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SUBMODULO2: UTILIZA TECNICAS DE SEPARACION Y PURIFICACIN CON BASE A PROCEDIMIENTOS ESTANDARIZADOS. ALUMNA: M. Angelica Rodriguez Zapata.

GRUPO: F COMPETENCIAS DICIPLINAR Interpreta su realidad social a partir de los procesos histricos locales nacionales e internacionales que la han configurado. 2.- Analiza de manera reflexiva y aplicando normas de seguridad COMPETENCIA GENERICAS: Sigue Instrucciones, y procedimientos de manera reflexiva, comprendiendo como cada uno de sus pasos contribuye al alcance de mi objetivo. 2.- Estructura ideas y argumentos de manera clara coherente y sinttica

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INTEGRANTES_

AIME NATALIA GARCIA JIMENEZ MARTHA ANGELICA RODRIGUEZ ZAPATA ELIZABETH PASOS ROMERO MAGHER AMARO ROSAS FRANCISCA LOPEZ ALARCON ERIKA YARETZI ALARCON ALEMN ADRIAN VISCENCIO CARBALLO

SUBMODULO2: UTILIZA TECNICAS DE SEPARACION Y PURIFICACIN CON BASE A PROCEDIMIENTOS ESTANDARIZADOS. ALUMNA: M. Angelica Rodriguez Zapata. GRUPO: F COMPETENCIAS DICIPLINAR Interpreta su realidad social a partir de los procesos histricos locales nacionales e internacionales que la han configurado. 2.- Analiza de manera reflexiva y aplicando normas de seguridad COMPETENCIA GENERICAS: Sigue Instrucciones, y procedimientos de manera reflexiva, comprendiendo como cada uno de sus pasos contribuye al alcance de mi objetivo. 2.- Estructura ideas y argumentos de manera clara coherente y sinttica

2 CROMATOGRAFA EN CAPA FINA: Tcnicas analtica y preparativa Cromatografa en capa fina (CCF) Usos Para comprobar la pureza Pruebas preliminares antes de la separacin Comparacin cualitativa con sustancias conocidas Llevar el control en reacciones Procedimiento Corte algunas placas de vidrio comercial (20 x 20 cm) con un cortador de vidrio. Elija la fase estacionaria: almina o gel de slice, aproximadamente .2 de grueso Aplicacin de la sustancia Desarrollo de cromatograma Identificacin: manchas de color, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante: Luz UV Introduccin en la placa en vapores de yodo El roci con una solucin de agua H2SO4 a una Conc. 1:1 Rociarlas con activos colorantes convenientes. Registro Marque la cromatografa usando papel carbn. Seale las manchas, posicin de inicio y frente del disolvente. Indique el tipo de placa, eluyente y la tcnica de desarrollo. Corrimientos mltiples Algunas veces es til volver a correr una placa, despus que se ha secado, hasta que el frente del disolvente alcance la misma posicin del frente del disolvente en el corrimiento anterior. CCF PREPARATIVA (CROMATOGRAFIA EN CAPA GRUESA) Usos: es la separacin preparativa de mezclas. Procedimiento El sistema de separacin se optimiza por medio de la CCF Aplique una solucin concentrada de la mezcla a la placa, formando una banda lo mas angosta posible por medio de una pipeta de punta muy fina Eluya de la misma manera que para CCF

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Si es necesario, se utiliza una lmpara de rayos ultravioleta, se localiza las bandas individuales y se sealan con un lpiz. Separe raspando las bandas en forma individual Eluya la sustancia con un disolvente ms polar que el eluyente Evapora el disolvente. Se cristaliza o se destila el producto y se identifica

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA Eluya de la misma manera que para CCF. Si es necesario se utiliza una lmpara de rayos ultravioleta (UV), se localizan las bandas individuales y se sealan con un lpiz. (Mtodos alternativos: se cubre la placa cuidadosamente con papel aluminio, dejando expuesta una franja de 0.5 cm en el centro y se desarrolla en vapores de yodo, despus supone que las bandas estn en posicin recta. Separe raspando las bandas de forma individual. El gel de slice es un poco soluble en etanol o metanol. Evapore el disolvente. Se cristaliza o se destila el producto y se identifica. NOTA: para el trabajo a pequea escala, estas debe limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus se dejan secar completamente antes de aplicar la mezcla. Es indispensable que se utilicen disolventes puros y redestinados. CROMATOGRAFA EN COLUMNA Por medio de la CCF se optimiza sistema (adsorbente eluyente). Dimensiones de la columna: el adsorbente se debe empacar en esta en una proporcin de altura dimetro de 10:1; para estimar la cantidad de

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adsorbente en relacin con el dimetro de la columna La cromatografa en capa fina es una tcnica para determinar el nmero de Componentes de una mezcla y como una prueba preliminar para realizar una Cromatografa en columna, entre otros. El proceso de cromatografa en columna se controla por cromatografa en capa fina, de tal manera que se puede separar cada componente de la mezcla. La cromatografa en columna se usa para separar grandes cantidades de material: >100 mg. El proceso de cromatografa consta de una fase mvil (eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las sustancias que se deseen separa. Se le proporcionar una mezcla slida de cido benzoico contaminado con azul de metileno, los cuales se separan por cromatografa en columna. Para empacar la columna sujtela en el soporte con las pinzas. Si la llave es de vidrio, engrsela ligeramente y mantenga la posicin de cerrado. Introduzca hasta el fondo un pequeo pedazo de algodn ayudndose con la varilla de vidrio, agregue 8 mL de eluyente (acetato de etilo) y presione suavemente el algodn para que quede bien Colocado y sin burbujas (Nota 1). Prepare una suspensin de.l0 g de el de slice para columna en 40 mL de eluyente y agite por 5 min. Para eliminar las burbujas de aire. A travs del embudo de vidrio vierta la suspensin en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el Empacado sea uniforme. Abra la llave para eliminar el exceso de disolvente teniendo cuidado de no dejar la gel de slice sin disolvente (Nota 2). En un vaso de precipitado de 100 mL L disuelva 0.4 q de la mezcla problema con la mnima cantidad de eluyente (4 o 5 mL), ayudndose con el agitador, virtala con cuidado para que quede distribuida uniformemente encima de la superficie de la gel de slice. Abra la llave para colectar el disolvente y que se adsorba la muestra aplicada (cuidando que no se seque la columna). Colecte fracciones (eluatos) de 6 mL en los frascos viales y verifique la separacin Haciendo cromatoplacas (Notas 3 y 4) de cada una de las fracciones usando una Muestra testigo como se indica en la figura I. Eluya las cromatoplacas en mezcla de hexano-acetato de etilo (2:1) y observe en cualesfracciones hay presencia del compuesto separado (Figura 1). En cada cromatoplacas observe el cambio de la coloracin de la mancha del producto principal (a menor concentracin menor intensidad de color). La elucin y separacin termina en el momento en el que ya no se observa en la Cromatoplacas presencia del producto separado. En un matraz rena las fracciones que contienen producto. Para recuperar la sustancia: destile el exceso de disolvente utilizando una destilacin simple, calentando el matraz en un bao mara (Nota 5), deje en el matraz un residuo de 5 mL aproximadamente y virtalo en un vidrio de reloj o en un vaso, para que termine De evaporarse en la campana. Pese el producto recuperado y calcule el rendimiento.

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Testigo Fraccin 1 Seguimiento de la separacin por cromatografa en capa fina Notas: 1) Otra opcin para preparar la columna es, agregando 10 mL de eluyente indicado. Y despus colocar en el fondo de la columna un pedazo de algodn o fibra de Vidrio ayudndose con la varilla de vidrio presionando suavemente sin apretar el Algodn. 2) Mantenga siempre el nivel del eluyente 0.5 cm por arriba del nivel del adsorbente. 3i Para preparar idas cromatoplacas se introducen 2 portaobjetos juntos, limpios y Secos en una suspensin de silica gel al 35% en acetato de etilo. 4) Para aplicar las muestras a la cromatoplacas utilice los capilares, los que Previamente deben ser estirados en la flama del mechero con el fin de que tengan el dimetro adecuado. 5) Para recuperar un slido disuelto en un disolvente, siempre se destila el Disolvente calentando en un bao-mara.
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA OBJETIVOS a) Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina, (ccf), sus caractersticas y los factores que en ella intervienen. b) Calcular valores de Rf de varias sustancias y correlacionarlo a la seleccin adecuada del eluyente y deducir la relacin que existe entre la polaridad de las Sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados. c) Aplicar la tcnica de cromatografa en capa fina como criterio de pureza e Identificacin de sustancias. ANTECEDENTES a) Concepto de cromatografa. Tipos de cromatografa. Cromatografa de adsorcin y cromatografa de particin. Ejemplos. b) Fenmeno de adsorcin. La propiedad de retencin. Concepto de Rf c) La cromatografa en capa fina. Sus caractersticas y aplicaciones. d) Eluyentes, soportes y reveladores ms comunes para cromatografa en capa Ttna. e) Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina.

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INFORMACIN Concepto de cromatografa La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la naturaleza de las Dos fases involucradas: slido- Liquido (capa fina, papel o columna), liquido-Liquido y Gases-lquido (fase vapor). Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de La mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que Transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra, Denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la Estacionaria puede ser un slido o un lquido. Todos los solidos finamente pulverizados tienen el poder de absorber de menor a mayor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente' todas las sustancias pueden Ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de adsorcin selectiva Es el principio fundamental de la cromatografa.

Concepto de Rf Rf es el registro, es una relacin de distancias, y se define como: p1 = (a) distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin

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(b) distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.

El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura,

vapor de saturacin, etc."). Tiene una reproducibilidad de t 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma Placa. Cromatografa en capa fina En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria
manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyentes ascender, por tap tarida o, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo "manchas" de los componentes.

En la cromatografa en capa fina (ccf), el grado de elucin de las sustancias


depende tanto de su propia polaridad como de la polaridad del eluyente utilizado' El adsorbente se coloca en forma de una capa delgada adherida sobre un soporte rgido,

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qu pueden ser placas de vidrio, aluminio o polister. Los tamaos de la placa para ccf Convencional son: 20 x 20; 't0 x20 y 5x2 cm.
Hay adsorbentes que contienen un indicador de fluorescencia para facilitar la Identificacin de muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos, se requerirn otras tcnicas de revelado. Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina

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- ter de petrleo - cloruro de metileno -hexano - acetato de etilo - ciclo hexano - acetona tolueno - ruso-propanol - dietil-ter - etanol - f-butil-ter - metanol - cloroformo - cido actico

Reveladores ms comunes para cromatografa en capa fina Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden Revelarse mediante: a) Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase Estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a F366), el nmero que aparece como subndice nos indica Ia longitud de onda de excitacin del Indicador utilizado" b) La introduccin de la placa en vapores de yodo c) El roco con una solucin de agualH2SOa 1 :1 (dentro de un compartimiento Especialmente protegido y bajo una campana de extraccin de gases). Despus Calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero. hasta carbonizar los Compuestos. Adsorbentes ms comunes para cromatografa en capa fina. a) Gel de slice (se utiliza en el 80% de las separaciones) b) Oxido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica) c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) d) Poliamidas Para la seleccin del adsorbente deber tomar las siguientes consideraciones: a) Polaridad b) Tamao de partcula c) Dimetro d) rea Superficial e) Homogeneidad fl Pureza

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Factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina.

a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase Estacionaria. b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire. c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes Plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben Limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar Secar completamente antes de aplicar la muestra. d) Pureza de los disolventes.

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Cromatografa

La palabra cromatografa significa escribir en colores, ya que cuando fue desarrollada, los componentes separados eran colorantes. Las tcnicas cromatogrficas se basan en la aplicacin de la mezcla en un punto (punto de inyeccin.

Clasificacin de la cromatografa

Cromatografa En columna . Cromatografa en Capa Fina

Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina Slica u Oxido de Magnesio.

Las tcnicas cromatogrficas para el anlisis y purificacin de los productos de reaccin son Ampliamente utilizadas en el laboratorio

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Orgnico.

Cromatografa de Adsorcin

Las columnas se rellenan con un adsorbente, como almina o gel de slice (fase estacionaria), mojado con El disolvente que se vaya a emplear en proceso Cromatogrficas. Los componentes de la mezcla son Adsorbidos por la fase estacionaria con diferente Intensidad.

Es una tcnica empleada como fase estacionaria una Cromatografa de Capa fina (TCL) capa delgada de gel slica o almina adherida a un soporte de vidrio o aluminio. Para llevar a cabo esta Tcnica se disuelve una pequea cantidad de la mezcla A separar y, con la ayuda de un capilar, se deposita sobre la Parte inferior de la placa.

Los compuestos que se pueden separar por cromatografa Cromatografa de Gases (CG) de gases deben ser voltiles y Trmicamente Estables.

Cromatografa en

Es bsicamente el mismo, solo que se usan tiras de papel

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Papel

cromatogrfico en la cuba cromatogrfica.

Es parecida a la cromatografa en columna, Slo que se Cromatografa de Lquidos de Alta Eficiencia (HPCL) aplica el flujo a presin, el tamao de partcula es entre 30 y 10 micras, la longitud de la columna es entre 5 y 25 cm y requiere de equipo sofisticado.

Intercambio Inico

La fase es una resina de intercambio Inico y tiene la Propiedad de separar especies Ionizadas. A la fase estacionaria se le llama tambin Exclusin

2 CROMATOGRAFA EN CAPA FINA: Tcnicas analtica y preparativa Cromatografa en capa fina (CCF) a) Usos Para comprobar la pureza Pruebas preliminares antes de la separacin Comparacin cualitativa con sustancias conocidas Llevar el control en reacciones b) Procedimiento i. ii. iii. iv. Corte algunas placas de vidrio comercial (20 x 20 cm) con un cortador de vidrio. Elija la fase estacionaria: almina o gel de slice, aproximadamente .2 de grueso Aplicacin de la sustancia Desarrollo de cromatograma

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v.

Identificacin: manchas de color, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante: 1. Luz UV 2. Introduccin en la placa en vapores de yodo 3. El roci con una solucin de agua H2SO4 a una Conc. 1:1 4. Rociarlas con activos colorantes convenientes.

c) Registro Marque la cromatografa usando papel carbn. Seale las manchas, posicin de inicio y frente del disolvente. Indique el tipo de placa, eluyente y la tcnica de desarrollo. d) Corrimientos mltiples Algunas veces es til volver a correr una placa, despus que se ha secado, hasta que el frente del disolvente alcance la misma posicin del frente del disolvente en el corrimiento anterior. CCF PREPARATIVA (CROMATOGRAFIA EN CAPA GRUESA) a) Usos: es la separacin preparativa de mezclas. b) Procedimiento El sistema de separacin se optimiza por medio de la CCF Aplique una solucin concentrada de la mezcla a la placa, formando una banda lo mas angosta posible por medio de una pipeta de punta muy fina Eluya de la misma manera que para CCF Si es necesario, se utiliza una lmpara de rayos ultravioleta, se localiza las bandas individuales y se sealan con un lpiz. Separe raspando las bandas en forma individual Eluya la sustancia con un disolvente mas polar que el eluyente Evapora el disolvente. Se cristaliza o se destila el producto y se identifica

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