Faculdade de Farmcia da Universidade do Porto Alimentao Humana II Ano letivo 2012/2013 Prof.

Maria Antnia

Relatrio 1 Srie de Trabalhos

Joana Rodrigues Guerra Ferreira Liliana Raquel Gomes Fernandes Marcos Tiago Morais de Jesus Oliveira Turma 7 Grupo 4

Alimentao Humana II | 2012-2013

ndice

Introduo Trabalho n 1: Determinao dos flavonoides Trabalho n2: Determinao dos compostos fenlicos Trabalho n 3: Determinao do poder de antioxidantes pela reduo do io frrico (FRAP- Ferric Reduction Antioxidant Power)

Pg. 3 Pg. 6 Pg. 9 Pg. 13

Comparao dos resultados com a rotulagem/Comentrios Ponto de vista do utente/cliente/consumidor Sugestes trabalhos futuros Bibliografia

Pg. 16 Pg. 17 Pg. 18 Pg. 20

2 Relatrio 1 srie de trabalhos

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Introduo
Os suplementos alimentares, tais como vitaminas, minerais e aminocidos so usados para servir de complemento a uma alimentao deficiente, principalmente por quem possui carncias nutricionais (idosos, grvidas, vegetarianos). Quem pratica atividades fsicas intensas tambm costuma usar os suplementos alimentares para conseguir obter melhores desempenhos e para repor as perdas nutricionais sofridas durante o exerccio fsico ou psicolgico. Outro grupo que recorre com frequncia a suplementos alimentares so indivduos sujeitos a um esforo intelectual que exige maior rendimento (estudantes em pocas de exames, sujeitos com excesso de trabalho,..), ajudando estes a aumentar a concentrao, memoria e o nmero de horas consecutivas de trabalho e diminuindo o cansao e fadiga. Mas o que so um suplementos alimentares? Os suplementos alimentares so considerados gneros alimentcios comuns, apesar de possurem uma forma de apresentao doseada. Por esse facto, tal como para todos os alimentos, os suplementos alimentares, de acordo com o Decreto-Lei n 560/99 de 18 de Dezembro e o Decreto-Lei n 136/2003 de 28 de Junho, no podem atribuir propriedades profilticas, de tratamento ou cura de doenas, nem fazer referncia a essas propriedades, ao contrrio dos medicamentos. So preparaes destinadas a complementar a dieta e fornecer nutrientes, como vitaminas, minerais, fibras, cidos gordos ou aminocidos, que podem estar em falta ou no podem ser consumidos em quantidade suficiente na dieta de uma pessoa. Podem ser substncias produzidas quimicamente que complementam os benefcios oferecidos pelos alimentos ou compostos naturais que podem fornecer protenas, carbohidratos, vitaminas e sais minerais. A maioria dos suplementos alimentares tem o seu uso liberalizado, pois no oferecem risco sade; porm, devem ser consumidos de acordo com o que est na embalagem. Devem ser tomados principalmente aquando as refeies visto ser o horrio ideal, dado que o corpo absorve os nutrientes de forma mais eficaz devido a estimulao do sistema digestivo pela comida. Os suplementos alimentares esto cada vez mais presentes na sociedade. O consumo cada vez mais elevado de suplementos deve-se avaliao positiva destes xenobiticos (resultados avaliados como razoveis, reaces adversas reduzidas) e autonomia na gesto da sade que permitem (consumo por iniciativa prpria, disponibilidade/acessibilidade dos recursos). Em contra partida, a conjugao medicamento + suplemento leva a um aumento do risco de interaes medicamentosas (ex.: Efeito antagnico - Xantinas e Suplementos Calmantes; Medicamentos ansiolticos e Suplementos Estimulantes).

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Os suplementos surgiram nos EUA nos anos 70 visando melhoria da qualidade de vida. O principal objetivo era a preveno de doenas e a complementao da alimentao que se encontrava, e ainda se encontra, muito deficiente. Hoje em dia esses suplementos visam a qualidade de vida e a parte clinica. Desde os anos 80 que um nmero crescente de investigaes tem confirmado que muitas das doenas mais comuns do sculo XX (doena de Alzheimer, cancro, doena cardiovascular, cataratas, diabetes, hipertenso, infertilidade, doena peridental (dentes), infeces das vias respiratrias, artrite reumatoide) esto associadas a uma escassez de nutrientes antioxidantes, derivado do sedentarismo e dos hbitos alimentares incorretos, que afeta o sistema imunitrio e mais concretamente os seus mecanismos de defesa contra o stress oxidativo. H, portanto, uma correlao entre o baixo consumo de antioxidantes e a elevada incidncia de doenas crnicas. O denominador comum no processo de envelhecimento e nas doenas que lhe esto associadas chama-se leso oxidativa. Os antioxidantes so nutrientes que ajudam a proteger o organismo desta leso atuando na preveno e tratamento da doena, sendo substncias capazes de desarmar os radicais livres. Os protagonistas so as vitaminas A, C e E mais o betacaroteno, precursor da vitamina A que se encontra na fruta e nos legumes. A sua presena na nossa alimentao e os seus nveis no nosso sangue podem vir a revelar-se o melhor indicador para prevenir a doena. O oxignio a base de toda a vida vegetal e animal, sendo necessrio a todas as clulas. Sem ele, no seria possvel libertar a energia dos alimentos que comanda todos os processos orgnicos. O oxignio, no entanto, quimicamente reactivo e altamente perigoso: em reaces bioqumicas normais, o oxignio pode tornar-se instvel e capaz de oxidar as molculas vizinhas, podendo conduzir degenerao celular que eventualmente desencadear cancro, inflamaes, leses nas artrias e envelhecimento. Os antioxidantes tambm ajudam a estimular o sistema imunitrio e aumentam a resistncia a possveis infees. Os radicais livres so molculas oxidantes altamente reativas que atacam outras molculas atravs da captura de eletres modificando as estruturas qumicas. So produzidos como parte do metabolismo natural, sendo tambm introduzidos no organismo atravs de fontes externas como a exposio ao sol, a poluio, o stress, a ingesto de bebidas alcolicas, os alimentos insalubres e o tabaco. Os antioxidantes combatem estes radicais livres e so essenciais para o funcionamento adequado do sistema imunolgico. As fontes endgenas de antioxidantes incluem a respirao

4 Relatrio 1 srie de trabalhos

Alimentao Humana II | 2012-2013 normal, a fagocitose, as enzimas do citocromo P450 e os peroxissomas. A oxidao dos cidos gordos causa libertao de peroxissomas que podem causar dano oxidativo. Todos os anos se descobrem mais antioxidantes na natureza, incluindo substncias existentes nas bagas, nas uvas, no tomate, na mostarda, nos brcolos e em ervas como o aafro-da-ndia e o ginkgo biloba. Essas substncias das quais fazem parte os bioflavonides, o licopeno e as antocianidinas, no so nutrientes essenciais mas so muito benficas. So classificadas como substncias fitoqumicas. As vitaminas antioxidantes essenciais (A, C, E e o precursor da vitamina A, o betacaroteno) encontram-se nos legumes e frutos vermelhos/cor de laranja/amarelos. A vitamina C tambm abundante nos legumes e frutos crus, mas o calor destri-a rapidamente. A vitamina E existe nos alimentos com semente (frutos secos, as prprias sementes e seus leos, legumes como ervilhas, feijes, milho e cereais integrais). Devido aos fatos acimai referidos, a procura por suplementos cujos constituintes possuam propriedades antioxidantes tem vindo cada vez mais a aumentar. Este relatrio surge no contexto da avaliao da atividade antioxidante de uma srie de produtos (Sumo Nctar de Frutos Vermelhos da marca Continente, vermelhos, Sumo Compal de Frutos

Xarope de Mangosto Mangosteen Extrato, Xarope Kids Geleia Real + Forte,

Vita C Berry) que alegam possuir esta propriedade. Com o objetivo de comprovar ou refutar a presena de capacidade antioxidante das amostras, foram realizadas trs determinaes: Determinao de flavonides totais; Determinao dos compostos fenlicos totais; Determinao da atividade antioxidante.

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Trabalho laboratorial 1: Determinao de flavonides

Os flavonides so ubquos nas plantas e desempenham um papel fundamental na qualidade sensorial dos alimentos, principalmente na

adstringncia. Estes constituem uma importante classe de polifenis,

presentes, em relativa abundncia, entre os metablitos secundrios. So produtos de origem

biossinttica mista, sendo biossintetizados atravs da rota (ou via) do cido chiqumico e tambm do acetato (acetil coenzima A). Alguns flavonides apresentam efeito antioxidante quatro vezes maior que a vitamina E. As fontes alimentares de flavonides incluem mas, cebola, vinho tinto, chocolate, frutas vermelhas, frutas ctricas e ch verde e vrios estudos prospetivos observaram a reduo do risco cardiovascular na presena de alta ingesto desse grupo de substncias. Um dos benefcios do consumo de frutas e outros vegetais geralmente atribudo aos flavonides, uma vez que a esta classe de substncias so atribudos diversos efeitos biolgicos que incluem, entre outros: ao anti-inflamatria, hormonal, anti-hemorrgica, antialrgica e anticancergena. So ainda responsveis pelo aumento da resistncia capilar e tambm denominados de fator P ou substncia P, auxiliando na absoro da vitamina C. O efeito mais importante a propriedade antioxidante. Tanto a indstria como pesquisadores e consumidores tm demonstrado grande interesse nos compostos flavonides pelo potencial de seu papel na preveno do cancro e doenas cardiovasculares devido s suas propriedades antioxidantes. Estima-se que a dose adequada ao consumo de flavonides varie entre 25mg e 1g. Diversas plantas medicinais possuem flavonides nos seus constituintes qumicos, sendo que exemplos importantes so o ginkgo (Ginkgo biloba L., famlia Ginkgoaceae), o maracuj (Passiflora incarnata L., P. edulis Sims. e P. alata Curtis, famlia Passifloraceae) e espcies do gnero Citrus. As catequinas, em particular, so fitonutrientes da famlia dos polifenis que possuem elevada actividade antioxidante. Benefcios constatados das catequinas: 6 Relatrio 1 srie de trabalhos

Alimentao Humana II | 2012-2013 Pode interromper o crescimento das clulas cancerosas, ao mesmo tempo que protege

as clulas saudveis. Refora o sistema imunitrio. Evita o aumento do colesterol. Pode evitar o envelhecimento precoce potenciado pela aco dos radicais livres,

O mtodo:
O mtodo utilizado um mtodo colorimtrico. O catio alumnio forma complexos estveis com os flavonides, ocorrendo na anlise espectrofotomtrica um desvio para maiores comprimentos de onda e uma intensificao da absoro. A amostra ento misturada com um reagente contendo cloreto de alumnio e nitrito de sdio, sendo formado um complexo flavonoide-alumnio de cor rosa.

Vantagens
possvel determinar a quantidade de flavonides, evitando-se a interferncia de outras substncias fenlicas, principalmente os cidos fenlicos. O mtodo preciso, isto , ele reproduzvel. Desvios muito pequenos entre ensaios com a mesma amostra.

Limitaes
Pouco exato, ou seja, o valor que ele fornece pode ser diferente (geralmente inferior) em relao quantidade de flavonides totais realmente presente na amostra analisada.

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Procedimento:
O procedimento utilizado na determinao do teor em flavonides foi o seguinte:

Preparaao das amostras filtrao e diluio / triturao e diluio

1 ml de amostra + 4 ml de gua destilada + 300 ul de NaNO2 (para fixar a cor)

Aguardar 5 minutos

300uL de AlCl3 (formao do complexo alumnio-flavonide)

Aguardar 1 minuto

2 ml NaOH (basicidade do meio) +2,4 ml de gua

leitura de absorvncia em leitor de microplacas a 510 nm Calcular a concentrao de flavonoides (reta de calibrao efetuada com soluo padro de catequina)

Resultados:
Comprimidos Vita C Berry Abs 1 Abs 2 Mdia das Abs Abs corrigida Y = 0,0018x+ 0,0036 Fator de diluio Concentrao final (mg catequinas/L)
0,129 0,106 0,1175 0,078 41,33333333 0,01 4133,333333 0,115 0,11 0,1125 0,073 38,55555556 1 38,55555556 0,34 0,343 0,3415 0,302 165,7777778 1 165,7777778 0,04 0,039 0,0395 -

Mangusto

Sumo Comercial

Branco

m (3 comprimidos) = 1,9620 g m (1 comprimido) = 0,654 g 1 comprimido = 4133,333333*0,654= 2703,20 mg catequinas 8 Relatrio 1 srie de trabalhos

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Trabalho laboratorial 2: Determinao de Compostos fenlicos

Fenis so compostos que apresentam hidroxilo ou oxidrilo ligado diretamente ao ncleo benznico. Vrios polifenis (que apresentam mais que 3 hidroxilos ligadas ao anel benznico) distribudos na natureza apresentam ao antioxidante e tm sido associados com a reduo de doenas crnicas. Entre eles, os flavonides tm-se mostrado um dos antioxidantes mais abundantes e eficazes da nossa dieta. Os compostos fenlicos so substncias amplamente distribudas na Natureza. Esse grande e complexo grupo faz parte dos constituintes de uma variedade de vegetais, frutas e produtos industrializados. Podem ser pigmentos, que do a aparncia colorida aos alimentos, ou produtos do metabolismo secundrio, normalmente derivado de reaes de defesa das plantas contra agresses do ambiente. Esses compostos agem como antioxidantes, no somente pela sua habilidade em doar hidrognio ou eletres, mas tambm em virtude dos seus radicais intermedirios estveis, que impedem a oxidao de vrios ingredientes do alimento, particularmente de lpidos. As frutas, principalmente as que apresentam so a colorao as mais

vermelha/azul,

importantes fontes de compostos fenlicos em dietas alimentares. Muitos destes compostos

apresentam uma grande gama de efeitos biolgicos, incluindo aes antioxidantes, antimicrobiana, antiinflamatria e vasodilatadora. Vrios efeitos benficos sade tm sido atribudos aos compostos fenlicos presentes nas frutas, vegetais, chs e vinhos. Estudos epidemiolgicos, clnicos e in vitro mostram mltiplos efeitos biolgicos relacionados aos compostos fenlicos da dieta, tais como: atividades antioxidante, anti-inflamatria, antimicrobiana e anti carcinognica. O interesse pelos compostos fenlicos antioxidantes tem aumentado de forma evidente devido a sua capacidade de neutralizar radicais livres associados a doenas.

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O mtodo:
O ensaio Folin-Ciocalteu (FC), tambm conhecido como ensaio de fenis total, um dos mais antigos mtodos de quantificao de fenis em uma amostra. um mtodo colorimtrico. Foi desenvolvido inicialmente por Singleton e colaboradores em 1965 e em 1999 o ensaio foi delineado e padronizado para quantificao de fenis totais (SINGLETON et al. 1999), a partir da o ensaio encontrou outras aplicaes. O teor total de compostos fenlicos foi determinado utilizando um ensaio com o reagente de Folin-Ciocalteu (FC). Este ensaio quimicamente suportado pela transferncia de eletres em meio alcalino de compostos fenlicos e outras espcies redutoras para o molibdnio, dando origem a complexos azuis. Estes complexos podem ser monitorizados espetrofotometricamente entre 750-765 nm (Magalhes et al., 2008; Karadag et al., 2009). Geralmente, o cido glhico utilizado como composto de referncia e os resultados so expressos em equivalentes de cido glhico. necessrio um meio alcalino para que os compostos fenlicos reajam com o reagente de Folin-Ciocalteu, pelo que necessrio adicionar uma soluo de carbonato de sdio (MacDonald-Wicks et al., 2006; Magalhes et al., 2008; Barreira, 2010). O ensaio FC atualmente utilizado para mensurar a capacidade antioxidante de uma amostra, o que aparentemente pode no estar refletido na sua caracterstica de ensaio de fenis total. O sistema caracteriza-se por uma mistura de cidos fosfotungustico e fosfomolibdico (colorao amarelada) em um meio bsico. Os fenis contidos nas amostras so energeticamente oxidados em meio bsico, resultando na formao do O2 -, o qual reage com os cidos formando compostos (colorao azul) com uma intensa absoro perto de 750nm. Os fenlicos determinados por FC so frequentemente expressos em cido glico equivalente. Apesar da qumica do FCR ainda no estar bem definida, o ensaio de fenis total por FCR conveniente, simples e reprodutivo. Como resultado, uma grande massa de dados esto sendo acumulados atravs deste e est se tornando um ensaio rotineiro no estudo de antioxidantes fenlicos, uma vez que se estabeleceu uma correlao entre o contedo fenlico e a capacidade antioxidante de produtos naturais. um ensaio simples, rpido, econmico e bastante fivel, podendo ser aplicado de forma automatizada, semi-automatizada ou manual.

Vantagens:
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Alimentao Humana II | 2012-2013 Boas correlaes lineares entre os perfis de fenis totais e a atividade antioxidante Resultados por este ensaio: teis, simples e reprodutveis

Limitaes:
lento: operaes mltiplas e perodo de incubao Necessita de uma curva padro com protena conhecida Os acares bem como o cido ascrbico so considerados compostos interferentes quando presentes nas amostras em teores mais elevados. um pouco questionvel at que ponto os dados obtidos por estes ensaios podem fornecer informao quantitativa da capacidade de inibio da amostra no processo oxidativo biolgico. Baixa reprodutibilidade: resultados so altamente dependentes da concentrao de reagentes e do tempo de incubao. Reagente FC no especfico para compostos fenlicos porque pode ser reduzido por outros compostos no-fenlicos, nomeadamente aminas aromticas, cido ascrbico, Fe2+ entre outros, assim a utilizao da denominao compostos fenlicos totais pode ser utilizada apenas quando os outros interferentes so removidos das amostras Ensaio moroso e logo de difcil implementao na rotina da avaliao de compostos fenlicos.

Procedimento:
Preparaao das amostras filtrao e diluio / triturao e diluio

500 l de amostra + 2,5 ml de Folin-Ciocalteu + 2 ml Na2CO3

45C protegido da luz, 15 minutos

temperatura ambiente, 30 minutos

leitura de absorvncia em leitor de microplacas a 765 nm

Calcular a concentrao de flavonoides (reta de calibrao efetuada com soluo padro de catequina)

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Resultados:
Comprimidos Abs 1 Abs 2 Mdia das Abs Abs corrigida Y = 0,0056x + 0,0548 Fator de diluio Concentrao final (mg cido galhico/L)
0,202 0,203 0,2025 0,149 16,8214286 0,0001 168214,3

Mangusto
0,669 0,669 0,669 0,669 109,678571 0,1 1096,786

Sumo Comercial
0,601 0,649 0,625 0,625 101,821429 0,1 1018,214

Branco
0,055 0,052 0,0535 -

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Trabalho

laboratorial

3:

Determinao

do

poder

de

antioxidantes pela reduo do io frrico (FRAP- Ferric Reduction Antioxidant Power)

O antioxidante um tipo de substncia que evita a formao de radicais livres no organismo. Existem os antioxidantes naturais, que so as vitaminas encontradas nos alimentos ou os suplementos vitaminicos e de minerais e oligoelementos que atuam como antioxidantes sintticos orais, quando a ingesto de frutas e legumes no ideal. Os radicais livres favorecem o envelhecimento celular e os antioxidantes combatem esta ao reduzindo a velocidade do envelhecimento do organismo. O consumo de alimentos ricos em antioxidantes protegem o corpo da ao dos radicais livres, proporcionando mais sade. Eles podem ser encontrados em frutas, vegetais, legumes e cereais. Principalmente nos alimentos que so fontes de vitamina A, C, E e selnio, que so os principais antioxidantes presentes nos alimentos. Alguns exemplos de alimentos antioxidantes so, o tomate, a acerola, a laranja, o arroz, a couve, o agrio e o brcolis, as sementes de linhaa ou de ssamo, a castanha do par, o morango, uvas e mistilos, A quantidade de antioxidante ideal para se suplementar muito difcil de se afirmar, porque a capacidade de oxidar nutrientes muito varivel dependendo do nvel de stress, atividade fsica, tipo de doena (caso exista) e at mesmo exposio solar que aumenta os radicais livres.

O mtodo
O ensaio FRAP (ferric reducing antioxidant power) (BENZIE, et. al, 1996) est baseado na capacidade dos fenis em reduzir o Fe3+ em Fe2+. Quando isto ocorre, na presena de 2,4,6-tripiridils-triazina (TPTZ), a reduo acompanhada pela formao de um complexo corado com o Fe2+. O ensaio expresso em cido ascrbico equivalente. Apesar de ser um mtodo relativamente simples, tambm muito utilizado. A cor amarela da soluo de ensaio altera-se para diferentes tons de verde ou azul. A cor azul resultante, medida espectrofotometricamente a 593 nm, tomada como linearmente relacionada com a capacidade de reduo do total de doadores de electres antioxidantes. . 13 Relatrio 1 srie de trabalhos

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Fe(III)-L + antioxidante

Fe(II)-L + antioxidante oxidado

Os ensaios mais utilizados para determinar as propriedades antioxidantes in vitro so o FRAP, ORAC e DPPH.

Vantagens
Requerem equipamento laboratorial pouco especfico e permitem resultados rpidos e reprodutveis. Ensaio simples, rpido, econmico, bastante fivel. Pode ser realizado utilizando mtodos automatizados, semi-automticas ou manuais.

Limitaes
Nem todos os redutores capazes de reduzir o Fe(III) sao antioxidantes e nem todos os antioxidantes (que podem reduzir os pro-oxidantes) so capazes de reduzir eficientemente o Fe (III). A presena de diferentes espcies na mistura de Fe(III) traz potenciais problemas, visto que estes podem ligar se a agentes quelantes no extrato da comida e estes complexos so capazes de reduzir antioxidantes. No h relao entre o valor de FRAP e o nmero de eletres que um antioxidante pode doar. A tcnica de FRAP no permite detectar os compostos que agem por captura de radicais (transferncia de H), em particular tiis e protenas. Isto provoca um erro de leitura em defeito grave no soro. FRAP obedece a hiptese de que as reaces redox ocorrem to rapidamente que todas esto completas em 4 a 6 minutos, respetivamente, mas isto no sempre verdadeiro.

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Procedimento:

Preparao das amostras

90 l de amostra + 270 l de gua destilada + 2,7 ml de reagente FRAP

Homogeneizao e banho-maria 30 minutos (37 0C)

Leituras a 595 nm

Resultados:
Comprimidos Abs 1 Abs 2 Mdia das Abs Abs corrigida Y = 0,012x - 0,0626 fator de diluio concentrao final (mg sulfato 0,418 0,47 0,444 0,363 35,4666667 0,0001 354666,6667 Mangusto 0,189 0,178 0,1835 0,1835 20,5083333 0,1 205,0833 Sumo Comercial 0,633 0,677 0,655 0,655 59,8 0,1 598 Branco 0,089 0,073 0,081 -

ferroso/L)

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Comparao dos resultados com a rotulagem/Comentrios

Observaram-se valores de concentrao muito elevados no caso de Vita C Berry, devido a interferncia da na vitamina C. A comparao com os valores rotulados, que s seria possvel no caso do Vita C Berry que o nico que tem no rtulo a quantidade de antioxidantes, no o pode ser visto no sabermos os mtodos utilizados para a determinao destes valores. No rtulo do mangosteen, no encontramos informao nutricional que nos permita comparar os nossos resultados com algum tipo de valor tabelado. Neste apenas refere o forte poder super antioxidante, ajuda no sistema imunitrio e anti-envelhecimento, propriedades cujos compostos antioxidantes medidos possuem. Porm, a concentrao observada, quando comparada com os outros produtos baixa, o que nos faz questionar se realmente o mangusto possui os efeitos que alega ter. No rtulo do sumo comercial, no encontramos informao nutricional que nos permita comparar os nossos resultados com algum tipo de valor tabelado. Neste apenas refere o forte poder antioxidante, propriedade tambm possuda pelos compostos antioxidantes avaliados. Os dois produtos a base de frutos vermelhos (Vita C berry, Sumo Comercial), ricos em antioxidantes, so efetivamente os que apresentam maiores quantidades destes.

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Ponto de vista do utente/cliente/consumidor

Na nossa opinio, o Mangosteen no apresenta as propriedades que alega ter, visto que as concentraes obtidas de antioxidantes so baixas. O sumo comercial e o Vita C Berry apresentam concentraes mais elevadas. Dos trs produtos, o Vita C Berry o que apresenta maiores concentraes. Tendo em conta os resultados dos ensaios, achamos que o Vita C Berry efetivamente possui as propriedades descritas.

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Sugestes trabalhos futuros

Com base nas reaes qumicas envolvidas a maioria dos ensaios relativos capacidade antioxidante podem ser classificados em duas categorias: - Ensaios em que tm por base a transferncia de tomos de hidrognio (TAH) - estes ensaios, geralmente so constitudos por um gerador de radical livre sinttico, um marcador oxidvel e um antioxidante; um mtodo que avalia a capacidade de um antioxidante eliminar os radicais livres pela cedncia de hidrognio. Os ensaios TAH incluem mtodos como o ORAC (capacidade de absoro do radical oxignio), o TRAP (parmetro antioxidante de radicais totais, o mtodo TBARS (substncias reativas do cido tiobarbitrico) e o mtodo de Folin-Ciocalteu ou ensaio da determinao dos fenis totais; - Ensaios com base na transferncia de um eletro (TE) - os ensaios baseados na transferncia de eletres avaliam a capacidade de um antioxidante para reduzir um oxidante, que muda de cor quando reduzido. Os ensaios de TE incluem mtodos como o TEAC (capacidade antioxidante em equivalentes de trolox), o FRAP (poder antioxidante por reduo do io frrico), a reduo de cobre (CUPRAC) e o DPPH (captao do radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazilo) (Huang et al., 2005; MacDonald-Wicks et al., 2006; Karadag et al., 2009). Estes dois mecanismos de ao podem ocorrer em simultneo o que pode dificultar a sua diferenciao e classificao (Karadag et al., 2009). Os componentes de qualquer ensaio da capacidade antioxidante incluem um iniciador da oxidao, um substrato adequado e uma correta medio do ponto de trmino da reao. O iniciador pode ser um aumento da temperatura, a adio de metais de transio como catalisadores ou a agitao para aumentar o contacto do reagente com a fonte de radicais livres (Karadag et al., 2009). Cada tipo de metodologia analisada apresenta as suas vantagens e desvantagens. Os mtodos diretos mostram-se mais adequados para avaliao da atividade antioxidante, especialmente aqueles baseados no modelo de reao em cadeia controlada, pois em geral so mais sensveis. A desvantagem apresentada por estes mtodos que muitos deles so tempo dependente, o que sugere que suas aplicaes requerem experincia em reaes de cintica qumica. Mtodos indiretos bem-desenvolvidos como, por exemplo, o DPPH e o FCR, so adequados e de mais fcil manipulao e apesar de no apresentarem a mesma especificidade, tambm permitem uma adequada avaliao da atividade antioxidante. Porm um pouco questionvel at que ponto os dados obtidos por estes ensaios podem fornecer informao 18 Relatrio 1 srie de trabalhos

Alimentao Humana II | 2012-2013 quantitativa da capacidade de inibio da amostra no processo oxidativo biolgico. Outro impasse na aplicao dos mtodos indiretos a sua baixa reprodutibilidade. A razo principal disto que os resultados so altamente dependentes da concentrao de reagentes e do tempo de incubao. Comparando alguns mtodos diretos e indiretos sob o ponto de vista do mecanismo de reaes envolvidas no protocolo experimental e sugerem que o ORAC e o FCR so ensaios adequados para se avaliar a atividade antioxidante de alimentos, produtos naturais e fludos biolgicos, apresentando vantagens uma vez que minimizam a possibilidade de ocorrncia de reaes falso positivas e outras limitaes presentes em ensaios como TEAC e FRAP. Por fim pode-se dizer que sempre prudente que os dados obtidos com o mtodo indireto sejam correlacionados com os dados obtidos por mtodos diretos a fim de se obter uma maior segurana analtica dos resultados obtidos em ensaios antioxidantes empregando modelos in vitro e in vivo. A aplicao do ensaio de fenis total e um ensaio baseado na transferncia de eletres (e.g. TEAC, FRAP, etc.) permite encontrar entre estes excelentes correlaes lineares entre o perfil de fenis total e a atividade antioxidante. Esta correlao est presente devido s similaridades qumicas presentes entre estes ensaios.

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Alimentao Humana II | 2012-2013

Bibliografia
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