Bacilos Gram Positivo Aerobicos / Facultativos

Mar Mara Teresa Ulloa Flores Programa de Microbiolog Microbiologa y Micolog Micologa ICBMICBM-Facultad de Medicina Universidad de Chile 2008

Tpicos
Clasificacin filogentica de los seres vivos en base al 16S rRNA Bacilos Gram positivo aerobios/facultativos Diagnostico de laboratorio de : Corynebacterium
Archanobacterium haemolyticum

Rhodococcus equi

CLASIFICACIN FILOGNETICA Plantea hiptesis de evolucin (determina relaciones de parentesco entre las especies) Compara la secuencia de molculas (cronmetros evolutivos) y establece la relacin entre ellas Las secuencias de las molculas son el registro histrico de la evolucin

Clasificacin filogentica de los seres vivos en base al 16S rRNA

Clasificacin filogentica de los seres vivos en base al 16S rRNA

Corynebacterium Mycobacterim Nocardia Rhodococcus

Corynebacterium y Coryneformes pertenecen a ordenes y familias distintas

Morfologa : Tincin de Gram

Bacilos G+ Irregulares lados curvos y no paralelos Corynebacterium Catalasa positivea No-hemolticos Arcanobacterium haemolyticum Catalasa negativa B-hemoltico Corineformes Bacilos G+ regulares lados paralelos

Listeria monocytogenes B-hemolitico catalasa positiva Erysipelothrix rhusiopathiae No-hemoltica, catalasa negativa Bacillus Esporulados catalasa positiva

Bacilos G+ Irregulares lados curvos y no paralelos a veces ramificaciones

Nocardia Rhodococcus

Corynebacterium
DNA de alto nivel de contenido G+C amplio rango (46-74 mol%) indicando gran diversidad gentica Pared celular contiene cidos miclicos, 22 36 tomos de carbono (grupo C M N) Corynebacterium no es cido alcohol - resistente 59 especies 36 Especies clinicamente relevante

Cuando estudiar una cepa de Corineforme?

Muestra respiratoria especialmente faringea En heridas de piel especalmente de viajeros Si es predominate en un sitio normalmente estril, herida, absceso o esputo purulento Aislamiento en hemocultivos seriados Recuento de 10
4

UFC/ml en cultivo puro en orina

Otras muestras con aislamiento predominante y respuesta inflamatoria en la Tincin de Gram directa

DIAGNOSTICO DE CORYNEBACTERIUM
Bateras bioqumicas tradicionales (CDC) API Coyneform bacteria Remel Cristal BBL Patrn de cidos grasos de pared celular (CFA) Sherlock system (MIDI Inc., Newark, Del.) perfil de 140 cidos grasos de 180 gneros bacterianos. Se compara con una base de datos de + de 700 bacterias.

Biolog system (Biolog, Hazelwood,Calif) : Perfil metablico de 95 fuentes de carbono. Se compara con una base de datos de + de 700 bacterias. Biologa Molecular de Corynebacterium anlisis de 16S rDNA

Evaluation of API Coryne System, version 2.0, for diphteroid Grampositive rods identification with clinical relevance
178 cepas de Bacilos Gram-positivo. 1995 and 2004. 78 cepas de Corynebacterium 100 cepas de gneros relacionados La identificacin fu hecha en base a los esquemas de Von Graevenitz y Funke.

162/ 178 cepas (91%) correctamente identificados a nivel de gnero y especie (IC95 = 85.6-94.6), 44 cepas (24.7%) : pruebas adicionales.
16 cepas s (9%)mal identificadas
Corynebacterium jeikeium Corynebacterium urealyticum Corynebacterium striatum Corynebacterium pseudodiphtheriticum Corynebacterium amycolatum Arcanobacterium haemolyticum

Rev Argent Microbiol. 2006 Oct-Dec;38(4):197-201.

I. Microbiologa Mdica, Zurich.JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Sept. 2003, p. 41344140 Vol. 41, No. 9

Diagnstico
Que podemos hacer en el lab. de rutina?

Corynebacterium
NO LIPOFILICOS
Fermentativo C. diphtheriae C ulcerans C.pseudotuberculosis C. xerosis C. amycolatum C. striatum C. minutissimum C.glucuronolyticum C. argentoratense C. matruchotii No fermentativo C. afermentans subsp. afermentans C. auris C. pseudodiphtheriticum C. propinquum

LIPOFILICOS C. jeikeium C. urealyticum C. afermentans subsp. Lipophilum C. accolens C. macginleyi CDC coryneform groups F-1 and G C. bovis

Crecimiento estimulado por la presencia de lpidos

Test Deteccin de cepas Lipoflicas

Especies Patgenas de Corynebacterium

Productoras de Toxina diftrica: Difteria

Corynebacterium diphtheriae
C. ulcerans C. pseudotuberculosis

A. Tinsdale

A. Sangre-Telurito

A. Sangre

Corynebacterium oportunistas
Varias especies microbiota normal De la piel C. jeikeium C. amycolatum C. urealyticum C. xerosis Desde la piel puede ser introducidos Adems C. jeikeium y C. amycolatum Se encuentran en el ambiente intrahospitalario Sistematicamente de cateres en pacientes debilitados Hospitalizacin prolongada Tratamiento antimicrobiano neutropnicos

Resistant a penicilina y otros B- lactmicos Sensible a vancomicin

Colonias de Corynebacterium en agar sangre

C jeikeium C.urealyticum

C diphtheriae

C xerosis C. amycolatum

Biochemical characteristics of Corynebacterium spp.

Corynebacterium urealyticum

Bacilo Gram-positivo Crecimiento lento infecciones asociadas Endocarditis Bacteriemia Neumona Patgeno urinario. Frecuencia de aislamiento en urocultivos : 0,025-0,32% Commensal uretra anterior

C. urealyticum
Crece en agar sangre 35 C durante 48-72 h. A las 48 h las colonias pequeas, blancas, lisas, convexas y no hemolticas. Puede crecer en agar chocolate Se han desarrollado medios selectivos para aislar esta bacteria, No est recomendado su uso La bacteria es aerobia estricta y lipoflica. La tincin de Gram suele mostrar cocobacilos (a veces con una morfologa ms cocoide que bacilar) Gram positivos frecuentemente agrupados. Identificacin Catalasa Nitratasa Ureasa (+ en el medio de Christensen en pocos minutos).

Cundo sospechar la existencia de una infeccin por C. urealyticum?.

Caractersticas de la orina: 1.Piuria-hematuria, 2.PH alcalino 3. Presencia de cristales de estruvita (fosfato amnico magnsico). No siempre se dan estos tres signos y la integridad de los leucocitos se ve muy afectada por la alcalinidad del medio. En otro tipo de infecciones, la presencia de leucocitos, polimorfonucleares y organismos diftermorfos sugieren infeccin. Cultivos negativos a las 24 h, prolongar la incubacin, especialmente si hay informacin clnica o datos de laboratorio que apoyen la existencia de una infeccin bacteriana Cuidado con considerar como "contaminante" a un organismo sobre la base de su identidad. La valoracin del significado del aislamiento solo puede hacerse dentro del contexto clnico.

Table 5. Corynebacterium spp. (Including C. diphtheriae)Information and Interpretive Criteria for Broth Microdilution Susceptibility Testing. CLSI M45-P Vol. 25 No. 26

Resistance: Some species of Corynebacterium may exhibit resistance to multiple drug classes. Reasons for Testing/Not Testing: Testing of isolates from normally sterile sources (blood cultures, deep tissue, implanted prosthetic devices) may be warranted, especially in immunodeficient patients. Derivation of Interpretive Criteria: Interpretive criteria for penicillin and erythromycin are based primarily on MIC distributions following testing of a large number of isolates. Cephalosporin interpretive criteria are adapted from those for Streptococcus spp.; linezolid interpretive criteria are adapted from those for Enterococcus spp.; remaining interpretive criteria are adapted from those for Staphylococcus spp. as published in the current edition of CLSI document M100. Testing Notes: Resistant results can be reported at 24 hours. Isolates demonstrating susceptible results for beta-lactams should be reincubated and results reported at 48 hours.

Table 5. Corynebacterium spp. (Including C. diphtheriae)Information and Interpretive Criteria for Broth Microdilution Susceptibility Testing. CLSI M45-P Vol. 25 No. 26

Archanobacterium haemolyticium

Relevancia clnica
Faringoamigdalitis indistinguible de la estreptoc estreptoccica con exudado en m ms del 70 % de los casos

55% de los pacientes presentan plurito, rash escarlatiniforme 11-4 d das antes de presentar la faringitis. Faringoamigdalitis en adolescentes y adultos j jvenes. 90 % de los pacientes tienen entre 10 y 30 aos, 80 % se concentra entre los 11 y los 20 a aos Menos frecuente Abcesos Sepsis Menos frecuentes causando: OMA, sinusitis, endocarditis y osteomelitis

CULTIVO
Comparison of different culture media and growth conditions for recognition of Arcanobacterium haemolyticum. 47 isolates of A. haemolyticum was studied. After 48 h of incubation, trypticase soy agar with 5% horse blood in 5% CO(2) was the best medium. Diagn Microbiol Infect Dis. 2008 Mar 4. Medios selectivos con Inhibidores Mupirocina Aztreonam Anfotericina B Acido nalidxico Colistina NaCl al 3,5% inhibe Streptococcus del grupo viridans, Neisseria, y otros Streptococcus

cultivo
Crecimiento ptimo a 37 37C en ambiente capnof capnoflico(3lico(3-5 % Co2) Las colonias a las 24 horas son peque pequeas, circulares y blancas. Las colonias a las 48 horas en el centro son negras, observado una vez removidas desde el agar.

Diagnstico de laboratorio
Bacilo Gram (+) Catalasa ((-) Beta hemol hemoltico Inm Inmvil Ureasa ((-) En cultivo a las 24horas se pueden observar los bacilos** Fermentan CH glucosa, lactosa maltosa No fermentan manitol y xilosa No reduce nitratos

Test de CAMP reverso (+)

Fosfolipasa D de A haemolyticum inhibe la Beta hemolisina de S. aereus.

Diagnstico
Gram concordante Test de CAMP INVERSO + Inhibici Inhibicin de B hemolisina de S. aereus Pruebas bioqu bioqumicas concordantes.

Archanobacterium haemolyticum

Otros exmenes de lab

Leucocitos: 7.100-23.000 clulas/ml Ttulos del Ac antistreptolisina O (-) a menos que la infeccin concomitante est presente. Los kits que identifican A. haemolyticum, presentan buen rendimiento.

Archanobacterium haemolyticum

Sensibilidad a antibiticos
Resistencia variable a penicilina, gentamicina y tobramicina. Resistentes generalmente a sulfonamidas y cido nalidixico. Sensible a eritromicina, eritromicina, cloramfenicol, doxiciclina, claritromicina, azitromicina, tetraciclina, etc. In vitro suceptibilidad a BB- lact lactmicos, pero in vivo no ocurre**.

Rhodococcus equi
Previamente como Corynebacterium equi Descrito en patolog patologa veterinaria desde 1923 Microorganismo productor de zoonosis, causante de neumon neumona granulomatosa y absceso de pulm pulmn en potros. En humanos, es un pat patgeno intracelular oportunista que infecta macr macrfagos y polimorfonucleares, especialmente en pacientes con alteraci alteracin de la inmunidad celular.

Clasificacin
Dominio: Bacteria Reino: Bacteria Divisi Divisin: Actinobacteria Clase:Actinobacteria Orden: Actinomicetales
Especie R. coprohilus R. equi R. erythropolis R. fascians R. globerulus R. marinonascens R. rhodnii R. rhodochrous R. ruber Aislada en humanos NE + + + NE NE NE + NE

Familia: Nocardiaceae Genero: Rhodococcus

12 Especies

Epidemiologa
Ubicuo : aire, agua y la tierra Se recupera de deposiciones de bovinos, porcinos y equinos Mecanismo de transmisin: Inhalacin Inoculacin en heridas o membranas mucosas Ingestin de alimentos contaminados

La mayora de los casos en pacientes con inmunodeficiencia celular La mortalidad asociada a la infeccin varia segn condicin del paciente: Inmunocompetentes 11% Inmunodeprimidos no VIH 20-25% SIDA 50- 55%

Patogenia
R. equi persiste en macr macrfagos. Evita la fusi fusin fagosomafagosoma- lisosoma. Constituci Constitucin de la pared celular ( (cidos mic miclicos con cadenas largas de carbono)
Bacteria Intracelular facultativa

Factores de virulencia Enzimas: colesterolcolesterol-oxidasa, colinocolino-fosfohidrolasa y exoenzima fosfolipasa C ("equi factor").

Cuadros Clnicos

Muestras respiratorias Expectoraci Expectoracin, cepillado bronquial, punci puncin aspirativa transtrans-tor torcica y hemocultivo (50% en SIDA).
-

Microbiologa
Morfologia: Bacilos, Cocobacilo, Cocos pleomorfico Gram (+). Aerobio estricto. Posee una c cpsula polisac polisacrida. Presencia de cido micolico en su pared. Alcohol cido resistente Intracelular facultativo.

Diagnostico de Laboratorio.
Aislamiento en medios de cultivo no selectivos. Crece a 37 37C (48(48-72 hrs.) Con el objeto de eliminar la microbiota comensal: Medios selectivos con antibi antibiticos. El pigmento caracteristico (Rhodo: rojo) . Las colonias pueden aparecer de color salm salmn.

Cambio morfol morfolgico de las 6 y 24 horas de incubaci incubacin.

Organismo cido alcohol resistente con la tinci tincin de Kinyoun.

Diagnstico de Laboratorio.

Catalasa +

Indol (-) Ureasa +

Reacciones hemol hemolticas cooperativas (y antag antagnicas) en Agar sangre de cordero

1.Rhodococcus equi, y Arcanobacterium haemolyticum: + 2.Rhodococcus equi y Staphylococcus aureus: + 3.Arcanobacterium haemolyticum y S. aureus : -

Sensibilidad in vitro

Generalmente resistente a lact lactmicos. En pacientes inmunocompetentes:combinaci inmunocompetentes:combinacin de farmacos. esquema prolongado, Durante el tratamiento realizar cultivos seriados con antibiograma Considerar tratamiento quir quirrgico en pacientes con infecci infeccin pulmonar cr crnica.

Gracias