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Practica #6

HIDRLISIS DE LAS GRASAS POR ACCIN DE LA LIPASA PANCRETICA 1Fundamento del experimento o del metodo
Las grasas de la dieta incluyen triglicridos, fosfolpidos, y colesterol. Los triglicridos son una rica fuente de caloras, y constituyen el mayor porcentaje de las grasas incorporadas en la dieta. La digestin de las grasas se da por las lipasas, que hidrolizan triacilgliceroles de cidos grasos, diacilglicerol, monoacilglicerol y glicerol, para que estas puedan ser captadas por las clulas. La lipasa tiene como principal funcin, la hidrlisis de grasa, rompiendo y modificando los enlaces ster de lpidos y sus derivados.

Algunos miembros de la familia de las lipasas como la Lipoprotena lipasa (LPL), lipasa heptica y lipasa pancretica poseen importantes funciones en el metabolismo lipdico. Lipasa pancretica es sintetizada por las clulas acinares pancreticas que es secretada en el lumen intestinal y ayuda en la absorcin intestinal de cidos grasos de cadena larga como los triglicridos, mientras que la LPL y lipasa heptica son crticas para la transformacin de lipoprotenas circulantes. Estas enzimas estn ampliamente distribuidas en la naturaleza y son especialmente importantes en el tracto gastrointestinal donde funcionan en la digestin y absorcin de grasas.

Debido a que las grasas no son solubles en agua, las enzimas deben actuar en la interface lpido-agua, lo cual trae como consecuencia una disminucin de la actividad enzimtica. Consecuentemente, ser necesario el empleo de los agentes emulsificantes tales como las sales biliares que producen a menudo una estimulacin marcada de la hidrlisis enzimtica de los lpidos, debido al incremento de la interface lpido-agua. En la leche homogeneizada los glbulos de grasa estn en un estado muy finamente dividido y este material sirve como sustrato excelente para las lipasas.

OBJETIVOS:

Determinar los mEq-acido grasos liberados por accin de la pancreatina. Observar cmo es que acta y que efectos trae las sales biliares sobre el aceite. Observar la actividad de la enzima lipasa indirectamente por titulacin de los cidos grasos liberados utilizando en la titulacin usando la base de hidrxido de sodio (NaOH). Aplicacin y manejo adecuado de tcnicas de laboratorio para la identificacin, aislamiento de enzimas y determinacin de la actividad enzimtica. Entender de forma prctica una parte importante del proceso digestivo que tiene lugar en el intestino delgado en el cual la lipasa pancretica consigue la hidrlisis de triacilgliceroles a cidos grasos.

2Esquema del procedimiento MATERIALES Y REACTIVOS Aceite. Buffer fosfato 0.1 M pH 8. Sales biliares. Lecitina. Glicerol. Pancreatina 1%. Bureta. Probeta. Tubos de ensayo. Gradilla. Vasos de 50 mL. Pipetas. Bombillas. Papel parafina. Balanza analtica. Bao mara.

PROCEDIMIENTO A_ Se procede a poner 5 tubos de ensayo, bien lavados y tabulados luego ponerlas en una rejilla en orden numrico para evitar errores.

B_ se procede a aadir los siguientes reactivos segn el cuadro indicado tubos Aceite mL Buffer fosfato 0.1M pH 8 ,mL Sales biliares en buffer, mL Lecitina /aceite ,mL Agua destilada, mL 1 Sales 1 2 Blanco 3 Sin sales 4 BLANCO 1 2 2 5 Lecitina 2

2 1 2

NOTA: A los tubos 1,2 y 3 deben tener un color rosado ya que de lo contrario se debe aadir NaOH hasta lograr el color rosado. Esto nos sirve para neutralizar cualquier cido graso libre y as poder tener unos clculos en funcin solamente de las enzimas que posteriormente se le suministrara a los tubos.

C_ Despus del sele agrego 5 ml de la pancreatina 1% a cada tubo la cual es un extracto de enzimas que contiene ala lipasa que necesitaremos la lipasa pancretica. Y debemos encubarla durante 45 minutos y cada 10 min debemos agitarlo un poco.

Se le aade la Enzima y luego se encuba durante 45 min.

Despus de encubar se Observa y se ve como grumos en la parte superior.

D_ Debemos titular ahora con NaOH 0.05N as podremos determinar cul tubo tiene una mejor eficacia a la catalizar a los lpidos con el emulsionante.

Tiene que formar un color ligeramente rosado,

Despus de titular queda de esta manera los reactivos usados no olvidar apuntar bien el volumen usado del NaOH a la horade titular. Quien haiga necesitado ms NaOH en la titulacin es el que ms acido grasos liberados por la enzima tiene, esto nos indica una mejor capacidad enzimtica.

3Calculos-resultados

Gasto ml

Con sales biliares

Gasto ml

Sin sales

Gasto ml

Con lecitina

Tubo 1

1,5

Tubo 3

Tubo 5

1,7

Tubo 2 gasto

0,8 0,7

Tubo 4 gasto

0,8 0,2

Tubo 4 gasto

0,8 0,9

Clculos: gastos ml de NaOH 0,05N restar

Determinar la concentracin de los AGL en funcin de la acidez:

Miliequivalentes acidez con sales biliares = gasto x 0,05N = 0,7 ml X 0,05 N = 0,7 ml x 0,05 (Eq/l) = 0,035 mEq

Miliequivalente acidez sin sales biliares = gasto x 0,05N = 0,2 ml x 0,05 N = 0,2 ml x 0,05 (Eq/l) = 0,01 mEq

Miliequivalentes acidez con lecitina = gasto x 0,05N = 0,9 ml x 0,05 N = 0,9 ml x 0,05 (Eq/l) = 0,045 mEq

4Discusin de resultados
En el tubo 1, tal como se esperaba, ocurri un mayor gasto de NaOH (1.5mL) gasto que es proporcional a los cidos grasos producidos. En el tubo 2 se obtuvo un gasto de slo 0.8. En esta ocasin los resultados entre ambos grupo se aproximaron entre s, pero aun as se podra mencionar algunas posibles causas de error: En la titulacin, se pudo haber echado unos cuantos mL de ms del NaOH, ya que este tipo de determinacin es relativo, segn la persona que lo realice, la observacin del color ocurre un poco. Al adicionar la enzima a los tubos, la cantidad no pudo haber sido la indicada, este cambio indicara una actividad menor de dicha enzima. A pesar de los resultados muy variados, nos damos cuenta que los mrgenes de ambos grupos son equivalentes. El tubo con aceite, pancreatina y sal biliar (tubo 1) tiene ms equivalentes que el tubo con aceite, pancreatina y buffer fosfato (tubo 2) ya que en el primero la digestin en el intestino se realiza de manera normal con la presencia de sales biliares que emulsifican las grasas y las hace ms disponibles a las lipasa, en el caso del tubo 2 la presencia del BUFFER hace que la pancreatina trabaje de manera lenta y a pH casi normal, y no a un pH realmente bsico. En la experiencia pudimos comprobar que la lecitina era mejor emulsionante en comparacin de las sales biliares, ya que provoco que usemos ms NaOH con la lecitina a la hora de titular, por el contrario las sales biliares necesitaron menos de NaOH en la titulacin. Fue as que implcitamente se determin el mejor emulsionante para la lipasa.

REVICION DEPGINAS DE INTERNET: http://www.uv.es/marcof/Tema20.pdf http://www.hipernatural.com/es/enfdisquinesias_biliares.html

5Concluciones
En esta prctica se observa la digestin en el intestino delgado, teniendo como actores a las sales biliares y a la pancreatina que atacan al aceite. Nos damos cuenta de la importancia que representan las sales biliares en el alto rendimiento de la pancreatina en la catlisis de los alimentos que consumimos, ya que por s solas pueden degradar dicho alimento pero no de una forma eficiente.

En el intestino se agregan las lipasas, que es el jugo intestinal, y se absorben los nutrientes. Entre otros indicadores, consideramos que la fenolftalena es el mejor indicador.

A diferencia de la pancreatina las lipasa linguales y las estomacales no dependen de las sales biliares

6Cuestionario
1. ESQUEMATICE LA ESTRUCTURA DE UN TRIESTERINA Y UNA TRIPALMITINA.

-La tripalmitina se encuentra en la manteca de vaca (75%) y en la panceta(40%) - La triolena es un triglicrido derivado del las moleculas cido oleico, y la triestearina, del cido esterico -La triestearina, por el contrario, es una grasa que a temperatura ambiente es slida, denominndose, por consiguiente, sebo o manteca. Esto se debe a que est formada por tres molculas de cido esterico que es un cido graso saturado

2. CUALES SON LOS PRODUCTOS LIBERADOS PORACCION DELA LIPASA PANCREATICA

Los productos finales de la digestin de las grasas son los CIDOS GRASOS y GLICEROL. La digestin de las grasas comienza en el DUODENO por medio de la lipasa pancretica. Las grasas son emulsionadas por las sales biliares, formando pequeas gotitas (micelas) de 3 a 10 nm. de dimetro. Gracias a esta accin emulsificante, los lpidos se ponen en estrecho contacto con las clulas de la mucosa intestinal, permitiendo que los monoglicridos y cidos grasos penetren en la clula. Ya dentro de la clula algunos monoglicridos son hidrolizados por la lipasa intracelular a GLICEROL y CIDOS GRASOS. Los cidos grasos de cadena corta pasan directamente a la sangre donde son transportados como cidos grasos libres por la vena porta hacia el hgado. Los cidos grasos de cadena ms larga son transformados en triglicridos y cubiertos por una capa de lipoprotena, colesterol y fosfolpido, formando quilomicrones, los cuales abandonan la clula por exocitosis e ingresan a los vasos linfticos.

3. CUALES SON LOS ACIDOS GRASOS POLIINSATURADOS, MONOINSATURADO Y SATURADOSPRESENTE EN LOS ALIMENTOS

cidos grasos saturados


Como se ha visto anteriormente, los cidos grasos saturados carecen de dobles enlaces y les cuesta combinarse con otras molculas. Por este motivo, la mayor parte de las grasas saturadas se mantienen en estado slido a temperatura ambiente. Todas las grasas animales son altamente saturadas, excepto las del pescado y los mariscos, que son muy poliinsaturadas. Algunas grasas vegetales, como el aceite de coco y el de palma, son muy ricas en cidos grasos saturados.

En numerosos estudios epidemiolgicos se ha comprobado que la ingesta de grasas saturadas aumenta los niveles de colesterol en sangre, especialmente los de la fraccin LDL. Aunque el mecanismo por el que este aumento se produce no est del todo esclarecido, parece ser que los cidos grasos saturados enriquecen los fosfolpidos de la membrana celular, interfiriendo con la funcin normal de los receptores LDL y reduciendo de esta forma la absorcin de las LDL por las clulas. Al reducirse la eliminacin de las LDL, su concentracin en la sangre es mayor. Los diferentes cidos grasos saturados tienen distintos comportamientos sobre los niveles de LDL-colesterol: El cido Palmtico (C16:0) es el principal cido graso saturado presente en los alimentos de origen animal. Diferentes investigaciones han arrojado que incrementa los niveles de colesterol total y LDL, cuando sustituyen en la dieta a los hidratos de carbono u otro tipo de grasas. El cido Mirstico (C14:0), aunque en menor medida que el palmtico, tambin aumenta la concentracin de colesterol total. La dieta mixta habitual contiene cantidades pequeas de cido mirstico, presente fundamentalmente en la mantequilla. E El cido Esterico (C18:0) no eleva los niveles plasmticos de colesterol total, segn distintos estudios en animales y humanos, en contraste con otros cidos saturados. Este cido se metaboliza ms rpidamente hacia cido oleico que otras grasas saturadas. La influencia del cido Larico (C12:0) sobre los niveles de colesterol en sangre todava no est clara, aunque se ha demostrado que el aceite de coco (rico en larico) aumenta ms los niveles de colesterol que la grasa de cordero. Los cidos grasos saturados de cadena corta (C10 y menor) apenas modifican la colesterolemia.

cidos grasos monoinsaturados


El principal representante de los cidos grasos monoinsaturados en nuestros alimentos es el cido oleico (C18:1). Tiene un nico doble enlace y est presentes en todas las grasas animales y aceites vegetales, especialmente en el aceite de oliva. Durante muchos aos el inters sobre los cidos grasos de la dieta se ha centrado en las proporciones entre cidos grasos saturados y poliinsaturados. Los cidos grasos monoinsaturados fueron olvidados de los estudios durante muchos aos. En el Estudio de los Siete Pases se demostr que un alto consumo de monoinsaturados derivados del aceite de

oliva traa consigo niveles bajos de colesterol e incidencia reducida de las enfermedades cardiovasculares. Tanto los cidos grasos poliinsaturados como los monoinsaturados pueden reducir el colesterol total y LDL cuando reemplazan en la dieta a las grasas saturadas. Pero no es oro todo lo que reluce, las dietas ricas en poliinsaturados pueden reducir el colesterol HDL, que tiene un papel protector claramente demostrado en las enfermedades cardiovasculares. Sin embargo, estudios bastante recientes han demostrado que al sustituir las grasas saturadas por monoinsaturadas no slo no se reduce el colesterol HDL, sino que incluso lo aumenta. Tambin se ha comprobado que se aumenta la concentracin de apolipoprotena A-I, a la que se le atribuye un papel antiaterognico importante. En resumen, las dietas ricas en cidos grasos monoinsaturados son las que producen el perfil lipdico ms favorable para la prevencin de las ECV.

Acidos grasos poliinsaturados


Estos cidos grasos no pueden ser sintetizados por el organismo humano y sin embargo son esenciales, por lo que deben ser aportados por la dieta. Se clasifican en cidos grasos w -3 y w -6 segn la posicin del doble enlace.

Acidos grasos w -6 El principal cido graso w -6 es el linoleico (C18:2), que se encuentra principalmente en los aceites vegetales de semillas (maz, soja, girasol, etc.). Los cidos grasos poliinsaturados reducen el colesterol total y LDL cuando reemplazan en la dieta a las grasas saturadas. Tambin reducen el colesterol HDL, lo cual no es deseable para una mxima proteccin frente a las enfermedades cardiovasculares.

Acidos grasos w -3

Los cidos grasos w -3 se encuentran en pequeas cantidades en algunos aceites vegetales, pero su fuente principal son los animales marinos (pescado y marisco). Los principales son el cido linolnico (C18:3), el eicosapentaenoico (EPA; C20:5) y el docosahexaenoico (DHA; C22:6). Los estudios de poblaciones que consumen grandes cantidades de grasa w -3 de pescado y animales marinos han mostrado siempre una baja incidencia en ECV. Los efectos de los cidos grasos w -3 sobre las diferentes lipoprotenas en el organismo humano no estn todava completamente definidos. El efecto ms llamativo y claramente demostrado, es la disminucin de los niveles de triglicridos y VLDL en todo tipo de sujetos. Esta reduccin se debe a la disminucin de la sntesis en el hgado de triglicridos y VLDL. Sin embargo, los efectos de los cidos grasos w -3 sobre los niveles de cLDL y cHDL depende del tipo de paciente y de su perfil lipdico. As, en pacientes con colesterol total elevado, los w -3 disminuyen el cLDL si a la vez se disminuye el consumo de grasas saturadas. El efecto sobre el cHDL vara desde una ligera disminucin, que es lo ms frecuente, a un ligero aumento en pacientes con triglicridos elevados. Adems de la modificacin del perfil lipdico, el consumo de cidos grasos w -3 da lugar a una inhibicin de la agregacin plaquetaria, principalmente al disminuir la formacin de tromboxano A2. Esto supone un impedimento para la formacin de placas en el interior de los vasos sanguneos y su adherencia al endotelio, lo cual es un importante factor protector frente a las ECV. Por si todo esto fuera poco, se ha comprobado tambin que este tipo de grasas reduce la presin arterial y disminuye la viscosidad sangunea. Estos son los motivos por los que siempre se recomienda aumentar el consumo de pescado frente al de carnes y otros tipos de alimentos de origen animal para reducir el riego de enfermedades cardiovasculares.

4. CUALES SON LAS ENZIMAS QUE DIJIEREN LAS GRASAS EN EL SISTEMA DIGESTIVO DE UN MAMIFERO .INDIQUE LA FUNCION DE CADA UNO. . A digestin de los lpidos ingeridos en la dieta sigue el siguiente proceso: Hasta que no llegan al duodeno, los lpidos no sufren ninguna transformacin. En el duodeno, por medio de la bilis; los lpidos son emulsionados (convierte gotas grandes de lpidos en gotitas pequeas), a continuacin por medio de enzimas stas gotitas se transforman en distintas molculas que ms tarde sern absorbidas en el yeyuno, pasarn a la linfa, seguido a la sangre y despus al interior de las clulas hepticas donde realizan sus funciones.

Las gotitas lipdicas que se forman son triglicridos, colesterol esterificado (unido a cidos grasos) y fosfolpidos. Los triglicridos son atacados por las enzimas lipasas pancretica e intestinal y los convierte en cidos grasos y glicerol. Sobre el colesterol esterificado acta la enzima colesterolesterasa y lo convierte en colesterol libre y cidos grasos. Los fosfolpidos son atacados por la enzima fosfolipasa pancretica y se trasforman en glicerol, iones fosfato (PO4 ), base

Boca:lipasa bucal Estmago: lipasa gstrica Intestino delgado: lipasa pancretica-colipasa, esterasa del colesterol, lipasa pancretica dependiente de sales biliares. Estas ltimas son la que producen la mayor hidrolisis, las provenientes del pncreas y las sales biliares

7Bibliografia http://www.uv.es/marcof/Tema20.pdf http://books.google.com.pe/books?id=HRr4MNH2YssC&pg=PA619&lpg=PA 619&dq=lipasas+pancreaticas&source=bl&ots=LTvLM2Didu&sig=w6USXUS W9SVKk13lHW0FQIzrC4&hl=es&sa=X&ei=ltOWUf6JKKfh4AO6woGoAw&ved=0CE4Q 6AEwBg#v=onepage&q=lipasas%20pancreaticas&f=false http://www.buenastareas.com/ensayos/Pr%C3%A1ctica-Hidr%C3%B3lisisDe-Grasas-Por-Acci%C3%B3n/2533344.html http://es.scribd.com/doc/135811138/Accion-de-la-Lipasa-Pancreatica http://es.answers.yahoo.com/question/index?qid=20071010185750AAFTK wp http://www.uned.es/pea-nutricion-y-dieteticaI/guia/enfermedades/cardiovasculares/alim_gras_interaccion.htm http://vidasana.lapipadelindio.com/salud/enzimas-digestivas-para-digerirmejor-los-alimentos http://www.ehowenespanol.com/absorbe-cuerpo-carbohidratos-grasasproteinas-info_125101/ http://es.wikipedia.org/wiki/Triglic%C3%A9rido

FACULTA DE QUIMICA, ING.QUIMICA Y ING .AGROINDUSTRIAL

CURSO

LABORATORIO DE BIOQUMICA

TEMA

HIDRLISIS DE LAS GRASAS POR ACCION DE LA LIPASA PANCREATICA

PROFESORA :

MARIA ROSARIO CALIXTO

INTEGRANTES

:-ANABEL ARONE -VICTOR VILLANUEVA

2013-1

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