Clase 15 Recombinacin gentica: Conjugacin, transformacin y transduccin Cmo intercambian las bacterias su material gentico?

Existen 3 mecanismos que son la conjugacin, la transformacin y la transduccin. Recombinacin: es un intercambio de genes que provienen de dos molculas de DNA de orgenes diferentes. De esta manera los genes se pueden organizar en nuevas combinaciones. Aunque la recombinacin se puede dar en secuencias homologas de un mismo cromosoma. Las clases de recombinacin son: Recombinacin general: ocurre en secuencia de DNA homologas. Recombinacin ilegitima: se da en secuencias de DNA no homologas, especifica de sitio. Se puede dar entre ciertas secuencias homologas como por ejemplo entre un fago y el cromosoma bacteriano Recombinacin replicativa: en elementos transponibles (secuencias de insercin y transposomas). Cmo se da el proceso de la recombinacin general? Comienza con un corte en una de las hebras del DNA donador, ese corte lo hace una nucleasa. Lo siguiente es que una helicasa tiene que separar las hebras y despus de eso se unen a la hebra monocatenaria que ha resultado, unas protenas SSB (protenas de unin a cadenas sencillas). Luego la protena RecA se une con el segmento monocatenario para facilitar la complementariedad de bases con el DNA receptor. All mismo se da el proceso de invasin de banda que es cuando est el DNA receptor y viene una de las hebras del DNA donador y se inserta lo que desplaza la otra hebra del DNA receptor. Contina el proceso del intercambio de las cadenas donadoras y receptoras, el resultado que se obtiene es la recombinacin de las dos molculas. Conjugacion: es el intercambio de un plasmido de una bacteria donadora a una receptora. Requiere el contacto directo entre las dos bacterias. Para el caso de las gram negativas se da a travs del pili sexual. La sntesis del pili sexual viene codificada por el plsmido. En el caso de las gram positivas el contacto entre las dos clulas se da por una molcula de adhesina que est presente en la superficie de las bacterias. Descubrimiento de la conjugacin: en 1946 por Joshua Lederberg y Edward Tatum. Trabajaron con la sepa K12 de E.Coli. Ellos tenan dos sepas de E.Coli que tenan necesidades nutricionales diferentes. Tenan una sepa A que solo poda crecer en un medio si este se suplementaba con metionina y biotina. Una sepa B que necesitaba que el medio estuviera suplementado con treonina, leucina y tiamina. Lo que hicieron con estas sepas fue sembrar en placas de Petri: una con la sepa A, otra con la sepa B y otra con la SepaA y SepaB juntas. Lo que obtuvieron fue que las que fueron mezcladas en un medio mnimo se registr crecimiento, lo que indicaba que haba una

forma que las bacterias intercambiaran el material gentico para crecer en u medio mnimo. Esa capacidad para crecer en un medio mnimo se llama prototropia. Factor F: DNA extracromosomico que la bacteria donadora va a dar a la receptora. La bacteria que lo tiene se llama F+ y la que no F-. El plsmido codifica su propia replicacin y tiene un tamao de 100 kilobases. Aproximadamente son 60 genes que lo conforman. Tiene la regin Tra que codifica las funciones que estn relacionadas con la conjugacin. Entre estos genes est el TraA que codifica la sntesis de la prepropilina que es la precursora de la sntesis de la pilina (protena que constituye el pili sexual). Hay dos secuencias de insercin de IS3, una de IS2 y una de TN1000. Estas secuencias permiten al plsmido insertarse al cromosoma de la bacteria. Las secuencias Ori, entre ellas OriT que es el origen para la transferencia del plsmido cuando se empieza el proceso de la conjugacin. La conjugacin requiere que haya un contacto entre las dos bacterias y para ello el primer paso es que el pili debe interaccionar con un receptor de la bacteria que va a recibir el DNA. Ese receptor se llama OmpA. Luego el pili se empieza a despolimerizar lo que hace que las dos bacterias se vayan acercando. Cuando el pili se termina de despolimerizar las bacterias ya se ponen en contacto pared a pared y se forma el puente conjugativo que es por donde va a pasar el DNA. Lo siguiente es la transferencia de DNA a la clula receptora y despus de un tiempo de haber terminado la conjugacin las dos clulas se reponen. Cmo el DNA se puede pasar a la otra clula? Se realiza mediante replicacin del crculo rodante. Qu sucede? Una de las cadenas de DNA del plsmido se va a quedar en el donador mientras que la otra va a ser transferida a la clula receptora. Entonces va a comenzar en cada una de las bacterias a darse la replicacin de las respectivas cadenas complementarias. Replicacin por crculo rodante: est el plsmido y viene la protena RecA y se une a la secuencia Ori de una de las hebras del DNA y se queda unida ah. Queda el extremo 3 con un OH libre. Luego acta la DNApolimerasa. Las protenas SSB estabilizan la hebra monocatenaria. Luego se separan las dos cadenas y la ligasa sella el pedazo que queda. Ah ya puede empezar la replicacin en la nueva cadena, se forma un loop que es un primer para iniciar la replicacin. La ligasa vuelve a sellar el pedazo que queda y finalmente se tienen dos plsmidos completos. Al final de la conjugacin se obtienen dos clulas F+ con su plsmido completo y van a poder transferir este plsmido a otra clula. Bacteria HFR: es aquella en la que el DNA del plsmido se ha integrado al cromosoma bacteriano. El plsmido se integra al cromosoma en la secuencia de insercin IS3, entre los genes cromosmicos Pro y Lac. El comienzo de la transferencia ocurre en OriT (origen de transferencia conjugativo).

El plsmido queda integrado al cromosoma y se va a transferir tanto algunos genes del cromosoma bacteriano como del plsmido. La interaccin entre las dos bacterias no es muy estable y se puede romper, por eso el plsmido F no se transmite por completo. La bacteria receptora queda con alguno de estos genes. Hay diferentes sitios donde se puede insertar el plsmido por lo que pueden resultar diferentes sepas HFR. En la HFR1 el factor F se integra dentro de los genes leucina y eso determina que los genes se transmitan en una determinada direccin y que en diferentes sepas HFR esa transferencia se pueda dar de diferentes formas. Transformacion: una bacteria capta del medio ambiente e incorpora a su cromosoma DNA. De dnde puede traer ese cromosoma que est en el ambiente? De una clula que ha muerto y ha liberado su DNA. Puede ocurrir en bacillus, neisseria, acinetobacter y en streptococcus pneumoniae. Etapas: Desarrollo de la competencia: La competencia es la capacidad que tiene la bacteria de integrar ADN. Depende de la temperatura, pH, los nutrientes. Unin de DNA: se incorpora el DNA y queda la bacteria transofrmada. Streptococcus neumoniae se da primero el desarrollo de la competencia donde se produce el factor FC (factor de competencia) que se va a unir a un sitio en la pared celular de la bacteria. Eso va a originar que unos genes se expresen y se libere una autolisina que va a ir a la superficie externa de la bacteria y va a desbloquear una nucleasa. Lo siguiente ya es el proceso de la transformacin, se une un DNA bicatenario. Luego la cadena bicatenaria se rompe y queda monocatenaria. A esa monocatenaria se le unen las protenas SSB. Luego el DNA ingresa y es integrado al cromosoma. Diferencias entre la transformacin entre un estreptococo (gram +) y haemophillus (gram -): En estreptococo hay factor de competencia mientras haemophillus no lo tiene. Estreptococo puede ingresar DNA heterologo pero al final lo degrada, haemophillus solo puede ingresar DNA que sea homologo. En la forma en el que el DNA debe unirse a la superficie celular en ambos debe ser de forma bicatenaria. En estreptococo el DNA est unido a las protenas SSB y en haemophillus est dentro de un transformasoma (vesculas). En estreptococo si hay periodo de eclipse que es cuando el DNA pierde la capacidad de transformar una bacteria. Cmo se hace la transformacin artificial? Un dispositivo por el cual se da la electroforacion en el cual se le dan choques a la bacteria y se abren poros, y el DNA puede ingresar por ah. Transduccin: transferencia del DNA de una clula mediante un bacterifago. Desulfovibrio, rhodobacter, salmonella, estafilococo, Escherichia y pseudomonas.

El bacterifago que est implicado realiza un ciclo ltico. En este ciclo el DNA entra a la bacteria hace una lisis y la bacteria muere y se liberan los nuevos virus. En un ciclo lisogenico el DNA del fago se va a integrar al cromosoma de una forma que se llama profago. El profago puede seguir integrado en el cromosoma y seguir replicndose con la clula sin causar inconvenientes. Transduccin generalizada: En la generalizada se puede transferir DNA que provenga de cualquier regin del cromosoma bacteriano. Las bacterias se infectan con el fago, el cromosoma se fragmenta y ocurre el ciclo ltico. Algunos genes por error son incorporados dentro de los fagos, la clula se lisa y libera los fagos que van a infectar a la clula receptora. El DNA se va a integrar y se va a producir la bacteria transductante. Transduccin especializada: tienen que ser segmentos especficos del DNA los que se transfieren por medio del fago. El fago que interviene entra en un ciclo lisogenico. Luego el DNA del virus se incorpora al cromosoma bacteriano. Despus se va a separar del cromosoma, entra en lisis y libera las partculas de virus que van a infectar con fragmentos a la clula receptora. Finalmente el DNA se integra al cromosoma incorporando fragmentos especficos de la bacteria. Diferencias entre transduccin generalizda y especializada: En la generalizada intervienen fagos en un ciclo ltico, y en la especializada son fagos en un ciclo lisogenico. Se puede transferir cualquier regin del cromosoma en la generalizada, en cambio en la especializada se transfieren determinadas secuencias del cromosoma. En la generalizada el fago no se integra en el cromosoma, en la especializada s. Cosmidos: son vectores de clonacin. Los cosmidos tienen parte del DNA de un fago y parte de un DNA del plsmido. Un vector de clonacin tiene un elemento gentico en el que un DNA puede ser transportado a otra clula. El pJB8 tiene un gen de resistencia a ampicilina y esto va a servir para identificar las sepas de bacterias en las que se ha transferido ese DNA. Hay un gen Cos que permite la integracin del gen en las partculas del fago. Hay un origen de replicacin que va servir para el momento en que ingrese la bacteria, se replique como si fuera un plsmido. PREGUNTAS: El plsmido se transfiere monocatenario a la otra clula o se transfiere todo el plsmido completo bicatenario? Se transfiere monocatenario por el extremo 5. Por qu un fago hace eso en el proceso de transduccin? Se tiene que ver del punto de vista evolutivo, es como preguntarse porque un virus ataca tu cuerpo ya que el bacterifago es un virus que ataca bacterias. Atacar la bacteria le asegura que su material gentico se va a reproducir en las bacterias subsecuentes que haya, esto en la especializada que es donde el fago no rompe la clula. El ADN del virus se va a quedar ah latente y contiguo al DNA de la bacteria se va a replicar y posteriormente se da una lisis bacteriana y se libera el DNA del virus. Entonces es una manera en la que l se reproduce. En la conjugacin la intencin de la bacteria es infectar a la otra? La intencin de la bacteria no es infectar, solo hace un proceso de conjugacin. El plsmido se integra con el cromosoma y al

momento de iniciar la conjugacin y eso ocurre en el OriT. El plsmido se rompe a la mitad. En todo el tiempo de conjugacin las bacterias se van a movilizar y pues llega un momento en que se separa, y la transferencia llega hasta cierto punto y se interrumpe, y por eso el plsmido no se transfiere por completo. Dentro del proceso del HFR, que es una modalidad que tienen de conjugacin, se da por un proceso de inestabilidad en la transferencia de plsmidos. Que lo hace inestable? En movimientos como el browniano hay choques de partculas lo que puede afectar la estabilidad en ese microambiente. Tiempo de generacin: tiempo para que se den dos clulas. Las bacterias no todas tienen el mismo tiempo de generacin, lo que tambin produce inestabilidad. En transformacin las bacterias requieren desarrollar una competencia para generar ese proceso. Todas las bacterias pueden desarrollar esa competencia? S o no? De que dependera que desarrollen o no esa competencia? No se puede aseverar que en todas porque se da en bacterias que son estudiadas y se ha comprobado que tienen ciertos factores en sus membrana que pueden permitir hacer el proceso de adaptacin e incluso desarrollar el factor de competencia. Solo se han descrito ciertos grupos de bacterias. Dnde se ubican los cosmidos? Qu bacterias lo poseen? Los cosmidos se han descrito de manera artificial. ****Hay que ampliar a ver si ha habido bacterias que dentro de su evolucin hayan adquirido la capacidad, o haya desarrollado los receptores que pueda hacer el proceso de conjugacin y transduccin a partir de un fago mediado por un pili.