ARTIGO DE REVISO

R E V I S TA P O R T U G U E S A
DE

CINCIAS VETERINRIAS

Clostridioses dos pequenos ruminantes Clostridiosis of small ruminants

Francisco C. F. Lobato*1, Felipe M. Salvarani1, Ronnie A. de Assis2
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Laboratrio de Bacteriose e Pesquisa da Escola de Veterinria da Universidade Federal de Minas Gerais Departamento de Medicina Veterinria Preventiva Av. Presidente Antnio Carlos 6627, CEP 30123-970, CP 567, Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil 2 Setor de clostridioses. Laboratrio Nacional Agropecurio de Minas Gerais (LANAGRO / MG), Brasil

Resumo: As clostridioses dos pequenos ruminantes so causadas por microrganismos patognicos do gnero Clostridium. Estes agentes so encontrados no solo e trato digestivo dos animais e do homem. Os clostrdios so bactrias anaerbias que penetram no corpo do animal na forma de esporos, atravs de alimentos contaminados ou feridas. As toxinas so produzidas no organismo do animal ou so ingeridas pr-formadas. As infeces e intoxicaes causadas por esses agentes so responsveis por grandes perdas econmicas nos sistemas de produo de pequenos ruminantes. O diagnstico das clostridioses depende da deteco das toxinas ou deteco in situ do agente bacteriano, no caso das mionecroses e hepatite necrtica. O controle e a profilaxia das clostridioses esto associados a medidas corretas de manejo e, principalmente, ao emprego de vacinas, que so, na maioria das vezes, toxides e/ou bacterinas, em combinao de dois ou mais agentes. A utilizao sistemtica de imungenos tem reduzido em grande parte a mortalidade e as perdas econmicas advindas dos quadros clnicos causados pela multiplicao ou pela ao das toxinas produzidas por microrganismos do gnero Clostridium. Palavras-chave: Clostridioses, pequenos ruminantes, diagnstico, controle Summary: Pathogenic microorganisms of the genus Clostridium cause Clostridiosis in small ruminants. These agents are found in the soil and digestive tract of animals, including human beings. The clostridia are anaerobic microorganisms that penetrate in the body of the animals in the form of spores through contaminated food and/or wounds. Toxins are produced inside the organism of the animals or are ingested when preformed. The infections and intoxications caused by these agents are responsible for great economical losses in production systems of small ruminants. The diagnosis of the clostridiosis mediated by toxins depends on the detection of the involved toxin(s) and not on the detection and isolation of the bacterial agent only. The control and prophylaxis of clostridiosis are associated with correct measures of management and vaccination. The vaccines are, most of the time, a combination of two or more antigens (toxoids and/or bacterins). The systematic use of immunogens has largely reduced the mortality and the economic losses due to clostridial diseases. Keywords: Clostridiosis, small ruminants, diagnosis, control

Introduo
O grupo de infeces e intoxicaes causadas por bactrias anaerbias do gnero Clostridium so chamadas clostridioses. Estes microrganismos so bacilos, Gram positivos e tm a habilidade de passar por uma forma de resistncia chamada esporo e podem se manter potencialmente infectantes no solo por longos perodos, representando um risco significativo para a populao animal e humana (Titball et al., 2006). Muitos processos infecciosos que afetam as exploraes ovinas e caprinas so determinados pelos clostrdios. Existem cerca de 100 espcies distribudas em reas geogrficas distintas, sendo a maioria constituinte da microbiota intestinal, porm apenas algumas delas so capazes de causarem enfermidades nestes animais, ocasionando grandes prejuzos econmicos para os produtores (Lobato e Assis, 2000). As infeces e intoxicaes causadas pelas bactrias do gnero Clostridium nos pequenos ruminantes, podem ser classificados em grupos distintos: a) Mionecroses: representadas pelo carbnculo sintomtico e gangrena gasosa ou edema maligno. So afeces em que os agentes Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi tipo A, Clostridium perfringens tipo A e Clostridium sordellii multiplicam-se na musculatura e tecido subcutneo, resultando em um quadro de toxemia (Sterne e Batty, 1975). b) Enterotoxemias: afeces causadas pelos agentes Clostridium perfringens tipos A, B, C, D, e provavelmente o tipo E (Songer, 1996), e ocasionalmente Clostridium sordellii e Clostridium septicum. Esses microrganismos multiplicam no trato intestinal dos animais e produzem exotoxinas responsveis pelo quadro nosolgico. c) Doenas hepticas: hepatite necrtica e hemoglobinria bacilar so causadas pelo Clostridium novyi tipo B e Clostridium haemolyticum, respectivamente. 23

*Correspondncia: flobato@vet.ufmg.br

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d) Doenas neurotrpicas: so afeces em que o sistema nervoso primariamente acometido. Os agentes envolvidos nesse grupo so Clostridium botulinum e Clostridium tetani.

Toxinas clostridiais
Clostridium chauvoei e Clostridium septicum Estes microrganismos produzem quatro toxinas principais: alfa (hemoltica, necrotizante e letal), beta (DNase), gama (hialuronidase) e delta (hemolisina). A toxina alfa a principal protena envolvida nos quadros patolgicos das mionecroses devido s suas atividades biolgicas. Seu mecanismo de ao baseado principalmente na formao de poros e lise osmtica, exibindo uma liberao pr-ltica de ons potssio (Ballard et al., 1992; Gordon et al., 1997; Tweten, 2001). A toxina alfa produzida pelo C. chauvoei, de origem cromossomal, tem peso molecular de 53,5 kDa e a toxina alfa secretada pelo C. septicum, de origem plasmidial e cromossomal, tem peso molecular de 49 kDa (Hatheway, 1990; Tweten, 2001). Moussa (1958) demonstrou que anticorpos contra toxina alfa de C. chauvoei no neutralizam toxina alfa de C. septicum, demonstrando no ocorrer proteo cruzada entre as espcies. Clostridium perfringens So classificados de A a E (Tabela 1), de acordo com a produo de quatro toxinas principais: alfa, beta, psilon e iota. Duas novas toxinas foram descobertas, beta-2 e enterotoxina, estando relacionadas com alguns tipos de C. perfringens.
Tabela 1 - Classificao dos diferentes tipos de Clostridium perfringens. Tipo A B C D E Alfa + + + + + Beta + + Beta-2 + + + + psilon + Iota Enterotoxina + + + + +

isoeltrico no pH de 5,6 (Hatheway, 1990). Sua ao caracteriza-se pelo efeito citotxico atravs da formao de poros, atuando nos canais seletivos de sdio e potssio, causando despolarizao das membranas celulares excitveis e alteraes na permeabilidade vascular do sistema nervoso (Shatursky et al., 2000; Tweten, 2001). Toxina beta-2. Codificada pelo gene cpb-2, de origem plasmidial, com peso molecular de 28 kDa (Bueschel et al., 2003). Investigaes epidemiolgicas demonstraram a maior ocorrncia do gene cpb-2 entre os animais doentes, sugerindo que a toxina codificada por este gene tem funo relevante no processo patognico, como possvel fator de virulncia (Gibert et al., 1997; Klaasen et al., 1999; Gkiourtzidis et al., 2001). Seu mecanismo de ao no est completamente esclarecido, mas envolve a lise celular atravs da formao de poros na membrana (Petit et al., 1999). Toxina psilon. Codificada pelo gene etx, de origem plasmidial, secretada na forma de protoxina, com peso molecular de 32,7 kDa e, pela ao de enzimas proteolticas convertida na forma ativa, com peso molecular de 31,2 kDa (Hatheway, 1990; Petit et al., 1999). Seu mecanismo de ao envolve a ligao especfica a receptores na superfcie das clulas endoteliais promovendo a desestabilizao da membrana com alterao da permeabilidade vascular com resultante escape de lquidos e destruio celular (Songer, 1996). Toxina iota. Formada por duas subunidades proticas imunologicamente distintas denominadas iota A, codificada pelo gene iap, de origem plasmidial, com peso molecular de 47,5 kDa e ponto isoeltrico no pH de 5,2; e iota B, codificada pelo gene ibp, de origem plasmidial, com peso molecular de 105 kDa e ponto isoeltrico no pH de 4,2. A toxina iota produzida na forma de protoxina, sendo ativada na presena de enzimas proteolticas. Seu mecanismo de ao envolve desorganizao do citoesqueleto das clulas com consequente morte celular (Marvaud et al., 2002). Enterotoxina. Codificada pelo gene cpe, de origem cromossomal e/ou plasmidial, com peso molecular de 35 kDa e ponto isoeltrico no pH de 4,3. Seu mecanismo de ao envolve a ligao com receptores especficos na superfcie das clulas epiteliais do intestino dos animais, levando a formao de poros e desequilbrio osmtico da clula com consequente lise celular (Li e McClane, 2006). Toxina secundrias. So representadas, principalmente, pelas toxinas: theta, codificada pelo gene PfoA, de origem cromossomal, com peso molecular de 51 kDa e mecanismo de ao envolvendo atividades

Fonte: Petit el at. (1999).

Toxina alfa. Codificada pelo gene plc, de origem cromossomal, com peso molecular de 43 kDa e ponto isoeltrico no pH de 5,4. uma fosfolipase C que hidrolisa a fosfatidilcolina e, em menor proporo, a esfingomielina, na dependncia de ons clcio. A ao da toxina alfa caracteriza-se por hemlise intravascular, danos capilares, processos inflamatrios, agregao plaquetria e alteraes do metabolismo, culminando com a morte celular (Songer, 1996; Petit et al., 1999; Titbal et al., 2006). Toxina beta. Codificada pelo gene cpb, de origem plasmidial, com peso molecular de 40 kDa e ponto 24

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hemolticas e necrosantes; delta, com peso molecular de 42 kDa e mecanismo de ao envolvendo atividade hemoltica; kappa, codificada pelo gene colA, de origem cromossomal, com peso molecular de 80 kDa e mecanismo de ao envolvendo hidrlise de colgeno e necrose celular; lambda, codificada pelo gene lam, de origem plasmidial, com peso molecular no determinado e mecanismo de ao envolvendo atividades proteolticas; neuramidase, codificada pelo gene nanH, de origem cromossomal, com peso molecular de 64 kDa e mecanismo de ao envolvendo aglutinao de eritrcitos, resultando num aumento da viscosidade sangunea e formao de trombos (Hatheway, 1990; Petit et al., 1999). Clostridium novyi Produz cinco toxinas principais: alfa, com peso molecular de 260-280 kDa e ao citotxica; beta, com peso molecular de 32 kDa e caracterizada como fosfolipase C de ao hemoltica; gama e delta, com pesos moleculares ainda no determinados e ao semelhante a toxina beta; e psilon, com peso molecular ainda no determinado e ao de lipase (Schirmer e Aktories, 2004). Clostridium sordellii Entre as toxinas produzidas por essa bactria temos a lectininase, hemolisina lbil ao oxignio, e uma fibrinolisina, as quais so capazes de causar choque com posterior hipotenso, aumento do hematcrito com marcada neutrofilia, generalizado edema pulmonar, acmulo de fludos no peritnio e outras cavidades corporais (Geny et al., 2007). Clostridium botulinum As neurotoxinas so as principais toxinas responsveis pelo quadro patolgico do botulismo. Existem sete sorotipos de neurotoxina botulnica, que permitem a classificao de C. botulinum em sete tipos, divididos de A a G. As neurotoxinas so codificadas pelo gene BoNT. A origem desse gene varia entre os diferentes tipos de C. botulinum. Os tipos C e D tem origem em bacterifagos, os tipos A, B, E e F origem cromossomal e o tipo G origem plasmidial (Brggemann, 2005). As neurotoxinas assemelham no somente no mecanismo de ao, mas tambm na sua organizao estrutural, produzindo uma cadeia polipeptdica inactiva com 150 kDa e aps a lise bacteriana, as BONTs so liberadas e clivadas por proteases exgenas e endgenas e uma neurotoxina activa bivalente gerada com uma cadeia pesada (H, 100 kDa) e uma cadeia leve (L, 50 kDa) interligadas por uma ponte dissulfdrica. A importncia dessa ligao est diretamente relacionada sua neurotoxicidade quando a toxina apresentada no espao extracelular (Brunger et al., 2007).

Outra importante toxina produzida pelo C. botulinum tipo C a toxina C2, que no considerada uma neurotoxina verdadeira. uma toxina binria, formada pelo componente I (C2I) com peso molecular de 50 kDa e o componente II (C2II) com peso molecular de 105 kDa. Seu mecanismo de ao envolve alterao da permeabilidade vascular e atividade letal (Kaiser et al., 2006). Clostridium tetani Tetanospasmina. Codificada pelo gene TeTx, de origem plasmidial, com peso molecular de 150 kDa uma neurotoxina e age inibindo a liberao de neurotransmissores inibitrios, como o cido gama globulnico (GABA) e a glicina, levando a um quadro de paralisia espstica (Brggemann, 2005). Tetanolisina. uma hemolisina, com peso molecular de 48 kDa e que tem seu mecanismo de ao baseado na lise celular atravs da formao de poros por hidrlise de fosfolipdeos de membrana (Cornille e Roques, 1999).

Mionecroses
Carbnculo sintomtico ("manqueira" ou "mal de ano") O carbnculo sintomtico ocorre em vrias espcies animais, sendo bovinos e ovinos os mais acometidos. Nos bovinos a infeco "endgena" causada pelo Clostridium chauvoei (Sterne e Batty, 1975; Gyles, 1993), em ovinos principalmente de origem "exgena" causada pelo mesmo agente, e desenvolve-se rapidamente aps contaminaes de feridas provenientes de tosquias, partos distcicos, castraes, vacinaes e outras intervenes realizadas em condies no asspticas (Roberts e McEwen, 1931; Buxton e Donachie, 1991, Assis et al., 2004). Entretanto, carbnculo sintomtico em ovinos sem qualquer evidncia de feridas tem sido relatado, envolvendo a musculatura esqueltica (Marsh et al., 1928; Stiles, 1943) e o miocrdio (Glastonbury et al., 1988). Clinicamente o animal apresenta temperatura elevada, anorexia e depresso. O local afetado torna-se edematoso e palpao observa-se crepitao decorrente das bolhas de gs produzidas pela multiplicao da bactria e quando um membro atingido, o animal apresenta claudicao. A evoluo da doena para morte ocorre geralmente em at 48 horas. A necrpsia observa-se edema, hemorragia e necrose miofibrilar, exalando acentuado odor ranoso ou butrico. A histopatologia do msculo, principal espcime clnico utilizado para o diagnstico definitivo das mionecroses, observam-se zonas de necrose de coagulao rodeadas por clulas inflamatrias, bem como a presena de bacilos (Hulland, 1993). 25

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Gangrena gasosa (edema maligno) A gangrena gasosa ou edema maligno considerado uma infeco "exgena", produzida por um ou mais dos seguintes agentes: C. septicum, C. chauvoei, C. novyi tipo A, C. perfringens tipo A e C. sordellii (Assis et al., 2002). Estes microrganismos penetram em feridas cirrgicas ou acidentais, decorrentes de castrao, tosquia, parto, puno venosa, vacinao, ou do cordo umbilical (Morris et al., 2002; Radostits et al., 2002). Estes fatores propiciam uma diminuio do oxignio molecular, levando a um baixo potencial de xido-reduo nos tecidos, favorecendo a germinao dos esporos dos clostrdios ali localizados, com a consequente produo de toxinas principalmente a toxina alfa que causa efeito letal e citoltico (Lobato e Almeida, 1997). Acomete vrias espcies animais, sendo mais freqente em bovinos e ovinos. Surtos da doena, envolvendo pequenos ruminantes, tm sido relatados com elevada mortalidade (Richards e Hunt, 1982; Lima et al., 2006; Costa et al., 2007). A sintomatologia inclui febre, anorexia, taquicardia e depresso, ocorrendo tambm toxemia que faz com que o quadro evolua para a morte em poucas horas ou geralmente em um a trs dias (Smith, 1984). As leses macroscpicas e microscpicas so semelhantes s do carbnculo sintomtico, com ocorrncia de edema crepitante nos msculos e tecidos subcutneos, que inicialmente so quentes e doloridos. Com a evoluo da doena, tornam-se frios e indolores, sendo comum a ocorrncia de hemorragias e necrose. Em geral na gangrena gasosa ocorre com maior frequncia uma celulite (afeta principalmente o tecido subcutneo) que uma miosite (Buxton e Donachie, 1991). Uma condio peculiar dos ovinos a afeco denominada "big head" ou "cabea inchada", sendo relatada em carneiros que tm o tecido subcutneo da regio da cabea, pescoo, e reas circunvizinhas, traumatizados por "lutas". As feridas funcionam como porta de entrada para esporos do microrganismo (Sterne e Batty, 1975).

nessa espcie pelo Clostridium perfringens tipo A, enfermidade denominada de "yellow lamb disease" ou "doena do cordeiro amarelo" (Songer, 1996; Uzal, 2001). Clostridium septicum Uma condio particular de ovinos, determinada por C. septicum, a enfermidade denominada "Braxy", caracterizada por injrias na parede do abomaso em decorrncia da ingesto de pastagens congeladas que favorecem a infeco pelo microrganismo e o desencadeamento do processo, produzindo leses locais no abomaso, intestino delgado e toxemia (Songer, 1996). A enfermidade est restrita a determinadas regies geogrficas e j foi relatada em cordeiros recm-nascidos no Reino Unido (Buxton e Donachie, 1991), assim como em outras partes da Europa, Austrlia e EUA (Songer, 1996). Clostridium perfringens tipo A A doena do "cordeiro amarelo" uma enterotoxemia causada pela toxina alfa produzida pelo C. perfringens tipo A, e tem sua patogenia baseada na hemlise de eritrcitos com a liberao de hemoglobina. Os animais acometidos apresentam depresso, anemia, ictercia e hemoglobinria. O curso clnico da doena de seis a 12 horas, podendo o animal vir a bito (Songer, 1996). Clostridium perfringens tipo B o agente causador da disenteria em cordeiros recm-nascidos. Esta afeco acomete cordeiros com menos de duas semanas de idade e causada pela ao das toxinas beta e psilon produzidas por este agente (Buxton e Donachie, 1991). A principal fraco txica responsvel pela disenteria dos cordeiros a toxina beta, que inativada por enzimas proteolticas como a tripsina. O fato de a doena ocorrer primariamente em animais recm-nascidos advm do excesso de colostragem e tambm por ser o colostro fonte de fatores anti-tripsnicos, favorecendo por sua vez a proliferao do agente com produo dessa toxina (Barker et al., 1993). O curso super-agudo, em geral em poucas horas os animais apresentam dores abdominais, reduo na suco do colostro e/ou leite e fezes semi-fluidas e coradas de vermelho. Ocasionalmente, animais que sobrevivam por mais dias, podem desenvolver no sistema nervoso central (SNC) uma leso conhecida por encefalomalacia focal simtrica (EFS) causada pela ao da toxina psilon (Buxton e Donachie, 1991), alm de apresentarem enterite, extensa hemorragia e ulcerao do intestino delgado (Songer, 1997). A doena tem sido tambm relatada em ovinos e caprinos adultos no Iran (Niilo, 1980).

Enterotoxemias
Enterotoxemia o termo usado para descrever doenas causadas por toxinas produzidas no trato gastrintestinal, principalmente pelo C. perfringens e com menor frequncia por C. septicum (Braxy) (Songer, 1996), e C. sordellii (Al-Mashat e Taylor, 1983a, b). Os diferentes tipos de C. perfringens so classificados como A, B, C, D e E em relao produo de quatro diferentes exotoxinas alfa, beta, psilon e iota (Niilo, 1980). Entretanto, o agente produz vrias outras exotoxinas chamadas de secundrias (McDonel, 1986). Em ovinos mais comumente descrita a enterotoxemia pelos tipos B, C e D, embora alguns autores descrevam a enterotoxemia

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Clostridium perfringens tipo C A enterotoxemia causada pelo C. perfringens tipo C produz um quadro clnico-patolgico muito semelhante ao produzido pelo Clostridium perfringens tipo B, sendo a toxina beta a principal envolvida (Barker et al., 1993). descrito como agente da enterite-hemorrgica em ovinos recm-nascidos, pelos mesmos fatores j descritos na disenteria dos cordeiros. Tambm responsvel por um quadro super agudo em ovinos adultos denominado de "Struck", que se caracteriza por morte sbita (Niilo, 1980). Clostridium perfringens tipo D C. perfringens tipo D causa a enterotoxemia comumente denominada de doena da superalimentao ("overeating disease") ou do rim pulposo ("pulpy kidney disease"). Enfermidade de distribuio mundial, que afeta primariamente ovinos de qualquer idade com exceo dos recm-nascidos (Scholes et al., 2007), raramente caprinos e provavelmente bovinos (Niilo, 1980; Uzal et al., 2003a). A doena causada pela rpida multiplicao do C. perfringens tipo D no intestino delgado e subsequente absoro da toxina psilon, que produzida na forma de protoxina. Esta convertida em uma toxina letal pela ao da tripsina digestiva (Buxton e Donachie, 1991) ou por toxinas secundrias do C. perfringens (McDonel, 1986). C. perfringens tipo D pode estar presente no intestino de animais sadios em pequena quantidade e produz toxinas que so eliminadas com os movimentos intestinais normais sem causar alteraes patolgicas no organismo do animal (Baldassi et al., 1995). Porm, quando ocorrem alteraes na microbiota ruminal em decorrncia de mudanas bruscas na alimentao, fornecimento de dietas ricas em carbohidratos e pobre em fibras, dentre outros fatores, o agente multiplica em propores logartmicas entre quatro a oito horas, produzindo grandes quantidades da toxina psilon. A toxina atua sobre o epitlio intestinal, causando aumento da permeabilidade vascular. Ao ganhar a circulao geral, chega aos rgos, como crebro, rins, pulmes, fgado e corao, onde se liga a receptores especficos nas clulas endoteliais, levando a uma degenerao dessas clulas. Com aumento da permeabilidade vascular, ocorre extravasamento de lquido e protenas para o espao perivascular, com consequente edema. Quando ocorre no tecido cerebral denominado edema perivascular proteinceo eosinoflico ou microangiopatia (Uzal et al., 1997a). Em condies naturais e na maioria dos casos, a morte dos animais ocorre durante as primeiras seis a 18 horas, mas se sobrevivem por mais de 36 a 48 horas, uma necrose do tecido cerebral produzida pela compresso ocasionada pelo edema, conhecida como EFS (Hartley, 1956; Uzal, 2001). Essa alterao caracterstica no caso de enterotoxemia em ovinos por C. perfringens tipo D, sendo um achado importante para o diagnstico

definitivo da doena nessa espcie. Em ovinos, a forma clnica mais frequente da enfermidade a super-aguda, com morte entre quatro a oito horas, sendo raramente observados sinais clnicos, quando ocorrem, so principalmente alteraes neurolgicas como opisttono, movimentos de pedalagem, entre outros; e alteraes respiratrias como taquipnia e edema pulmonar. Na forma aguda, os animais sobrevivem por at 24 horas e os sinais clnicos so geralmente os mesmos observados na forma super-aguda. J na forma sub-aguda ou crnica, que tem um curso de 48 a 72 horas, pode ser observada, alm dos sinais descritos, a ocorrncia de cegueira em alguns animais (Uzal, 2001). Caprinos tambm podem apresentar essas trs formas da doena, porm as leses neurolgicas so pouco frequentes devido a uma menor absoro intestinal da toxina psilon (Buxton, 1978; Uzal et al., 1994; Uzal et al., 1997a; Colodel et al., 2003). Consequentemente observam-se principalmente leses entricas, como diarrias e enterocolites, sendo as leses neurolgicas restritas a achados histopatolgicos de edema perivascular protenaceo eosinoflico ou microangiopatia (Blackwell et al., 1991, Uzal & Kelly, 1996; Colodel et al., 2003). necrpsia dos ovinos, os achados podem ser inexistentes (Uzal, 2001), mas em alguns casos encontram-se as seguintes alteraes: hidrotrax, hidropericrdio, hidroperitneo, edema pulmonar com acmulo de grandes quantidades de espuma na traquia e brnquios, septos interlobulares dos pulmes engrossados pelo acmulo de lquido e, em alguns casos, hrnia do cerebelo, que consiste na sada do mesmo para fora da calota craniana atravs do forame Magno (Uzal, 2001; Facury Filho, 2004). No comum encontrar leses intestinais, porm pode-se observar uma ligeira enterite catarral no intestino delgado (Uzal, 2001; Facury Filho, 2004). Hiperglicemia e glicosria podem ser observadas, assim como o outro achado que tem relao com o nome genrico de "doena do rim pulposo", referente a uma alterao autoltica da cortex renal (Songer, 1997). Em caprinos, alm das alteraes anteriormente descritas, observam-se quadros de enterocolites, hemorragias da serosa do clon (Colodel et al., 2003), e edema dos linfonodos mesentricos (Blackwell e Butler, 1992). Clostridium perfringens tipo E C. perfringens tipo E produz enterotoxemia em cordeiros, bezerros e coelhos (Barker et al., 1993). Sua patogenia est envolvida com a produo da toxina iota, que precisa ser ativada por enzimas proteolticas para promover a sua atividade biolgica, causando citlise. O quadro clnico envolve diarria hemorrgica com morte do animal em poucas horas. necrpsia observam-se reas de hemorragia e edema na mucosa intestinal, podendo atingir a mucosa do abomaso (Songer e Miskimmins, 2004). 27

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Doenas hepticas
Hepatite necrtica A hepatite necrtica uma enfermidade de carter agudo que ocorre frequentemente em ovinos e raramente nos bovinos devido associao entre C. novyi tipo B e trematdeos, principalmente, Fasciola hepatica (Assis et al., 2001a). Entretanto h uma descrio da doena na ausncia de F . hepatica por Uzal et al. (1996a), onde provavelmente uma overdose de anti-helmnticos tenha sido o fator predisponente ao lesionar o parnquima heptico. A doena tambm denominada "black disease", devido presena de sangue venoso ciantico no tecido subcutneo (Assis et al., 2001a). C. novyi tipo B, produz duas potentes toxinas: alfa (classicamente letal) e beta (necrotizante e hemoltica), sendo a alfa considerada a mais importante na patogenia do agente. No fgado so observadas reas de infarto necrtico de 2-3 cm de dimetro, rodeadas por uma larga zona de intensa hiperemia (Kelly, 1985). Hemoglobinria bacilar A hemoglobinria bacilar uma infeco causada pelo C. haemolyticum, geralmente de localizao geogrfica limitada, estando associada a reas midas e presena de infeces por trematdeos, principalmente F . hepatica. A enfermidade tem sido descrita no Mxico, ndia, Nova Zelndia, Austrlia e Amrica do Sul (Pianta, 1997). A doena ocorre usualmente nos bovinos, acometendo esporadicamente os ovinos (Uzal, 2001) sendo causada pela ao da toxina beta que uma potente lecitinase (Kelly, 1985). Os danos causados ao tecido heptico pelas larvas do parasita permitem a proliferao do agente e a produo de toxinas, as quais provocam a destruio de eritrcitos com liberao de hemoglobina. Os principais sinais clnicos so: depresso, anorexia, diarria sanguinolenta, hemoglobinria e choque, culminando com a morte em um a trs dias aps o incio dos sintomas (Assis et al., 2001a). Tambm se observa um quadro de anemia associado hemlise intravascular. necrpsia, as leses so semelhantes s da hepatite necrtica, mas a rea do infarto necrtico usualmente maior e nica. Os rins podem apresentar colorao vermelho-amarronzada, devido impregnao pela hemoglobina, os vasos peritoneais injetados, e em alguns casos observa-se uma severa peritonite fibrino-hemorrgica (Kelly, 1985).

os ovinos e caprinos (Azevedo et al., 1999), sendo responsvel por levar um grande nmero de animais morte. A principal categoria afetada a de fmeas em gestao e ou lactao, criadas em pastagens deficientes em fsforo, que desenvolvem o hbito da osteofagia ou sarcofagia. Animais podem se intoxicar ingerindo neurotoxinas produzidas pelo C. botulinum presentes em suplementos alimentares, matria orgnica de origem vegetal e animal em putrefao e gua estagnada (Lobato e Almeida, 1997). O mecanismo de ao da toxina envolve o bloqueio nervoso pr-sinptico por inibio da liberao de acetilcolina na placa motora. A toxina ocupa os stios relativos ao on clcio na fibra colinrgica, evitando a exocitose da acetilcolina, que clcio dependente, resultando numa flacidez neuromuscular generalizada que tem incio nos membros posteriores progredindo no sentido crnio-caudal, atingindo todos os msculos esquelticos (Titball et al., 2006). Vrios surtos da doena, envolvendo pequenos ruminantes, tm sido relatados em diversos pases (Van Der Lugt et al., 1995; Azevedo et al., 1999; Otter et al., 2006; Van Der Burght et al., 2007; Lobato et al., 2008). Os sinais clnicos e curso da doena dependem da quantidade de toxina ingerida. Os sinais mais comuns so incoordenao motora, primariamente dos membros posteriores que progride no sentido cranial, incapacidade de se locomover e levantar culminando com morte por parada respiratria. A propriocepo do animal continua normal por todo o curso da doena e no so encontradas leses significativas necropsia dos animais acometidos (Lobato et al., 2007). No botulismo importante o diagnstico diferencial, pois a sintomatologia clnica apresentada inicialmente semelhante a vrias doenas infecciosas, metablicas ou envenenamentos (Tabela 2). Ttano ("Lockjaw") O ttano uma toxi-infeco altamente letal que acomete o homem e os animais domsticos, causada pela tetanospasmina, uma potente neurotoxina produzida pelo C. tetani. Os ovinos e caprinos apresentam menor sensibilidade neurotoxina tetnica em relao outras espcies animais, sendo os equinos a espcie mais sensvel (Lobato et al., 2007). A infeco se d geralmente atravs de feridas acidentais ou cirrgicas, em contato com esporos do agente presente em esterco ou nos solos. Os esporos do microrganismo podem se manter infectantes no solo por perodos superiores h 40 anos. Nas feridas, os esporos encontram condies de anaerobiose favorveis para germinarem, multiplicarem e produzirem a tetanospasmina, a qual transportada atravs dos axnios da via nervosa perifrica por um mecanismo retrgrado, ligando-se nas terminaes pr-sinpticas ao nvel do sistema nervoso central (SNC), impedindo a liberao de neurotransmissores

Doenas neurotrpicas
Botulismo O botulismo uma das principais doenas de bovinos adultos podendo acometer outras espcies como 28

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Tabela 2 - Diagnstico diferencial do botulismo nos pequenos ruminantes. Doena Listeriose Caractersticas diferenciais Andar em crculos podendo ocorrer desvio da cabea com torcicolo e aborto. Salivao e tremor muscular. Caprinos so comumente agressivos. Ocorre principalmente no ltimo ms de gestao. O animal apresenta encefalopatia com cegueira, tremor muscular e convulses. Incoordenao dos membros posteriores com evoluo crnica at queda e morte por inanio. Cegueira, presso da cabea contra obstculos, andar em crculos, hiperestesia e convulses tnico-clnicas peridicas. Anorexia, estase ruminal, edema craniano. Confirmao laboratorial Bacteriologia e histopatologia do crebro e teste sorolgico. Pesquisa do corpsculo de Negri ou do vrus no crebro.

Raiva

Toxemia da gestao em ovinos

Hipoglicemia, cetonemia e cetonria.

Ataxia enzotica

Anlise do teor de cobre no soro.

Polioencefalomalcia

No realizado. O diagnstico teraputico, atravs da administrao de cloridrato de tiamina. Dosagem de chumbo sanguneo, nas fezes, no fgado, rins e contedo do retculo. No realizado. Diagnstico baseado no histrico, sinais clnicos e achados de necrpsia. Anlise do teor de magnsio no soro. Nveis do fator txico nos tecidos.

Intoxicao por chumbo

Traumatismo medular ou cerebral

Observadas de acordo com a localizaao da leso.

Deficincia de magnsio Intoxicao por hidrocarbonetos clorados Intoxicao por organofosforados

Convulses tetnicas. Anorexia, convulses.

Dispnia, colapso, diarria, hiperestesia, salivao.

Nveis de colinesterase no sangue e nos tecidos.

Tabela 3 - Materiais de eleio das principais clostridioses que afetam os pequenos ruminantes. Clostridioses Botulismo Material de eleio 250g de contedo intestinal, contedo ruminal e fragmentos de fgado, bem como 20 mL de soro sanguneo e de gua estagnada, em frascos estreis. Fragmentos de msculo lesado refrigerado e em formol a 10%.

Carbnculo sintomtico e gangrena gasosa Hemoglobinria bacilar Hepatite necrtica Enterotoxemia por Clostridium perfringens tipo D

Fragmentos de fgado lesado refrigerado e em formol a 10%. Fragmentos de fgado lesado refrigerado e em formol a 10%. 50 ml de contedo intestinal refrigerado, em frascos estreis e crebro inteiro em formol a 10%.

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inibitrios, principalmente glicina, resultando em espasmos musculares tnicos e hiperexcitabilidade reflexa (Bizzini, 1993). As contraes musculares podem ser to fortes a ponto de causarem fraturas das vrtebras. Alm disso, observam-se: distenso abdominal, agalactia, ataxia, clicas, desidratao, constipao intestinal, timpanismo, cianose, febre, excitao, miotonia, dispnia, opisttono, trismo da mandbula, sialorria, disfagia, midrase, taquicardia, incontinncia urinria, vmitos, regurgitao, prolapso de terceira plpebra, podendo em alguns casos, ocorrer morte sbita do animal. O perodo de incubao de cinco dias a 15 semanas, com mdia de sete dias. O curso clnico dura em mdia de quatro a sete dias. A morte ocorre devido parada respiratria. necropsia, no so encontradas leses significativas (Driemeier et al., 2007).

novyi tipos A e B e C. haemolyticum (Sasaki et al., 2002; Assis et al., 2008). Enterotoxemias O diagnstico confirmatrio est na dependncia direta da deteco da(s) toxina(s) produzida pelos agentes, diretamente no contedo intestinal. O mtodo convencional para deteco destas toxinas o teste de soroneutralizao em camundongos, entretanto devido discusses ticas por parte de grupos humanitrios, est sendo gradualmente substituda por metodologias in vitro: ELISA (Weddel e Worthington, 1984; El Idrissi e Ward, 1992; Uzal et al., 2003a; Carvalho, 2004), empregos de linhagens celulares (Knight et al., 1990; Lindsay et al., 1995; Souza Jnior, 2005), aglutinao em ltex (Songer, 1997) e contraimunoeletroforese (Uzal et al., 2003a). Tambm existem diferentes tcnicas de PCR que, apesar de no detectarem diretamente a(s) toxina(s) produzida pelos C. perfringens dos tipos A-E, e sim os genes que codificam a produo das mesmas, permitem a tipificao do C. perfringens envolvido em um determinado caso ou surto (Uzal et al., 1996b; Uzal et al., 1997b; Meer e Songer, 1997; Vieira, 2006). Apesar da presena de toxinas no contedo intestinal ser o mais importante indicador das enterotoxemias, necessrio combinar este achado com outros, especialmente o histrico do animal e da propriedade, sinais clnicos, achados de necropsia e histopatologia dos rgos com leses. No caso da enterotoxemia por C. perfringens tipo D, imprescindvel a realizao de histopatologia do crebro concomitantemente deteco da toxina psilon (Uzal, 2004). Hepatite necrtica e hemoglobinria bacilar O diagnstico da hepatite necrtica baseia-se no isolamento, e na deteco do agente pela tcnica de IFD (Sterne e Batty, 1975). Na hemoglobinria bacilar, alm do isolamento e a IFD, tem sido utilizada a tcnica de IHQ, empregando o complexo peroxidase-antiperoxidase (PAP) (Uzal et al., 1992). Da mesma maneira que nas mionecroses e enterotoxemias, achados de necrpsia e subsequente histopatologia de tecidos do suporte ao diagnstico definitivo dessas enfermidades. Botulismo O diagnstico do botulismo baseado na anamnese, sinais clnicos, isolamento e principalmente na demonstrao e identificao da toxina(s) botulnica(s). Os espcimes de eleio so: soro, contedo intestinal, contedo ruminal, ossos e alimentos suspeitos. A tcnica mais utilizada a soroneutralizao em camundongos. Uma vez que haja suspeita da presena da toxina(s), o que verificado pela morte dos camundongos, a identificao da mesma(s) feita com anti-soros especficos (Lobato e Assis, 2001). No

Diagnstico
Colheita e remessa de material Para a realizao do diagnstico laboratorial das principais clostridioses, que acometem os pequenos ruminantes, necessrio conhecer qual o material a ser colhido e a forma adequada de submisso do mesmo para o local de realizao dos exames (Madeley, 1985). Deve-se proceder necrpsia pouco tempo aps a morte do animal (no mximo seis horas) ou em estado agnico, pois a maioria dos clostrdios invade a carcaa rapidamente, mascarando os resultados do diagnstico final. Os materiais de eleio e a forma de envio so apresentados na Tabela 3. Mionecroses Diferentemente do botulismo, ttano e enterotoxemias, em que a deteco da(s) toxina(s) produzida pelos agentes envolvidos imprescindvel para o diagnstico, nas mionecroses a deteco dos agentes suficiente para se ter um diagnstico conclusivo. Alguns mtodos imunolgicos de diagnstico podem ser empregados como a imunofluorescncia direta (IFD), teste "padro-ouro" para mionecroses, que permite a deteco dos agentes em esfregaos de cultivo (Batty e Walker, 1963; Pinto e Abreu, 1992; Assis et al., 2001b) e em impresses (claps) obtidas diretamente dos tecidos durante a necropsia (Assis et al., 2005); a imunohistoqumica (IHQ) em cortes histolgicos e/ou esfregaos de cultivo (Conesa et al., 1995; Vanelli e Uzal, 1996a,b; Assis et al., 2005) e as seguintes tcnicas de PCR: que amplificam sequncias conservadas da subunidade 16s rRNA (Kuhnert et al., 1997; Takeuchi et al., 1997; Uzal et al., 2003b), da subunidade 16S-23S rDNA (Sasaki et al., 2000 a,b; Sasaki et al., 2001), a sequncia gnica que codifica a flagelina de C. chauvoei (Kojima et al., 2001) e a que codifica a flagelina de C. chauvoei, C. septicum, C. 30

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Brasil, tambm tem sido empregada a tcnica de microfixao do complemento (Dutra et al., 1993). Ttano No ttano, o diagnstico laboratorial pode ser feito pela demonstrao da neurotoxina. Entretanto na maioria dos casos, o diagnstico est baseado apenas na anamnese e sintomatologia clnica, sem referncia a testes laboratoriais (Lobato e Assis, 2001).

Controle e profilaxia
As enfermidades causadas por microrganismos do gnero Clostridium ocasionam considerveis perdas nos diferentes sistemas de produo de pequenos ruminantes, uma vez que o tratamento, na maioria dos casos impraticvel. Devido s caractersticas ecolgicas dos agentes, que so ubiquitrios do trato digestivo dos animais e solo, e pela forma de resistncia por meio de esporos, a erradicao dessas patologias praticamente impossvel. O controle e profilaxia devem basear-se em medidas adequadas de manejo e vacinaes sistemticas de todo o rebanho, j que os animais esto em permanente contato com os agentes e com os fatores que podero desencadear as doenas. As vacinas clostridiais so na sua grande maioria polivalentes, contendo em sua composio mltiplos antgenos e so usadas como estratgia frente a uma grande variedade de agentes e/ou toxinas. Os imungenos devem ser administrados por via subcutnea, preferencialmente, em duas doses intervaladas de 4-6 semanas na primo-vacinao e reforo anual, com exceo para o Clostridium haemolyticum que dever ser semestral. Quando o rebanho sistematicamente vacinado, os anticorpos colostrais protegem os animais por at trs a quatro meses aps o nascimento, devendo ento a primo-vacinao ser realizada aps esse perodo (Lobato e Assis, 2000). De acordo com a literatura nenhuma vacina produzida especificamente para prevenir enterotoxemia em caprinos, sendo as desenvolvidas para ovinos utilizadas em caprinos (Uzal e Kelly, 1996). Porm, de acordo com Uzal et al. (1998), os caprinos tm ttulos de anticorpos menores e menos persistentes, sendo necessrias mais pesquisas para o desenvolvimento de novas vacinas que atestem a eficcia dessas vacinas para essas espcies.

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