CICLO CELULAR

El ciclo celular regula la conducta proliferativa de las clulas. El ciclo celular incluye: la interfase y la mitosis. La interfase comprende tres perodos: G1, S y G2. En la G1 la clula expresa su estado diferenciado y experimenta un crecimiento progresivo para dotar a las clulas hijas de suficientes organelas y masa para su supervivencia. En el perodo S se produce la duplicacin de los cromosomas y del centrosoma. En G2 la clula verifica la normalidad de su genoma y se prepara para la mitosis. La mitosis dura 1h, el perodo S 4-8h, G2 2-6h y G1 es variable. Sin embargo, hay clulas que salen del ciclo celular, sufren una diferenciacin terminal y dejan de proliferar entrando en un perodo conocido como G0. Son clulas postmitticas.

REGULACIN DEL CICLO

La progresin del ciclo celular requiere de la actividad de quinasas especficas, llamadas Cdks (Cyclindependent kinases). La actividad de las Cdk est regulada por ciclinas, ya que slo los complejos ciclina-Cdk son activos. En cada fase del ciclo opera un complejo diferente de ciclina-Cdk. Al final de G1 actan los complejos ciclina D/Cdk4 y ciclina D/Cdk6; en la transicin G1-S, el complejo ciclina E/Cdk; en la fase S, los complejos Ciclina A/Cdk2 y Ciclina A/Cdk1; en la mitosis, el complejo Ciclina B/Cdk1.

PUNTOS DE CONTROL
El ciclo celular est estrictamente controlado en tres puntos: de restriccin (final G1), de netrada en la mitosis (transicin G2-M) y de transicin metafase-anafase. En G1 la clula presenta sus rasgos fenotpicos y aumenta su masa celualr. Al final de G1 se incrementa la concentracin de Ciclina D/Cdk4-6. Si el medio es favorable (correcta concentracin de factores de crecimiento y nutrientes) y el tamao es adecuado, se pasa el punto de restriccin y se dispara la transicin G1-S. Justo antes de la entrada a la mitosis se comprueba que no haya anormalidades en el genoma.Si hay errores, se dispara la expresin de p53 que activa a p21, un inhibidor del complejo ciclina E/Cdk2 que provoca la parada del ciclo celular. En esta parada se intenta corregir todos los errores, pero si eso no es posible la clula entra en apoptosis ya que no puede transmitir los errores en su genoma.

PERODO S
Ocurren tres procesos muy importantes: duplicacin del centrosoma, duplicacin del DNA y sntesis de histonas. El complejo ciclina E/Cdk2 activa la entrada y progresin en el perodo S. Requiere la fosforilacin de la pRb (retinoblastoma). Esta molcula se encontraba reprimiendo los genes que codifican las molculas necesarias para la entrada en el perodo S, pero al fosforilarse se inactiva y ya es posible la stneisi de la ciclina E y Cdk2.

DUPLICACIN DEL CENTROSOMA

El complejo ciclina E/Cdk2 dispara la duplicacin semiconservativa de los centrosomas. Se separan los dos centriolos y cada centriolo parental organiza el ensamblaje de un nuevo centriolo a partir de la matriz pericentriolar. Inicialmente se forma un procentriolo. En la transicin G2-M se inicia la separacin de los centrosomas y el reclutamiento del material pericentriolar. El ciclo centriolar est regulado por la quinasa PLK4 (polo-like kinase 4). Durante la profase cada centrosoma se dirige a un polo de divisin.

DUPLICACIN DEL DNA

La duplicacin del DNA mantiene constante el nmero de cromosomas y la informacin gentica de la especie: una clula 4c al final del perodo S pasa a 2 clulas 2c tras la mitosis.

La duplicacin del DNA es semiconservativa. Se inicia en el DNA de la eucromatina y termina en el de la heterocromatina (asincrnica). En el DNA naciente podemos observar la bromodesoxiuridina que es una molcula anloga a la timina. Cada cromosoma tiene mltiples sitios de origen de la replicacin, sealizados por 11 bases, donde se ensamblan el complejo del origen de replicacin (COR), Cdc6 y Cdt1 unidos previamente en G1. El COR se activa por fosforilacin (mediada por la ciclinaE/Cdk2), se recluta la DNA helicasa que separa las cadenas, formndose la burbuja de replicacin. La DNA polimerasa, en cooperacin con protenas de unin al DNA de cadena simple, incorpora nucletidos en direccin 5'-3'. En la cadena conductora la sntesis de DNA es continua, mientras que en la cadena retrasada la sntesis es discontinua, se producen fragmentos de DNA de entre 1000 y 2000 nucletidos, denominados fragmentos de Okazaki que posteriormente se unen mediante la DNA ligasa.

SNTESIS DE HISTONAS
Los nucleosomas se disocian parcialmente por la helicasa (pridida de algunas histonas) y se ensamblan inmediatamente despus de la sntesis del DNA. En S se produce la mayor actividad de sntesis de histonas (hay 20 copias de los genes que las sintetizan). Los mRNAs de las histonas tienen un procesamiento especfico para la rpida sntesis de las protenas: no hay splicing ni poliadenizacin.

FORMACIN DE LAS CROMTIDAS HERMANAS

Las dos molculas de DNA resultantes son las cromtidas hermanas. Permanecen ntimamente asociadas por anillos de complejos de cohesinas que las mantienen unidas de forma paralela a lo largo de toda la cadena. La protena geminina sintetizada en S se une a Ctd1 y bloquea su reclutamiento en el COR. Esto impide que se produzca una segunda ronda de duplicacin del DNA, lo que provocaria clulas poliploides.

MITOSIS
Dura aproximadamente 1h y tiene 5 fases: profase, prometafase, metafase, anafase y citoquinesis. La 1 parte de la mitosis est controlada por la fosforilacin de sustratos por el complejo ciclina B/Cdk1. La 2 parte se inicia con la transicin metafase/anafase. Se dispara por el complejo promotor de la anafase (APC) que induce la degradacin de las ciclinas y la separacin de las cromtidas hermanas.

PROFASE
Los cromosomas en interfase y en mitosis tienen estas regiones: centrmero, telmeros y mltiples orgenes de replicaicn. En esta fase hay varios acontecimientos celulares: condensacin de los cromosomas, separacin de los centrosomas a los polos de divisin, ensamblaje inicial del huso mittico (se forman los microtbulos del ster) y disociacin del nucleolo. El mecanismo de condensacin requiere varios niveles de plegamiento del DNA: fibras cromatnicas (30nm), fibras de 300nm y cromtidas 700nm (acortan la longitud del DNA desnudo 10.000 veces). La condensacin de los cromosomas se induce por la fosforilacin de histonas, la degradacin de los anillos de cohesinas salvo en el centrmero (individualizacin de cada cromtica) y por el complejo axial de anillos de condensina (impulsado por ciclina B/Cdk1) que atrapan la cromatina alrededor de su eje axial y es un proceso dependiente de ATP. La condensacin y acortamiento de los cromosomas permite su individualizacin y segregacin en la anafase. La condensacin produce la parada de la transcripcin, lo que provoca un silenciamiento gnico porque ese grado de condensacin impide la entrada de los factores de transcripcin. La inactivacin de los genes ribosomales desensambla el nucleolo, ya que el nucleolo es una estructura formada por la unin de los genes ribosomales activos.

PROMETAFASE
La fosforilacin de las lminas nucleares provoca su inestabilidad lo que induce el desensamblaje (fragmentacin y vesiculacin) de la envoltura nuclear. Quedan restos de la envoltura en vesculas espaciadas por el citoplasma. Se generan los microtbulos cromosmicos que se fijan en los cinetocoras de todas las cromtidas. Entre 10-40 microtbulos por cinetocoro. Adems se produce la disgregacin del complejo de Golgi en pequeas vesculas y de los microtbulos que no son del huso mittico, para la obtencin de tubulina para el huso.

CROMOSOMA MITTICO
Un cromosoma mittico tiene dos cromtidas hermanas, cuatro telmeros y un centromero con dos cinetocoros. Las cromtidas hermanas son los dos cromosomas resultantes de la duplicacin del DNA unidos por el centrmero y puentes de cohesinas solo a la altura del centrmero. Tienen el DNA en el mximo nivel de plegamiento y su dimetro es aproximadamente de 700nm. El centrmero une las cromtidas hermanas hasta la anafase. Proporciona un sitio de anclaje de los microtbulos cromosmicos o cinetocricos. El DNA centromrico contiene repeticiones de secuencias ricas en A-T denominado DNA-satlite y nucleosomas con una variante especfica de histona H3. En la interfase, el DNA centromrico se localiza en dominios de heterocromatina constitutiva. Por lo que no codifican protenas, pero puede codificar microRNAs. Los cinetocoros anclan los microtbulos cromosmicos. Se asocian a los lados del centrmero y son esenciales para la segregacin de los cromosomas. Tienen una estructura trilaminar formada por placas. La placa interna interacciona con el DNA centromrico. La placa media, electrolcida, est atravesada por fibrillas proteicas paralelas que conectan la placa interna con la externa. La placa externa forma una corona de protenas. Interacciona con el extremo + de los microtbulos cromosmicos. El cinetocoro carece de DNA y posee protenas cinetocricas. Los telmeros son los extremos de los cromosomas interfsicos y mitticos. Los telmeros protegen a los cromosomas de la fusin con otros cromosomas y de la degradacin por nucleasas disueltas en el citoplasma. En el telmero hay un DNA telomrico (no codificante de protenas) formado por un hexanucletido (5'TTAGGG3') que se repite mltiples veces. Se le asocian protenas telomricas que forman un casquete protector en el extremo del cromosoma. En DNA telomrico no se duplica por la DNA polimerasa. La enzima telomerasa dirige la duplicacin. La alteracin de los telmeros es frecuente en el proceso de carcinognesis. Esto se debe a que despus de cada duplicacin del DNA los telmeros se van acortando y cuando se alcanza un valor crtico son inestables por lo que la clula silencia su genoma y no vuelve a dividirse. Sin embargo, en la carcinognesis esto no ocurre y los telmeros cortos no paran la divisin lo que provoca que algunos cromosomas se unan y se dividan de manera incorrecta durante la anafase.

METAFASE
En la metafase los cromosomas se alinean en la placa ecuatorial o placa metafsica formando lo que se denomina estrella madre. Los cinetocoros estn orientados hacia sus respectivos centrosomas o polos de divisin (biorientacin). El jeje que une los dos centrosomas es el eje de divisin. La presencia de microfilamentos de actina se reduce a la periferia celular. Las tensiones opuestas que ejercen los microtbulos cromosmicos sobre los dos cinetocoros mantienen a los cromosomas en el plano ecuatorial. El huso mittico tiene 3 componentes: los microtbulos del ster, los microtbulos cromosmicos y los microtbulos interpolares que interaccionan entre s.

TRANSICIN METAFASE-ANAFASE
Se establece el punto de control de la mitosis. Verifica que todas las cromtidas estn unidas al huso mittico para evitar la aneuploida. La sealizacin depende de la interaccin del cinetocoro con el complejo Mad-Bub. El APC fosforilado, activado por la protena Cdc20, dispara la anafase mediante la poliubiquitinacin (unin de varias ubiquitinas) de la segurina para su degradacin va proteasoma.

La enzima proteoltica separasa, liberada de su inhibidor segurina, degrada las cohesinas del centrmero y libera a las cromtidas. Entonces las cromtidas pueden separarse. Adems se produce la poliubiquinacin de todas las ciclinas lo que permite su degradacin.

ANAFASE
Comprende dos perodos consecutivos: anafase A y B. En la anafase A se produce el acortamiento de los microtbulos cromosmicos y el movimiento de los cromosomas a los polos de divisin. En la anafase B se produce la separacin de los polos de divisin. El acortamiento de los microtbulos cromosmicos es muy intenso en el extremo +, zona de interaccin con la corona del cinetocoro. La despolimerizacin libera enrga y la curvatura de los protofilamentos desflecados empuja al cinetocoro con el cromosoma hacia el polo de divisin. El complejo Ndc80 (protena motora del cinetocoro) de la placa externa facilita el deslizamiento a lo largo de los microtbulos. Los cromosomas se despalzan 1m por minuto. En la anafase B se produce la separacin de los polos de divisin. La clula se alarga de 1,5 a 2 veces respecto al comienzo de la anafase. La fuerza se genera por el deslizamiento de microtbulos polares opuestos en la zona de solapamiento. El proceso est mediado por quinesinas que desplazan microtbulos hacia el extremo +.

TELOFASE
Los acontecimientos ms importantes son: finaliza la migracin de los cromosomas a los polos de divisin, desensamblaje del huso mittico, ensamblaje del huso central de microtbulos, descondensacin de los cromosomas mitticos, ensamblaje de la envoltura nuclear y reformacin del nucleolo. Todos estos procesos se modulan por la desfosforilacin por fosfatasas. La protena nuclear asociada a microtubulos, NuMA (Nuclear Mitotic Aparatus) en la forma desforforilada por fosfatasas promueve el desensamblaja de los microtbulos del ster y cromosmicos. Los microtbulos interpolares forman un haz, el huso central, entre los dos grupos de cromosomas. Los microtbulos del huso central tienen una orientacin antiparalela con un dominio de solapamiento central. La reformacin de la envoltura nuclear est inducida por la desfosforilacin de las lminas nucleares que promueve su interaccin con el DNA. Las vesculas remanentes de la envoltura nuclear, con lminas desfosforiladas, se asocian con los cromosomas al poder reconocerlos de nuevo. Las vesculas se fusionan y forman parches de envoltura nuclear con espacio perinuclear. Adems se reclutan nucleoporinas que se ensamblan para formar los complejos del poro nuclear. La descondensacin de los cromosomas se induce por la desfosforilacin de histonas que induce a su relajacin. Adems los complejos de condensinas se desfosforila, por lo tanto se sueltan de los cromosomas y se restablece la configuracin de la cromatina en interfase. Se forman cuerpos pronucleolares (muy densos a ME) que concentran fibrilarina, B23 y snoRNAs imprescindibles para la sntesis de RNAs ribosomales. La descondensacin de los cromosomas expone las NORs, que tienen asociados UBF y RNA pol I inactivos. La asociacin de los cuerpos pronucleolares con los NORs activa la transcripcin nucleolar y la formacin de nucleolos por la convergencia de los NORs en el espacio durante G1.

CITOQUINESIS
Es la separacin de las dos clulas hijas. Normalmente se inicia en la telofase. Los dos ncleos estn separados por los microtbulos del huso central. En el ecuador se dispone un anillo contrctil de filamentos de actina y miosina II. Esta formado por la actina de la corteza celular que se dispone en forma de anillo en la zona central de la clula. RhoA-GTP activa la formina que promueve el ensamblaje de los filamentos de actina y miosina II del anillo contrctil. La contraccin del anillo produce un surco de divisin. En algunas clulas se forma un puente intercelular recorrido por el huso central. En el centro del fascculo de microtbulos se dispone una matriz amorfa y electrodensa de protenas, el cuerpo medio que es constante en todas las clulas, pero se desconoce su composicin. La rotura del puente intercelular se produce por traccin (en cada extremo de la clula se disponen lamelipodios avanzando en sentidos contrarios), vesiculacin o estrangulamiento.

MEIOSIS
Es un mecanismo de divisin especfico de las clulas de la lnea germinal: espermatocitos y ovocitos. Permite la reduccin haploide del nmero de cromosomas (de 2c a c) caracterstica de los gametos: espermatozoides y vulos. Es la base de la reproduccin sexual en la que se restablece la dotacin diploide de la especie por fusin de los gametos (fertilizacin). La combinacin de gametos de individuos distintos es una fuente de variabilidad gentica. La meiosis incluye mecanismos adicionales de variabilidad gnica: todos los gametos de un individuo son genticamente distintos. La meiosis incluye dos divisiones consecutivas: 1 y 2 divisin meitica. En la espermatognesis de un espermatocito primario se producen 4 espermtides, mientras que en la ovognesis de un ovocito primario slo se produce un vulo. La espermatognesis se inicia con la pubertad y continua toda la vida. Su activacin se produce por la secrecin de hormonas hipotalmicas e (FSH y LH). La ovognesis se inicia en el periodo fetal, peor se para en la profase de la 1 divisin meitica. A partir de la pubertad y hasta la menopausia un grupo de ovocitos primarios reanuda la meiosis de manera cclica estimulados por la FSH. De ellos solo culminan la meiosis uno o dos ovocitos primarios en cada ciclo.

MEIOSIS FRENTE MITOSIS

En los dos procesos hay un solo perodo S de duplicacin del DNA. En la mitosis una clula 4c origina dos clulas 2c. En la meiosis una clula 4c origina 1 vulo o 4 espermtides 1c. El perodo entre el fial de la 1 y el comienzo de la 2 divisin meitica, intercinesis, no incluye duplicacin del DNA. En la 1 divisin meitica se separan los cromosomas homlogos. En la 2, igual que en la mitosis, se separan las cromticas. En la mitosis, a diferencia de la meiosis, no hay mecanismos de variabilidad gentica.

PRIMERA DIVISIN MEITICA

Se produce la segregacin de los cromosomas homlogos: cada clula hija resultante de la primera divisin recibe una solo copia de cada cromosoma. La distribucin de los cromosomas maternos y paternos se produce al azar. As hay 8.400.000 combinaciones. Por ello, este es el primer factor de variabilidad gentica. Comprende la profase, metafase, anafase y telofase. La profase es muy larga y compleja, subdividida en : leptotene, cigotene, paquitene y diacinesis. El leptotene se inicia con la duplicacin del DNA (4c). Los cromosomas se individualizan como cintas. El acortamiento es menor que en la profase de la mitosis. Cada cromosoma homlogo tiene sus dos cromtidas unidas por cohesinas. Los cromosomas se anclan en la envoltura nuclear. Se produce la rotacin de 90 de los cinetocoros para que solo se separen los cromosomas homlogos al completo. En el cigotene se produce el emparejamiento de los cromosomas homlogos por secuencias de reconocimiento llamado sinapsis con un acercamiento de 400nm. La sinapsis requiere de un andamiaje estructural, el complejo sinaptonmico, formado por protenas Scp. El complejo incluye 2 elementos laterales, 1 elemento central y filamentos transversales. Cada elemento lateral se dispone a lo largo de las dos cromtidas hermanas, unidas por anillos de cohesinas, de un cromosoma homlogo. En el paquitene el complejo sinaptonmico permite la mxima aproximacin de los homlogos a 100nm. Se produce una coincidencia muy precisa de las secuencias de genes entre las cromtidas de los dos cromosomas homlogos. En los complejos sinaptonmicos se ensamblan los ndulos de recombinacin donde se encuentra toda la maquinaria de recombinacin. El entrecruzamiento se produce mediante unas endonucleasas que producen roturas de la coble cadena del DNA en los sitios de alta tasa de recombinacin, fragmentos de entre 1000-2000 pares de bases. En ndulo de recombinacin dirige el intercambio de fragmentos homlogos entre cromtidas no hermanas (entre cruzamiento). Participa las DNA polimerasas y ligasas que unen los fragmentos . En el complejo sinaptonmico, cada pareja de cromosomas homlogos establece de 1 a 4 entrecruzamientos en sitios de recombinacin. Los intercambios de fragmentos de cromtidas incrementan enormemente la variabilidad gentica de los gametos. Es una gnesis de la diversidad. Los conjuntos de las 4 cromtidas de los complejos sinaptonmicos se llaman bivalentes o tetradas.

En el diplotene se produce la separacin de los cromosomas homlogos. Se mantienen puntos de contacto en los sitios de entrecruzamiento llamados quiasmas. En la ovognesis, el ovocito primario reactiva la transcripcin para incrementar su masa celular (sustancias de reserva y maquinaria enzimtica). El proceso requiere la formacin de lazos laterales de cadenas polinucleosomales llamados cromosomas plumosos. A este proceso se le denomina vitelognesis. En la diacinesis los cromosomas se separan y se acortan. Se desensambla la envoltura nuclear y se dorma el huso de microtbulos cromosmicos. En la metafase las parejas de homlogos unidos por los quiasmas se ordenan en la placa ecuatorial. En la anafase los quiasmas se disocian y los homlodos se separan a los polos de divisin. Los complejos de cohesinas del centrmero no se degradan. La telofase y la citoquinesis son convencionales igual que en la mitosis.

SEGUNDA DIVISIN MEITICA

No est precedida de un perodo de duplicacin del DNA. Su mecnica es equivalente a la de la mitosis. En la metafase rotan los cinetocoros 90 para colocarse uno enfrente del otro. En la anafase se separan las cromtidas de los homlogos y la telofase y citoquinesis son convencionales.

ERRORES EN LA MEIOSIS
El sndrome de Down, se produce por una aneuploida, en concreto por una trisoma del cromosoma 21. esta se puede producir porque en la 1 divisin, los dos cromosmas se van a un polo de divisin al no romperse los quiasmas o en la 2 divisin cuando no se separan las dos cromtidas hermanas al no romperse las cohesinas del centrmero. La correcta divisin meitica est muy condicionada por la edad, ay que cuando se envejece los controles son menos precisos lo que pueden llevar a ms errores.

DIFERENCIACIN CELULAR
En cualquier clula diferenciada los genes que codifican protenas se distribuyen en: genes que se expresan y genes reprimidos que estn silenciados par la transcripcin en la heterocromatina facultativa. Hay dos categoras de genes que se expresan: de mantenimiento, expresados en todas las clulas y de especificidad celular.

CLASIFICACIN DE CLULAS ATENDIENDO A SU CAPACIDAD PROLIFERATIVA

CLULAS POSTMITTICAS
Tambin llamadas permanentes. Han sufrido la diferenciacin celular terminal y no pueden volver a dividirse. Se hallan en la fase G0. Incluyen, entre otros tipos celulares, las neuronas y clulas musculares estriadas.

CLULAS CON CAPACIDAD PROLIFERATIVA

CLULAS DIFERENCIADAS Estn paradas en G1 de manera estable, pero reactivan transitoriamente el ciclo celular en respuesta a factores ambientales llamados factores de crecimiento. Incluyen los fibroblastos (FGF), clulas endoteliales de los vasos (VEGF) o los hepatocitos (FCH). CLULAS INDIFERENCIADAS O CLULAS MADRE Tienen capacidad prolifaratica permanente. Pueden ser totipotenciales, pluripotenciales y unipotenciales. Las totipotenciales son clulas madre embrionarias que pueden generar todos los tipos celulares del organismo y derivan de la masa celular interna del blastocisto. Las pluripotenciales son clulas madre que generan varios tipos celulares, normalmente del mismo linaje. Incluyen las hematopoyticas de la mdula sea roja que generan todos los tipos de clulas sanguneas. Las unipotenciales son clulas madre que generan un solo tipo celular. Incluyen las clulas madre implicadas en la renovacin de algunos epitelios. La renovacin de estas clulas normalmente se produce mediante una divisin asimtrica: 1 clula madre y 1 clula que sigue el programa de diferenciacin. Menos frecuentemente se producen divisiones simtricas: 1 clula madre origina dos clulas madre o dos clulas que se diferencian. En algunos epitelios, especialmente en los planos poliestratificados, la divisin asimtrica genera una clula madre y una clula del sistema de amplificacin transitoria que experimenta entre 3 y 5 rondas de proliferacin antes de la diferenciacin terminal. Este sistema genera un gran nmero de clulas epiteliales.