1.

TEMA: Extraccin y Cuantificacin de Pigmentos Vegetales

2. FUNDAMENTO TERICO PIGMENTOS: Un pigmento es un material que cambia el color de la luz que refleja como resultado de la absorcin selectiva del color. Este proceso fsico es diferente a la fluorescencia, la fosforescencia y otras formas de luminiscencia, en las cuales el propio material emite luz. Muchos materiales selectivamente absorben ciertas ondas de luz, dependiendo de su longitud de onda. Los materiales que los seres humanos han elegido y producido para ser utilizados como pigmentos por lo general tienen propiedades especiales que los vuelven ideales para colorear otros materiales. Un pigmento debe tener una alta fuerza teidura relativa a los materiales que colorea. Dnde estn los pigmentos? Estos pigmentos se encuentran en el interior de las clulas vegetales especficamente en una organela llamada cloroplasto. Los cloroplastos son simplemente plstidos que contienen pigmentos cloroflicos. Los compuestos cloroflicos estn ligados qumicamente con las estructuras internas del cloroplasto (membrana tilacoides) y se hallan retenidos en estado coloidal. Asociados con las clorofilas, existen tambin en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y amarillo-anaranjados que son las xantofilas y carotenides. Cmo se dividen los solventes? Los pigmentos cloroflicos son insolubles en el solvente universal llamado agua. Pero s son solubles (afinidad qumica) en solventes orgnicos como por ejemplo alcohol etlico y acetona. A los solventes que extraen simultneamente todos los pigmentos de la hoja se los suele llamar extractantes. Existen otros solventes que presentan afinidad por algunos pigmentos y se los llama separadores, como por ejemplo el tetracloruro de carbono y el ter de petrleo. En el mtodo de extraccin simple, como se desarrolla ms adelante se utilizar como extractante el alcohol etlico y como separador el tetracloruro de carbono. Estos dos solventes orgnicos responden en forma diferente a los pigmentos cloroflicos, como as tambin a sus diferencias fsicas que hacen que sean dos lquidos no misibles y con diferente peso especfico. En el segundo mtodo por cromatografa se utilizar como extractante la acetona y como separador el ter de petrleo. Este mtodo se trata de una separacin ms fina de los pigmentos, y se basa en la absorcin y solubilidad diferenciales de varias sustancias entre las que se incluyen los pigmentos. Un soporte inerte como papel de filtro para la corrida y unos granos de carbonato de calcio para deshidratar la muestra, son

los

componentes

necesarios

para

desarrollar la tcnica.

3. CUESTIONARIO: 3.1 En una tabla escriba las propiedades fsicas (peso, forma y color, densidad, punto de fusin, punto de ebullicin, solubilidad) de: cido saliclico, anhdrido actico, cido fosfrico y cido acetilsaliclico. acetona 58.08 g/ mol. liquida Incoloro 0.788 g/ ml 94C ter anhdrido Liquido Incoloro 736 kg/m3 -116 C.

PESO FORMA COLOR DENSIDAD P. FUSIN C P. EBULLLCIN C SOLUBILIDAD

6.5 C 34,5 C Miscible con agua, alcoholes, Disolvente de las cloroformo, dimetilformamida, grasas, azufre, aceites y teres. fsforo.
que comprenden Cianofitos. el filo de los

3.2 cules son las funciones biolgicas de los pigmentos vegetales Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los cloroplastos, son molculas qumicas que reflejan o transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez. El color de un pigmento depende de la absorcin selectiva de ciertas longitudes de onda de la luz y de la reflexin de otras. Constituyen el sustrato fisicoqumico donde se asienta el proceso fotosinttico. Hay diversas clases de pigmentos:
Principales: Clorofilas (a, b, c, d y bacterioclorofilas) de coloracin verde. Accesorios: Carotenoides (carotenos y xantofilas) de coloracin amarilla y roja. Ficobilinas de coloracin azul y roja presentes en las algas verdeazuladas,

La Clorofila, es el pigmento que da el color verde a los vegetales y que se encarga de absorber la luz necesaria para realizar la fotosntesis, proceso que posibilita la sntesis de sustancias orgnicas a partir de las inorgnicas (CO2, H2O y sales minerales), 3.3 que caractersticas qumicas tiene la clorofila y que funcin cumple La Clorofila, es el pigmento que da el color verde a los vegetales y que se encarga de absorber la luz necesaria para realizar la fotosntesis, proceso que posibilita la sntesis de sustancias orgnicas a partir de las inorgnicas (CO2, H2O y sales minerales), mediante la transformacin de la energa luminosa en energa qumica. La

clorofila absorbe sobre todo la luz roja, violeta y azul, y refleja la verde. Generalmente la abundancia de clorofila en las hojas y su presencia ocasional en otros tejidos vegetales, como los tallos, tien de verde estas partes de las plantas. En ocasiones, la presencia de clorofila no es tan patente al descomponerse y ocupar su lugar otros pigmentos de origen isoprnico tambin presentes en los plastos como son los carotenos (alfa, beta y ganma) y las Xantofilas. 3.4 cual es la estructura molecular de la clorofila a y la clorofila b

pirofosfato. Esto produce sus rasgos estructurales ms evidentes, la presencia de muchos dobles enlaces conjugados y de un buen nmero de ramificaciones de grupos metilo, situados en posiciones constantes. Se conocen alrededor de 600 compuestos de esta familia, que se dividen en dos tipos bsicos: los carotenos, que son hidrocarburos, y las xantofilas, sus derivados oxigenados. A estos tipos hay que unir los apocarotenoides, de tamao menor, formados por ruptura de los carotenoides tpicos. 3.6 que es el licopeno, cual es su estructura molecular y que caractersticas qumicas tiene El licopeno es un pigmento vegetal, soluble en grasas, que aporta el color rojo caracterstico a los tomates, sandas y en menor cantidad a otras frutas y verduras.

ESTRUCTURA MOLECULAR

3.5 que son los carotenoides Los carotenoides son los responsables de la gran mayora de los colores amarillos, anaranjados o rojos presentes en los alimentos vegetales, y tambin de los colores anaranjados de varios alimentos animales. Desde el punto de vista qumico, pertenecen a la familia de los terpenos, es decir estn formados por unidades de isopreno (ocho unidades, es decir, cuarenta tomos de carbono), y su biosntesis se produce a partir de isopentenil El licopeno es uno de los primeros carotenoides que aparecen en la sntesis de este tipo de compuestos, constituyendo la base molecular para la sntesis de los restantes carotenoides. El licopeno es un carotenoide de estructura sencilla con una cadena aliftica formada por cuarenta tomos de carbono. El licopeno es un carotenoide altamente lipoflico que se caracteriza por carecer de anillos cclicos y poseer un gran nmero de dobles enlaces conjugados. Su

obtencin por sntesis qumica an no est totalmente establecida y, a diferencia de otros carotenoides como el -caroteno producido a gran escala por sntesis, el licopeno se obtiene fundamentalmente a partir de fuentes

naturales, hongos y muy especialmente tomates. Sin embargo, los sistemas de extraccin son costosos y el licopeno presenta una baja estabilidad, lo que ha limitado su utilizacin como colorante alimenticio.

4. MATERIALES, SUSTANCIAS, REACTIVOS a) Mediante un cuadro indique los materiales de laboratorio y sustancias utilizados para cada una de las determinaciones hechas en la prctica.

Materiales de Laboratorio 1 Espatula 1 Vaso de Precipitacin 250 ml 1 luna de reloj 1 Piseta 1 tubo falcon de 15 ml 1 Pipeta 1 tubo de ensayo de 15 1 Gradilla para tubos de ensayo 15ml 1 varilla de agitacion 2 pipetas de 10 ml 1 Pera

Sustancias ter Anhdrido Acetona Muestra de tomate

5. PROCEDIMIENTO
Lavamos y pelamos el tomate de rin verde, de manera que solo se obtuvimos el pericarpio del mismo Luego pesamos aproximadamente 2 gramos del pericarpio y disgregarlos con la varilla de vidrio en el interior del tubo Falcon de 15ml. Por cada gramo de pericarpio, aadimos 2ml de acetona; tapamos con rapidez para que no se volatilice el reactivo. Agitamos vigorosamente hasta completar la extraccin de los pigmentos. Lugo centrifugamos durante 30 minutos de 3000 a 3500 rpm; hasta obtener la solucin libre de sustratos. Recuperamos la fase orgnica superior, que contiene los pigmentos, con la pipeta y lo pasamos a otro tubo. El lquido obtenido lo pasamos a las celdas del espectrofotmetro y determinamos los espectros de absorcin de ambos pigmentos a la absorbancia de 502nm para el licopeno y a la absorbancia de 650 y 665nm para la clorofila.