CICLO CELULAR e MITOSE

Mestrado em Biologia Molecular e Celular, UC Mdulo de Regulao Celular

Ciclo Celular

Elsa Logarinho, IBMC Setembro 2009

elsa.logarinho@ibmc.up.pt

Objectivos:

1. Compreender a organizao do ciclo celular 2. Conhecer os complexos moleculares que regulam a proliferao celular e o seu modo de regulao 3. Compreender o conceito de checkpoint 4. Compreender como os checkpoints controlam a progresso do ciclo celular 5. Compreender os mecanismos moleculares associados a cada etapa da mitose

Bibliografia:

Molecular Biology of the Cell, Alberts B et al., 5th edition 4th edition disponvel online: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books

Cells, 2007, Lewin, Cassimeris, Lingappa, Plopper, 1st edition The Cell Cycle, Principles of Control, David O Morgan, New Science Press Ltd 2007

A reproduo celular ocorre atravs de uma srie elaborada de eventos designada ciclo celular, em que os cromossomas e outros componentes so duplicados e distribudos pelas duas clulas filhas. Uma rede complexa de protenas reguladoras governa a progresso pelas etapas do ciclo celular. 1855 Virchow omnis cellula e cellula Organismos unicelulares: diviso = reproduo Organismos multicelulares: diviso = desenvolvimento, crescimento, renovao, reproduo Cell-cycle control system os eucariotas contm uma network reguladora complexa que assegura a correcta ordem dos eventos (timing e coordenao)

Somatic cell cycle

M
Embryonic cell cycle

Caractersticas do sistema de controlo do ciclo celular

Relgio / timer tempo limite para cada evento Iniciao de eventos ter uma ordem Um evento por ciclo ON/OFF irreversibilidade e concluso do evento Robustez / backup para falhas Adaptabilidade a tipos celulares e condies extracelulares

Ciclos embrionrios
Sistema de controlo independente/timing dado tempo ao evento para completar Se um evento falha continua a operar

vs

Ciclos somticos
- sensores atrasos - checkpoints - G1 (sinais extracelulares) - G1 e G2 (DNA damage) - G2 (incomplete DNA replication) - M (mitotic errors) - o sinal negativo

Checkpoints
O sistema de controlo do ciclo celular conduz a progresso do ciclo celular em transies chave de regulao checkpoints - Start ou G1/S checkpoint - G2/M checkpoint - mataphase-to-anaphase checkpoint

Componentes e regulao do sistema de controlo do ciclo celular

CDKs - a actividade destas cinases oscila -> alteraes cclicas de fosforilao de protenas que regulam os eventos do ciclo - so activadas por ciclinas - os nveis de ciclinas oscilam (sntese/degradao) - outros nveis de regulao: 1) CAK (Cdk activating kinase); 2) CKI (Cdk inhibitor) Portelise cclica - ubiquitinao de ciclinas - ligases de ubiquitina: 1) SCF ciclinas G1/S, CKI; 2) APC/C coesin, ciclinas M Controlo transcricional - ausente nos ciclos embrionrios - oscilao dos nveis de mRNAs durante o ciclo celular (10% dos genes)

CDKs

1. 2. 3. 4.

O sistema de controlo do ciclo celular inclui feedback loops e interaces reguladoras que provocam activao ou inactivao irreversvel do tipo tudo-ou-nada das Cdks As interaces entre os switchs assuguram a ordem e coordenao dos eventos Robustez: a activao ou inactivao controlada por mltiplos mecanismos Adaptao: switches so ajustados a inputs reguladores

Controlo da actividade CDK

A ligao da ciclina reorienta os resduos de interaco com ATP e reconfigura o stio activo e T-loop A activao da Cdk requer fosforilao da T161 adjacente ao stio activo - constitutiva

Fosforilaes inibitrias - regulao

Protelise no controlo do ciclo celular

SCF

Mecanismos distintos de reconhecimento do substrato e regulao de actividade enzimtica -SCF: F-box determina especificidade para o substrato; substrato tem que estar fosforilado -APC: actividade controlada por subunidades que tambm determinam especificidade para o substrato (Cdc20 e Cdh1)

Proliferao celular

Controlo da expresso gnica E2F-dependente em G1/start Inibio de CKIs e Cdh1

feedback positivo cycD-CDK fosforila membros da famlia pRB -> libertao de E2Fs -> activao da expresso de genes G1/S -> feedback positivo Nutrientes, mitognios -> entrada em novo ciclo, passagem do start checkpoint Presena de cycE-Cdk2

Activao de G1-CDKs por mitognios

Activao dos complexos G1/S- e S-CDK

2 mecanismos de regulao de p27: Controle da estabilidade da cycA-CDK 1. Aps mitognio, a acumulao de cycD-CDK sequestra p27 (cycE-CDK livre) Mitognio -> fosforilao Cdh1 Mitognio -> expresso de Emi1 Inibio de Cdh1, inibio do APC

2. Fosforilao de p27 exporte nuclear e degradao Late G1- cycE-CDK fosforila p27 degradao nuclear S degradao da cycE

DNA damage checkpoints

- As cinases ATR e ATM so recrutadas para a leso - Cascata de sinal -Activao das cinases Chk1 e Chk2 -Vrias respostas possveis

Mdm2 ubiquitina p53

G1 DNA damage checkpoint

G2 DNA damage checkpoint

Long-term cell cycle arrest

Blocks import to the nucleus

Nveis das ciclinas mitticas em clulas somticas de mamfero

Mltiplos feedback loops que governam a activao Cdk1

Cdk1 activa Cdc25C e inactiva Wee1 e Myt1 Cdk1 fosforila e estabiliza Cdc25A Cdk1 activa Plk1 que activa Cdc25C e Myt1 Cdc25B e cycA-Cdk1 so triggers em late G2

Sada de mitose
A transio metafase-anafase iniciada pela ubiquitinao e destruio de protenas reguladoras (securina e ciclina B)

Mecanismos de activao do APC/Cdc20

Cdh1

Metaphase-to-anaphase transition: the Spindle Checkpoint

Metaphase Anaphase

Misaligned chromosome

Error correction

Mitotic arrest Checkpoint ON Spindle depolymerization Cell death Adaptation aneuploidy Mitotic arrest Checkpoint ON

Spindle checkpoint proteins: Mad1, Mad2, Mad3(BubR1), Bub1, Bub3, Mps1

Localize to kinetochores of misaligned chromosomes

Logarinho et al. (2004), J Cell Sci 117: 1757-71.

Different spindle checkpoint proteins monitor distinct aspects of KT-MT attachment

Mad2 and Bub1 respond to MT occupancy BubR1 and Bub3 (not shown) respond to tension
Logarinho et al. (2004), J Cell Sci 117: 1757-71.

Downstream checkpoint target: the anaphase promoting complex

Improperly attached kinetochores BubR1 Bub3
P PP

Cdc20

Mad2 APC Cdc20

Ub

MCC Mitotic checkpoint complexwait anaphase signal

Ub

Securin Separase

CyclinB Cdc2

MPF

Scc1

MPF inactivation M exit

Sister chromatid separation

Manuteno de G1
3 mecanismos: Aumento da destruio das ciclinas (aumento da actividade APC-Cdh1, porque baixa actividade CDK permite acumulao de Cdh1) Diminuio da expresso dos genes de ciclina Inibio por CKIs (acumulao de CKIs)

CKIs so expressas a nveis elevados em G1 CKIs so potentes inibidores dos complexos S-CDK e M-CDK (mas no G1/S-CDK)- no se aplica a p27! CKIs so marcados para destruio qdo fosforilados por CDKs