Universidade Catlica de Braslia Curso de Formao Geral da Sade Disciplina: Bioqumica Professora: Patrcia Silvestre Limeira Horrio: 3AB

Relatrio N 3

CINTICA ENZIMTICA

Clarissa Machado e Dias Borges Jairo de Sousa Martins Kacyus Handell de Almeida Silva

Introduo: Cintica enzimtica a anlise quantitativa do efeito de cada um dos fatores que influencia a atividade enzimtica avaliada atravs do aumento ou reduo da velocidade da reao catalisada. A atividade da enzima determinada pela concentrao da enzima, a concentrao de cofatores, pH, temperatura e concentrao do substrato.

Figura 1: Imagem gerada por computador de um modelo da estrutura tridimensional da enzima purina nuclesido fosforilase bacteriana. (http://pt.wikipedia.org/wiki/Cin%C3%A9tica_enzim%C3%A1tica)

Enzimas so catalisadores biolgicos, formados por longas cadeias de aminocidos. So um tipo de protena com atividade cataltica, sendo encontradas na natureza em todos os seres vivos. Sua funo viabilizar a atividade das clulas, quebrando molculas ou juntando-as para formar novos compostos. A singularidade desses compostos decorre do elevado grau de especifidade ao substrato em condies moderadas, sob as quais atuam. Algumas enzimas so especficas para determinado tipo de ligao qumica, como, por exemplo, a capacidade da -amilase de romper unicamente as ligaes -1,4 das molculas de amido. Toda enzima uma prot ena, mas nem toda protena uma enzima.

enzima de Trypanosoma cruzi. Noticias.php?rowid_home=1240&rowid_vol=76)

Figura 2: (http://boletim.ifsc.usp.br/Todas-

O stio ativo constitudo pelo conjunto de aminocidos que entram em contato com o substrato. O centro cataltico atua sobre o substrato e o leva a sofrer a reao qumica e o local de fixao se combina por meio de ligaes fracas. A velocidade de uma reao enzimtica obtida pela medida da quantidade de produto formado pela unidade de tempo.

S+E

P+E

Aonde: S= Substrato; E= Enzima; P= Produto.

A velocidade da reao enzimtica pode ser medida de duas maneiras: Pela reao em um tempo (t): v =d[P] dt Pelo decrscimo da concentrao de substrato: v =d[S] Dt

Figura 3: velocidade de uma reao enzimtica em presena de quantidades crescentes de enzima. (http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/concn_subst.htm)

Muitos fatores influenciam na atividade de uma enzima. Os que so mais importantes so: temperatura, pH, concentrao de substrato, presena ou no de inibidores. Temperatura: A velocidade de quase todas as reaes qumicas aumenta quando a temperatura aumenta. Nas reaes enzimticas, entretanto, as elevaes alm de certa temperatura reduz drasticamente a velocidade da reao. A temperatura enzimtica tima para a maioria das enzimas est entre 35 e 40C.

Figura 4: Diagrama esquemtico mostrando o efeito da temperatura na atividade de uma enzima (http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/temperat.htm)

pH: A maioria das enzimas tem pH timo na qual a sua atividade mxima. Quando est acima ou abaixo deste valor de pH, a atividade enzimtica e a velocidade da reao diminuem.

Figura 5: efeito do pH na atividade de uma enzima. (http://qnint.sbq.org.br/qni/visualizarConceito.php?idConceito=57)

Concentrao de substrato: H uma taxa mxima na qual certa quantidade de enzima pode catalisar especfica reao. Apenas quando a concentrao de substrato muito alta, essa taxa mxima pode ser alcanada.

Figura 6: efeito da concentrao de substrato na atividade da enzima (http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/concn_subst.htm)

Inibidores: Qualquer substncia que reduza a velocidade de uma reao enzimtica pode ser considerada como inibidor. Inibio competitiva ocorre quando um inibidor compete com o substrato por ligao com enzima livre. Alguns destes so estruturalmente semelhantes ao substrato ou ao produto, enquanto outros so estruturalmente diferentes.

Na inibio no-competitiva uma situao mais complicada ocorre, quando um inibidor reversvel se liga tanto enzima livre como ao complexo ES. Este

modo de ligao leva a uma inibio de atividade mesmo com a presena de concentrao elevadas de (S). ( DEVLIN, 2007)

Algumas vezes quando uma grande quantidade de substrato est presente, a velocidade da reao catalisada por enzima diminui pelo excesso de substrato. Este fenmeno chamado inibio pelo substrato. Nesse caso, a velocidade da reao v atinge um mximo quando a concentrao de substrato aumentada at certo valor, e diminui quando a concentrao de substrato ultrapassa esse valor. (Lehninger, 2002)

Figura 7: efeito de inibidores na atividade da enzima (http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/inibidores.htm)

Objetivos: Observar efeito da concentrao de substrato na atividade enzimtica Observar efeito do pH na atividade enzimtica Observar efeito da temperatura na atividade enzimtica

Materiais: Saliva gua destilada Amido 1% (mL) Amilase diluda 1:10 Reagente de Lugol Fosfato pH 7 cido actico pH 2 Carbonato de clcio pH 9,7 Tubo de ensaio Banho Maria 37C Isopor com gelo Pipeta de Pasteur Pipetador Pipetas graduadas

Metodologia: Efeito da concentrao do substrato: Separar os 7 tubos para adicionar amido conforme os volumes citados na tabela e completa-los com gua tambm conforme a tabela. Adicionar 0,1 mL de amilase no fundo do tubo de ensaio e agitar bem. Aguardar o banho maria a 37C por exatamente 3 minutos, aps isso mergulhar os tubos juntos. Aguardar esfriar e adicionar de 2 a 3 gotas do reagente de Lugol. Analisar os resultados, observando a diferena de colorao entres os tubos.

Tubo 1 2 3 4 5 6 7 Amido 1% (mL) 0,0 0,2 0,4 0,6 1,0 2,0 3,2 gua 3,2 3,0 2,8 2,6 2,2 1,2 0,0

Efeito do pH: Preparar os tubos e adicionar 0,5 mL de amilase diluda em cada tubo, sempre no fundo e agitando bem. Esperar por 10 minutos. Adicionar de 2 a 3 gotas de reagente de Lugol. Analisar os resultados. Tubo Volume do tampo (mL) Amido (mL) 1 fosfato pH 7 1,0 2,0 2- cido actico pH 2 1,0 2,0 3- carbonato de clcio pH 9,7 1,0 2,0 Efeito da temperatura: Preparar 3 tubos de ensaio e adicionar em cada um 2 mL de amido 1% e 1mL de tampo fosfato. Coloque previamente os tubos: 1 no gelo, 2 a 37C e 3 em gua fervente por aproximadamente 5 minutos para o equilbrio trmico. Adicionar 0,1mL da soluo de amilase e sempre agite bem. Aguardar exatamente 10 minutos e teste a hidrlise com Lugol (2 a 3 gotas de reagente de Lugol). Analisar os resultados. ATENO: Coletar saliva (1,0 mL e adicionar 9,0 mL de gua destilada) em um tubo de ensaio, o mesmo corresponde a soluo de amilase diluda 1:10.

Bibliografia:

NELSON, D.L & COX, M. M. Lehninger. Princpios de bioqumica. 4 Edio. Editora Sarvier, 2006. MOTTA T., VALTER. Bioqumica bsica. 2 Edio. Editora Medbook, 2011. STRYER, L., BERG, J. M., TYMOCZKO, J. L. Bioqumica. 6 Edio. Editora Guanabara-Koogan, 2008. MARZZOCO, A. & TORRES, B.B. Bioqumica Bsica. 3 Edio. Editora Guanabara Koogan, 2007. PALERMO, Jane Rizzo. Bioqumica da nutrio. 1 Edio. Editora Atheneu, 2008. Bibliografia das imagens: http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/inibidores.htm http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/concn_subst.htm http://qnint.sbq.org.br/qni/visualizarConceito.php?idConceito=57 http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/temperat.htm http://www2.bioqmed.ufrj.br/enzimas/concn_subst.htm http://boletim.ifsc.usp.br/Todas-Noticias.php?rowid_home=1240&rowid_vol=76 http://pt.wikipedia.org/wiki/Cin%C3%A9tica_enzim%C3%A1tica *TODOS FORAM ACESSADOS EM 13/04/2013.

Discusso: Efeito do pH: As diferenas observadas deve-se ao fato de que as enzimas, em sua maioria, possuem um pH caracterstico no qual sua atividade mxima. Mudanas extremas de pH podem alterar a estrutura da enzima devido a uma repulso de cargas, a velocidade da reao diminui na medida que o pH se afasta do valor ideal que cada enzima possui. No caso da amilase, seu pH relativamente neutro, por isso que o ponto ideal foi alcanado num tempo menor quando se utilizou a amostra de pH 7. Acima ou abaixo desse pH, a enzima trabalha de forma mais reduzida, e por esse motivo o ponto ideal demorou mais de ser alcanado quando se utilizou a amostra de pH 9,7 e nenhuma atividade foi verificada com a aplicao do pH 2,0. Efeito da temperatura: O pH da saliva em torno de 7, portanto neutro. Foram testadas temperaturas de 37C, 92C e um isopor com gelo. Observou-se que ao adicionar Lugol, o nico experimento que no reagiu foi o 37C, o que conclui que a amilase neutra e est em seu estado normal 37C. IMPORTANTE: NA HORA DO EXPERIMENTO, ESQUECEMOS DE DEIXAR OS TUBOS DE ENSAIO QUE ESTAVAM NO GELO VOLTAREM PARA A TEMPERATURA AMBIENTE, PORTANTO, OS MESMOS NO REAGIRAM CONFORME O ESPERADO. Efeito da concentrao: Aps adicionar os contedos mandados para cada tubo de ensaio, coloca-los em banho maria, esperar esfriar e adicionar o Lugol, concluiu-se que quanto maior a presena de amido no tubo de ensaio, mais escura fica a colorao da amostra, conforme a tabela abaixo: Tubo 1 2 3 4 5 6 7 Fotos: Amido 1% 0,0 0,2 0,4 0,6 1,0 2,0 3,2 gua 3,2 3,0 2,8 2,6 2,2 1,2 0,0 Colorao final Clara Mais escuro que o 1 Mais escuro que o 2 Mais escuro que o 3 Mais escuro que o 4 Mais escuro que o 5 Mais escuro que o 6

Efeito do pH

Efeito da temperatura

Efeito da concentrao