ANALISIS INSTRUMENTAL CROMATOGRAFIA GASEOSA

INTRODUCCION
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija y otra mvil. En cromatografa gaseosa, la fase mvil es un gas que fluye a travs de una columna que contiene a la fase fija. Esta fase fija puede ser un slido poroso (cromatografa gas-slido o CGS), o bien una pelcula lquida delgada que recubre un slido particulado o las paredes de la columna (cromatografa gas-lquido o CGL). En el primer caso, el proceso que produce la separacin es la adsorcin de los componentes de la mezcla sobre la superficie slida y en el segundo, la particin de los mismos entre las fases lquida y gaseosa. Por ser la ms utilizada, la discusin que sigue se refiere a CGL.

INSTRUMENTAL
Un instrumento para cromatografa gaseosa puede representarse por el siguiente esquema:

El gas portador (fase mvil) proviene de cilindros provistos con vlvulas reductoras de presin. La muestra se introduce en el inyector con una microjeringa a travs de un septum de goma. All se produce la vaporizacin instantnea de la misma y su introduccin en la corriente de gas. La columna se halla dentro de un horno de temperatura variable, lugar donde se realiza la separacin de los componentes de la muestra. El detector produce una seal elctrica proporcional a la cantidad de materia a medida que cada componente separado fluye a travs de l. Esa seal es enviada al registrador que realiza un grfico de intensidad en funcin del tiempo (cromatograma) del tipo:

Idealmente, se trata de picos gaussianos y cada pico corresponde a un componente de la muestra original. El integrador calcula adems el rea correspondiente a cada pico, la cual es proporcional a la cantidad de sustancia.

PARMETROS RELEVANTES
Tiempo de retencin (tr) de un dado componente de la muestra es el tiempo transcurrido desde la inyeccin de la misma hasta la aparicin del mximo correspondiente al pico de ese componente. Un caso especial lo constituye un componente que no es retenido por la fase

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fija (no se reparte entre fases), el cual saldr de la columna antes que cualquier sustancia a un tiempo llamado tiempo muerto (t0). De esta manera, es posible definir tr como el tiempo que un cierto componente permanece en la fase estacionaria:

t r = t 0 + t r
El factor de capacidad (k) de un dado compuesto se define como:

k=

moles del componente en la fase estacionaria moles del componente en la fase gaseosa

que, en funcin de la constante de particin (K), del volumen de la fase fija (VL) y del volumen de la fase mvil (VG) se puede escribir como:

k=K
y en funcin de los tiempos de retencin:

VL VG

k=

(t r

t 0 ) t r = t0 t0

Con respecto a la columna, se define como plato terico a una capa estrecha de la misma en donde se produce el equilibrio de particin de un compuesto entre la fase fija y la mvil. Para una columna de longitud L, el nmero de platos tericos (N) es:

N =

L t = 16 r H W

siendo H la altura de plato terico, uno de los parmetros que determina la capacidad del proceso cromatogrfico para separar dos compuestos dados, y W el ancho de los picos a la altura de la lnea de base. A partir de las definiciones anteriores, es posible definir parmetros asociados a la separacin de dos sustancias A y B que caracterizan la eficiencia de una separacin. Siendo B la sustancia con mayor tr estos parmetros son: kB t (B ) = r kA t r ( A )

Factor de selectividad

Resolucin

R =

1 4

( 1)

(1 + k )

N =

1 4

( 1)

(1 + k )

L H

(1)

Teniendo en cuenta que k, , L y H dependen de la temperatura, tipo de fase fija, longitud de columna y flujo de fase mvil, es posible mejorar una separacin optimizando estos parmetros experimentales.

ETAPAS DEL ANALISIS DE UNA MUESTRA

1. 2. 3. 4. Optimizacin de las condiciones instrumentales. Obtencin de los cromatogramas en condiciones ptimas (muestras y patrones) Calibracin (diferentes tcnicas). Cuantificacin del/los componentes presentes en la muestra.

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5. Tratamiento de los resultados. 1. Se busca obtener como respuesta instrumental: Picos bien resueltos. Buena relacin seal a ruido. Lnea de base horizontal (sin deriva). Picos no distorsionados. 2. Normalmente suele realizarse una calibracin por estndar externo o utilizando un estndar interno. i. Estndar externo: Se preparan muestras de patrones de concentracin conocida que se analizan y permiten construir una curva de calibracin para cada componente a cuantificar. Con este mtodo es necesario medir exactamente los volmenes inyectados tanto de los patrones como de la muestra incgnita.

ii. Estndar interno: En este caso se agrega a la muestra una cantidad conocida de un compuesto que no est presente originalmente. En este caso, la calibracin se realiza analizando patrones de concentracin conocida para cada componente a cuantificar a los cuales se le agrega la misma cantidad del estndar interno que a la muestra incgnita. La curva de calibracin se construye graficando el cociente entre la seal del analito incgnita y el estndar interno en funcin de la concentracin del analito incgnita. Este mtodo elimina el error cometido por la irreproducibilidad en el volumen inyectado. 3. Tanto para la medicin de la muestra como de los patrones, es conveniente estudiar la reproducibilidad de la seal analtica y la de los tiempos de retencin del/los analitos. Para ello se deben realizar varias inyecciones (n) de cada muestra y cada uno de los patrones y utilizar los valores medios. 4. Se realizara el tratamiento de resultados siguiendo las indicaciones dadas en la gua de trabajos prcticos.

PARTE EXPERIMENTAL
Objetivos Analizar la influencia de los diversos parmetros instrumentales en la identificacin y separacin de los componentes presentes en una mezcla de alcoholes. Seleccionar las condiciones instrumentales ptimas para dicha separacin. Determinar la identidad de los componentes de la muestra utilizando patrones de cada analito y los tiempos de retencin obtenidos para cada uno de ellos en idnticas condiciones operativas. Determinar la concentracin de etanol en una muestra incgnita utilizando calibracin externa, adicin estndar, adicin de estndar interno, normalizacin de reas. Comparar crticamente los resultados obtenidos con cada tipo de calibracin.

Materiales a emplear Cromatgrafo de gases Shimadzu GC/17 A e integrador Shimadzu CR5A. Columna capilar marca Supelco SPB-1 (100 % dimetilsiloxano), longitud 30 m, dimetro interno 0,25 mm, espesor de film, 0,25 m, o columna capilar marca Supelco SPB-5 (Poly(5%-diphenyl-95%-dimethylsiloxane), longitud 15 m, dimetro interno 0,25 mm,

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espesor de film, 0,25 m, o columna capilar marca Supelco SPB- 2250 (50 % metil - 50 % fenil siloxano), longitud 30 m, dimetro interno 0,25 mm, espesor de film, 0,20 m Patrones individuales de metanol, etanol, butanol y acetonitrilo (3% en agua). Mezclas de metanol, etanol, butanol y acetonitrilo (5% en agua de cada uno de ellos) Idem mezcla anterior excluyendo butanol Muestras de composicin desconocida. Microjeringa de 10 l.

Protocolo de Preparacin de bebida espirituosa Utilizando viales de 3,5 mL prepare las siguientes soluciones Sol 1 y 2 Sol 3 Sol 4 Sol 5 Vol. muestra (L) 150 150 150 150 Vol. EtOH 50% (L) 0 100 150 200 Vol. ACN 15% (L) 200 200 200 200 Vol. H2O (L) 2650 2550 2500 2450 Nota: La preparacin de la solucin de ETOH al 50% debe hacerse en el da por pesada. Las dems soluciones sern provistas por el personal docente. Experimentos a realizar Anlisis cualitativo de la muestra. Para identificar los componentes de la muestra se realizarn cromatogramas de una mezcla sinttica que contiene metanol, etanol y acetonitrilo todos en la misma concentracin, hasta optimizar la resolucin variando las distintas condiciones instrumentales (tipo de columna, temperatura del horno, flujo de gas portador, etc.). Una vez logradas las condiciones ptimas para la muestra ternaria, realice el cromatograma de la muestra de cuatro componentes incluyendo butanol1. Se analizarn luego patrones de cada componente por separado para proceder a su identificacin a travs de los tiempos de retencin obtenidos en idnticas condiciones operativas. En este punto deber discutir el criterio de seleccin de la columna. Anlisis cuantitativo. Se utilizarn las metodologas de cuantificacin descriptas anteriormente: i) Estndar externo ii) Estndar interno iii) Normalizacin de reas iv) Adicin de estndares

Anlisis de los resultados Discutir los resultados obtenidos mediante las distintas metodologas utilizadas, analizando las ventajas y desventajas de cada una de ellas. Informar las condiciones experimentales, los tiempos de retencin de cada componente de la mezcla y la composicin porcentual de alcoholes en la muestra.

CUESTIONARIO
1. Enumerar los tipos de detectores habitualmente empleados y evaluar su mbito de aplicacin.

Note que el butanol es retenido ms fuertemente en la columna que el resto de los componentes por lo que se trabaja primero en la separacin optimizada de los otros tres analitos y con el fin de no alargar innecesariamente los tiempos que insume cada corrida de prueba. CG 4

2. Discutir la eleccin del gas portador a utilizar en relacin al tipo de detector con que se cuenta. Qu caractersticas debe reunir el gas elegido? 3. Discutir la aplicacin de la ecuacin de Van Deemter (ecuacin (1)) para modificar la eficiencia de un anlisis. 4. De qu manera influyen las condiciones instrumentales en el cromatograma? 5. Qu condiciones debe reunir un componente para ser utilizado como estndar interno? 6. Discutir las ventajas y desventajas de cada uno de los mtodos de cuantificacin utilizados. 7. Discutir la conveniencia de considerar como seal la altura o el rea del pico obtenido como respuesta de la muestra. 8.- Compare el coeficiente b para dos columnas capilares con dimetro de 0,24 y 0,36 mm que contienen el mismo espersor de fase estacionaria, 0,2 m. Cual de ellas es ms conveniente para el anlisis de compuestos de bajo punto de ebullicin y cual para un compuesto termolbil? 9.- Para la determinacin de residuos de xido de etilieno en tubuladuras para uso mdico esterilizadas con dicho gas, una muestra dentro de un frasco cerrado se calent a 60 C por 20 minutos, se tomaron 500 uL de la fase gaseosa (head space) y se us una columna empacada de polietilenglicol de 3 mm de dimetro y 1.80 m de largo. La temparatura de la corrida es 60 C y el detector del tipo FID. Considerando que el materia lde la tubuladura es PVC y los posibles productos de reaccin del xido de etileno son etilenglicol (PE: 197 C) y 2-cloroetanol (PE:129 C), a.- Discuta la conveniencia de la temperatura utilizada, la fase estacionaria y el tamao de columna. b.- Para determinar etilenglicol y 2-cloroetanol , que cambios debe realizar en la toma de muestra, en el tipo de columna y en la temperatura de trabajo. 9.- Una muestra contiene las sustancias X e Y. Se desea determinar cuantitativamente X utilizando el mtodo del estndar interno. Se probaron los compuestos 1, 2 y 3 como posibles estndares internos, obtenindose el siguiente cromatograma:

i.- Cual eligira como estndar y que condiciones variara en el cromatograma para su uso. ii.- Una vez conseguida las condiciones ptimas como procede para la determinacin. 9.- El fabricante de una columna para GC basada en poliestireno-polidivinilbenceno sugiere la corrida que se muestra en la Fig. 3 para la separacin de una serie de compuestos disueltos en metanol (condiciones dadas en la Figura). Como se puede apreciar en el cromatograma los dos primeros compuestos salen sobre la cola que corresponde a la seal de metanol. i.- Examine los componentes de la muestra y establezca que propiedades entran en juego en el orden de elucin de los mismos. ii.- Que sucede si se trabaja a 70 C

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BIBLIOGRAFA
Anlisis Instrumental. Skoog y Leary. Mtodos Instrumentales de Anlisis. Willard, Merritt y otros.

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