RELACION GENTICA Y ECOLGICA DE TRES ESPECIES DEL GRUPO B.

cereus GENETIC AND ECOLOGICAL RELATIONSHIP OF THREE SPECIES OF GROUP B. cereus Melissa valos1 e Indira Santos2
1 Laboratorio de Control de Calidad de Agua y Alimentos. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Email: meli_25_21@hotmail.com 2 Laboratorio de Ecologa Microbiana. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Email: indiramsp.38@gmail.com

RESUMEN El grupo Bacillus cereus, un grupo muy homogneo dentro del gnero Bacillus, est conformado por tres especies reconocidas: B. cereus, B. thuringiensis, B. anthracis.
Estas especies comparten un grado significativo de similitud determinado por anlisis de secuencias nucleotdicas del 16S ARNr y 23S ARNr por ello, varios autores sugieren que estas especies corresponden a una sola especie. En adicin, los anlisis de variedad de caractersticas bioqumicas indican la estrecha cercana de estas especies. A pesar de que hay algunos parmetros fisiolgicos considerados nicos para la diferenciacin de especies del grupo de B. cereus, existe la potencial ganancia o prdida de plsmidos que codifican caractersticas diferenciales, por lo que B. cereus puede ser confundido con B. anthracis, B. thuringiensis o B. mycoides. Bacillus cereus, Bacillus anthracis y Bacillus thuringiensis tienen un marcado impacto en la actividad humana, mientras que Bacillus cereus y B. anthracis son patgenos importantes de mamferos, incluyendo los seres humanos, B. thuringiensis se utiliza ampliamente en el control biolgico de insectos. Las caractersticas microbiolgicas, bioqumicas y genticas de estas tres especies son revisados, junto con una discusin de varios estudios genmicos realizados sobre el grupo B. cereus. Utilizando conceptos sistemticos bacterianos, se especula que para entender la relacin taxonmica dentro de este grupo de bacterias, especial atencin debe dedicarse tambin a la ecologa y la gentica de las poblaciones de estas especies.

SUMMARY
The Bacillus cereus group, a very homogeneous cluster within the Bacillus genus, comprises three recognized species: B. cereus, B. thuringiensis, B. anthracis. These species share a significant degree of similarity determined by nucleotide sequence analysis of 16S rRNA and 23S rRNA therefore, several authors suggest that these species correspond to a single species. In addition, analysis of variety of biochemical characteristics indicate the close proximity of these species. Bacillus cereus, Bacillus anthracis, and Bacillus thuringiensis have a marked impact on human activity. Bacillus cereus and B. anthracis are important pathogens of mammals, including humans, and B. thuringiensis is extensively used in the biological control of insects. The microbiological, biochemical, and genetic characteristics of these three species are reviewed, together with a discussion of several genomic studies conducted on strains of B. cereus group. Using bacterial systematic concepts, we speculate that to understand the taxonomic relationship within this group of bacteria, special attention should be devoted also to the ecology and the population genetics of these species.

INTRODUCCIN
El grupo I de Bacillus comprende cuatro especies caractersticas, denominadas B. cereus, B. thuringiensis, B. mycoides, y B. anthracis (1-2), a las que se incorporan B. pseudomycoides (3) y B. weihenstephanensis (4). Estas especies estn estrechamente relacionadas, pero su filogentica y relaciones taxonmicas todava son objeto de debate. Los datos recientes basados en la electroforesis de enzimas multilocus (MEE) (Helgason et al., 2000) y variaciones de la secuencia de ADN de 16S(5) - 23S(6) espaciadores internos transcritos (Daffonchio et al., 2000) sugirieron que B. anthracis, B. thuringiensis y B. cereus sensu stricto son miembros de una misma especie, B. cereus sensu lato(6-8). B. anthracis cae claramente en la categora perjudiciales debido a su capacidad para causar enfermedades animales y humanas, as como su papel potencial en el bioterrorismo. B. thuringiensis cae normalmente en el lado beneficioso de la contabilidad debido a su actividad insecticida potente. B. cereus se sita por lo general en la categora de peligroso, pero Handelsman plante que esta colocacin es injusto para esta bacteria multifactica. Seal que la mayora de tratamientos de la especie B. cereus en la literatura lo priva de su "estilo de vida colorida y cosmopolita." Famosa por su papel en la intoxicacin alimentaria, B. cereus es un habitante abundante de la tierra y coloniza las races de las plantas, a veces con profundos efectos sobre la estructura de la comunidad microbiana (19). Esta revisin pone una especial atencin a la comparacin de las propiedades biolgicas y ecolgicas de las tres especies en sus entornos naturales. (9,10)(1). Considerando tambin el intenso trabajo se ha realizado para descifrar su relacin gentica (Harrell et al, 1995; Helgason et al, 2000;. Hansen et al, 2001; Chen y Tsen, 2002),

TRANSFERENCIA DE GENES
(A) Un informe previo de este laboratorio (15) demostr la utilidad del bacterifago transduccin generalizada CP-51 en la transferencia de plsmidos entre las tres especies de Bacillus anthracis, B. cereus, y B. thuringiensis. Sin embargo, el tamao de los plsmidos que pueden ser transferidos por CP-51 est limitado por el tamao del fago y la cantidad correspondiente de ADN se puede empaquetar (ca. 50 megadaltons). Por lo tanto, con la esperanza de ser capaz de transferir los grandes plsmidos de B. anthracis de evaluar ms adecuadamente su importancia biolgica, decidimos investigar si el sistema de apareamiento de B. thuringiensis descrita por Gonzlez et al. (5, 6) se podra aplicar a B. anthracis. Nuestra estrategia fue buscar la transferencia de la resistencia a la tetraciclina seleccionable plsmido pBC16 (2) y a continuacin, para examinar transcipients resistentes a la tetraciclina para la adquisicin de plsmidos adicionales. Hemos encontrado que ciertos plsmidos que promueven su propia transferencia de B. thuringiensis tambin son eficaces en la promocin de la transferencia de una variedad de plsmidos entre las tres especies de Bacillus. Se presenta evidencia de que cada uno de los dos plsmidos, pXO11 y pXO12, que se encuentra en B. thuringiensis subsp. thuringiensis es capaz de provocar su propia transferencia, as como la de otros plsmidos. Anlisis plsmido confirmaron la transferencia de una variedad de plsmidos de B. thuringiensis subsp. thuringiensis de B. anthracis y B. cereus. Transcipients de

este ltimo dos organismos que heredados, bien pXOll o pXO12 eran, a su vez, los donantes eficaces. El sistema de apareamiento es un medio til y eficaz de transferir grandes y pequeos plsmidos entre las tres especies. (B) La taxonoma del grupo es controvertido y algunos investigadores han sugerido que estas especies estrechamente relacionadas todas deben ser agrupados como miembros de B. cereus [4,5]. B. thuringiensis y B. cereus comparten un alto nivel de similitud cromosmica y son fenotpicamente similar, excepto que B. thuringiensis tiene plsmido genes cry codificados que expresan protenas cristalinas insecticidas (toxinas Cry) durante la fase de esporulacin [5 ^ 7].

Se ha encontrado que B. thuringiensis, incluyendo las cepas utilizadas comercialmente, tienen

genes que codifican la enterotoxina, y muestran en los niveles de toxicidad in vitro similares a los de las cepas de B. cereus [8 ^ 10] lo que sugiere un potencial para causar diarrea en los seres humanos. Por lo tanto, es importante para evaluar el riesgo potencial de cepas de B. thuringiensis individuales utilizados como insecticidas y para buscar algn medio para construir o seleccionar cepas de B. thuringiensis para el control biolgico con baja expresin de B. cereus-como rasgos enterotxicas. Es una manera de investigar el papel de las enterotoxinas en el insecticida proceso es la transferencia de plsmidos que codifican la toxina Cry por conjugacin a un nmero de B. Cereus grupo de bacterias, incluyendo bacterias conocidas por tener baja actividad enterotxica [11]. Transferencia conjugativa entre cepas de B. thuringiensis y para otros miembros del grupo B. cereus se ha descrito [12 ^ 14]. Un aspecto ambiental a considerar es si el uso intensivo de B. thuringiensis podra resultar en la propagacin de los plsmidos que codifican las toxinas Cry, como la transferencia de plsmido se ha observado en los sistemas naturales tales como el suelo, especies de larvas de insectos y agua de ro, as como en caldo de laboratorio [15 ^ 17].

BIBLIOGRAFA

1. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17668027 19. Gilbert, G. S., M. K. Clayton, J. Handelsman, and J. L. Parke. 1996. Use of cluster and discriminant analyses to compare rhizosphere bacterial communities following biological perturbation. Microb. Ecol. 32:123-147. [PubMed] 1 Priest F G, Goodfellow M, Todd C. A numerical classification of the genus Bacillus. J Gen Microbiol. 1988;134:18471882. 2. Turnball, P C B.; Kramer, J M. Bacillus. In: Balows A, Hausler W J Jr, Herrmann K L, Isenberg H D, Shadomy H J. , editors; Balows A, Hausler W J Jr, Herrmann K L, Isenberg H D, Shadomy H J. , editors. Manual of clinical microbiology. 5th ed. Washington, D.C.: American Society for Microbiology; 1991. pp. 296303. 3. Nakamura L K. Bacillus pseudomycoides sp. nov. Int J Syst Bacteriol. 1998;48:1031 1035.

4. Lechner S, Mayr R, Francis K P, Pr B M, Kaplan T, Wiener-Gunkel E, Stewart G S A B, Scherer S. Bacillus weihenstephanensis sp. nov. is a new psychrotolerant species of the Bacillus cereus group. Int J Syst Bacteriol. 1998;48:13731382. 5. Seki, T., C. K. Chung, H. Mikami, and Y. Oshima. 1978. Deoxyribonucleic acid homology and taxonomy of the genus Bacillus. Int. J. Syst. Bacteriol. 28:182-189. 6. Ash C, Collins M D. Comparative analysis of 23S ribosomal RNA gene sequences of Bacillus anthracis and emetic Bacillus cereus determined by PCR-direct sequencing. FEMS Microbiol Lett. 1992;94:7580. 9 Battisti L, Green B D, Thorne C B. Mating system for transfer of plasmids among Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Bacillus thuringiensis. J Bacteriol. 1985;162:543550.

10 Gonzales J M Jr, Brown B J, Carlton B C. Transfer of Bacillus thuringiensis plasmids coding for -endotoxin among strains of Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus. Proc Natl Acad Sci USA. 1982;79:69516955. (A) Mating System for Transfer of Plasmids Among Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Bacillus thuringiensis LAURIE BATTISTI, BRIAN D. GREEN, AND CURTIS B. THORNE* JOURNAL OF BACTERIOLOGY, May 1985, p. 543-550 0021-9193/85/05054308$02.00/0Copyright D 1985, American Society for Microbiology (B) Conjugative transfer, stability and expression of a plasmid encoding a cry1Ac gene in Bacillus cereus group strains

Para facilitar el anlisis de los determinantes genticos realizados por grandes plsmidos residentes de Bacillus anthracis, un sistema de apareamiento fue desarrollado que promueve la transferencia de plsmido entre las cepas de B. anthracis, B. cereus, y B. thuringiensis. Transferencia de la resistencia a la tetraciclina seleccionable plsmido pBC16 y otros plsmidos de B. thuringiensis a B. anthracis y B. cereus destinatarios se produjo durante la incubacin en caldo mixto. Dos plsmidos, pXOll y pXO12, que se encuentra en B. thuringiensis fueron responsables de plsmido movilizacin. B. anthracis y B. cereus transcipients heredar ya sea pXOll o pXO12 eran, a su vez, los donantes eficaces. Transcipients albergan pXO12 eran donantes ms eficientes que las que albergan pXO11; frecuencias de transferencia oscilaron entre 10-4 y 10-1 y 10-8 y 10-5, respectivamente. Contactos de clula-a-clula era necesario para la transferencia de plsmido, y la adicin de DNasa no tuvo ningn efecto. Las altas frecuencias de transferencia, junto con el hecho de que los filtrados libres de clulas de cultivos de donantes eran ineficaces, sugirieron que la transferencia no fue mediada por fago. B. anthracis y B. cereus transcipients que heredaron pXO12, adquirieron la capacidad de producir cristales paraesporales (Cry ') similar las producidas por B. thuringiensis, lo que indica que pXO12 lleva un gen (s) que participan en la formacin de cristales. Transcipients que heredaron pXOll eran Cry-. Este sistema de apareamiento proporciona un mtodo eficiente para la transferencia entre especies de una gran variedad de plsmidos de Bacillus por un proceso de conjugacin.