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PARA SU USO Para el anlisis cuantitativo in vitro de Urea en suero, plasma u orina. Este producto es adecuado para uso Manual. No. Cat. UR 220 6 x 15 ml 1. Tampn 2. Reactivo Enzima Patrn 1. Tampn 2. Reactivo Enzima Patrn 1. Tampn 2. Reactivo Enzima Patrn 1. Tampn 2. Reactivo Enzima Patrn
(1,2)

UREA
Mtodo Enzimtico Cintico MANUAL EXTRACCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA (3,4) Suero/Plasma: Se puede utilizar la heparina como anticoagulante. No utilizar heparinato amnico Orina (24h): Extraer la orina sin aditivos: Refrigerar tras la extraccin Se recomienda una dilucin de 1 + 20 con NaCl al 0,9% para este anlisis. Multiplicar el resultado por 21. La urea es estable en suero/plasma durante 1 da +25C, 3 das entre +2 y +8C 3 meses a -20C. La urea es estable en la orina durante 4 das cuando se conserva entre +2 y +8C. COMPOSICIN DEL REACTIVO Componentes Concentracin Inicial de las Soluciones

1 x 100 ml 6 x 15 ml 1 x 5 ml 10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5 ml 10 x 100 ml 10 x 100 ml 1 x 5 ml 6 x 500 ml 6 x 500 ml 1 x 5 ml

UR 221 10 x 50 ml

UR 222 10 x 100 ml

UR 2364 6 x 500 ml

SIGNIFICADO CLINICO La urea se sintetiza en el hgado a partir del amonaco, como resultado de la deaminizacin de los aminocidos. El cuerpo utiliza el camino biosinttico como la forma principal para eliminar el exceso de nitrgeno. Las medidas obtenidas por esta prueba se utilizan en el diagnstico de enfermedades renales y metablicas, principalmente enfermedades de los riones. Ms del 60% del rin debe ser destruido antes de que los niveles de urea plasmtica aumenten significativamente. Esta prueba se utiliza ms frecuentemente junto con la creatinina srica para los niveles incrementados de protena (descompensacin cardaca, reduccin de agua). En 1913, Marshall introdujo un anlisis en el que utilizaba la ureasa para la determinacin de urea en la sangre. El amonaco liberado de la urea por medio de la ureasa se midi titrimtricamente. Desde entonces se han utilizando numerosas tcnicas para medir el amonaco producido. En 1965 Talke y Schubert produjeron un procedimiento enzimtico para la determinacin de urea utilizando el sistema enzima de ureasa-GLDH (Glutamato deshidrogenasa) METODO UV La urea se hidroliza en presencia de agua y ureasa para formar amonaco y dixido de carbono. El amonaco producido en la primera reaccin se combina con -oxoglutarato y NADH en presencia de + glutamato-deshidrogenasa para producir glutamato y NAD . PRINCIPIO
Ureasa (1,2)

1. Tampn Tampn Tris 2. Reactivo Enzima Ureasa GLDH NADH Adenosina-5-difosfato -oxoglutarato Patrn

150 mmol/l, pH 7,6 10 U/ml 2 U/ml 0,26 mmol/l 3 mmol/l 14 mmol/l 13,3 mmol/l (80 mg/dl)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Slo para diagnstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. La solucin 1 y el Patrn contienen Azida Sdica. Evitar su ingestin o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestin, buscar atencin mdica inmediatamente. El Azida Sdica reacciona con el plomo y cobre de las caeras, formando cidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volmenes de agua para evitar la formacin de cidos. Las superficies metlicas expuestas, debern limpiarse con hidrxido de sodio al 10%. Hojas Sanitarias y de Seguridad estn disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados slo para los propsitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

Urea + H2O

2 NH3 +

CO2
GLDH

2 -oxoglutarato + 2 NH4+ + 2 NADH

2 L-glutamato + + 2 NAD + 2 H2O

MUESTRA Suero, plasma heparinizado o plasma EDTA, orina. Diluir la orina 1 + 20 con agua destilada. Multiplicar el resultado por 21.

MANUAL - UREA - UR 220 ESTABILIDAD Y PREPARACIN DE LOS REACTIVOS 1. Tampn Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C. 2. Reactivo Enzima UR 220 Reconstituir un frasco de Reactivo Enzima 2 con 15 ml de Tampn 1. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8C 2 das entre +15 y +25C. UR 221, UR 222, UR 2364 Reconstituir el contenido de un frasco de Reactivo Enzima 2 con una parte de Tampn 1 y despus transferir todo el contenido a la botella 1, enjuagando la botella Reactivo Enzima 2 varias veces. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8C 2 das entre +15 y +25C. Patrn Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampn Reactivo Enzima Patrn MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Material para pipetar adecuado de 10 l y 1000 l. Cronmetro y bloque de calentamiento o bao para mantener 37C. Un espectrofotmetro con una capacidad de longitud de onda de 340/334/365 nm. Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) NOTA Se pueden utilizar todos los anticoagulantes excepto amonaco-heparinato. PROCEDIMIENTO Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 nm o Hg 365 nm) Cubeta: 1 cm de espesor Temperatura de Reaccin: 37C Medicin: frente al blanco de reactivo Pipetear en la cubeta: Blanco de Reactivo l Patrn Muestra Reactivo --1000 Patrn 10 -1000 Muestra l -10 1000

PAGINA 2 DE 2 por ej. 20 mg/dl Urea = 20 x 0,166 = 3,32 mmol/l

Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 30 seg y empezar a cronometrar simultneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. CALCULO DE LA CONCENTRACIN DE UREA Para calcular la concentracin de urea utilizar la siguiente frmula: Amuestra Conc. de urea = x Conc. Patrn (mmol/l or mg/dl) Apatrn Para convertir de las unidades convencionales a las unidades SI4 multiplicar las unidades convencionales por 0,166. mg/dl urea x 0,166 = mmol/l urea
RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912 Email: applications@randox.com Website: www.randox.com

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MANUAL - UREA - UR 220 CALIBRACION Se recomienda el Patrn de Urea Randox (13,3 mmol/l). Completar la recalibracin para cada serie de muestras analizadas. Referirse a los manuales u hojas de aplicacin apropiadas para las instrucciones de calibracin especficas para el instrumento. El patrn se prepara gravimtricamente utilizando urea pura disponible en el comercio. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al da. Los valores obtenidos debern encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repeticin excluye error, se debern seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programacin del instrumento y la lmpara 2. Comprobar que todo material est limpio. 3. Comprobar el agua, contaminacin ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reaccin 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Tcnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. ESPECIFICIDAD/LIMITACIONES La interferencia de la Bilirrubina se analiz hasta 20 mg/dl y se encontr que no interfiere. Las muestras altamente lipmicas pueden causar errores de absorbancia y se deber diluir la muestra. La interferencia de la hemlisis se analiz hasta 500 mg/dl y se encontr que no interfiere. Tomar precauciones para prevenir la contaminacin con amonaco de las muestras a analizar para urea. El amonaco en la atmsfera, en la habitacin, en el agua o en el reactivo elevar los resultados.
5 6 Young et al and Friedman et al dan una lista de substancias y condiciones se sabe afectan a los niveles de urea in vivo. Randox Laboratories Ltd no se hace responsable de la integridad de esta lista o de la exactitud de la informacin en ella incluida. (5,6)

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VALORES DE NORMALIDAD(7) Suero/Plasma 1,7-8,3 mmol/l (10-50 mg/dl) Orina (24 Horas) 333-583 mmol/l (20-35 g/24 h) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geogrfica de la poblacin. LINEARIDAD El mtodo es lineal hasta 50 mmol/l (300 mg/dl) en suero o plasma, y 1050 mmol/l (6300 mg/dl) en orina. Diluir las muestras con concentraciones ms elevadas en 1+1 con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de sensibilidad que esta limitada por la sensibilidad del espectrofotmetro utilizado. En condiciones manuales el anlisis del espectrofotmetro est limitado por el cambio en la absorbancia de 0,001 unidades.

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MANUAL - UREA - UR 220 CARACTERSTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Se realizaron estudios de precisin y correlacin a 37C. Estudio de Recuperacin en una solucin Patrn de Urea ESPERADO (mmol/l) 10 20 30 40 50 RECUPERACIN OBSERVADA (mmol/l) 10,36 20,28 30,10 41,30 50,13 Media (mmol/l) DE CV(%) n PRECISION (ORINA) Precisin Dentro del Anlisis Nivel 1 Media (mmol/l) 354,5 DE 4,04 CV(%) 1,14 n 20 Precisin Entre Anlisis Nivel 1 379,9 13,95 3,67 20

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Nivel 2 451,2 4,71 1,04 20

Nivel 2 476,2 12,76 2,67 20

Correlacin (Suero/Plasma) Se realiz un estudio de comparacin utilizando 40 muestras de pacientes normales y anormales abarcando un rango de 1,58 a 45 mmol/l. El mtodo arriba indicado (Y) se compar con otro mtodo comercial disponible (X). El anlisis de regresin lineal result en la siguiente ecuacin: Y = 0,982X - 0,119 con un coeficiente de correlacin de 0,999 Correlacin (Orina) Se realiz un estudio de comparacin utilizando 46 muestras de pacientes normales y anormales abarcando un rango de 102 a 630 mmol/l. El mtodo arriba indicado (Y) se compar con otro mtodo comercial disponible (X). El anlisis de regresin lineal result en la siguiente ecuacin: Y = 0,9728X + 6,792 con un coeficiente de correlacin de 0,987 PRECISION (SUERO/PLASMA) Precisin Dentro del Anlisis Nivel 1 Media (mmol/l) 6,04 DE 0,16 CV(%) 2,67 n 20 Precisin Entre Anlisis Media (mmol/l) DE CV(%) n Nivel 1 11,21 0,36 3,2 24 Nivel 2 24,71 0,47 1,9 24

REFERENCIAS 1. Marshall EK Jr: J Biol Chem 1913; 15:487. 2. Talke H; Schubert GE: Klin Wschr 1965; 43:174. 3. Tietz N. W., Textbook of Clinical Chemistry. W.B. Saunders Co, 1987, 1254-1316. 4. Tietz N.N: Clinical Guide to Laboratory Tests Philadelphia. W.B. Saunders Co, 1983 pg 494. 5. Young D.S., Pestaner, L.C., Gibbermann, V. Clin. Chem, 1975; 21: No.5. 6. Friedmann R.B, et al: Clin Chem 1980; 26 No.4. 7. Kerscher,L; Tieqenhorn,J; Methods of enzymatic Analysis, H.U. Bergmeyer Ed., VCH rd Verlagsgesellschaft, Weinheim, 1985 3 Ed; Vd VII, p.453.

Nivel 2 16,12 0,30 1,89 20

Revisado 29/03/04 wpt

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