DISCIPLINA: Bioqumica II CURSO de FARMACIA E BIOQUMICA Turma: 4A1 e 4A3 V.

Maria/Memorial - 2 Semestre/2012

AULA 05 Gliclise aerbica: Cadeia de transporte de eltrons e fosforilao oxidativa

Tpicos da aula: Cadeia de transporte e Fosforilao oxidativa Mecanismo de transporte Inibidores da fosforilao: - Inibidores dos Complexos I, II e III, inibidores da ATP sintase e desacopladores Balano energtico da fosforilao Roteiro de Estudos: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Como ocorre o transporte de eltrons pela cadeia de transporte? Como o transporte de eltrons pode gerar energia? Nesta etapa as coenzimas so oxidadas ou reduzidas? Quem o cofator que participa das reaes de oxi-reduo do transporte? Explique. Comente sobre o efeitos do desacoplador na fosforilao e citar um exemplo. Diferencie a fosforilao pela cadeia de transporte e ao nvel do substrato. O que est sendo fosforilado? O que est sendo oxidado? 7. Como agem os inibidores da fosforilao oxidativa? Diferencie e explique. 8. O que ocorre na cadeia de eltrons na presena de um desacoplador? E na sntese do ATP? Explique 9. Equacione as reaes de oxidao do NADH e FADH2 durante a fosforilao oxidativa. Demonstre o balano energtico final da glicolise aerbica aps a fosforilao oxidativa. 10. A membrana interna da mitocndria impermevel a ATP e NADH. Explicar: a. como o NADH produzido na via glicoltica pode ser oxidado na cadeia respiratria (lanadeiras do malato e de glicerol fosfato). b. como o ATP produzido na mitocndria pode ser utilizado no citoplasma.

Obs: Todas as notas de aula cedidas pelo professor devem ser utilizadas APENAS como ORIENTAO para uma pesquisa mais detalhada, de acordo Bibliografia indicada, para cada aula ministrada.

CADEIA DE TRANSPORTE

Prof MsC Gisele Ribeiro Felix

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Aula 05 - CADEIA DE TRANSPORTE E FOSFORILAO OXIDATIVA

1 Introduo Na cadeia Respiratria ou cadeia de transporte de eltrons, ocorrem a reoxidao das coenzimas NADH e FADH2 (reduzidas na oxidao da glicose, aminocidos e cidos graxos), gerando, ao final do processo, molculas de ATP atravs da fosforilao oxidativa. Em clulas eucariticas, a maior fonte de ATP. O processo se passa na membrana interna da mitocndria e envolve 4 complexos proticos ligados a grupos prostticos capazes de receber e doar eltrons (reaes de xido-reduo). A energia liberada usada para manter um gradiente de H + de fora para dentro da matriz. O retorno desses prtons para a matriz libera energia livre que ser ento utilizada para o funcionamento da ATPsintase, que produzir as molculas de ATP a partir de ADP + Pi. H ento um acoplamento entre a cadeia de transporte de eltrons e a fosforilao oxidativa. O oxignio, recebendo 4 eltrons, liga-se a prtons do meio formando H 2O, produzindo grande quantidade de energia . Os Complexos so denominados; Complexo (I) NADH-ubiquinona xido-redutase. (Enzima grande formada por cerca de 42 cadeias polipeptdicas). A essas cadeias esto associados: 1 FMN e 6 ou 7 centros de ferro-enxofre. Ocorre a transferencia de eltrons do NADH at a Ubiquinona (FeS) NADH + H+ + UQ NAD+ + UQH2 ( Fe3+ Fe2+ )

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Complexo (II) Succinato-ubiquinona xido-redutase Transfere eltrons do succinato at ubiquinona (FAD e FeS) Faz parte desse complexo a enzima succinato desidrogenase, a nica do ciclo de Krebs presente na membrana mitocondrial Essa enzima tem FAD como grupo prosttico Por esses componentes passam os eltrons derivados do FADH2. Os prtons presentes no FADH2 so devolvidos para a matriz, no contribui para o gradiente de prtons Complexo (III) Ubiquinona ao citocromo C Transfere eltrons da ubiquinona at o citocromo C (Heme e FeS) Os citocromos so protenas transportadoras de eltrons que contm o grupo heme (Fe2+Fe3+) Citocromo b Fe-S citocromo c1 Citocromo c1 citocromo c (IV) Citocromo C oxidase Transfere eltrons do citocromo at o oxignio (Cu) uma enzima grande. Contm 2 citocromos do tipo a e dois ons cobre. responsvel pela doao de 4 eltrons para o oxignio. Para cada 4 eltrons passando por esse complexo, a enzima consome 4 H+ 4 cit c red + 8 H++ O24 cit c ox + 4H++ 2H20 2H+ (citocromo C) + O2 UQ + H2O

UQH2

Complexo III

Complexo IV

Entre eles existe ainda dois compostos mveis, a coenzima Q (CoQ ou ubiquinona) e o citocromo c, que transportam os eltrons dos complexos I e II para o III e do III para o IV, respectivamente. O posicionamento desses complexos no aleatrio. Eles se organizam de acordo com seus potenciais de reduo, assim os eltrons so sempre transferidos para um carreador com maior potencial para reduzir-se, favorecendo um fluxo unidimensional do NADH e FADH 2 para o O2, receptor final dos eltrons. A transferncia de eltrons se d atravs das reaes redox reversveis de centros de Fe-S (ferro-enxofre), CoQ, citocromos e ons de cobre e envolvem um doador de eltrons (redutor) e um aceptor de eltrons (oxidante). Nenhuma substncia doa eltrons sem que outra os receba, o que as torna acopladas, formando um par redox.

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Cadeia Respiratria e Fosforilao Oxidativa (Galembeck e Torres)

Os centros Fe-S esto presentes nos Complexos I, II, III alm dos citocromos. Seu funcionamento envolve a reduo do Fe 3+ a Fe2+ ao receber um eltron e em seguida sua reoxidao ao transferir esse eltron ao prximo intermedirio da cadeia. Nisso h a liberao de prtons, com a formao do gradiente de H+. Um exemplo de reao redox em que encontramos o ferro : FMNH2 + 2 Protena-Fe3+S FMN + 2H+ + 2 Protena-Fe2+ 2 Fosforilao Oxidativa atravs da cadeia de transporte A fosforilao oxidativa o processo metablico de sntese de ATP a partir da energia liberada pelo transporte de eltrons na cadeia respiratria. Todo o processo depende de dois fatores, a energia livre obtida do transporte de eltrons e armazenada na forma de gradiente de ons hidrognio e uma enzima transportadora denominada ATPsintase. Durante o fluxo de eltrons h liberao de energia livre suficiente para a sntese de ATP em 3 locais da cadeia respiratria: Complexos I, III e IV. Estes locais so denominados "STIOS DE FOSFORILAO OXIDATIVA". Nestes locais a liberao de energia livre em quantidade equivalente necessria para a sntese do ATP. 2.1 Balano energtico pela fosforilao via cadeia de transporte (coenzima) (I) Glicose 2 Piruvato 2H2O
5ATP

2 NADH + H+ + O2 2NAD+ +

eltrons ATPsintase 5 ADP + 5P

(II) 2 Ppiruvato 2 Acetil Ca 2 NADH + H+ + O2 2NAD+ + 2H2O

5ATP

eltrons ATPsintase 5 ADP + 5P

(III) 2 Acetil CoA CO2 + H2O (produz de 6 NADH e 2 FADH) 6 NADH +6H+ + O2 6NAD+ + 2 FADH2 +O2 2FAD + 2H O 6H2O
15ATP

eltrons ATPsintase 15 ADP + 15P + 2 eltrons ATPsintase 3 ADP + 3P

3ATP

3 Fosforilao oxidativa no nvel do substrato

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a sntese de ATP obtida diretamente em reaes que fazem parte da gliclise e do ciclo de Krebs. 4 - Inibidores da fosforilao oxidativa O envenamento da cadeia respiratria se d basicamente atravs de dois grupos de substncias, os inibidores dos complexos de transporte e os desacopladores da cadeia. Propriedades e aes de um inibidor podem ajudar a identificar aspectos do mecanismo de uma enzima. Muitos detalhes dos mecanismos de transporte de eltrons e da oxidao fosforilativa foram conseguidos atravs de estudos dos efeitos de inibidores particulares. 4.1 - Inibidores dos Complexos I, II e III bloqueiam o transporte de eltrons A Rotenona um inseticida comum que inibe fortemente a NADH - UQ redutase. A rotenona obtida das razes de diversas espcies de plantas. A Ptericidina, amital e outros barbituratos e o Demerol tambm exercem suas aes inibitrias nesse complexo enzimtico. Todas essas substncias parecem inibir a reduo da coenzima Q e a oxidao das pores do grupo Fe-S da NADH-redutase. A 2-Tenoiltrofluoroacetona e carboxina e seus derivados bloqueiam especificamente o Complexo II, a succianto-UQ redutase. Antimicina, um antibitico produzido pelo fungo Streptomyces griseus, inibe a UQ-citocromo c redutase pelo bloqueio da transferncia de eltrons entre a bH e a coenzima Q. Mixotiazol inibe o mesmo complexo pela ao do stio Qp. O Complexo IV, a citocromo c oxidase, especificamente inibida pelo cianeto, azida, a monxido de carbono. Cianeto e azida ligam-se fracamente forma frrica do citocromo a 3, enquanto monxido de carbono liga-se apenas forma ferrosa. As aes inibidoras do cianeto e da azida neste stio so muito potentes, enquanto a principal toxicidade do monxido de carbono reside na sua afinidade pelo ferro da hemoglobina. Hereina lies uma importante distino entre os efeitos venenosos do cianeto e do monxido de carbono. Sabendo que os animais (incluindo humanos) carregam muitas molculas de hemoglobina, eles precisam inalar uma quantidade muito grande de monxido de carbono para morrer. Estes mesmos organismos, contudo, possuem comparativamente poucas molculas de citocromo a3. Conseqentemente, uma exposio limitada ao cianeto pode ser letal. Uma ao repentina do cianeto atesta para uma constante e imediata necessidade do organismo pela energia suprida pelo transporte de eltrons.

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4.2 - Inibidores da ATP sintase incluem a diciclohexilcarbodiimida (DCCD) e oligomicina. A DCCD liga-se covalentemente aos grupos carboxila em domnios hidrofbicos de protenas em geral, e a um resduo de cido glutmico da subunidade c de F o, o proteolipdio que forma o canal de prtons da ATP sintase, em particular. Se a subunidade c marcada com DCCD, o fluxo de prtons bloqueado e a atividade da ATP sintase inibida. Semelhantemente, oligomicina age diretamente na ATP sintase. Pela ligao uma subunidade de F o, oligomicina tambm bloqueia o movimento dos prtons atravs de Fo. 4.3 - Desacopladores eliminam o acoplamento do transportes de eltrons e da ATP sintase Os desacopladores so cidos hidrofbicos fracos que podem libertar um prton dissipando a transferncia de eltrons da fosforilao, permitindo que a respirao continue sem a sintese do ATP. Exemplos tpicos incluem o 2,4 - dinitrofenol, dicumarol, e carbonil cianeto-ptrifluorometoxifenil hidrazona (melhor conhecido como fluorocarbonil-cianeto fenilhidrazona ou FCCP).

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Estes compostos apresentam duas importantes peculiaridades comuns: carter hidrofbico e prton dissocivel. Como desacopladores, eles funcionam como carregadores de prtons atravs da membrana interna. Sua tendncia adquirir prtons na superfcie citoplasmtica da membrana (onde a concentrao de prtons grande) e carregam os prtons para o lado da matrix, portanto destruindo o gradiente de prtons que acopla o transporte de eltrons e a ATP sintase. Na mitocndria tratada com desacopladores, o transporte de eltrons continua, e os prtons so levados para for a da membrana interna. Contudo, eles retornam para dentro to rapidamente via desacopladores que a sntese de ATP no ocorre. Conseqentemente, a energia liberada no transporte de eltrons dissipada como calor. Ironicamente, certos animais adaptados ao frio, animais estes que ibernam e animais recmnascidos, geram grande quantidade de calor pelo desacoplamento da fosforilao oxidativa. O tecido adiposo nesses organismos contm tanta mitocndria que chamado tecido adiposo marrom pela cor conferida pelas mitocndrias. A mitocndria da membrana interna do tecido adiposo marrom contm uma protena endgena chamada termogenina, ou protena desacopladora, que cria um canal passivo de prtons pelo qual os prtons fluem do citosol para a matrix.

5 - Acoplamento do Transporte de letrons sntese de ATP: controle respiratrio As necessidades de ATP variam dependendo do estado fisiolgico. O transporte de eltrons e a sntese de ATP so processos acoplados. Os substratos desse processo so: Coenzimas reduzidas Oxignio ADP e Fosfato O ADP o nico que atinge concentraes limitantes na clulas e o regulador de ambos os processos 6 -Oxidao do NADH citosslico Lanadeiras Os eltrons do NADH so transferidos para um composto citosslico, que reduzido pode atravessar a membrana 2 tipos conhecidos de lanadeira: Malato-aspartato glicerol-3-fosfato

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