Un modo mecnico de desactivar genes sin daarlos La ciencia ya conoce muchas maneras en que los organismos logran esto,

pero un equipo dirigido por Koen Visscher, profesor en el Departamento de Fsica de la Universidad de Arizona, ha descubierto otro modo en que las clulas pueden controlar la expresin de los genes. Para activar un gen y leer su informacin, una clula debe activar ciertos componentes de su maquinaria bioqumica. Primero, debe actuar una enzima llamada ARN polimerasa en un sitio especfico de unin en el ADN y desenrollar las dos hebras que forman la doble hlice. Luego, la enzima se desplaza a lo largo del tramo de ADN, leyendo la informacin y creando una copia en la forma de una molcula de ARN. Visscher, Gary Skinner y Bennett Kalafut, se valieron de una tcnica lser comparable a unas pinzas pticas, a fin de manipular los actores moleculares necesarios para el proceso de activacin de genes y estudiar cmo interactan estos. El descubrimiento se produjo cuando los investigadores tiraban de dos molculas de ADN, aumentando gradualmente la tensin. Hubo un punto en el que ya no se lea el gen. La fuerza aplicada a la hebra de ADN vari desde 1 a 12 piconewtons, unas 50.000 veces menos que la fuerza ejercida por el peso de un grano de sal. Aplicar demasiada fuerza acarrea que se altere la estructura del ADN. Segn Visscher, estirar de modo controlado el ADN podra conducir a nuevas aplicaciones que requieran un control preciso de la expresin de genes. Los dispositivos popularmente descritos como "laboratorios en un chip" podran ser los receptores de una de estas aplicaciones. Hay muchos modos bioqumicos de controlar la actividad de genes en esos chips. Pero la va mecnica puede ser otro modo, quiz ms conveniente. Acerca de si los organismos de manera natural usan el estiramiento del ADN como un modo de controlar la expresin de sus genes, los cientficos todava no lo saben con certeza, aunque que creen que es posible que s. TEST DE AMES Las bacterias se extienden sobre una placa de agar con una pequea cantidad de histidina y el compuesto qumico cuyo efecto mutagnico se quiere comprobar. Esta pequea cantidad de histidina en el medio de cultivo permite a las bacterias crecer por un tiempo inicial y tener la oportunidad de mutar. Cuando la histidina se agota, slo las bacterias que hayan mutado para obtener la capacidad de producir su propia histidina van a sobrevivir y multiplicarse. En el experimento la placa se incuba durante 48 horas, y la mutagenicidad de la sustancia ser proporcional al nmero de colonias observadas en la placa. Es un test para detectar la carcinogenicidad. Utiliza dos mutaciones de auxotrofa para histidina que revierten por diferentes mecanismos moleculares. Llevan una mutacin que inactiva el sistema de reparacin por escisin, y otra que elimina la cubierta protectora. SUPRESIN Y REVERSIN Se explica mediante un ejemplo. Si tenemos una mutante de E. coli que no crece en un medio sin histidina, es his- y es auxtrofo. El silvestre se llama his+. Sometemos el mutante a mutgenos y puede pasar a his+, y es una reversin. En este mutante puede ocurrir una reversin verdadera o una reversin equivalente. Se produce una supresin cuando la segunda mutacin se produce en otro sitio pero s se convierte en his+. Es una complementacin intergnica. La supresin intergnica consiste en una mutacin en otro gen distinto de donde ocurri la primera. La supresin intragnica consiste en una mutacin supresora en el mismo gen que ocurri la supresin inicial. La complementacin intragnica se produce sobre todo en protenas polmero. MECANISMOS DE REPLICACIN Reparacin directa: Son sistemas que eliminan directamente el dao del UV en el DNA, como es el caso de los dmeros de timina. La luz visible activa la fotoliasa que rompe los dmeros de timina. Otro ejemplo son las alquiltransferasas y su actividad consiste en eliminar los grupos alquilo, tambin se repara la despurinizacin gracias a las glicosidasas del ADN. Dependiente de replicacin: Todas las clulas contienen endonucleasas que atacan los sitios que quedan tras la prdida espontnea de resduos de purina o pirimidina. Por comodidad, los sitios sin purina o sin pirimidina se denominan sitios AP. Las endonucleasas AP son vitales para la clula porque, como se apunt con anterioridad, la despurinizacin espontnea es un hecho relativamente frecuente. Estas enzimas introducen hendiduras en la cadena mediante la rotura de enlaces fosfodisteres en los sitios AP. Esto promueve un proceso de reparacin por escisin medidado por otras tres enzimas: una exonucleasa, la polimerasa de DNA I y la ligasa de DNA. Escisin: Esta va de reparacin est determinada por tres genes denominados uvrA, uvrB y uvrC. Este sistema reconoce cualquier lesin que cree una distorsin importante en la doble hlice de DNA. Una endonucleasa denominada nucleasa uvrABC realiza una incisin alejada varios pares de bases a cualquier lado de la base daada, eliminndose a continuacin un fragmente de DNA de cadena sencilla. El pequeo hueco se rellena entonces mediante sntesis de reparacin y queda sellado por la ligassa de DNA. Sistema GO: Dos glucosilasas actan conjuntamente para eliminar las mutaciones causadas por las lesiones que produce en el DNA el 8-oxodG. Las glucosilasas junto al producto del gen mutT forman el sistema GO. Cuando se originan lesiones GO en el DNA, por dao oxidativo espontneo, una glucosilasa cifrada en el gen mutM elimina la lesin. An as persisten algunas lesiones GO que emparejan errneamente con adenina. Una segunda glucosilasa producto del gen mutY elimina la adenina de este emparejamiento errneo especfico, llevando al restablecimiento de la citosina correcta por sntesis de reparacin. Sistema SOS: En E. coli depende de los genes recA, umuC y umuD. Cuando se encuentra un tramo sin cifrar acta el sistema SOS. Se activa la protena recA que induce la presencia de las protenas SulA y SulB que interaccionan con la DNA pol III. sta hace que pierda afinidad y prosiga la sntesis de ADN y dejando el hueco y sin que la clula muera. Reparacin postreplicativa: Algunas vas de reparacin reconocen errores incluso despus de que haya tenido lugar la replicacin. Uno de estos sistemas, denominado sistema de reparacin de emparejamientos errneos. Para averiguar cual de las dos bases es la errnea debe diferenciar entre la cadena progenitora y la cadena hija. Lo diferencia porque la enzima metiladora metilasa de la adenina tarda varios minutos en metilar la cadena hija. Las protenas mut S y mut L interaccionan con el sitio mal emparejado y una protena mutH rompe la cadena recin sintetizada. Alrededor del emparejamiento errneo, las cadenas de DNA se separan con ayuda de una protena denominada MutU y se estabilizan con SSB. Y las polimerasas copian el segmento de DNA. Detectar Carcingenos: El Test de Ames

Las bacterias han probado ser buenos modelos para determinar el potencial mutagnico de los compuestos. Bruce Ames, un bioqumico, desarroll un ensayo para identificar mutgenos potenciales. El test de Ames funciona justo al revs de como uno esperara. El test empieza con bacterias mutantes y busca qumicos que puedan cambiarlas para que de nuevo sean bacterias normales (tipo salvaje). En el test de Ames, un mutgeno potencial es colocado en un papel de disco en el centro de una caja de petri sobre el cual slo clulas bacterianas que mutan son capaces de crecer. El potencial mutagnico del compuesto en cuestin es determinado por la cantidad de aumento en el crecimiento bacteriano. La informacin obtenida de esta forma ha probado ser comparable con los resultados de exmenes en roedores. Investigadores tambin han manipulado clulas de ratn para hacerlas blancos potenciales para carcingenos y han transferido genes de clulas cancergenas a ratones saludables,- los cuales han llevado a la conclusin de que las mutaciones en genes clave pueden provocar los cambios que resultan en el cncer.