Aislamiento De Protenas A.

Seleccin De La Fuente: Protenas con idnticas funciones se encuentran en diferentes organismos, por supuesto es considerable la variacin en las propiedades de una protena en particular de acuerdo a la fuente. varios criteris se deben seguir para la seleccionde la fuente, entre estas es facilidad para su obtencion y que la proteina autilizar en la fuente se pueda obtener en grandes cantidades. hoy debido alas tecinicas de clonamiento molecular se han generado nuevas tecnicas para obtener proteinas. Mtodos De Solubilizacin El primer paso para la solubilizacion de una proteina es su ubicacion en una solucion, sin embargo esta primero debe ser liberada de la celula. Para esto es necesario someter la celula a un proceso de lisis. Se puede utilizar lisis osmotica si la celula es de origen animal, si es bacteria o celula vegetal se utiliza enzima capaz de degradar la pared celular, ej:lisosima para las bacterias. Tambien se utilizan metodos mecanicos para la irrupcin de la celula, que pueden incluir arena o alunima, entre estos se cuenta el uso de juguera, homogenizadores, morteros, sonicacion, etc. todos estos procesos, son acompaados por un paso siguiente de centrifugacion o filtracion. c. Estabilizacin

Una vez que la proteina ha sido removida de su ambiente natural se ve expuesta a muchos agentes que pueden daarla. estas influencias deben ser cuidadosamente controladas. las proteinas pueden ser afectadas por pH, temperatura, proteasas, oxidacion de puentes disulfuro, contaminacion por metales pesados, concentracion de sal, etc. Esta variables se pueden controlar con el uso de tampones, mantenciona baja temperatura, uso de inhibidores, etc. d. Ensayos

Cuando una proteina es purificada es necesaria detectar su presencia para indicar su pureza. Una proteina se encuntra en muy pequeas cantidades en cada celula por lo que para su deteccion se hace necesario el uso de ensyos sensibles y especificos. estos ensayos deben ser repetidos en cada paso de la purificacion. las proteinas pueden ser monitoreadas de acuerdo a sus caracteristicas espectroscopicas oo de fluorescencia, se pueden realizar ensayos enzimaticos cuando corresponda (proteina a purificar= enzima). Tambien, es posible utilizar anticuerpos para la deteccion de proteinas a traves del test de ELISA. En este un anticuerpo se encuentra unido a una matriz solida y es capaz de reconocer nuestra proteina. Luego un segundo anticuerpo se une al compljo formado por el anticuerpo 1, el anticuerpo2 se encuentra unido

covalentemente a un enzima capaz de liberar un producto medible. e. Estrategia De Purificacin

La purificacin de proteinas se realiza por procedimientos de fraccionamiento. Las propiedades fisicoquimicas de la proteina de interes seran utilizadas para separarla progresivamente de otras sustancias. La idea es miimizar la perdida de la proteina deseada, pero eliminar selectivamente los otros componenetes de la mezcla. La insulina es una hormona que se produce en el pncreas y su papel principal es la metabolizacin de la glucosa, que es la fuente de energa fundamental de las clulas de nuestro cuerpo. Las personas cuyo pncreas no sintetiza insulina son diabticas y necesitan una administracin externa mediante una, dos e incluso mas inyecciones de insulina diarias para mantener sus niveles de glucosa en sangre (glucemia). La recombinacin de genes humanos en el ADN de bacterias es una de las posibilidades que ofrece la biotecnologa, y que posibilita obtener protenas humanas con fines teraputicos. Se trata de la insercin del gen humano que controla la sntesis de insulina e introducirlo en el genoma de una bacteria, la Escherichia Coli, que habita en nuestros intestinos. Esta tcnica es de gran valor porque las bacterias se reproducen rpidamente y pueden duplicar su numero cada 20 minutos. De esta forma se pueden obtener en poco tiempo muchas copias del gen humano inserto en el ADN bacteriano, y producir grandes cantidades de protenas recombinantes. Posteriormente esta insulina se purifica y se envasa para su aplicacin mediante generalmente por inyecciones subcutneas. Se sintetiza diversos tipos de insulina segn su velocidad de absorcin, para mejor control de los niveles de glucemia (glucosa en sangre) de las personas diabticas, esto junto con unas dietas y unos regmenes de vida (ejercicio moderado, etc.) forman hoy por hoy el tratamiento fundamental de los insulinodependientes. Esquema de la obtencin de la insulina humana:

INGENIERA GENTICA INSULINA HUMANA OBTENIDA A PARTIR DE BACTERIAS. En primer lugar, la insulina es una hormona que se encarga de regular la cantidad de glucosa (azcar) en sangre. Se produce naturalmente en el organismo humano. Especficamente, se fabrica en el pncreas. Con cada comida, el pncreas libera insulina a la sangre para ayudar a las clulas de todo el cuerpo a incorporar la glucosaque contienen los alimentos. Ya dentro de las clulas, la glucosa servir de combustible y aportar la energa necesaria para las actividades cotidianas. Cuando nuestro cuerpo no produce insulina, o lo hace de forma escasa/insuficiente, la persona padece una enfermedad denominada Diabetes. Sin insulina, la glucosa no entra en las clulas y esta se acumula en la sangre. Las clulas del cuerpo no obtienen suficiente energa, y dicha acumulacin puede causar diferentes complicaciones. Por esto, en ocasiones se ha dado en llamar a la diabetes la enfermedad dulce. El tratamiento de la diabetes consiste en inyectar insulina externa, sustituyendo o complementando as a la producida por nuestro organismo, para lograr regular el nivel de glucosa en la sangre. Adems de mantener una dieta baja en carbohidratos y practicar actividad fsica. De dnde viene la insulina que toda persona se inyecta? En 1921, se extrajo por primera vez insulina del tejido pancretico de perros.ms tarde, la insulina se obtuvo a partir de pncreas de cerdos o vacas (cerdos ms comnmente). Sin embargo, dado los bajos rendimientos de produccin y el riesgo de contaminacin con toxinas o microbios (ya que el uso de medicamentos extrados de animales, como en el caso de la insulina, puede producir reacciones inmunes adversas en el cuerpo del paciente, si la sustancia que se inyecta no es exactamente igual a la insulina humana) la industria farmacutica opt por fabricar la insulina humana mediante tcnicas de ingeniera gentica. La produccin de Insulina humana en bacterias: La tcnica de ingeniera gentica empleada consiste en extraer de clulas humanas el gen que porta la informacin para fabricar insulina humana. Este gen (un fragmento del material gentico) se introduce dentro de bacterias de tipo E coli, que son organismos fciles de cultivar en el laboratorio. Las bacterias que incorporaron el pequeo fragmento de ADN se denominan entonces "organismos genticamente modificados" (OGM). Las bacterias que tienen el gen humano de la insulina, en condiciones adecuadas, se multiplican a un ritmo veloz y, a medida que lo hacen, producen grandes cantidades de insulina humana, entre otras sustancias. Entonces, la insulina humana se extrae de las bacterias, se purifica y se vende como medicamento. La sustancia obtenida por ingeniera gentica, en este caso insulina humana, se denomina "insulina recombinante". Dicha insulina sinttica humana, no se diferencia en nada a la producida por humanos y no produce rechazo a largo plazo. Adems es barata y fcil de obtener.