, com o insentivo do uso de biodiesel, um dos maiores conflitos que o governo dever enfrentar a diviso do uso de terras agrcolas para fins de consumo humano e para a produo de biocombustveis. Um exemplo interessante o caso dos Estados Unidos que
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responsvel por 70% da exportao mundial de milho e tem a preocupao de produzir os gros tanto para a indstria alimentar quanto para as usinas destiladoras de produo de etanol. No Brasil, dos 20% de terras para uso agrcola, o 7% pertence soja, 4% ao milho, 2% cana de acar deixando o restante para a produo de outras culturas, destes s o leo de soja contribui com o 85.6% da produo de biodiesel. Assim, a medida que os preos de petrleo aumentam, a produo de biocombustivis se torna mais rentvel podendo transformar-se em um ensumo economicamente atraente colocando em risco a indstria alimentar. Com a finalidade de reduzir o possvel impacto da produo de biocombustveis sobre a produo de alimentos, no Brasil tem-se formado setores governamentais responsavis por mecanismos de certificao para as companhias dedicadas fabricao de biocombustveis, garantindo a segurana alimentar e a reduo dos impactos ambientais.
E a Botnica com isso?

O estudo e o desenvolvimento de novas variedades e melhoramento gentico de plantas utilizadas como matrias-primas para a produo de biocombustveis, com o objetivo de aumentar a produo de sacarose para o etanol ou leo para o biodiesel, alm da prospeco de diferentes oleaginosas, avaliando diferentes caractersticas fsico-qumicas deste leo e respeitar a distribuio destas plantas para reduzir os custos de produo so trabalhos do botnico. A fitoqumica, alm de descrever inmeros compostos do metabolismo secundrio das plantas, possui ferramentas que auxiliam na anlise e prospeco de matrias-primas para a produo de biocombustveis. Assim, juntamente com outras reas da botnica, a fitoqumica faz parte de um passo importante para desacelerar o aquecimento global atravs da reduo, por meio dos biocombustveis, das emisses de poluentes na atmosfera.
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Bioinformtica
Bioinformtica
Jonas Weissmann Gaiarsa
Bioinformtica para genmica

Bioinformtica constitui uma rea de interseco entre a Computao e a Biologia. Sua funo auxiliar na interpretao e modelagem matemtica de fenmenos biolgicos. Dois exemplos que ocorrem na medicina so os algoritmos de interpretao de dados de ressonncia magntica para imagens e o processamento de imagens para diagnstico automatizado. Na genmica, rea que iremos explorar mais a fundo nesse texto, podemos encontrar vrios pacotes de software voltados para gerao e anlise de sequncias de DNA.
Do DNA ao gene
Sequenciamento Sanger A tcnica de seqenciamento Sanger funciona a partir do princpio de interrupo da replicao da molcula de DNA. Ao se fazer uma reao de polimerizao em cadeia de DNA in vitro com uma molcula molde de DNA, enzima polimerase de DNA e uma mistura de deoxinucleotdeos e dideoxinucleotdeos h interrupo da reao de replicao do DNA. Isso acontece devido a integrao de dideoxinucleotdeos, que no possuem um grupo hidroxila que faz parte da polimerizao do DNA. Com uma proporo apropriada na mistura entre quatro (A,T,C e G) de cada um dos dois tipos de nucleotdeos ocorre uma interrupo seriada das diferentes cpias geradas na reao. Isto , so geradas diversas cpias da molcula molde de DNA, porm sempre haver cpias interrompidas em cada posio dos pares de base (bp) da sequncia. Ao se submeter o produto dessa reao a eletroforese em gel de poliacrilamida fazemos a separao por tamanho das molculas. Se tambm fizermos reaes separadas para cada uma das quatro diferentes bases nitrogenadas, poderemos visualizar ou ler a sequncia de bases do DNA. No caso de seqenciadores automticos as quatro reaes so feitas conjuntamente, porm h um marcador fluorescente diferente em cada um dos dideoxinucleotdeos que emite uma determinada cor quando excitado com um laser. A reao ento submetida eletroforese porm em um capilar de vidro. A informao gerada no seqenciamento automtico constituda por quatro sries de dados de intensidade luminosa capturadas por uma sensor de cmera digital. Cada uma das sries corresponde a uma cor das quatro encontradas na fluorescncia dos nucleotdeos terminadores. Anlise de dados de sequenciamento O sinal luminoso capturado apresentado na forma das quatro cores sobrepostas que variam de acordo com a migrao das molcula fluorescentes durante a progresso da eletroforese. Cada base lida representada por um pico no sinal luminoso na cor apropriada. Na prtica, so encontrados uma srie de rudos e artefatos na curva de luminosidade como picos largos demais, picos de diferentes cores sobrepostas, entre outros. O software mais amplamente utilizado para interpretar esses dados chama-se PHRED e seu papel o de discernir uma base da outra e determinar o nucleotdeo lido. A analis feita sobre as curvas
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3. Recursos
de luminosidade para determinar largura e intensidade de cada pico que so ento comparados com medidas padro para ento atribuir-se uma pontuao (Score) de qualidade a aquela base. Na Tabela 1 a referncia do sistema de pontuao. Tabela 1 . Sistema de pontuao Phred. Score de qualidade Erro na determinao Phred de bases 10 1 em 10 20 1 em 100 30 1 em 1.000 40 1 em 10.000 50 1 em 100.000 Fonte: www.phrap.com/phred/
Acurcia da determinao de bases 90% 99% 99,9% 99,99% 99,999%
A sada desse programa feita na forma de dois arquivos texto: o score relativo ao sinal de cada pico e uma seqncia de pares de bases de DNA correspondentes a cada pico (chamado read). Montagem de genomas Pela tcnica Sanger os reads gerados no passam de mil bases, mas genomas podem conter de milhares a bilhes de bases (kb a gb). A estratgia de um projeto genoma deve ento contemplar a construo de uma biblioteca biolgica de pequenos trechos aleatrios de cada uma das molculas de DNA componentes do genoma para obter-se uma representao proporcional de todo o genoma. Dessa forma, para podermos contemplar uma cobertura completa de um genoma devemos sequenciar vrios desses segmentos de DNA e ento reunir a informao. O software que faz essa reunio, ou montagem de sequncias, chama-se Phrap. Ele compara as sequncias geradas atravs de alinhamento e constri consensos como descrevemos a seguir. Por trs do Phrap existem dois outros softwares, o Cross_match e o Swat. O Swat a base de toda a anlise e o programa que faz o alinhamento local entre sequncias usando uma implementao mais eficiente do algoritmo clssico Smith-Waterman. O alinhamento local procura parear trechos similares dentro de duas sequncias de nucleotdeos, em contrapartida a alinhamentos globais que tentam alinhar a sequncia como um todo. O Cross_match uma verso do Swat que economiza tempo de anlise olhando apenas para regies do alinhamento com baixo nvel de identidade ao redor de regies com alto nvel de identidade. O conjunto de reads alinhados formam uma figura semelhante a um andaime, ou scaffold como conhecido. ento gerada um consenso das seqncias dos empilhamentos de um scaffold, chamado contig. O Phrap no entanto no se restringe ao alinhamento das sequncias, mas tambm procura levar em conta a qualidade atribuda pelo Phred ao fazer esse consenso ponderando o peso de cada base proporcionalmente a sua pontuao.
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Bioinformtica
Anlise de montagens Reunindo-se vrios contigs podemos por fim chegar seqncia do genoma. No entanto a realidade envolve algumas complicaes que os programas de montagem automtica no conseguem resolver e que devem ser tratados manualmente antes do fechamento de um genoma. Grande parte dos genomas so populados com sequncias repetitivas em pequena (at dezenas de bp) e grande escala (dezenas de kb) como micro satlites, regies gnicas e intergnicas de baixa complexidade e elementos de transposio. Todos esses fenmenos provocam o surgimento de inconsistncias na formao de contigs na forma de alinhamentos esprios e concentrao de uma parte desproporcionalmente grande dos reads. Para averiguar problemas desse tipo contamos com programas de visualizao de montagem como o Consed, onde possvel averiguar desde o pico e a qualidade de uma base at sobreposio de diversos contigs. Com esse programa tambm possvel forar a agregao de contigs, retirar reads que podem estar comprometendo um consenso ou um scaffold, buscar por pareamentos entre contigs e suas sub-regies, fazer estatsticas para verificar a qualidade montagem, entre outras funes. Conjuntamente tambm possvel automatizar procedimentos de finalizao de genoma com a ajuda do recurso Autofinish que gera sugestes de estratgias de gerao de novas sequncias para resolver regies problemticas da montagem. Uma parte desses problemas pode ser resolvida com a gerao de um nmero maior de clones e sequncias que cubram todo o genoma de forma a no prejudicar a amostragem de determinadas regies. No entanto, algumas regies s podem ser resolvidas com a gerao de uma sub-biblioteca de clones para sequenciamento, fazendo-se sucessivos sequenciamentos com iniciadores encadeados no final de cada read (primer walking), medindo o tamanho da falha (gap) por PCR, entre outras estratgias. Alguns programas de montagem mais modernos j conseguem distinguir algumas dessas repeties e evitar problemas de comparao entre regies que no necessariamente so coesas dentro de um genoma. Predio gnica De posse da seqncia do genoma, precisamos ento descobrir os genes l contidos. Para isso precisamos de um software como o Glimmer que procura por sinais de fase aberta de leitura (na sigla em ingls, ORF), ou regies que codificam uma seqncia de aminocidos. Alguns dos indcios a serem procurados so cdons de incio (ATG, GTG, TTG) do processo de traduo do RNA mensageiro pelo ribossomo, cdons de parada (TGA, TAA, TAG) da traduo, tamanho limite mnimo e mximo de ORFs a serem considerradas, freqncia de uso de cdons, se conhecida, se o percentual de bases C e G na regio compatvel com uma ORF, seqncia de regies de ancoramento do complexo ribossomal, indcios de regies intrnicas, se for o caso, entre outras caractersticas. Dessa forma conseguimos chegar a uma coleo de ORFs que podem ser traduzidas eletronicamente em seqncias de aminocidos, de acordo com uma tabela de traduo prviamente conhecida que seja mais apropriada ao tipo de organismo sendo sequenciado. Existem diversos softwares voltados para essa fase da anlise, cada um voltado para um tipo de organismo ou dado experimental especfico, como Glimmer, GlimmerHMM, Augustus, Maker, Orphelia, GeneMark.
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Anotao de genomas
Bancos de Dados e procura de sequncias O prximo passo atribuir uma funo hipottica a essas protenas, tambm conhecida como anotao. Para tal o procedimento mais comumente adotado o de comparao das seqncias geradas com seqncias de funo conhecida. As colees de seqncias anotadas so disponibilizadas publicamente na forma de bancos de dados sendo Uniprot e GenBank dois dos mais consagrados. Cada um desses bancos pertence a uma instituio diferente e possuem subdivises com propostas diferentes. Aquilo que comeou como o Atlas of Protein Sequence and Structure curado por Margaret Dayhoff e iniciado em 1965 transformou-se mais tarde, com a unio do European Bioinformatics Institute (EBI), o Swiss Institute of Bioinformatics (SIB) e o Protein Information Resource (PIR) em 2003 no Uniprot. O GenBank foi iniciado por Walter Goad no Los Alamos National Laboratory ainda como Los Alamos Sequence Database em 1979, mas que em 1982 veio tornou-se pblico com o nome GenBank. Foi durante 1989 a 1992 com a criao do National Center for Biotechnology Information (NCBI) que o banco passou a ter sua atual residncia. Para procurar e comparar seqncias so usados softwares de alinhamento, de forma parecida como feita a montagem dos scaffolds. O software de procura e alinhamento mais utilizado chamado BLAST e amplamente empregado nas pginas web desses bancos de dados. Esse software usa de heurstica, ou aproximao estatstica, para tornar o processo de procura e comparao de sequncias de cinco a vinte vezes mais rpido do que o Swat, com um grau de confiana bastante alto. Ferramentas preditoras e outros modelos de sequncia Se no entanto, as sequncias procuradas no gerarem nenhum tipo de correspondncia com outras sequncias ou gerarem resultados que indiquem a semelhana apenas com outras sequncias pouco caracterizadas, podemos recorrer a outros tipos de ferramentas. Algumas sequncias podem ter seu nvel de conservao evolutiva no na sequncia nucleotdica explicita ou em uma das tradues polipeptdicas possveis dessa sequncia, mas em vrios outros nveis. Podemos com o BLAST fazer dois tipos de procura tradicionais: BLASTN onde uma sequncia de nucleotdeos comparada com um banco de sequncias nucleotdicas e BLASTP onde se compara uma sequncia de aminocidos com um banco de sequncias de aminocidos. Podemos no entanto fazer alguns outros tipos de pareamentos: BLASTX onde se compara uma determinada sequncia nucleotdica traduzida em suas seis possveis fazes de leitura contra um banco de protenas, TBLASTN onde uma sequncia de aminocidos procurada e o banco de nucleotdeos traduzido nas seis fases e por fim TBLASTX onde ambos pergunta e banco so traduzidos nas seis fases e comparados. Alm dessas modalidades, podemos fazer procuras denominadas PSI-BLAST, PHIBLAST e DELTA-BLAST, onde a procura BLASTP pode ser focada em um modelo especfico de permuta de aminocidos, no caso do PSI, ou permite o enfoque em um determinado padro de aminocidos ou modelo proteico conhecido, na mesma ordem PHI e DELTA. Da mesma forma programas como HMMER/Pfam, Prints, entre outros, procuram
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Bioinformtica
mudanas mais sutis e de conservao em mais largas escalas de tempo onde so conservados determinados domnios e resduos proteicos fundamentais para o funcionamento bioqumico. Podemos tambm tentar prever outras caractersticas de funo como stios de modificao ps-transcricional, splicing e splicing alternativo, modificaes pstraducionais e localizao subcelular. Todas essas caractersticas podem ser previstas com maior ou menor confiana por diversos programas disponibilizados na forma de websites, pacotes de anlise ou softwares avulsos.
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Organismos Geneticamente Modificados no contexto da Botnica

Kleber Alves Gomes
No h substncia to importante quanto o DNA. Ele carrega em sua estrutura a informao hereditria que determina a estrutura das protenas, que so as principais molculas da vida. Essas instrues so armazenadas no DNA em genes, sequencias de DNA que, em termos moleculares, so responsveis por fazerem as protenas e os RNAs funcionais. De forma simplificada, tanto em plantas como na maioria dos eucariotos, cada gene codifica uma protena ou RNA funcional, por isso no surpreendente que em um organismo complexo como as plantas, existam um amplo nmero de genes. Plantas, ao contrrio dos animais, possuem dois outros genomas. Em comum eles apresentam o genoma mitocondrial, mas plantas tambm possuem o genoma cloroplastdico. O genoma nuclear contm a maioria, mas no toda a informao gentica e este genoma tambm o mais comumente manipulado em biotecnologia de plantas.
OGMs: conceitos bsicos

OGMs a sigla de Organismos Geneticamente Modificados, isto organismos manipulados geneticamente, de modo a favorecer caractersticas desejadas, como a cor, tamanho etc. OGMs possuem alterao em trecho(s) do genoma realizadas atravs da tecnologia do DNA recombinante ou engenharia gentica. Na maior parte das vezes que se fala em Organismos Geneticamente Modificados, estes so organismos transgnicos. Porm, OGMs e transgnicos no so sinnimos: todo transgnico um organismo geneticamente modificado, mas nem todo OGM um transgnico.Um transgnico um organismo que possui uma sequncia de DNA, ou parte do DNA de outro organismo, pode at ser de uma espcie diferente. Enquanto um OGM um organismo que foi modificado geneticamente, mas que no recebeu nenhuma regio de outro organismo. Por exemplo, uma bactria pode ser modificada para superexpressar um gene. Isso no quer dizer que ela seja uma bactria transgnica, mas apenas um OGM, j que no foi necessrio inserir material externo. Sempre que se insere um DNA exgeno em um organismo, este passa a ser transgnico, e este evento tem as suas vantagens e desvantagens.
Implicaes para transformao gentica de plantas

A introduo e integrao estvel de transgenes no interior de genomas de plantas hospedeiras apenas o primeiro passo para uma manipulao de plantas bem sucedida. Os trangenes precisam ser expressos de uma maneira apropriada, tanto espacialmente quanto temporalmente. Alm disso, eles precisam ser devidamente processados e os seus produtos proticos devem ser modificados apropriadamente e sinalizados para o compartimento celular correto. Em ordem, para que esses pr-requisitos sejam atingidos, esforos considerveis so necessrios no desenho do transgene antes que ele seja introduzido na planta.
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2.1-Exemplos de promotores utilizados para dirigir a expresso transgnica 2.1.1-Expresso gnica controlada pela luz Anlises de promotores de genes responsivos luz identificaram as regies requeridas para induo da expresso. Essas sequencias elementos so chamadas de elementos responsivos luz (LREs- ligth responsive elements). A ao dos LREs complexa, pois como nenhum LRE encontrado em todos os genes regulados pela luz e so necessrios dois ou mais LREs para expresso gnica induzida. 2.1.2- Expresso gnica induzida por cido abscsico cido abscsico um hormnio de plantas que controla a expresso de vrios genes. Anlises de promotores demonstraram que pequenos fragmentos derivados de promotores de alguns genes cido-abscsico induzidos so suficientes para conferir a inducibilidade ABA mnima. 2.1.3- Expresso tecido especfica Anlises de promotores de vrios genes expressos em tecidos especficos tm permitido a identificao daqueles elementos responsveis pelos padres de expresso. 2.2- Protenas alvo Protenas tambm podem ser marcadas para determinadas localizaes subcelulares para se obter o efeito desejado. A produo de plantas resistentes a herbicidas, por exemplo, requer que o produto transgnico seja marcado para o cloroplasto o que pode ser feito pela adio do peptdeo de transito de uma protena sinalizada para o cloroplasto. 2.3-Promotores heterlogos Vrios pressupostos so feitos quando se considera o uso de promotores heterlogos para dirigir a expresso transgnica. O primeiro deles que fatores de trans ativao de uma planta ser reconhecido pelas sequencias dos elementos cis dos promotores heterlogos. Em muitos casos isso parece acontecer, mas em alguns casos (particularmente se elementos promotores de monocotiledneas so usads para dirigir a expresso transgnica numa dicotilednea ou vice- versa), mas em alguns casos no. 2.4- Tamanho e Organizao do Genoma O tamanho do genoma nuclear varia entre os organismos. Em clulas eucariticas o contedo haplide varia de 107 a 1011pb.
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Figura 1-Esquema geral da organizao do genoma.
Figura 2-(a) Genoma bacteriano e genoma eucarionte. (b) Proporo de diferentes sequencias no genoma. (c) A maior parte do genoma consiste de transposons. (d) Esquema geral da organizao do genoma.
A relao entre tamanho e complexidade do genoma conhecida como paradoxo do valor de C. Plantas superiores, por exemplo, podem apresentar um similar grau de complexidade e um similar nmero de genes, exibem tamanhos de genomas que variam por vrias ordens de magnitude e muitos anfbios tem o valor de C maiores do que os de
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humanos. Sabe-se tambm que em muitos organismos apenas um pequeno percentual do genoma efetivamente codifica protenas. A composio e organizao do genoma em eucariotos ilustrada nas figuras 1 e 2.
A manipulao gentica da resistncia a herbicidas

Por definio, herbicidas so muito mais txicos s plantas do que para os animais. Portanto, no surpreendente que eles geralmente afetem mais os processos biolgicos especficos das plantas. Os principais grupos de herbicidas podem ser classificados de acordo com seu modo de ao. Eles pertencem a uma vasta gama de diferentes famlias qumicas, com cerca de 15 grandes classes de modo de atividade e a maioria deles possuem apenas um modo de ao. Mas tambm podem diferir quanto a outras propriedades (i) stio de absoro na planta (raiz vs. parte area); (ii) grau de translocao no interior da planta (sistmico vs. contato); (iii) tempo de aplicao (pr-plantio, pr-emergncia, psemergncia ou pr-colheita). Mullineaux (1992) identifica 4 estratgias distintas para engenharia de resistncia a herbicidas. Elas so: 1. Sinalizao da protena alvo=> envolve a supresso do herbicida pela superproduo da protena alvo. Se um herbicida um inibidor especfico de uma enzima particular, a produo de excesso da enzima pode suprimir a inibio. Isso pode ser feito pela integrao de mltiplas cpias do gene e/ou uso de um promotor forte transcricional acentuador para dirigir a expresso do gene. 2. Mutao da protena alvo=> a lgica dessa abordagem encontrar protenas-alvo modificadas que substituem funcionalmente a protena nativa e que resistente a inibio pelo herbicida e incorporar o gene de resistncia da protena alvo no genoma da planta. 3. Detoxificao do herbicida usando um nico gene de uma fonte exterior=> isso significa tornar o herbicida em um composto menos txico ou remov-lo do sistema. 4. Melhoria da detoxificao da planta=>o objetivo aqui melhorar as defesas naturais da planta contra compostos txicos. Isso requer informaes detalhadas das vias endgenas de detoxificao da planta e os mecanismos pelos quais os compostos so reconhecidos e sinalizados para detoxificao pela planta.
A manipulao gentica de resistncia a pragas

Cerca de 13% do rendimento potencial das culturas globais so perdidos para as pragas. Pragas que parasitam plantas vo desde nematides a pssaros e mamferos, sendo que os insetos so os maiores causadores de danos s culturas. A agricultura moderna encontra-se longe de reduzir os danos por pragas e est diante de um problema: alguns caracteres de defesa tm sido perdidos acidentalmente durante o processo de seleo por vrias propriedades ou tambm porque a resistncia a pragas afeta outras caractersticas como o rendimento e qualidade. Embora insetos adultos alimentem-se de plantas, a maior parte dos danos causada pelas larvas. As principais classes de insetos que causam danos s culturas so as ordens Lepidoptera (borboletas e traas), Diptera (moscas e mosquitos), Orthoptera (gafanhotos, grilos), Homoptera (pulges) e Coleoptera (besouros). Existem duas abordagens de estratgias de organismos geneticamente modificados para resistncia a insetos: 1 Bacillus thuringiensis => envolve o uso de genes inseticidas provinientes de bactrias
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para fornecer proteo dos danos pragas. 2 Copy nature=> envolve o potencial para uso de mecanismos endgenos de proteo da planta. O mais conhecido exemplo o uso das endotoxinas dos genes cry do Bacillus thuringiensis. A bactria produz protena cristalizada inseticida (ICP), cujas formas incluem corpos de cristais bipiramidais e cubides durante a esporulao. ICPs so uma das vrias classes de endotoxinas produzidas pela esporulao da bactria, consequentemente, elas foram originalmente classificadas como -endotoxinas, para distingui-las das -, - e endotoxinas.
Figura 3-Mecanismo de ao do Bacillus thuringiensis.
Essas toxinas so altamente especficas contra seus insetos-alvo, mas so incuas a humanos, vertebrados e plantas, alm de serem completamente biodegradveis. Em razo desses fatos, B.thuringiensis torna-se uma alternativa segura no controle de insetos-praga de importncia agrcola, bem como de importantes vetores de doenas humanas. Os genes cry esto localizados em plasmdios e muitos isolados possuem diversos genes cry responsveis pela sntese de diferentes protenas inseticidas, as quais foram classificadas como Cry1 a Cry55, dependendo da especificidade do hospedeiro e do grau de homologia de seus aminocidos. A expresso dos genes cry de B. thuringiensis geralmente ocorre na fase estacionria da clula, acumulando seu produto na clula-me, na forma de uma incluso cristalfera, a qual liberada no meio ao final da esporulao. Essa incluso pode representar cerca de 25% do peso seco de clulas j esporuladas. Apesar de a expresso dos genes cry estar estreitamente relacionada ao evento da esporulao, existem genes cry que se expressam independentemente da esporulao. As plantas Geneticamente modificadas com genes cry O maior avano na utilizao de B. thuringiensis tem sido a transformao de diversas cultivares agrcolas visando a expresso das toxinas Cry. Desde 1996, a importncia
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dessas cultivares transformadas tem crescido comercialmente, levando-as a ocuparem o segundo lugar entre as plantas geneticamente modificadas com maior emprego e distribuio, seguidas das plantas resistentes a herbicidas. Essas cultivares transformadas com genes cry, tambm denominadas plantas-Bt, apresentam diversas vantagens em relao aos formulados de B. thuringiensis, pois no necessitam de pulverizao foliar para o controle de certos insetos, j que a toxina expressa pela prpria planta. Alm disso, diminuem a quantidade de inseticidas qumicos liberados no ambiente, bem como os gases emitidos pelo maquinrio agrcola empregado na sua aplicao. Em 2006, as lavouras de plantas GM somaram 102 milhes de hectares de plantio na escala mundial, dos quais as culturas de plantas-Bt alcanam 19 milhes de hectares (19%). Entre 2005 e 2006, os nmeros indicados representaram um crescimento de 17% do cultivo de plantas resistentes a insetos. O crescimento mais significativo foi o de milho e o de algodo- Bt. Essas plantas produzem uma forma truncada de protenas Cry, a qual se assemelha queles peptdeos txicos ativados aps sua clivagem no intestino dos insetos susceptveis. Assim, a toxina sintetizada em sua forma txica ou solvel, preferencialmente s incluses cristalinas, as quais ainda tero de ser solubilizadas pelo pH alcalino do intestino. Cabe salientar que o milho resistente a insetos, ou milho- Bt, j tem 16 aprovaes comerciais no mundo inteiro. Atualmente, existem 13 espcies de plantas transformadas com genes de B. thuringiensis.
Estratgias para engenharia de tolerncia a estresse

Ano a ano as culturas esto sendo afetadas por uma srie de fatores externos (temperatura, disponibilidade de gua, salinidade, etc...) influindo diretamente em seu crescimento e desenvolvimento.
Figura 4-Os diferentes tipos de estresses externos que afetam o crescimento e desenvolvimento da planta.
A maior parte dos stress abiticos ou biticos leva produo de radicais livres e ROS (reactive oxygen species), originando stress oxidativo. As mudanas climticas associadas ao aquecimento global devero induzir aumentos nos nveis de stress s plantas por isso urgente desenvolver variedades tolerantes ao stress. O sucesso destas iniciativas
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permitiria estender a rea de cultivo a ambientes que no so ideais para o crescimento (e.g., desertos, solos altamente salinos). As necessidades hdricas excedem o fornecimento de gua. Esse dficit de gua pode: inibir a fotossntese; aumentar a concentrao dos ons txicos; remover a proteo hdrica que envolve as macromolculas. Alm disso as plantas podem responder falta de gua acumulando osmoprotetores (que reduzem o potencial osmtico): acares e acares alcolicos (e.g., manitol, sorbitol, pinitol e oligossacridos como a trealose) compostos zwiterinicos (com cargas positivas e negativas; e.g., prolina, glicina e betana). Diferentes tipos de plantas produzem diferentes tipos de osmo protetores e alguns cultivos importantes no tm esta capacidade (e.g., arroz e tabaco). A Engenharia Gentica Isso requer a determinao das vias biossintticas para vrios osmoprotetores. Bem como o isolamento dos genes relevantes. Tambm requer estratgias para o desenvolvimento de vetores que guiem a expresso gnica e o destino das protenas. A integrao no genoma vegetal de osmoprotectores est a ser testada, mas as taxas de sucesso tm variado largamente. Todavia, em alguns casos tem sido conseguido um aumento da tolerncia da planta a vrios tipos de stress associados dficits de gua. At agora foram efetuados poucos testes de tolerncia ao stress no campo. Tambm a tolerncia secura pode melhorar as taxas de sobrevivncia, contudo no garante um aumento dos nveis de produtividade para taxas normais.
O melhoramento de culturas para rendimento e qualidade

A produtividade de um cultivo determinada em funo dos seguintes fatores: radiao solar interceptada; eficincia fotossinttica; ndice de colheita. J a qualidade de um cultivo determinada em funo: da qualidade nutritiva; do sabor; da qualidade de processamento e do tempo de vida. Um dos exemplos o retardamento do amadurecimento de frutos. Os primeiros produtos GM (Geneticamente modificados) comercializados foram os tomates FlavrSavr (1994; Calgene) que apresentavam um retardamento do amadurecimento e por isso um maior tempo de vida nas prateleiras. O amadurecimento dos frutos um processo complexo que envolve a degradao das paredes celulares, e a produo de compostos que afetam a cor, sabor e aroma dos frutos. Este processo induzido pela produo de til-etileno. A modificao gentica neste caso teve como objetivos interferir, ou com a produo de etileno, ou com os processos de resposta ao etileno. As tcnicas de silenciamento gnico, antisense (Calgene; Flavr Savr) e cosupresso (Zeneca), foram usadas nas primeiras variedades de tomate GM para reduzir a atividade do gene que codifica a poligalacturonase (PG), uma enzima que contribui para o relaxamento da parede celular durante o amadurecimento. A atividade da PG foi reduzida durante o amadurecimento, mas outros eventos deste processo continuaram a ocorrer (e.g., acumulao de licopeno cor vermelha). Como resultado: Flavr Savr no teve sucesso comercial e a sua produo foi abandonada um ano aps a sua implementao. Zeneca tomate majoritariamente usado para processamento (elevado contedo slido) para polpas elevada taxa de sucesso durante trs anos, mas abandonada em resposta
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hostilidade antiGM.
Bibliografia
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Organismos geneticamente codificados e a cultura de tecidos

Mariana Crotti Franco
A engenharia gentica vem sendo atravs das tcnicas de transformao gentica e cultura de tecidos, uma tecnologia de grande importncia no aumento dos limites da disponibilidade de genes impostos pela incompatibilidade sexual levando ao aumento da variabilidade gentica das espcies. Assim, um gene responsvel por uma determinada caracterstica de interesse pode ser introduzido atravs da transformao gentica em materiais selecionados, e para aumentar a eficincia deste processo, essencial o conhecimento prvio da capacidade regenerativa in vitro destes materiais.
Cultura de Tecidos vegetais

Histrico A primeira tentativa de se cultivar clulas de tecidos somticos vegetais em soluo nutritiva foi em 1902 por Haberlandt, que no obteve sucesso em seus experimentos por diversos fatores: falta de conhecimento dos fitorreguladores; utilizao de espcies inadequadas; baixa densidade do inculo e utilizao de tecidos maduros como explante. 'Logo aps, em 1904, Hanning cultivou in vitro embries imaturos de crucferas (Raphanus sativus, R. landra, R. caudatus e Colchlearia danica), suplementando o meio de cultivo com sacarose para a germinao dos embries. Knudson, em 1922, por sua vez, cultivou embries de orqudeas, observando a importncia da sacarose para o crescimento e desenvolvimento dos embries in vitro. Laibach foi quem iniciou em 1925 a tcnica de resgate de embries, recuperando hbridos do cruzamento entre Linum austriacum e L. perenne. O primeiro trabalho com meio de cultivo lquido foi estabelecido por White em 1934, sendo este capaz de manter o crescimento de pices radiculares de Lycopersicon esculentum por um perodo ilimitado. White observou a importncia da tiamina para o crescimento de razes in vitro e formulou um meio de cultivo que usado at hoje e que leva seu nome. O primeiro hormnio vegetal descoberto foi a auxina, fato que ocorreu em 1926, sendo descoberto por Went. J a descoberta da cinetina, uma citocinina, se deu por volta da dcada de 50, nos trabalhos de Folke Skoog e colaboradores. O mtodo de isolamento de protoplastos de plantas por meio de enzimas de degradao da parede celular foi desenvolvida por Cocking em 1960. Sendo esta tcnica de extrema importncia capacitando a obteno de hbridos interespecficos e intergenricos, alm de ter aberto um caminho para a engenharia gentica. No Brasil, o Dr. Agesilau Bitancourt, do Instituto Biolgico de SP, foi o pioneiro no uso da tcnica de cultura de tecidos, em 1950. Entre 1975 e 1980 foram criados os laboratrios da Universidade de Campinas, Instituto Agronmico de Campinas e EMBRAPA.
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Definies A cultura de tecidos o nome genrico que se d aos vrios procedimentos de cultivo in vitro de clulas, tecidos e rgos vegetais em um meio nutritivo e em condies asspticas. Esta tcnica se baseia na teoria proposta por Schleiden em 1838 e Schwann em 1839 da totipotncia celular, que considera que as clulas vegetais manifestam em momentos diferentes e sob estmulo apropriado, a potencialidade de iniciar novo indivduo multicelular. Os segmentos de tecido ou rgos vegetais utilizados para iniciar uma cultura in vitro so chamados de explantes, podendo ser um segmento de folha, caule, raiz, endosperma, gros de plen, vulos, etc. Considera-se que todas as clulas vegetais sejam capazes de expressar sua totipotncia, porm como se utilizam no processo in vitro, explantes, que so constitudos de uma mistura de clulas em diferentes estados fisiolgicos, bioqumicos e de desenvolvimento, espera-se a obteno de reaes diversificadas destes explantes, fazendo com que apenas algumas clulas respondam s condies do cultivo in vitro, levando regenerao de um novo indivduo. A cultura de tecidos vem sendo utilizada para diversos objetivos: limpeza clonal por meio de cultura de meristemas; micropropagao de gentipos superiores; conservao de germoplasma in vitro; aumento de variabilidade gentica por meio de variantes somaclonais; obteno de transformantes via engenharia gentica; obteno de haploides; resgate de embries de hbridos interespecficos ou intergenricos, entre outros. Laboratrio de Cultura de Tecidos As instalaes de um laboratrio de cultura de tecidos devem apresentar caractersticas apropriadas, que possibilitem alto nvel de assepsia, alm de temperatura e iluminao controladas visando otimizao das respostas dos materiais cultivados in vitro. As atividades devem ser compartimentalizadas, obtendo dessa forma uma distribuio de salas que podem seguir o seguinte padro: sala de limpeza (descarte de meios, autoclavagens em geral, lavagem de vidrarias), sala de preparo (com bancadas para o preparo de meios de cultivo, solues estoque, etc), sala de transferncia (local com fluxo laminar para a manipulao dos materiais asspticos), sala de cultura (local com temperatura em torno de 27 C e fotoperodo de 16hs luz, onde sero mantidas as culturas in vitro), cmara de nebulizao (para o processo de aclimatizao das plantas) e casa de vegetao. Meios de Cultura Os meios de cultura se baseiam nas exigncias das plantas quanto aos nutrientes minerais, com algumas modificaes para atenderem s necessidades especficas do processo in vitro. Desta forma, as mesmas vias bioqumicas e metablicas bsicas que funcionam nas plantas so conservadas nas clulas cultivadas, porm, alguns processos como fotossntese podem ser inativados pelas condies de cultivo e pelo estado de diferenciao das clulas. O meio de cultura de White (1943) foi por muitos anos utilizado como meio bsico. Em 1962, foi desenvolvido o meio de cultivo MS de Murashige e Skoog, apresentando altos nveis de nitrato, potssio e amnio. Atualmente os meios mais completos e mais utilizados so: White, MS, B5 e WPM.
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1.4.1- Componentes bsicos dos meios de cultura As plantas in vitro apresentam metabolismo heterotrfico, portanto necessitam para o seu desenvolvimento, componentes essenciais, como gua, macro e micronutrientes e carboidrato (fonte de carbono). A gua o elemento de maior abundncia na composio do meio de cultura, devendo apresentar alto nvel de pureza, portanto esta deve ser destilada e deionizada para a eliminao das impurezas e sais minerais. Os macronutrientes utilizados so: nitrognio (na forma de amnio e nitrato), fsforo, potssio, clcio, magnsio, ferro, carbono e enxofre. J os micronutrientes encontrados so: mangans, zinco, boro, cobre, cloro, molibdnio, cobalto e iodo. A fonte de carboidrato mais comumente utilizada a sacarose a 3%(p/v). As vitaminas mais utilizadas so: tiamina, piridoxina, cido nicotnico e glicina. Os meio MS, B5 e WPM apresentam tambm em sua composio o mio-inositol, que um hexitol com grupos OH em todos os seus seis carbonos. O mio-inositol incorporado s molculas de fosfolipdeos que compem a estrutura da membrana plasmtica. Os fitorreguladores so fatores determinantes no desenvolvimento da maioria dos sistemas de cultura de tecidos. Os principais fitorreguladores so: Auxinas: naturais (IAA;IBA) e sintticas (NAA; 2,4-D; 2,4,5-T); Citocininas: naturais (Zeatina; 2ip) e sintticas (BAP; cinetina); Giberelinas; cido Abscsico.
Outros compostos tambm podem ser utilizados para suplementar o meio de cultura como: gua de coco, extrato de malte, extrato de sementes, suco de tomate, sulfato de adenina, carvo ativado, agentes antioxidantes, etc. Os meios slidos necessitam de agentes gelificantes como: gar, gelrite, phytagel, entre outros. O pH ajustado para 5,8 e a esterilizao feita por autoclavagem a 121 C por 15 a 20 minutos. A composio do meio de cultura pode ser alterada dependendo da espcie, gentipo e explantes utilizados. Principais tcnicas da Cultura de Tecidos 1.5.1- Micropropagao A propagao vegetativa in vitro uma das aplicaes mais prticas da cultura de tecidos e aquela de maior impacto. Dentre as formas como a micropropagao pode ser conduzida esto a multiplicao via organognese e multiplicao via embriognese somtica. 1.5.2- Organognese Organognese a formao de rgos in vitro a partir de meristemides, sendo esse processo em geral, estimulado por citocininas. Este processo pode ocorrer de duas formas: direta ou indireta. A organognese direta ocorre sem a formao de calos, ou seja, surge a partir de tecidos que apresentam potencial morfogentico na planta in vivo, mas que, em geral, no se expressa, como por exemplo, tecidos do cmbio vascular, base de pecolo em
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dicotiledneas, base de folhas, segmentos de razes, etc. J a organognese indireta ocorre quando o processo de regenerao de gemas precedido pela formao de calo (Figura 1a). O calo por sua vez, um grupo ou massa de clulas, com crescimento desordenado que pode apresentar certo grau de diferenciao. 1.5.3- Embriognese somtica A embriognese somtica o processo pelo qual clulas haplides ou somticas desenvolvem-se por meio de diferentes estdios embriognicos, dando origem a uma planta, sem que ocorra a fuso de gametas. Na embriognese ocorre a diferenciao de uma estrutura bipolar, constituda de pice caulinar e radicular. A embriognese somtica pode ocorrer tambm como na organognese, de forma direta ou indireta (Figura 1b).
a) b)
Figura 1-a) Organognese indireta a partir de explantes foliares de pinho-manso, b) Embriognese somtica indireta a partir de explantes foliares de caf.
Protoplastos A parede das clulas composta de celulose, hemicelulose e pectina. Sendo as fibras de celulose e hemicelulose que conferem rigidez parede e a pectina mantm juntas as clulas adjacentes. Os protoplastos, por sua vez, so clulas vegetais desprovidas da parede celular. A manipulao dos protoplastos teve incio em 1892, porm no havia naquele momento tcnicas eficientes para o seu isolamento. J em 1960, foram empregadas enzimas pectocelulolticas para a obteno de protoplastos, aumentando assim o rendimento do processo e dando perspectivas para o uso da tcnica. Os protoplastos podem ser utilizados para: produo de plantas transgnicas, obteno de hbridos somticos e produo de mutantes ou variantes somaclonais. 1.6.1- Obteno dos protoplastos: Degradao da parede celular O mtodo mais utilizado a degradao dos componentes da parede com enzimas pectocelulolticas, sendo esta realizada em meio lquido, que deve conter os principais componentes do meio de cultura, pH que favorea a ao enzimtica e presso osmtica tal que d estabilidade aos protoplastos recm-liberados. Os protoplastos podem se romper se houver difuso de gua para o interior das clulas, sendo assim, deve-se regular a presso hidrosttica adicionando acares ao meio.
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Aps a ao enzimtica, os protoplastos passam por uma etapa de purificao em filtros (30 a 80 mm), etapa de centrifugao e enfim, lavagem em soluo salina para a remoo das enzimas residuais da digesto e fragmentos celulares. Para a verificao da viabilidade dos protoplastos isolados so realizados testes com o auxlio de corantes. 1.6.2- Fuso de Protoplastos A fuso de protoplastos uma possvel soluo para as limitaes encontradas em cruzamentos sexuais interespecficos decorrentes das barreiras pr e ps-zigticas. A fuso pode ser realizada atravs do tratamento com polietilenoglicol (PEG) ou por eletrofuso. O objetivo agregar os protoplastos que normalmente se repelem por causa das cargas negativas da membrana plasmtica e induzir a desestabilidade das membranas. Na fuso com PEG, h a necessidade de um meio de fuso com altas concentraes de ctions Ca2+, assim, a soluo salina neutraliza as cargas negativas da membrana plasmtica permitindo que o PEG forme pontes moleculares entre certas protenas da membrana, o que facilita as agregaes dos protoplastos e sua fuso. J no processo de eletrofuso, os protoplastos so submetidos a um campo de corrente alternada de alta frequncia, onde estes se tornam dipolos, com um lado da superfcie celular mais negativo que o outro. Dessa forma, os protoplastos se alinham. A partir desse momento so aplicados pulsos curtos de corrente contnua de alta voltagem, o que gera poros temporrios nas membranas permitindo a fuso. A eletrofuso uma tcnica que comparada com a fuso por PEG permite maior domnio das condies de agregao; uma facilidade maior na manipulao e permite maior reprodutibilidade dos resultados. 1.7- Obteno de Mutantes O objetivo desta tcnica favorecer o aparecimento de clulas com caractersticas diferentes em uma populao homognea, sendo os protoplastos os explantes ideais. A induo de mutao pode ser realizada de duas maneiras: por radiaes (radiaes eletromagnticas: ultravioleta, raios X e raios gama; e radiaes corpusculares: partculas alfa, beta, prtons, nutrons, etc) e atravs de agentes mutagnicos qumicos (ex: antibiticos, bases anlogas s bases nitrogenadas do DNA e substncias alquilantes, etc). Aps a induo, a cultura deve ser transferida para um meio seletivo que favorea o crescimento das clulas mutadas. Outro grande uso dos protoplastos a obteno de plantas transgnicas. A utilizao de protoplastos extremamente vantajosa, pois a planta transgnica obtida no apresenta o fenmeno de quimeras, pois originria de um nico protoplasto transformado.
Transformao gentica
O melhoramento gentico convencional se utiliza da variao natural dentro de diferentes recursos genticos para a melhoria das caractersticas das culturas agronmicas, porm, com o desenvolvimento de sistemas eficientes de transformao e regenerao de plantas, novas possibilidades tem sido criadas. A transformao gentica vem, portanto mostrando grande potencial como
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ferramenta auxiliar em programas de melhoramento gentico por tornar possvel a introduo de genes de interesse agronmico, mantendo-se as caractersticas originais da variedade e evitando a transferncia de caractersticas deletrias, permitindo assim, o encurtamento do tempo para a obteno de uma nova variedade. A transformao gentica pode ser definida como a introduo e integrao de DNA em uma clula hospedeira. O gene a ser transferido para a planta pode ser isolado de outras plantas, ou microrganismos e animais. As tcnicas de transformao gentica vegetal podem ser agrupadas em duas categorias: transformao indireta e direta de genes. Transformao Indireta A transformao indireta aquela em que se utiliza um vetor para intermediar o processo de transformao, como o Agrobacterium tumefaciens e Agrobacterium rhizogenes. A descoberta do Agrobacterium tumefaciens como um vetor teve incio com o estudo da doena conhecida como galha-de-coroa (crown gall), uma doena que se manifesta em um grande nmero de dicotiledneas pelo aparecimento de um tumor ou galha sobre o tecido vegetal ferido e infectado. A apario da galha o resultado de um processo natural de transferncia de genes entre a agrobactria e a clula vegetal. O fragmento de DNA bacteriano que inserido na clula vegetal o T-DNA (Transferred DNA). O T-DNA est presente em um plasmdeo encontrado em todas as linhagens patognicas de A. tumefaciens, denominado plasmdeo Ti (Tumour inducing). O TDNA delimitado por sequncias repetidas de 25 pares de bases, conhecidas como extremidades esquerda (EE) e direita (ED) e contm genes que esto envolvidos na sntese de auxina e citocininas, porm nenhum gene presente no T-DNA exceto os 25 pb de suas extremidades necessrio ao processo de transferncia e integrao do T-DNA, sendo assim, pode-se deletar partes do T-DNA e inserir novas sequncias sem que isso afete o processo de transferncia. O plasmdeo Ti, alm da regio do T-DNA e de suas extremidades, apresenta as seguintes regies: ori (origem de replicao do plasmdeo), inc (regio de incompatibilidade de coexistncia de dois Tis iguais), tra (funo de transferncia conjugativa entre bactrias), vir (regio de virulncia) e opc (catabolismo de opinas) (Figura 2).
Figura 2-Estrutura do plasmdeo Ti.
2.1.1- Etapas da transformao via A. tumefaciens A transformao gentica indireta segue basicamente as seguintes etapas: 1) Retirada
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dos explantes, 2) Imerso dos explantes em soluo com o Agrobacterium, 3) Processo de co-cultivo em meio slido sem a adio de antibitico, onde ocorrer a ligao entre a bactria e a clula vegetal, com transferncia do T-DNA para o genoma vegetal e 4) Inoculao dos explantes em meio especfico, onde haver a induo de brotaes, antibiticos para evitar o desenvolvimento do Agrobacterium e um agente de seleo (antibitico ou herbicida) que impea o desenvolvimento de clulas no transformadas. A durao das etapas ir depender da cultura que se est tentando transformar, do tipo de explante, linhagem de Agrobacterium, etc. Transformao direta Algumas espcies vegetais, incluindo a maioria das monocotiledneas e gimnospermas so pouco susceptveis infeco por Agrobacterium, o que levou a uma busca por outros mtodos de transformao. Deste modo foram desenvolvidos sistemas de transformao sem a utilizao de vetores biolgicos: os mtodos diretos de transformao de genes. Esta transferncia realizada por mtodos fsicos ou qumicos, tendo como objetivo quebrar a barreira da parede celular e da membrana plasmtica para a penetrao do DNA na clula. Os principais e mais eficientes sistemas de transferncia direta de genes em plantas so: polietilenoglicol (PEG), sendo esta tcnica obrigatoriamente utilizada em protoplastos; eletroporao, podendo ser utilizado em clulas intactas, porm a eficincia do uso desta tcnica muito melhor se utilizada em protoplastos e biobalstica. A biobalstica o mtodo de transformao direta mais recente e mais promissora, onde utiliza-se microprojteis cobertos com molculas de DNA que so acelerados a alta velocidade, o que permite a sua penetrao em clulas intactas. Os microprojteis so de ouro ou tungstnio, com dimetro em torno de 1 mm, nos quais so adsorvidas as molculas de DNA. O aparelho usado para acelerar as micropartculas envolvidas pelo DNA pode ter propulso a ar, a plvora, a gs hlio ou a eletricidade. A grande desvantagem desse mtodo que ele necessita de aparelhagem e material relativamente onerosos. Genes Marcadores e Genes Reprteres Os genes marcadores de seleo e os genes reprteres podem ser encontrados em plantas, bactrias ou insetos. Podem ser expressos em plantas, se colocados sob o controle de seqncias regulatrias vegetais ou que nelas se expressem. Portanto esse conjunto de genes deve apresentar: Um promotor que se expresse em plantas; Regio codante do gene reprter ou de seleo; Seqncias de terminao apropriadas para plantas.
Estes genes so ento, introduzidos no genoma das plantas via transformao gentica juntamente com o gene de interesse. Genes Marcadores de seleo: so aqueles que codificam para uma protena com atividade enzimtica, ou para um produto que ir conferir s clulas transformadas da planta, resistncia a um determinado substrato (antibiticos e herbicidas). Seu objetivo permitir que apenas as clulas transformadas se desenvolvam, ou seja, plantas no transformadas
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quando em contato com o meio seletivo morrero. O gene marcador mais utilizado o neo, que codifica para a enzima neomicina fosfotransferase II (NPT II). Ele atua fosforilando o grupo 3-hidroxil da poro aminohexose de antibiticos aminoglicosilados, tornando assim, as plantas que contem esse gene, resistentes esses antibiticos. Genes Reprteres: so aqueles que codificam para uma protena geralmente de atividade enzimtica, cujo produto facilmente detectvel. Estes genes identificam ou marcam clulas transformadas, sem eliminar as clulas no transformadas. O gene reprter mais utilizado atualmente o gene uidA, isolado de Escherichia coli. Este gene codifica para a enzima -glucuronidade (GUS), uma hidrolase que catalisa a clivagem de uma grande variedade de -glucurondios. A presena ou ausncia de GUS pode ser detectada por intermdio da avaliao histoqumica, adicionando-se um substrato cromognico, como o X-Glu (5-bromo-4-cloro-3-indol glucurondio), o qual em presena da enzima forma um precipitado azul. Alm da utilizao de genes marcadores e genes reprteres, so utilizadas tambm tcnicas moleculares para a confirmao dos transformantes. So utilizadas, portanto, tcnicas como PCR com a adio de primers especficos para os genes de interesse, Southern Blot para a confirmao da integrao estvel dos genes nas plantas transgnicas, alm de analisar a complexidade desta integrao e nmero de cpias do transgene no DNA genmico, entre outras tcnicas moleculares.
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Biologia Sinttica
Biologia Sinttica
Andrs Ochoa C. Edgar
A rea de biologia molecular est evoluindo para um novo paradigma tecnolgico em que o objetivo final desenhar novas funes ou manipular e melhorar as funes j conhecidas de microorganismos, plantas e clulas em geral. A histria recente da biologia molecular mostra como o campo tem se desenvolvido rapidamente, desde a descoberta da estrutura do DNA em 1953 at o sequnciamento do genoma humano em 2001. Em 50 anos a biologia molecular passou da descoberta da estrutura molecular do DNA para a leitura, montagem e organizao de 2,91 bilhes de bases. Mais recentemente, em 2010, a capacidade de escrever cdigo gentico em grande escala foi mostrada pelo grupo de Craig Venter, ao conseguirem escrever/sintetizar e montar cdigo de DNA j existente (1,08 milhes de pares de bases) e transplant-lo para outra bactria. Este experimento valida a idia de que um genoma sinttico pode fazer funcionar a maquinaria celular. A expanso da tecnologia de sequenciamento e sntese de DNA tornou-se possvel devido reduo de custos. Em 2000, o custo de sntese era de US$25 e de sequenciamento US$0,25 por base. Em 2010, estes custos caram para US$0,35 para a sntese e US$0,00000317 para o sequenciamento, o que difundiu a utilizao dessas tecnologias. Mesmo com a capacidade tecnolgica para ler e compilar uma grande quantidade de DNA, a escala de projetos ainda pequena e a maioria dos bilogos sintticos no trabalha com mais de dez genes por vez. Assim, h uma oportunidade nica para a expanso da tecnologia de design de circuitos gnicos. A biologia sinttica usa a engenharia de vrios genes para a construo de circuitos de DNA que podem ser programados para controlar o comportamento celular. Este campo emergente rene cientistas de diferentes reas como biologia, fsica, qumica e engenharia que querem entender a vida e construir novas funes biolgicas. Estratgias clssicas de engenharia como padronizao, dissociao, e abstrao tero que levar em conta as caractersticas e a complexidade de dispositivos biolgicos. Uma analogia til para conceituar a engenharia de dispositivos biolgicos mostrar os sistemas vivos como componentes com varias camadas. Na parte basal esto DNA, RNA, protenas e metablitos (incluindo lipdios e carboidratos, aminocidos e nucleotdeos), anlogos camada fsica de transistores, capacitores e resistores usados na engenharia da computao. A prxima camada so os dispositivo, anlogos a reaes bioqumicas que regulam o fluxo de informaes e manipulam processos fsicos, o equivalente das portas lgicas eletrnicas que realizam clculos em um computador. Na camada de mdulo, o bilogo sinttico utiliza uma biblioteca diversificada de dispositivos biolgicos para montar complexas vias que funcionam como circuitos integrados podendo gerar via metablica inteiras. H uma necessidade crescente na biologia sinttica para a criao de peas padro que podem ser usadas como blocos de construo e montadas de maneira confivel. Assim como a compreenso da estrutura mnima, combinao de genes, ou informaes que so necessrias para criar uma funo especfica. Algumas comunidades j comearam a construo de bases de dados de funes biolgicas de livre acesso, que iro permitir a transferncia mais rpida de tecnologia e amplificaro os potenciais benefcios de projetos desenvolvidos por esta rea. Por exemplo, a Fundao Biobricks criou um banco de dados de peas biolgicas estandardizadas que podem ser usado por qualquer pessoa. Esta base
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chamada de Registry of Standard Biological Parts, uma coleo de peas genticas iniciada em 2003 no Instituto de Tecnologia de Massachusetts (MIT), a coleo contm mais de 3400 peas. Isso permite que a comunidade cientfica crie parcerias e sinergias entre pessoas ou organizaes. Dentre os utilizadores destas peas genticas esto includos laboratrios acadmicos, cientistas estabelecidos e as equipes de estudantes que participam de iGEM (The International Genetically Engineered Machine Competition ), que acontece anualmente no MIT. Outro caso de uma ferramenta de livre acesso de sucesso a plataforma chamada Foldit que permite que qualquer pessoa ao redor do mundo participe de um jogo de descoberta de dobramento de protenas. Esta plataforma recentemente conseguiu desvendar a estrutura da M-PMV PR (Protease do retrovrus Mason-Pfizer de macaco), que importante na maturao viral e proliferao, conhecida tambm por ser um dos focos do desenvolvimento de medicamentos anti-retrovirais. Os pesquisadores haviam tentado, sem sucesso por mais de uma dcada, usar a tcnica de estrutura por substituio molecular (MR) usando modelos derivados de homodmeros e estrutura por RMN (ressonncia magntica nuclear) do monmero da protena. Entre as abordagens mais populares usadas na biologia sinttica esto; a computao em organismos biolgicos, a evoluo dirigida e a gerao de aptmeros. A computao biolgica usa diferentes molculas disponveis como so DNA, RNA ou protena para realizar clculos e processamento de dados. Como parte da computao necessrio um input (entrada de informao), um processamento desta informao e um output (sada de informao). Existem diferentes gros de complexidade que podem ser abordados nesta rea, a computao pode ser feita simplesmente com molculas como no caso de um gene reprter que d resposta na presena de um metabolito, ou uma via metablica que gera um produto na presena de um substrato. Nos dois casos o input o metabolito, o processamento feito pela maquinaria celular (transcrio e traduo do gene reprter/ varias reaes metablicas acopladas) e o output o gene reprter ou o produto da via metablica. Uma das funes interessantes para ser recreadas na computao biolgica so as portas lgicas, assim como as portas lgicas construdas com transistores usados nos computadores, estas permitem implementar computaes mais complexas. Por exemplo, permitiria acoplar um sistema de output (gene reprter) a dois inputs dentro da clula (presena de metabolito 1 AND presena de inibidor 1), ou poderia ajudar na criao de circuitos responsivos para mais de um input (presena de metabolito 1 OR presena de metabolito 2). Por outro lado, a evoluo dirigida usada para modificar sistemas (vias metablicas) e molculas j conhecidas, ou partir de bibliotecas de molculas e otimizar suas funes catalticas, no caso das enzimas. Esta tcnica pode ser usada em clulas ( in vivo evolution) ou em molculas (in vitro evolution). Uma dos mtodos mais famosos para realizar in vitro evolution a tcnica de exon shuffling, na qual molculas de DNA que codificam para protenas com a mesma funo, mas filogeneticamente distantes, so clivadas em varias partes e posteriormente reconstrudas usando a tcnica de PCR. Esta reconstruo produz sequencias de DNA produto de combinaes de diferentes espcies, permitindo a gerao de novas molculas que no seriam possveis na evoluo natural. Esta biblioteca de sequencias quimricas colocada em bactrias e enfrentada a diferentes presses biticas ou abiticas, o que permite a triagem da biblioteca para encontrar a funo desejada. Finalmente, a tcnica de seleo de aptmeros (SELEX) permite gerar bibliotecas de nucleotdeos aleatrios e selecionar estes nucleotdeos segundo sua afinidade de ligao por
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um substrato, usando etapas iterativas de seleo in vitro. Estes aptmeros so molculas de RNA ou peptdeos codificados por estas molculas com a capacidade de ligao a uma molcula alvo como por exemplo um outro peptdeo. Podendo ser usadas como sensores, j que tem a capacidade de se ligar em outras molculas ou sendo usados como riboswitches. A biologia sinttica traz um enorme potencial de mercado, sendo que j existem vrios casos de grandes investimentos sendo feitos em diversas aplicaes em potencial. A Amyris Biotechnologies, na Califrnia, est fazendo biocombustveis e avaliada em mais de US$1 bilho. Synthetic Genomics, tambm na Califrnia, tem uma parceria de US$300 milhes com a ExxonMobil para usar microorganismos projetados para tornar a gua potvel, gerar combustveis e produzir vacinas. Codon Devices, em Massachusetts, fornece genes sintticos para empresas que desenvolvem aplicaes da biologia sinttica. Gingko BioWorks, em Massachusetts, concentra-se em engenharia de microorganismos. No Brasil, a Amyris est desenvolvendo uma plataforma de biologia sinttica industrial para fornecer combustveis e produtos qumicos a partir de matrias-primas alternativas ao petrleo, sendo que o foco inicial est na cana-de-acar. A biologia sinttica como mercado em crescimento apresenta pontos-chave que precisam ser abordados a fim de desenvolver novas tecnologias.
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Plantas e Sociedade
Plantas e Sociedade
Adne Abbud Righi Bruna Silvestroni Pimentel Natlia Ravanelli
A alimentao uma maneira de ver o mundo, atravs da qual demonstramos o que somos, de onde viemos e o que pensamos. A alimentao pode ser considerada como o elo entre as vrias dimenses da existncia humana, articulando quatro aspectos da vida em sociedade: o aspecto biolgico, dado que o alimento necessrio manuteno da vida; o aspecto econmico j que o alimento era a base de troca entre povos; o aspecto sciopoltico, pois conforme as populaes tornavam-se mais densas, houve a necessidade de uma organizao social para que todos pudessem conviver e sobreviver e a isto est atrelada a produo de alimento; e o aspecto cultural, uma vez que gira em torno da comida encontros e festividades. O homem d significado ao ato de se alimentar e ao alimento, para cada ocasio um tipo de alimentao e para cada pessoa, dentro da sociedade hierarquizada, um tipo de alimento especfico para sua classe social. Dessa forma, o acesso aos alimentos gera a organizao da sociedade e cria sociedades complexas e os avanos tecnolgicos e cientficos permitiram sustentar populaes cada vez mais numerosas. Concomitantemente a isso, so criadas as diferentes classes sociais e o acesso diferenciado aos alimentos. Tal estratificao social reflete na nutrio, onde pessoas mal nutridas so mais susceptveis s doenas. H, assim, o estabelecimento de novos padres epidemiolgicos, como a varola e a peste negra que acometeram mais pessoas menos abastadas. Em contrapartida desnutrio, atualmente h o problema da obesidade, relacionado a uma alimentao no balanceada. Os alimentos apresentam uma grande diversidade nutricional: alm de gua, os alimentos so compostos por carboidratos, lipdeos, protenas, vitaminas, sais minerais e fibras, que so importantes para a nutrio das nossas clulas. Existem os alimentos energticos, pois liberam energia necessria ao metabolismo, alimentos que so provedores de matria prima para a produo de novas clulas, ditos constitutivos ou plsticos, e os alimentos que auxiliam na regulao do metabolismo. Assim, o problema da ingesto de alimentos de forma desbalanceada, do ponto de vista energtico e nutricional, acarreta no problema da obesidade, tanto em crianas, jovens e/ou adultos. Associado a isso h a baixa prtica de atividades fsicas regulares, e estilo de vida sedentrio. Tal problema ocorre principalmente em pases da Amrica, Europa e Oceania. Dentre os pases de primeiro mundo, nos Estados Unidos da Amrica 30 a 40% da populao obesa. Canad e Austrlia tambm apresentam altos ndices de obesidade, entre 20 a 30 % da populao. Em alguns pases Europeus 10 a 20% da populao apresenta problemas de obesidade. E, dentre os pases em desenvolvimento, o Brasil o nico que j apresenta problemas de obesidade na populao (10 a 20%), assemelhando-se aos ndices de pases mais ricos. Na dieta humana, os principais alimentos provm de animais ou de plantas. No entanto, com maior ou menor freqncia, costuma-se incluir alguns alimentos de outros grupos de organismos. O iogurte e produtos anlogos so produzidos a partir do crescimento de bactrias chamadas lactobacilos. Estes microrganismos ocorrem naturalmente no leite, porm o
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crescimento acima de um dado limite acarreta alteraes bioqumicas em sua composio, principalmente ao acmulo do cido lctico, proveniente da atividade fermentativa das bactrias. Outro grupo de organismos bastante utilizado para fins alimentcios das algas. Por exemplo, a cianobactria Spirulina, que antigamente era cultivada em lagos e lagoas pelos astecas. Essa alga usada no preparo de aditivo alimentcio, que tem sido proposto para atenuar os problemas de subnutrio de povos de pases em desenvolvimento. A Spirulina apresenta alto contedo proteico, em virtude da sua condio de fixadora de nitrognio atmosfrico. Vrias espcies de algas eucariticas so usadas por diferentes povos em sua dieta. Em particular no Japo muito comum o uso de algas como alimento. Entre as Phaeophyta (algas pardas) inclui-se o gnero Laminaria, popularmente conhecida pelos japoneses como kombu. Outra alga parda muito apreciada representante do gnero Undaria, a wakame. Entre as Rhodophyta (algas vermelhas) a mais popular do gnero Porphyra, o nori, amplamente empregado no preparo do sushi. Alm disso, complementos alimentares baseados em algas so cada vez mais comuns no comrcio de produtos alternativos ou ditos naturais. Alm do alto contedo protico, as algas so fonte de vitaminas e minerais, sobretudo o iodo e o potssio, importantes para o bom funcionamento do organismo de homens e animais. Com relao aos fungos, dos quatro grupos em que se dividem quitridriomicetos, zigomicetos, ascomicetos e basidiomicetos, apenas os dois ltimos apresentam representantes comestveis. Os gneros de ascomicetos Morchella e Tuber tm como representantes as morcelas e as trufas, respectivamente. A classe dos basidiomicetos contm a maioria dos fungos consumidos, sendo que a parte utilizada corresponde ao corpo de frutificao. O cogumelo mais comum no mercado o Agaricus bisporus, popularmente conhecido como champignon. J na culinria oriental bastante utilizado o Lentinus edodes (shiitake) e o Pleurotus ostreatus (shimeji). Apesar de outros grupos de organismos contriburem para a nutrio humana e animal, so as plantas que fornecem a maior parte da energia necessria manuteno da vida. Dentre elas as angiospermas constituem o grupo mais numeroso de plantas, com mais de 250 mil espcies descritas! Destas, apenas 150 espcies so produzidas em larga escala, porm, 80% das calorias que consumimos so provenientes de menos de dez espcies. As plantas, a partir do processo de fotossntese, produzem uma srie de compostos essenciais para a manuteno e reproduo da espcie. Atravs dos diversos processos metablicos envolvidos so formados acares, substncias de reservas (amidos, protenas e/ou leos), fibras, resinas e metablitos secundrios importantes na proteo das plantas e nas diversas interaes com o meio em que vive. Alm de gua, os alimentos so compostos basicamente das seguintes classes de substncias: carboidratos, lipdeos, protenas, vitaminas, sais minerais e fibras. A energia necessria para o trabalho celular pode ser obtida dos carboidratos, dos lipdeos e das protenas. Para a construo de novas clulas os lipdeos, as protenas, a gua e os sais minerais so importantes fontes de matria prima. Alm disso, as protenas, as vitaminas e os sais minerais tambm so substncias reguladoras do metabolismo celular. As fibras, embora no digeridas e absorvidas, so importante na alimentao humana, pois contribuem para aumentar o bolo alimentar, bem como estimular o peristaltismo do sistema digestrio.
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Plantas e Sociedade
Grande parte dos alimentos que utilizamos apresenta todas as classes de substncias descritas acima, porm com predominncia de uma ou outra categoria. Atualmente, estima-se que as necessidades energticas dirias de uma pessoa adulta esteja ao redor de 2400 kcal. H uma variedade enorme de alimentos de origem animal e vegetal capazes de satisfazer tal demanda. Entretanto, a combinao de diferentes alimentos a nica possibilidade que existe para garantir o suprimento de todos os nutrientes em quantidade suficiente para o bom desempenho do organismo. Vale lembrar que h oito aminocidos no sintetizados pelo organismo humano, ditos essenciais, obtidos exclusivamente da dieta. So eles a fenilalanina, a isoleucina, a leucina, a lisina, a metionina, a treonina, o triptofano e a valina. Alimentos que apresentam protenas com um balano desses aminocidos semelhante ao das nossas protenas so dieteticamente superiores. Em geral considera-se que a protena ideal a do ovo de galinha. As principais representantes de plantas proticas so: a soja ( Glycine max), o feijo (Phaseolus vulgaris), o amendoim (Arachis hypogaea), a lentilha (Lens culinaris), a ervilha (Pisum sativum), o gro-de-bico (Cicer arietinum), a alfafa (Medicago sativa) e os trevos (Trifolium spp.). So plantas com elevado teor de nitrognio, enxofre e fsforo em menores propores. As protenas so o principal constituinte do protoplasma, mas armazenadas nas sementes. Estas sementes apresentam os aminocidos essenciais (tabela 1) e devem ser ingeridas associadas a, geralmente, cereais para que sejam adquiridas quantidades suficientes para o pleno aproveitamento. A combinao de um cereal com uma leguminosa resulta numa mistura de protenas com uma composio mdia de aminocidos essenciais muito mais prxima da protena padro (ovo de galinha) que cada uma das protenas isoladamente. Entre os europeus comum a associao do trigo com ervilhas, lentilhas ou gro-de-bico. Os orientais combinam arroz com soja. Na Amrica do Sul e Central, fazem-se combinaes entre arroz e feijo ou milho e feijo. Tabela 1: Proporo de aminocidos essenciais em diferentes grupos de alimentos.
Os cereais representam os recursos mais extensamente explorados, so eles o arroz (Oriza sativa), a aveia (Avena sativa), o centeio (Hordeum vulgare), a cevada (Secale
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3. Recursos
cereale), o milho (Zea mays), o sorgo (Sorghum bicolor) e o trigo (Triticum aestivum). No entanto, os mais importantes em termos de produo mundial so o trigo, o arroz e o milho. Tais alimentos esto relacionados ao fornecimento de energia devido ao alto teor de amido. Outras fontes amilceas so plantas que apresentam rgos subterrneos espessados sob a forma de razes (mandioca - Manihot esculenta, batata-doce Ipomoea batatas), tubrculos (batata Solanum tuberosum, inhame Dioscorea alata, car D. bulbifera.) e bulbos (taioba Colocasia esculenta) e tambm infrutecncias (fruta-po Artocarpus altilis, jaca A. heterophyllus). Finalmente, as plantas oleaginosas produzem misturas de substncias chamadas leos fixos, isso dado que no so volteis como os leos essenciais. Os leos fixos so encontrados principalmente em sementes (de legumes, cereais e palmeiras) e tambm em alguns frutos (oliva e abacate). Nota-se, portanto, a grande importncia como reserva energtica para o embrio durante a germinao. Os leos fixos so misturas de triglicerdeos, isto , so formados por trs resduos de cidos graxos que esterificam uma molcula de glicerol (Figura 1). Tais substncias so altamente energticas, fornecem o dobro de energia por grama quando comparados a carboidratos e protenas.
Figura 1: Estrutura do triglicerdeo.
Alm da importncia nutricional, os leos so fundamentais para diversas atividades econmicas: na indstria de tintas e vernizes, na produo de xampus e sabes, na produo de lubrificantes e na indstria farmacutica. A diversidade de aplicao dos leos, deve-se, sobretudo, s propriedades fsicas e qumicas, o que est atrelada composio em cidos graxos. Uma das propriedades fsicas mais importantes dos leos o seu ponto de fuso. Os glicerdeos que se apresentam slidos temperatura ambiente so comumente designados por gorduras. J aqueles que se apresentam no estado lquido so ditos leos, tais englobam a grande maioria dos leos vegetais. importante salientar que o ponto de fuso dos leos determinado por duas caractersticas estruturais dos cidos graxos: o tamanho da cadeia carbnica (quanto maior a cadeia mais alto o ponto de fuso) e o grau de insaturao (quanto maior o grau de insaturao menor o ponto de fuso). Essas caractersticas estruturais dos cidos graxos tambm determinam a destinao econmica dos leos. A indstria de tintas classifica os leos em trs categorias (leos secantes, semi-secantes e no secantes), de acordo com a sua eficincia como secantes, ou seja, relacionado ao nmero de insaturaes presentes nas molculas de cidos graxos. Dentre os leos de grande interesse econmico pode-se citar como leos secantes: o linho (Linum usitatissimum) e a soja (Glycine max); leos semi-secantes: milho (Zea mays), girassol (Helianthus annuus) e gergelim (Sesamum indicum); leos no-secantes: oliva (Olea europaea), mamona (Ricinus communis) e amendoim (Arachis hypogaea). Dentre as gorduras vegetais tm-se o coco ( Cocos nucifera),
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Plantas e Sociedade
o babau (Orbignya speciosa), o dend (Elaeis guineensis) e a manteiga de cacau (Theobroma cacao).
Alimentao e Sade
A alimentao deve ser moderada, varivel e equilibrada, contendo alimentos de todos os grupos (cereais, massas, legumes, hortalias, frutas, carnes, laticnios e lipdeos). O consumo de alimentos considerando-se, principalmente, evidncias de efeitos benficos para a sade e o bem-estar, pode estar relacionado aos fitonutrientes. Ou seja, nutrientes presentes em alimentos vegetais, porm que no so classificados como nutrientes tradicionais (carboidratos, protenas, lipdeos, vitaminas e sais minerais). Tais fitonutrientes so oriundos do metabolismo secundrio das plantas e responsveis por inmeros benefcios sade humana, por exemplo, os varredores de radicais livres (polifenis, carotenides, tocoferol e cido ascrbico), os glicosinolatos presentes nas Brassicaceae (brcolis, couve, repolho) auxiliam na preveno de tumores, dentre inmeros outros compostos. Muitas plantas utilizadas na alimentao tambm so reconhecidas por terem ao farmacolgica, tanto de ordem medicinal quanto txica. O ch verde ( Camellia sinensis), por exemplo, amplamente consumido pela populao mundial como bebida. Alguns estudos atribuem diversos benefcios advindos de seu consumo regular, tal como a preveno de variadas formas de cncer e de doenas cardiovasculares. Por outro lado, estudos de mesma natureza atestam uma relao inversa, onde o consumo da bebida se correlaciona positivamente com a ocorrncia de cncer de esfago, estmago e intestino. J o caf, por muitos anos considerado tanto pela cincia quanto pela cultura popular uma bebida de propriedades medicinais inferiores s do ch, atualmente considerado uma excepcional fonte de cido clorognico, um poderoso antioxidante. Da frao oleosa extrada das sementes do caf, tambm so obtidos dois diterpenos, cafestol e caveol, que possuem atividade anticarcinognica e hepatoprotetora. O consumo destes diterpenos, que ocorre quando o caf preparado sem filtrar (caf fervido ou turco), est relacionado, no entanto, com aumento do colesterol sanguneo de baixa densidade (LDL), que frequentemente associado s doenas cardacas. A partir dos exemplos citados acima, possvel perceber que uma planta pode apresentar ao mesmo tempo usos alimentares, efeitos teraputicos e deletrios. Assim sendo, de extrema importncia que as propriedades das plantas utilizadas, seja na alimentao ou para fins medicinais, sejam bem reconhecidas, de forma a diminuir o risco de intoxicaes.
Propriedades Farmacolgicas das Plantas

Os conhecimentos a cerca da ao das plantas sobre o corpo humano so muito antigos, provavelmente antecedendo o estgio de civilizao. H milnios, a botnica e a medicina eram consideradas uma mesma rea do conhecimento, e as informaes sobre a atividade farmacolgica de uma planta eram um misto de observaes e supersties. Acreditava-se que as plantas tinham sido criadas por Deus para servir ao homem e que elas apresentavam sinais em sua morfologia que indicavam as suas utilidades. As sementes de Cardiospermum halicacabum, por exemplo, apresentam impressa no tegumento uma figura muito semelhante a um corao, o que levava as pessoas a acreditarem que a planta serviria para tratar males cardacos. Atualmente, sabe-se que a ao de uma planta
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est relacionada com o seu perfil qumico, ou seja, com as substncias que ela produz. Durante a idade mdia, algumas plantas da famlia Solanaceae, ricas em alcaloides tropnicos, eram conhecidas por sua utilizao em rituais de feitiaria. Estes alcaloides, em altas doses, possuem efeito estimulante e em seguida depressor e esto ligados tambm a efeitos alucingenos. O mito das bruxas que voavam em cima de vassouras provm do fato de as mulheres consideradas feiticeiras durante a idade mdia prepararem unguento a partir destas ervas, e impregnarem o cabo da vassoura. Em seguida colocavam-na entre as pernas e o unguento, em contato com a mucosa vaginal e anal, era rapidamente absorvido pelo organismo causando alucinaes e a sensao de voo. Outro grupo de plantas muito reconhecido pelos seus efeitos farmacolgicos a famlia Papaveraceae, qual pertence Papaver somniferum, popularmente conhecida como papoula. A evidncia mais antiga do cultivo desta planta data de 5.000 anos e foi deixada pelos Sumrios, que a descreviam como planta da alegria. A partir da papoula extrado o pio, droga de efeito sedativo que era amplamente utilizada pelos povos antigos, egpcios, gregos e romanos. A partir da papoula, em 1806, foi isolado o primeiro frmaco de origem vegetal, a morfina, um alcaloide utilizado at hoje graas a sua forte ao anestsica. A descoberta da morfina pode ser considerada como o fato mais importante do incio do sculo XIX. O pesquisador alemo Friecerich Sertner isolou a partir do pio uma substncia cristalina e insolvel em gua que se mostrou farmacologicamente ativa quando administrada a animais. A esta substncia deu o nome de morphium em homenagem a Morpheus, deus grego do sono. Esta descoberta possibilitou a compreenso sobre os mecanismos fisiolgicos da dor, e inspirou o desenvolvimento de muitas drogas anlogas a morfina, levando a um grande avano na farmacologia. A grande exploso acerca do conhecimento da composio qumica de plantas veio na segunda metade do sculo XX, devido aos enormes progressos na rea da qumica de produtos naturais. Paralelamente, a farmacologia tambm apresentava avanos. Com a verificao laboratorial dos efeitos dos frmacos, o conhecimento das plantas medicinais foi consolidado e aceito pela comunidade cientfica mundial.
Plantas Medicinais e Princpios Ativos

Os princpios ativos so as substncias responsveis pela ao teraputica das plantas medicinais, pertencendo ao grupo conhecido como metablitos secundrios. Esto distribudos nos diferentes rgos das plantas, podendo estar presentes em todas as partes, ou restritos a rgos especficos. So classificados de acordo com a classe de substncias aos quais pertencem: cidos fenlicos, alcaloides, flavonoides, glicosdeos cardioativos, terpenoides entre outras. Dentre os principais princpios ativos de origem vegetal podemos destacar os alcaloides, substncias que frequentemente exercem efeitos sobre o sistema nervoso de mamferos, atuando como estimulantes ou depressores. Um exemplo bastante conhecido a atropina, um alcaloide tropnico obtido a partir da planta Atropa belladonna, conhecido pela sua ao dilatadora das pupilas, mas tambm pode ser utilizado em casos agudos de bradicardia (baixa frequencia de batimentos cardacos). A codena e a morfina, substncias provenientes da papoula (Papaver somniferum, Papaveracea), so alcaloides opiides utilizados no tratamento da dor. A pavaverina, tambm proveniente da papoula, o princpio
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ativo do medicamento Atroveran, utilizado no tratamento de clicas. Outro exemplo de alcaloide tropnico utilizado terapeuticamente a escopolamina, oriunda de espcies de Scopolia (Solanaceae), que faz parte da composio do medicamento Buscopan , tambm utilizado para aliviar clicas. A vincristina e a vimblastina, alcaloides presentes em Catharantus roseus (Apocinaceae), planta nativa e endmica de Madagascar, so utilizadas em diversos tipos de tratamentos quimioterpicos, especialmente contra leucemia. Outro alcaloide importante a pilocarpina, oriunda de Pilocarpus jaborandii (Rutaceae), utilizada em tratamentos contra o glaucoma e no tratamento da xerostomia (secura da boca), muito recorrente em pacientes que fazem quimioterapia. Outras classes de metablitos secundrios que desempenham importante papel na produo de frmacos so os glicosdeos cardioativos e os leos volteis. Dentre os glicosdeos cardioativos destacam-se a digoxina e a digitoxina, substncias purificadas a partir da dedaleira (Digitalis lanata, Plantaginaceae), utilizada no tratamento de diversos tipos de doenas cardacas. Dentre os leos volteis com propriedades medicinais, a cnfora, substncia predominate no leo voltil de Cinnamomum camphora (Lauraceae), possui ao anti-sptica e anti-pruriginosa. O eugenol, principal componente do leo de Eugenia caryophyllus (Myrtaceae), possui efeito antissptico e levemente anestsico. Muitos frmacos so semi sintetizados a partir de substncias de origem natural, dentre as quais o cido acetilsaliclico um exemplo clssico. Desde 400 a.P. sabe-se que a casca do salgueiro (Salix alba, Salicaceae) possui propriedades antipirticas e analgsicas. O frmaco, cido saliclico, foi isolado em 1828. Em 1897, o laboratrio alemo Bayer conjugou o cido saliclico com um grupo acetil, criando o cido acetilsaliclico (AAS), menos txico para o organismo. O cido acetilsaliclico foi o primeiro frmaco sintetizado na histria da farmcia. Outro exemplo representado pelos trabalhos de Rusell E. Marker sobre a sntese de progesterona a partir da diosgenina, saponina isolada de Dioscorea macrostachya (Dioscoreaceae). Estes trabalhos foram cruciais para a descoberta da plula contraceptiva feminina. Vale lembrar tambm do Paclitaxel (Taxol), frmaco licenciado recentemente para o tratamento de cncer. A substncia ativa, isolada de Taxus brevifolia (Taxaceae) pouco abundante na natureza. No entanto sua sntese possvel a partir da desacetil 10-baccatina III, abundante em T. baccata. O Paclitaxel demonstrou atividade antitumoral e j est aprovado para uso clnico para o tratamento de cncer de pulmo, cncer de mama e de ovrio, assim como o sarcoma de Kaposi. Diversos derivados terpnicos de Artemisia annua (Asteraceae) tm sido utilizados na sntese de artemisina, um importante sesquiterpeno com propriedades antimalricas. Esta planta j utilizada na medicina chinesa desde 200 a.P. Alm de serem utilizadas para a produo de medicamentos, as plantas tambm fazem parte da medicina popular, e um grande nmero de pessoas faz uso de chs, tinturas, extratos e cpsulas de origem vegetal, que muitas vezes so comercializados com pouco controle. O apelo para o consumo de produtos de origem natural so cada dia maiores, e muitos pensam que medicamentos a base de plantas (fitoterpicos e fitofrmacos) no apresentam riscos a sade e podem ser utilizados indiscriminadamente. Mas da mesma forma que algumas plantas possuem substncias que podem ser benficas aos seres humanos e a outros animais, muitas plantas tem potencial txico.
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3. Recursos
Inclusive, a mesma planta que possui efeito benfico pode apresentar toxicidade, dependendo da dosagem ou da maneira que utilizada.
Plantas Txicas
Dentre os compostos vegetais potencialmente txicos destacam-se os alcaloides pirrolizidnicos, os glicosdeos cianognicos e alguns leos volteis. Atualmente j se conhecem treze famlias de plantas que apresentam elevados ndices de alcaloides pirrolizidnicos (AP). Tais compostos so hepatotxicos, carcinognicos, teratognicos, genotxicos e por vezes pneumotxicos. Estima-se que 3% das plantas com flores apresentam esses alcaloides, principalmente gneros de plantas das famlias Asteraceae, Fabaceae e Boraginaceae. Nos anos de 1920s problemas de fgado se disseminaram na frica do Sul em decorrncia do consumo de pes contaminados com sementes de espcies de Senecio. Na ex-USSR, h 60 anos doenas de fgado acometeram a populao em funo do consumo de pes com Heliotropium lasiocarpum (Boraginaceae). Muitos outros casos de intoxicao tambm foram reportados na sia, todos derivados da contaminao de cereais por APs. Alm dos alimentos advindos diretamente de plantas, o leite e o mel tambm podem ser outra fonte de exposio humana aos APs. A contaminao pode ocorrer em gados de leite que se alimentam de plantas com altos teores de APs e produzem leite contaminado. Da mesma forma, a produo do mel pelas abelhas pode ser contaminada por plen de espcies ricas em APs. Um exemplo muito conhecido de planta com propriedades medicinais e txicas ao mesmo tempo o confrei (Symphytum officinale, Boraginaceae), que na dcada de 1980 era muito consumido in natura ou na forma de chs, por conta de propriedades teraputicas que lhe eram atribudas. O confrei tem ao medicinal, graas presena de alantona, um composto nitrogenado de comprovada ao cicatrizante. No entanto, a planta contm APs que causam leses no fgado, podendo levar doena oclusiva. Outro exemplo clssico de planta txica a gloriosa, Gloriosa superba, planta ornamental largamente utilizada em jardins. Esta espcie apresenta o alcaloide colchicina, que se ingerido inibe a mitose das clulas, causa vmitos e diarreia, desidratao, hipotenso e perda total de pelos. Outras plantas ornamentais com alta toxicidade so a espirradeira ( Nerium oleander) e a comigo-ningum-pode (Dieffenbachia picta). A primeira apresenta glicosdio cardioativo, oleandrina, que provoca problemas gastrointestinais e distrbios cardacos. E a segunda apresenta uma protena com atividade enzimtica, dumbcana, que provoca a lise das membranas celulares. Esta ruptura promove a liberao de histamina, serotonina e outras aminas que desencadeiam um intenso processo alrgico. A azaleia, Rhododendron sp., tambm tem propriedades txicas conferidas pela andromedotoxina, um terpenoide que afeta a fisiologia do corao e da respirao. Os glicosdios cianognicos tambm so de grande preocupao para a sade humana pois causam a asfixia celular pela liberao de cianidreto. A mandioca, Manihot esculenta, que apresenta extrema importncia econmica, contem linamarina, um glicosdio cianognico em suas razes. Esta substncia se ingerida pode causar asfixia celular e morte, assim a perfeita preparao deste alimento essencial para a eliminao deste composto. Por fim, a mamona (Ricinus communis) cuja propriedade medicinal bastante conhecida pelo leo de rcino com efeito purgativo, tambm bastante txica! Esta planta
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contm ricina, uma protena capaz de aglutinar hemcias que pode causar tromboses e embolias, mas no est presente no leo. Assim importante ressaltar a necessidade de estudos fitoqumicos para a elucidao da qumica das plantas, seu potencial medicinal, nutracutico e txico. Alm de discernir entre as formas de obteno e melhor aproveitamento de cada propriedade.
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Ficocolides: Polissacardeos das algas marinhas

Emmanuelle S. Costa Janana P. Santos
As algas compreendem um grupo de organismos, os quais apresentam poucas caractersticas em comum, em especial o fato de serem predominantemente aquticos e desprovidos de um tecido constitudo de clulas estreis envolvendo os rgos de reproduo e por apresentarem um sistema diferenciado para conduo de gua. Juntamente com um pequeno grupo de angiospermas aquticas so consideradas produtores primrios que sustentam a vida nos mares, oceanos entre outros diferentes ambientes hdricos, desempenhando um papel ecolgico fundamental na manuteno destes ecossistemas. So encontradas nos mais diversos ambientes, podendo ser identificadas formas terrestres, aquticas, assim como formas que vivem em associaes com outros organismos, a exemplo dos lquens que representam uma associao dos fungos com as algas. Dentre as diversas formas, as mais comuns so as de ambiente aqutico, podendo ser rios, lagoas, mangues e mares. Nestes ambientes podem fazer parte do bentos (definido como o conjunto de indivduos que vivem fixos ao substrato) ou plncton ( conjunto de indivduos que vivem em suspenso na coluna de gua devido a sua pequena ou nula capacidade de locomoo). A Ficologia a cincia que estuda as algas (phycos, do grego = alga), assim como a parte da biologia que engloba a maior diversidade de organismos (incluindo procariontes e eucariontes). Inicialmente a classificao das algas feita pelo Harvey em 1836 foi baseada na sua pigmentao, o que ainda utilizada at os dias atuais. No entanto sabido que devido a presena de outros pigmentos fotossintetizantes a exemplo dos carotenides e xantofilas, esse critrio muitas vezes pode induzir ao erro, confundindo o grupo quando separados com base na sua composio pigmentar. Evolutivamente as algas no apresentam relaes claras bem definidas, devido a carncia de registros fsseis para boa parte dos grupos, a grande plasticidade fenotpica encontrada e a morfologia simples. Em busca de se resolver os problemas taxonmicos apresentados pelas algas, uma srie de pesquisas foram desenvolvidas na busca de informaes mais detalhadas e precisas sobre o grupo. Dentre esses avanos, foram obtidos imagens detalhadas de ultraestruturas das clulas, com o uso da microscopia eletrnica, assim como informaes baseadas nas sequncias moleculares com o uso de ferramentas moleculares essenciais para se estabelecer as hipteses evolutivas das linhagens de algas, mostrando que esses organismos formam um grupo artificial incluindo txons mais proximamente relacionados com organismos no fotossintetizantes do que com outras algas. So organismos que desempenham um papel econmico bastante relevante, dada a produo de polissacardeos presentes em suas paredes, os quais so utilizados com diversas finalidades, desde alimentao, na indstria farmacutica, assim como fertilizantes. Nos pases orientais o uso das algas no consumo direto pelo homem uma prtica bastante antiga, com evidncias de seu uso no Japo h mais de 10.000 anos. E hoje em dia esse uso bastante difundido, sendo alguns gneros mais amplamente utilizados, a exemplo: Porphyra, Eucheuma, Laminaria e Undaria, oriundas de cultivo e bancos naturais. A utilizao das algas como fonte de alimentao, levou ao desenvolvimento de pesquisas acerca de sua composio qumica, comprovando que as mesmas possuem um
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3. Recursos
contedo significativo de protenas, vitaminas e sais minerais. Possuem uma grande quantidade de polissacardeos que de modo geral no so digeridas pelos seres humanos. No entanto comprovado que o consumo regular das algas proporcionam uma maior capacidade de digestibilidade. As algas marinhas apresentam um contedo muito rico em protenas, vitaminas, sais minerais e polissacardeos, que so amplamente utilizados nas indtrias farmacuticas, alimentcia e biotecnolgica. Os ficocoldes so polissacardeos coloidais presentes nas paredes das algas vermelhas ou pardas, que tem a propriedade de formar gis em soluo aquosa. So classificados em trs tipos principais: alginato, gar e carragenana. De acordo com suas propriedades fsicas, esses polissacardeos tero diferentes tipos de emprego. O uso das algas marinhas como fonte de ficocolides data de 1968, quando as propriedades emulsificantes e estabilizantes do gar extrado com gua quente de uma alga vermelha, foram descobertas no Japo. Posteriormente outros extratos foram obtidos das algas pardas, em escala comercial devido a sua ao gelificante e em seguida vendidos. No entanto, foi a partir da Segunda Guerra Mundial que o uso industrial dos extratos de algas marinhas se expandiu largamente, sendo algumas vezes limitados devido a disponibilidade de matria prima. Os ficocolides so substncias mucilaginosas extradas das paredes de algas vermelhas e pardas. Esse interesse comercial dado devido s propriedades gelificantes, estabilizantes e emulsificantes dessas substncias gelatinosas. So classificados em trs tipos principais: alginato, gar e carragenana. Alginato um termo usado para os sais de cido algnico, encontrados nas paredes celulares das algas pardas. So polmeros formados por cadeias longas dos cidos Lglururnico e D-manurnico, podendo variar de acordo com a espcie (Figura 1). Alginatos na forma de sdio, clcio, potssio ou magnsio solvel em solues aquosa de pH acima de 3,5. Dessa forma os alginatos no so necessariamente os mesmos, podendo ser encontrado um alginato com alta viscosidade quando dissolvido em gua (exemplo: Macrocystis) ou baixa viscosidade (exemplo: Sargassum). Seu uso baseado nas trs principais propriedades presentes: emulsificante, gelificante e estabilizante.
Figura 1-Esquema da estrutura qumica do alginato.
A importncia dos alginatos como insumo para as indstrias alimentcia, farmacutica e qumica, devido as suas propriedades hidrocolides, ou seja, sua capacidade de hidratar-se em gua quente ou fria para formar solues viscosas, disperses ou gis. Os alginatos so nicos quanto as suas propriedades espessantes, estabilizantes, gelificantes e formadoras de pelculas, resultando em uma ampla gama de aplicaes. Os alginatos so utilizados em indstrias txtil, devido alta qualidade do gel
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produzido e por no reagirem com os corantes, dessa forma eles so os melhores espessantes para tais corantes, tornando-se mais caros do que os demais encontrados no mercado. So tambm utilizados na indstria alimentcia, devido sua capacidade estabilizante, reduzindo a formao de cristais de gelo mesmo quando submetidos temperaturas muito baixas, alm de proporcionarem o aspecto macio. Outra aplicao importante se d na indstria de cervejas por formar uma pelcula no permitindo a formao de bolhas, mesmo diante da agitao do lquido. Os principais gneros de macroalgas utilizados para produo de alginato so: Macrocystis, Laminaria e Ascophyllum, todos caractersticos de guas frias. O gnero Macrocystis coletado de populaes naturais na costa oeste dos EUA, enquanto o gnero Laminaria vem sendo cultivado intensamente na China, onde a produo ultrapassou 200.000 t de algas secas por ano. Uma significante parcela desse material utilizado nas indstrias de alginato da prpria China. Aproximadamente 27.000 t de alginatos com valores de US$ 230 milhes foram comercializados em 1990. A produo comercial de alginatos teve incio em 1929 e, em 1934, em escala limitada na Gr Bretanha e, mais tarde, durante a Segunda Guerra Mundial, surgiu a indstria de alginatos na Noruega, Frana e Japo. Carragenanas so polissacardeos extrados da parede celular das algas vermelhas, diferindo em sua composio qumica e propriedades. As carragenanas de interesse comercial so denomindas iota (Figura 2), Kappa (Figura 3) e lambda (Figura 4). Seu uso est relacionado com a sua habilidade em formar solues espessas ou gis. Iota carragenana produz um gel elstico formado com sais de clcio, enquanto Kappa carragenana produz um gel rgido, forte com sais de potssio. Por outro lado lambda carragenana no forma gis, mas importante por fornecer uma textura cremosa. conhecido com o nome comercial de musgo da Irlanda.
Figura 2: Esquema da estrutura qumica do iota carragenana.
Figura 3: Esquema da estrutura qumica do kappa carragenana.
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Figura 4: Esquema da estrutura qumica do lambda carragenana.
As galactanas (isto , polmeros de galactose) diferenciam-se do gar pelo seu carcter fracamente inico, consequncia do elevado teor em radicais OSO3. As galactanas diferem tambm dos alginatos, pois estes ltimos devem o seu carcter inico aos grupos carboxlicos COO-. A denominao carragenana provm da palavra carraigeen que significa alga em glico, ou do nome carraghen, distrito irlands onde, desde h cinco sculos se colhe a alga vermelha Chondrus crispus (devido sua caracterstica particular que lhe permite coagular o leite). A carragenana possui a habilidade exclusiva de formar uma ampla variedade de texturas de gel a temperatura ambiente: gel firme ou elstico; transparente ou turvo; forte ou dbil; termo-reversvel ou estvel ao calor; alta ou baixa temperatura de fuso/gelificao. Pode ser utilizado tambm como agente de suspenso, reteno de gua, gelificao, emulsificao e estabilizao em outras diversas aplicaes industriais. O contedo de carragenana nas algas varia de 30% a 60% do peso seco, dependendo da espcie da alga e das condies marinhas, tais como luminosidade, nutrientes, temperatura e oxigenao da gua. Algas de diferentes espcies e fontes produzem carragenanas de diferentes tipos: kappa, iota e lambda. Algumas espcies de algas podem produzir carragenanas de composio mista, como kappa/iota, kappa/lambda ou iota/lambda. As espcies produtoras de carragenana tipo kappa so a Hypnea musciformis, a Gigartina stellata, a Eucheuma cottonii, a Chondrus crispus e a Iridaea. As espcies produtoras de carragenana tipo iota so a Gigartina e a Eucheuma spinosum. As espcies produtoras de carragenana tipo lambda so, em geral, o gnero Gigartina. So polissacardeos utilizados principalmente na indstria alimentcia por produzirem solues de alta viscosidade e gis na presena de gua, alm disso reagem com protenas, especialmente a casena (presente no leite). A primeira meno do uso de carragenana na indstria alimentar de meados do sculo XIX, como agente clarificante da cerveja. A extensa lista de caractersticas que as carragenanas apresentam, levaram ao aparecimento e expanso da indstria de derivados lcteos. Devido sua reatividade com o leite, resultando em um gel suave e agradvel s papilas, 52% das aplicaes das carragenanas so referentes indstria de laticnios (indstria do leite e seus derivados). Em sobremesas lcteas gelificadas, o agente gelificante usado normalmente a kappa carragenana, devido ao seu baixo custo. A utilizao da iota carragenana em sobremesas oferece a vantagem de produzir um gel de estrutura comparvel da gelatina, mas com um ponto de fuso mais elevado. As carragenanas podem ser usadas na estabilizao de cremes dentrios, devido sua capacidade de formar gis aquosos altamente estveis contra a degradao enzimtica,
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tornando a carragenana nica como agente espessante nesse tipo de pastas. A sua estrutura permite, nestas circunstncias, a liberao dos sabores e aromas durante a lavagem dos dentes. A indstria de cosmticos tem feito uso crescente das carragenanas na fabricao de loes, cremes e gis perfumados. A aptido para formar finas pelculas torna a carragenana um excelente acondicionador de shampoos, alm dos cremes de beleza, pois a rpida evaporao da fase aquosa da emulso liberada sobre a pele, forma um microfilme oleoso protetor e medicinal. Em produtos lcteos, utilizada em sorvetes, achocolatados, flans, pudins, creme de leite, iogurtes, sobremesas cremosas, queijos, sobremesas em p e leite de coco. Em doces e confeitos, sua aplicao inclui sobremesas tipo gelatina, gelias, doces em pasta, confeitos e merengues. Nos produtos crneos, a carragenana aplicada em presunto, mortadela, hambrguer, pats, aves e carnes processadas. Nas bebidas, aplicada para clarificao e refinao de sucos, cervejas, vinhos e vinagres, achocolatados, xaropes, suco de frutas em p e diet shakes. Em panificao utilizada para cobertura de bolos, recheio de tortas e massas de po. A carragenana utilizada, tambm, em molhos para salada, sopas em p, mostarda, molhos brancos e molhos para massas. Os principais gneros produtores de carragenana so: Chondrus, Eucheuma, Kappaphycus, Gigartina, Iridaea e Hypnea. Os nicos que vem sendo cultivados comercialmente so Eucheuma e Kappaphycus. gar-gar tambm conhecido como gar ou agarose um hidrocolide extrado de diveros gneros de algas vermelhas. O nome deste polmero originado da palavra malaia agar-agar. Resultante da mistura heterognea de dois polissacardeos, agarose e agaropectina, encontrados na parede celular. A agarose o componente gelificante enquanto a agaropectina tem apenas uma baixa capacidade de formar gel. uma famlia de polissacardeos que apresenta estruturas de D e L-galactose (Figura 5).
Figura 5-Esquema da estrutura qumica do gar-gar.
So polissacardeos que possuem muitas aplicaes, sendo utilizado principalmente na indstria alimentcia e na rea de pesquisas, devido s suas aplicaes biotecnolgicas. Nas indstrias alimentcias o gar tem uso generalizado, onde se aproveitam suas propriedades emulsificantes, estabilizantes e gelificantes, assim como sua alta resistncia ao calor. Em virtude do seu baixo valor energtico empregado na elaborao de alimentos dietticos. O gar destinado a alimentao considerado de boa qualidade, quando possui baixos teores de sulfato. A quantificao dos teores de sulfato na molcula de gar fornece um dos parmetros
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de qualificao deste ficocolide, a retirada de sulfato e a sua transformao em 3,6 anidrogalactose aumentam a qualidade do gel. Contudo, o gar que utilizado na bacteriologia deve ter alguns pr-requisitos, como ser resistente a hidrlises enzimticas, possuir uma alta fora do gel e ausncia de cargas. O gar na forma pura para anlise suplementado com uma mistura de nutrientes, usado em Biologia Vegetal para auxiliar a germinao de plantas em placas de Petri, sob condies estreis e de acordo com cada tipo de planta. Este tipo de meio particularmente til na aplicao de concentraes especficas, por exemplo os fitohormnios, de modo a induzir determinados padres de crescimento. Alm da grande utilidade nas pesquisas biotecnolgicas, sendo empregado em gis utilizados na separao de eletrlitos em eletroforese, na separao de molculas, em tcnicas de imunodifuso, em meios de cultivo microbiolgico. A utilizao do gar para preparao desses meios deve-se principalmente : formao de gel em baixas concentraes; baixa reatividade com outras molculas; e resistncia degradao pelos microrganismos mais comuns. Preparaes comerciais de gar so obtidas principalmente de espcies de Gelidium e Gracilaria.
Figura 6: Esquema de extrao do gar com modificaes de acordo com o gnero escolhido.
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Apostila Botanica No Inverno 2012

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Apostila Botanica No Inverno 2012

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UNIVERSIDADE DE SO PAULO INSTITUTO DE BIOCINCIAS

1. Botnica. 2. Extenso. 3. Ps-Graduao. I. Righi, Adne Abbud. II. Ttulo.

Comisso Organizadora do II Botnica no Inverno

Estrutura e desenvolvimento da raiz

Estrutura e desenvolvimento da raiz

Desenvolvimento do sistema radicular

Estrutura e desenvolvimento da raiz

Coordenao no crescimento do sistema radicular

Absoro de gua e manuteno do potencial hdrico em razes

Estrutura e desenvolvimento da raiz

Figura 2: Possveis rotas de absoro de gua.

Absoro e transporte de nutrientes

Estrutura e desenvolvimento da raiz

O Caule: um enfoque na atividade cambial

O Caule: um enfoque na atividade cambial

O Caule: um enfoque na atividade cambial

O Caule: um enfoque na atividade cambial

b) Cilindros vasculares compostos. Famlia em que ocorre: exclusivo de Sapindaceae.

O Caule: um enfoque na atividade cambial

Controle hormonal da atividade cambial

desde a fonte as razes. B) variao das gradiente de

Registro do produto da atividade cambial e dendrocronologia

O Caule: um enfoque na atividade cambial

O Caule: um enfoque na atividade cambial

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

da infeco para outros rgos e para os seus vizinhos.

Folha: desenvolvimento, estrutura e funo

Estruturas reprodutivas em angiospermas

Estruturas reprodutivas em angiospermas

Estruturas reprodutivas em angiospermas

Figura 1-Meristema apical caulinar vegetativo de Asclepiascurassavica (foto de Diego Demarco)

Estruturas reprodutivas em angiospermas

Mecanismos moleculares responsveis pelo desenvolvimento floral

Estruturas reprodutivas em angiospermas

Identidade e manuteno do meristema floral

Determinao dos rgos florais e o modelo ABC

Estruturas reprodutivas em angiospermas

Estruturas Secretoras Florais

Evoluo floral e as Sndromes de Polinizao

Estruturas reprodutivas em angiospermas

Fitormnios no desenvolvimento vegetal

Fitormnios no desenvolvimento vegetal

Figura 1- Vias do metabolismo secundrio e exemplos das principais classes

Figura 3-Representao simplificada das vias metablicas geradoras dos terpenos

Derivados de cidos Graxos

Figura 2. Molculas de aldedos, alcoois e ster de 6 tomos de carbono, esquematizando os GLVs.

Figura 7 - Representao da nagilactona C, uma podolactona.

Orqudeas Epfitas Bromlias Lquens Lianas Cips No No

Copo de macaco Drsera

Planta fantasma Erva-depassarinho Cip-chumbo Sndalo

Em contato com alimento

Total, parcial ou facultativo

Em contato com tecidos da planta hospedeira

Impactos Econmicos e Controle

A origem do cloroplasto e a evoluo dos eucariontes fotossintetizantes