So Platyhelminthes Coelomates sem celoma? Um argumento com base na evoluo de genes Hox (1).

Zologo americano | 01 de dezembro de 1998 | Balavoine, Guilherme | COPYRIGHT Society 1998 de Biologia Integrativa e Comparativa (SICB). ( Ocultar informaes sobre direitos autorais ) Direitos de autor

INTRODUO

"Somos convidados [pelos defensores da teoria enterocoele] a acreditar que o Turbellaria perderam sua coelom, perdeu seu nus, perderam suas nephrostomes. Isso pedir demais de sua credulidade." Libbie H. Hyman, (1959, p. 753).

O debate sobre se (ou platelmintos platelmintos) foram originalmente simplesmente animais organizado ou secundariamente simplificada de um ancestral mais complexo de fato muito antiga e sempre esteve ligada com a polmica sobre a origem dos metazorios com simetria bilateral (Bilateria). No entanto, nas ltimas dcadas, o ponto de vista da veemente Hyman (que a simplicidade genuna) tem sido dominante. Os platelmintos, na maioria dos livros de zoologia, so acriticamente apresentado como o primeiro grupo emergente na histria do bilaterians. Em alguns livros com insights embriognese, os vermes so colocados emergente na base dos protostomados (Brusca e Brusca, 1990; Nielsen, 1995). Mas o pressuposto bsico que a evoluo comeou a partir de uma condio acoelomate simples para a organizao coelomate mais complexo e que os platelmintos so os representantes modernos da antiga etapa. Antes desafiando este dogma por razes moleculares, til para expor dois conceitos histricos importantes que esto em competio para explicar a origem do bilaterians: a teoria planuloid-acoeloid ea teoria archecoelomate (revisto em Willmer, 1990). Podemos, ento, perguntar o que possvel fazer previses para a topologia da rvore metazoan sob cada um desses regimes.

O conceito planuloid-acoeloid

Este esquema tem sido defendida por Hyman (1940), entre outros. Ele afirma que os platelmintos reter em seu plano corporal a simplicidade de um ancestral metazoan bilateralmente simtricos. O principal argumento a comparao entre a larva pelgica de muitos cnidrios, o chamado Planula, e um grupo de platelmintos muito simples, o acoels. Planula larvas so radialmente simtrico com as extremidades anterior e posterior distintas. Elas so formadas por uma camada epidrmica ciliadas externas (ectoderme) e uma massa de

clulas slida interna (Entoderm). Acoels so pequenos vermes marinhos. Eles tm uma faringe simples ou nenhum. Eles no tm cavidade permanente intestino (apenas uma massa celular digestivo), nenhum protonephridia e sem gnadas bem delimitadas. Normalmente, o sistema nervoso tem uma organizao do tipo rede, embora em algumas espcies, h uma "crebro" anterior no qual se originam pares de nervos. Larvas Planula e acoels foram considerados descendentes quase inalteradas dos dois bilaterians consecutivos hipotticos ancestrais, o planuloid ea acoeloid. Quando o planuloid evoluiu para o acoeloid mais complexo (Fig. 1), que adquiriu uma simetria bilateral, alguns centralizao do sistema nervoso, rgos sensoriais e uma cavidade do intestino.

[Figura 1 ILUSTRAO omitidos]

A noo de que platelmintos so primitivamente simples no significa que eles devem ser colocados em um nico ramo na base da rvore bilaterian. Os Platyhelminthes filo contm, de facto, os animais muito diversa (Brusca e Brusca, 1990). Os rhabditophorans, que formam a maior parte dos Platyhelminthes filo (incluindo os polyclads marinhos, os tricladidos neodermatans e os parasitas), ter um nvel de organizao mais complexa do que as acoels descrito acima. Rhabditophorans possuem sistemas nervoso, reprodutor e excretor complexos. Alm dos acoels, os catenulids so distinguidos pela sua relativa simplicidade. Os catenulids so pequenas e arredondadas, com uma boca anterior. Contrariamente ao acoels, eles tm uma nephridium e um intestino ciliado. No contexto da hiptese plnulas, no existe qualquer motivo forte para considerar os vermes como monofilticas, porque a maior parte das suas caractersticas definidoras suposto ser plesiomrfica em Bilateria. Diversos grupos de platelmintos e tambm de minutos animais "verme-like" (gnathostomulids, rotferos) pode constituir uma espcie de grupo de tronco em que coelomate filos esto enraizados. Este o ponto de vista da Willmer (1990). Smith e Tyler (1985a) e Smith et ai. (1986) enfatizam a dissimilaridade entre acoels e rhabditophoran platelmintos, e apontar a falta de provas para o monofiletismo de platelmintos. Haszprunar (1996), em uma anlise cladstica recente, tem apontado as acoelomorphs e catenulids, que, em sua opinio, no esto relacionadas com o rhabditophorans, mas pode representar primeiras ramificaes independentes da rvore bilaterian. O grupo acoelomorphs a pedidos Acoela Nemertodermatida e na base de caracteres ultraestruturais partilhados (Smith e Tyler, 1985b). A questo de como os acoels e catenulids so realmente filogeneticamente relacionado aos outros platelmintos , portanto, de interesse particular.

Muitos analistas recentes reconhecem o fato de que rhabditophoran platelmintos compartilham muitas caractersticas com coelomates protostomado (clivagem espiral, larva ciliada das polyclads, a tendncia para a concentrao ventral das cordas nervosas) e coloque os rhabditophorans na base do ramo protostomado. Uma vez que os coeloms de protostomados e deuterostomes, sendo formada de modo diferente, so pensados para no ser homlogos (Nielsen, 1995), esta posio compatvel com a hiptese plnulas.

A teoria archecoelomate

Inversamente ao regime planuloid, a teoria archecoelomate postula que o antepassado de todos Bilateria era um organismo coelomate cujas cavidades celmica foram derivadas de bolsas intestino semelhantes aos existentes em cnidrios anthozoan. A teoria est profundamente associada ao conceito de enterocoely, o que significa que a forma ancestral no qual as formas celoma no embrio por outpocketing da parede do intestino, tal como visto na maioria deuterostmios, alguns lophophorates e chaetognaths. Esta basicamente uma extenso da teoria gastrea de Ernst Haeckel (1874), uma vez que estas bolsas intestino constituem uma recapitulao Haeckelian de uma estrutura presente no ancestral adulto, como em anthozoans. Essa idia parece ter sido defendida pela primeira vez um sculo atrs por Sedgwick (1884), mas tem sido mais recentemente revivida por Remane (1963), Marcus (1958), Jagersten (1955) e Siewing (1980). A Figura 2 descreve a filogenia bilaterian na opinio de Remane (1963). O ancestral eumetazoans (Bilateria + cnidrios) era um organismo possuindo o mesmo tipo de simetria biradial como anthozoans e quatro bolsos do intestino. O alongamento do eixo bilateral, combinado com o fecho das bolsas do intestino que do origem a cavidades celoma bilaterais, gerou o plano do corpo bilaterian fundamental. Este organismo, o proto-coelomate, tambm tem um intestino completo devido ao fechamento medial da fenda como blastporo, um "crebro" com cordes nervosos dele decorrentes e um celoma tripartido (protocoel, mesocoel, metacoel). Em acoelomates, as cavidades celmicos desapareceram, apesar de alguns remanescentes deles pode persistir em nemertines. Em vermes, alguns sistemas de rgos que esto fortemente associados com a presena de um celoma, como os vasos sanguneos ou metanephridia, desapareceram. Finalmente, mesmo no nus foi perdida. Neste contexto, a maioria dos caracteres colocar os vermes no ramo da rvore protostomado bilaterian, mas no necessariamente na base deste ramo (Fig. 2).

[Figura 2 ILUSTRAO omitidos]

Os defensores do sistema planuloid-acoeloid e defensores da teoria archecoelomate, portanto, tm opinies divergentes sobre notavelmente o status de platelmintos na evoluo metazoan. Para o primeiro, platelmintos so testemunhas de um passo fundamental nesta evoluo, ou seja, uma fase que tem precedido a aquisio dos planos corporais complexas de animais coelomate. Para este ltimo, platelmintos so um grupo muito derivado e sua morfologia adulto no d qualquer dica para a evoluo mainstream do plano corporal bilaterian.

O aumento da filogenia molecular tem proporcionado uma abordagem poderosa para construir a rvore genealgica de metazorios com personagens supostamente independentes dos mais morfolgicas e embriolgicas. Isso permite construir rvores que so supostamente

desprovida de preconceitos ideolgicos que possam ter afetado zologos anteriormente. Estas rvores moleculares podem ento ser comparadas com as teorias correntes da evoluo da morfologia. Infelizmente, filogenias moleculares tm suas prprias armadilhas. Neste artigo, eu gostaria de explicar as razes pelas quais o marcador molecular mais utilizado, o gene rRNA 18S, os rendimentos informaes ambguas. Por outro lado, o estudo da evoluo de um conjunto de genes de desenvolvimento afins, o complexo HOX, fornece evidncias de que as defesas do regime archecoelomate pode ser direita, na medida em que os platelmintos esto em causa.

O 18S RDNA filogenia

A universalidade, comprimento e padro de variao do gene rDNA 18S, com a alternncia de pores conservadas e variveis, fornecer uma ferramenta poderosa para a construo evolutiva grande escala. Alm disso, o processo de homogeneizao das mltiplas cpias do gene que existem no genoma aparentemente previne qualquer problema metodolgico resultante duplicaes de genes.

Mtodos de construo foram refinados tambm, e algumas das armadilhas que podem afetar a construo de rvores moleculares foram identificados, tais como taxas de substituio desiguais e saturao. Taxas aceleradas de substituio so um problema particularmente pesadas para algumas espcies. Isso s vezes faz com que o taxon olhar "mais velho" do que realmente e faz com que o chamado "-ramos longos atrao" artefato (Felsenstein, 1978). Este problema pode ser identificado usando o teste de taxa relativa (Sarich e Wilson, 1973). Um bom exemplo de um longo ramo a mosca da fruta Drosophila, mas filos integrais tambm so conhecidas por serem afetados por taxas aceleradas, como nematides (Aguinaldo et al., 1997). Veremos que uma taxa to acelerado comum em espcies flatworm e que isso est afetando a estabilidade de filogenias moleculares para este grupo.

O esboo do 18S rDNA metazoan filogenia

Trabalhos de Philippe et al. (1994), Winnepenninckx et ai. (1995), Halanych et ai. (1995), Mackey et ai. (1996) e Aguinaldo et ai. (1997) demonstraram rvores de 18S rDNA metazorios lidar com mais coelomate filos. Estas rvores tm muitos pontos em comum, que agora podem ser usados como um novo quadro para abordar a questo da evoluo metazoan. Um consenso destes resultados mostrado na Figura 3. Um nmero de pontos encontrados consistentemente esto confirmando alguns dos conceitos mais antigos de classificao metazoan. Isto inclui a monofilia dos triploblasts ou Bilateria, que notavelmente suportados pelo teste de bootstrap. Esponjas, cnidrios e ctenforos emergir como outgroups do Bilateria.

Os deuterostmios tambm so encontrados como um agrupamento robusta na maioria das rvores, mostrando que as sinapomorfias proposto por eles, principalmente embrionrio (ontogenia da boca, a clivagem undeterminate radial), so os vlido. A monofilia da coelomate protostomes suportado na maioria rvores, embora com menos intensidade do que para os deuterostomes. Os artrpodes so um grupo monofiltico quando apenas coelomate filos so usados. Tardigrades (Giribet et al, 1996;.. Garey et al, 1996) e onychophorans (. Aguinaldo et al, 1997) parece estar mais relacionado com artrpodes do que aneldeos, o que justifica o uso do termo "panarthropods". Em contraste com estes agrupamentos esperado, um conjunto surpreendente de a maior parte do restante protostomado filos foi consistentemente encontrado. Isso inclui no apenas a spiralian filos (aneldeos, moluscos, pogonophorans, echiurans, sipunculids e nemertines), denominado "eutrochozoans" por Eernisse et al. (1992), mas tambm lophophorate filos (briozorios, brachiopods e phoronids). Uma vez que difcil encontrar qualquer synapomorphy morfolgica convincente para este agrupamento, que tem sido chamado de "lophotrochozoans" por Halanych et al. (1995).

[Figura 3 ILUSTRAO omitidos]

A existncia destas assemblias, se confirmada, est em contradio com dois pontos de vista tradicionais amplamente aceitos: o agrupamento dos aneldeos com os artrpodes (conhecido como o "Articulata") e as afinidades deuterostome dos lophophorates. A rvore da Bilateria toma a forma de uma dupla dicotomia, dando trs grandes ramos da coelomate filos.

Mais importante para a presente discusso, os acoelomates e pseudocoelomates no parecem surgir em posio basal das rvores mais recentes. Aguinaldo et ai. (1997) sugerem a existncia de um subtipo de animais Moulting (Ecdysozoa), compreendendo os priapulids, nematides e nematomorphs kinorhynchs juntamente com os artrpodes. Por outro lado, rotferos (Aguinaldo et al, 1997.) E nemertines (Turbevill et ai, 1992,.. Winnepenninckx et ai, 1995) parece ser robustamente agrupado com os lophotrochozoans.

Relgio rpido em platelmintos

A posio dos vermes, apesar de um nmero substancial de espcies j foram amostrados, instvel. Ela varia de acordo com a amostragem da espcie e do mtodo de construo da rvore utilizada. As tentativas iniciais (Filipe et al., 1994), feito apenas com representantes dos trematdeos, mostrou posio emergente cedo no Bilateria. Esta posio, no entanto, foi mal suportada pelos valores de bootstrap. Ele foi desafiado quando mais representantes das diferentes ordens de platelmintos foram adicionados amostragem. A razo para esta instabilidade a tendncia geral para os ADNr 18S para evoluir rapidamente, em todos os

vermes da amostra medida. De acordo com clculos de substituio relativos (Balavoine, 1997;. Aguinaldo et al, 1997), a tendncia varia consideravelmente em frente do filo. A catenulid (Stenostomum) e polyclads tm as menores taxas; trematods tm taxas intermedirias; cestides e planrias tm rpida evoluo seqncias. O registro em altas taxas pertence aos acoels. A anlise mais detalhada por Carranza et al. (1997) apresenta os problemas de lidar com a filogenia dos vermes. Platelmintos nunca so encontrados monofiltico. Acoels catenulids e so separadas do resto (e uma da outra). O rhabditophora monofiltico so encontrados na base do ramo protostomado, contrariando os primeiros resultados, mas a significncia estatstica sempre baixa.

Uma maneira de lidar com o problema das altas taxas de substituio eliminar da amostragem as espcies que possuem as maiores taxas. Eliminar as acoels, Balavoine (1997) encontraram uma emergncia do rhabditophora dentro dos lophotrochozoans, usando tanto Neighbor Juntando (Saitou e Nei, 1987) e Mxima Parcimnia (Swofford, 1993) os mtodos de construo de rvore. No entanto, os valores de bootstrap so muito baixos. Quando somente os polyclads so tomadas, a relao com o lophotrochozoans ligeiramente reforada (de 43% para 57% com parcimnia) (Balavoine, resultado indito). Aguinaldo et ai. (1997) aplicaram esta estratgia ainda mais estritamente, tendo a nica Stenostomum, uma espcie catenulid. encontrado cluster robusta com as lophotrochozoans.

Os acoels so invariavelmente encontrados como uma linhagem emergente cedo, no necessariamente relacionadas com os outros vermes (Katayama et al, 1996,.. Carranza et al, 1997). No entanto, a taxa de substituio para inferir as acoels tambm o mais elevado calculado para os vermes. duvidoso se alguma informao relativa posio filogentica das acoels relativamente ao Bilateria ou dos outros vermes podem ser recuperados a partir de uma tal sequncia de rDNA 18S anormalmente evoluindo. Deve notar-se, contudo, que uma sequncia de uma nemertodermatid, Nemertinoides, foi obtido Carranza et ai. (1997). Os nemertodermatids so platelmintos simples, que so presumivelmente relacionados com as acoels no acoelomorphs (Smith e Tyler, 1985a). Nemertinoides robustamente agrupado com os rhabditophorans. Esta uma indicao de que os acoelomorphs poderia muito bem ser includa em um Platyhelminthes monofilticos.

A combinao destes resultados continua a ser insatisfatrio. A tarefa de determinar a posio dos vermes na rvore de metazorios, ou se so vermes monofilticas, seja comprometida pelas unequalities dramticos de taxas de substituio. Trs solues so encontradas, pelo menos durante os rhabditophorans: na base da rvore bilaterian, na base das protostomados ou dentro das protostomados como membros do ramo lophotrochozoan. Uma pista importante , no entanto, que a afinidade lophotrochozoan favorecida quando a seleco de espcies de evoluo lenta, custa do surgimento precoce. No entanto, os dados definitivamente no so suficientes para estabelecer as afinidades dos platelmintos dentro do Protostomia. Evidence for necessrio a partir de outras molculas.

A EVOLUO DO CLUSTER HOX: UMA NOVA ABORDAGEM PARA filogenia de metazorios

Um synapomorphy gentica do bilaterians

O cluster HOX um complexo de genes que codificam para os reguladores de transcrio do DNA-binding. Todos eles compartilham uma sequncia conservada chamada de homeobox, que codifica para o motivo de DNA sessenta aminocido de ligao, o homeodomnio. O aglomerado HOX foi primeiro identificado geneticamente por Ed Lewis no fruifly Drosophila como um conjunto de genes que regulam a identidade do segmento no desenvolvimento embrionrio precoce da mosca. As mutaes desses genes causam fentipos de homeosis (segmentos so transformados semelhana de outro segmento), portanto, os genes hometicos nome. A propriedade marcante deste complexo a regra colinearidade: os genes afetam segmentos ao longo do eixo do corpo (e so expressos em nvel mRNA) na mesma ordem em que eles so encontrados no cromossomo. Dois conjuntos de genes hometicos (ANT-C e BX-C), foram identificados na mosca, mas isso tem sido demonstrado ser uma condio secundria, uma vez que um nico cluster homlogos agrupamento de todos os genes da mosca encontrado na besouro Tribolium (Beeman et ai., 1993).

A descoberta de genes Hox em vertebrados, abriu uma nova era: uma vez percebeu-se que genes de desenvolvimento foram conservados em sua estrutura entre esses organismos distantes como mosca e vertebrados, a idia parecia que a evoluo desses genes pode fornecer pistas para a compreenso da evoluo dos metazorios. Na ltima dcada, a pesquisa comparativa com a conservao do cluster HOX desenvolveu-se consideravelmente e provou que o sistema fundamental para a padronizao do eixo ntero-posterior conservada em ramos distantes da rvore bilaterian.

Hox genes de murino pode ser relacionada individualmente para fazer genes Hox a partir da comparao da sequncia caixa homeo. O cluster HOX surgiu por duplicao de genes em uma fase inicial da evoluo dos metazorios. Os quatro grupos de vertebrados apareceram por duplicaes sucessivas de um nico conjunto de 13 genes dentro do ramo deuterostome (Holland e Garcia-Fernandez, 1996). A conservao da regra colinearidade e da funo embrionrio desses genes (mutantes murino mostram transformaes "hometicos" da morfologia vrtebras, revisada em Manak e Scott, 1994) mostram que o papel deste grupo na padronizao eixo do corpo evoluiu antes da protostomado / deuterostome divergncia. Genes Hox ter sido procurado em metazorios que divergiram no incio da rvore, ou seja, os cnidrios. O trabalho mais completa sobre este domnio tem sido feito na hidrozorios (Naito et ai, 1993,.. Kuhn et al, 1996). Um certo nmero de genes Hox semelhantes foram identificados nestes animais, mas nenhum deles corresponde muito bem com os genes da

mosca ou rato. Conforme ressaltado por Kuhn et al., (1996), possvel que esses genes representam outra famlia, produzidos por diferentes duplicaes do que as que deram origem ao cluster HOX em Bilateria.

Fechar comparao dos aglomerados da mosca e do rato, conforme representado na parte superior da Figura 4, permite a reconstituio da condio do aglomerado ancestral. Os genes anteriores mostram principalmente de um-para-um a correspondncia uns com os outros. A parte posterior do complexo parece ter sofrido mais mudanas. Existem cinco genes Hox posteriores (9/13) em vertebrados correspondentes a um nico gene de mosca posterior AbdB. Mltiplas duplicaes deste gene so, portanto, provvel que tenha ocorrido na linhagem deuterostome.

[Figura 4 ILUSTRAO omitidos]

No meio do complexo em ambos mosca e vertebrados, vrios homeoboxes com sequncias muito semelhantes esto presentes, formando o chamado "ANTP classe" de genes (quatro genes da mosca, trs genes "arqutipos" no rato). A seqncia homeodomnio por si s no suficiente para estabelecer as relaes exatas destes genes. Pequenos pptidos parecem ser conservadas fora do homeodomnio. O Ubx e A ABD-genes da mosca partes um peptdeo to comum apenas a jusante da homeodomnio, o que se pode chamar de "UBD-A" peptdeo (Fig. 5). Este pptido tem sido demonstrado ser essencial para a especificidade funcional das protenas (Chan e Mann, 1993). Este pptido conservado no encontrada nos genes de vertebrados. A hiptese de que se pode inferir que as duplicaes que deram origem aos genes de classe ANTP mosca aconteceu independentemente dos que ocorreram na linhagem dos vertebrados. Em particular, os genes que codificam para um "UBD-A" pptido evoludo na linhagem protostomado.

[Figura 5 ILUSTRAO omitidos]

Assim, podemos saber de pelo menos trs eventos genticos dramticos, o que pode, potencialmente, ser utilizados como marcadores de afinidades filogenticas: a multiplicidade de genes posteriores na linhagem deuterostome e a presena de um par de "UBD-A" genes nas protostomados. O ltimo ancestral comum teria, portanto, possua um conjunto de sete genes Hox, pelo menos. Este cluster HOX ancestral pode ter sido inteiramente produzido por sucessivas duplicaes de genes em um ancestral do Bilateria aps a divergncia da linhagem cnidrios.

Podemos usar essas peculiaridades com a finalidade de estabelecer relaes filo? A idia de usar genes de desenvolvimento, que esto envolvidos no incio de padronizao plano do corpo, para fazer a filogenia destes planos corporais parece ser suspeito primeira vista. A evoluo do rDNA 18S, o que no suposto estar relacionada com a evoluo morfolgica, seria melhor a este respeito. No entanto, deve ser mantido em mente que estamos aqui utilizando a conservao das sequncias de genes para identificar os conjuntos de genes ortlogos potenciais e as duplicaes de genes comuns. Esta abordagem muito diferente de usar a divergncia de seqncia como no 18S rDNA filogenia. Afigura-se que as limitaes de peso sobre a famlia de genes Hox so de uma grandeza muito maior do que as que so esperadas a partir da conservao do plano do corpo s. Ilustrando esta afirmao est o facto de a composio do ourio-do-mar do cluster HOX (Popodi et ai., 1996) parece ser muito semelhante ao de um animal vertebrado, embora as morfologias adultos destes dois grupos so muito diferentes. A evoluo da sequncia de genes individuais parece ser independente suficiente a partir da evoluo do plano do corpo em si, permitindo assim o reconhecimento de genes ortlogos potenciais como sinapomorfias moleculares.

A composio da famlia de genes Hox est em bom acordo com a rvore de trs ramificaes de bilaterians sugerido pelos RNA 18S.

Poucos aglomerados HOX foram totalmente mapeado at agora, por causa da grande quantidade de trabalho necessria. Como alternativa, as telas de Hox foram realizadas por PCR utilizando "primers" generalistas, seguido pela recuperao de toda a sequncia caixa homeo, quer inversa-PCR (Balavoine, 1996) ou por sequenciao de clones genmicos (GarciaFernandez e Holland , 1994). A desvantagem do mtodo de PCR que alguns genes podem ser "perdida". A ausncia de um determinado gene pode, portanto, ser feita como uma evidncia convincente.

Notavelmente, as telas Hox em deuterostomes mostrar vrios genes posteriores e no "AUBD" genes de tipo. Os trabalhos mais completos foram realizados em um cephalochordate (Garcia-Fernandez e Holanda, 1994) e um ourio do mar (Popodi et al., 1996), para o qual os dados da organizao de cluster esto disponveis. Extensos dados ainda aguardam a ser obtido por urochordates (Di Gregorio et al., 1995) e hemichordates (Pendleton et al., 1993). O cluster de anfioxo ressembles fortemente o arqutipo 13 genes-cluster que pode ser inferido para os vertebrados. Pelo menos quatro genes Abd-B-como posteriores esto presentes nesta espcie (Holland e Garcia-Fernandez, 1996), enquanto que trs genes centrais ANTP classe podem corresponder aos ortlogos de Hox-6, -7 e -8 do vertebrados. Nenhum desses genes centrais mostra um peptdeo que assemelha-se intimamente "UBD-A." A situao parece semelhante no ourio-do-mar (trs genes centrais, pelo menos trs genes posteriores) (Popodi et al., 1996). Em urochordates, h indicao de que existem vrios genes Abd-B tambm (pelo menos trs) (Di Gregorio et ai., 1995). Portanto, o arqutipo inferido para os vertebrados realmente existiam no ancestral de deuterostomes.

Os dados disponveis a partir de protostomes, embora ainda escassa, tendem a confirmar a ntida diviso de protostomes em dois ramos principais indicados pelas seqncias de RNA 18S.

Em artrpodes, telas Hox esto disponveis a partir de crustceos (Averof e Akam, 1993), chelicerates (Cartwright et al., 1993), e miripodes onychophorans (Grenier et ai., 1997). Em todas estas espcies, os genes muito similares aos encontrados nas moscas tm sido encontrados, em particular, os genes Hox centrais (ANTP, Ubx, Abd-A). As sequncias de codificao de um pptido-UBD esto presentes nos genes correspondentes de crustceos, miripodes e onychophorans em uma forma muito semelhante mosca. Isto confirma a monofilia dos panarthropods (tardigrades continuam a ser analisado). Um cluster de fly-como existia no ancestral de panarthropods, o que difere marcadamente de sua contraparte deuterostome.

Do ramo potencial lophotrochozoan, dados confiveis esto disponveis principalmente de aneldeos. Hox telas foram cardadas no poliquetas (Dick e Buss, 1994,. Irvine et al, 1997) e clitellates (Neve e Buss, 1994,. Kourakis et al, 1997). A Figura 5 mostra um alinhamento de sequncias organizadas de acordo com a sua relao com o grupo ancestral coelomate. Representantes de seis das sete classes de genes ancestrais descritos anteriormente foram recuperados a partir de aneldeos. A estrutura do cluster ainda aguarda para ser avaliada, mas as semelhanas homeoprotein so claras o suficiente para estabelecer relaes adicionais de ortologia que poderiam ser filogeneticamente significativo. A evoluo da parte anterior do cluster parece ter sido bastante conservador. As cinco primeiras classes de genes parecem ser representado em poliquetos (Ctenodrilus, Chaetopterus). Nenhuma gene ou Hox3 pb foi ainda descoberto na sanguessuga, apesar extensas telas de PCR, de modo que possvel que estes dois genes que esto ausentes ou, secundariamente, em muito derivado clitellates. Na outra extremidade do conjunto, nenhuma sequncia Abd-B ainda no foi publicada qualquer aneldeos, o que sugere que esta classe particular pode estar ausente em aneldeos (Irvine et al., 1997). No entanto, esta ausncia , provavelmente, um problema tcnico. A sequncia dos genes Abd-B-como aneldeos pode ser tambm derivada para ser recuperada com os iniciadores Hox geralmente utilizados.

Os resultados mais significativos no momento venha a partir da classe de genes ANTP. Como mostrado na Figura 4, esta classe contm pelo menos trs genes em aneldeos (ainda no claro se uma quarta, a sanguessuga Lox1, tambm um membro). Dois destes, e Lox2 Lox4 na sanguessuga e seus ortlogos poliquetas, mostram uma UBD-se um pptido, claramente homlogos aos pptidos Ubx e Abd-A. Esta similaridade indica que um gene UBD-A-como apareceram antes da divergncia aneldeo / artrpode. Uma vez que nenhum gene deste tipo foi encontrado na deuterostmios, os genes UBD-A so potenciais sinapomorfias dos

coelomates protostomado. O restante do gene, Lox5, mais semelhante ao ANTP, embora no possam ser considerados ortlogos com certeza.

Os argumentos adicionais para as relaes ortologia destes genes aneldeos provm dos seus padres de expresso no desenvolvimento da sanguessuga. Embora Lox5, Lox2 e Lox4 apresentam diferenas dramticas em seu tempo de implantao e aspectos de sua camada especificidade germe, todos eles mostram um claro limite anterior de expresso. Estes limites so anterior correspondendo, respectivamente, aos segmentos de 4, 8 e 10 (Kourakis et ai., 1997). Isso refora o argumento de que Lox5 pode ser um ortlogo ANTP.

A relao precisa entre Lox2, Lox4, Ubx e abd-A est aberto a debate. O argumento colinarity trazida pelos dados de expresso a favor da ortologia relaes entre Lox2 Ubx e, por um lado, e Lox4 e Abd-A na outra. No entanto, a comparao das seqncias de protenas no suporta tais relaes. Em vez disso, as semelhanas adicionais podem ser encontrados entre Lox2 Lox4 e a montante do homeodominio, na regio de hexapptidos. Lox2 Lox4 e pode ser o produto de uma duplicao especfico para a linhagem aneldeo enquanto Ubx e Abd-Um teria divergiram num antepassado dos artrpodes s (Grenier et ai., 1997).

Uma predio clara da hiptese apresentada acima que Lox5-, e-Lox2 genes Lox4 semelhantes devem ser encontrados em outros filos suspeita de estar relacionada com aneldeos. Surpreendentemente, este foi verificado em trs filos, os moluscos, os nemertines e os braquipodes (de Rosa, Lartillot, Girardot, Adoutte e Balavoine, os resultados no publicados). A presena deste gene em particular situado num desses grupos apia o clade lophotrochozoan controversa de Halanych et al. (1995). A obteno de genes Hox de filos agora supostamente associada com panarthropods na Ecdysozoa outra prova crucial. Estes animais devem possuir genes de classe ANTP mais semelhantes a ANTP, Ubx e Abd-A do que para Lox5, -2 e -4.

Flatworm genes Hox compartilham semelhanas com os genes dos aneldeos

Um certo nmero de telas a partir de Hox vermes foram publicados, principalmente a partir de planarians (Bartels et al, 1993;. Balavoine e Telford, 1995; Balavoine, 1996; Tarabykin et ai, 1995,.. Bayascas et al, 1997). As espcies que foram amostradas esto intimamente relacionados e isso se reflete por seqncias homeodomain notavelmente semelhantes. No entanto, existem algumas diferenas entre Polycelis e Dugesia, as duas espcies mais estudadas. Um gene de classe labial no foi encontrado na Dugesia. No entanto, a sua presena estabelecida em Polycelis (Balavoine e Telford, 1995) e Phagocata (Bartels et ai., 1993). Por outro lado, nenhum gene pb e de classe Dfd foi encontrado at agora em Polycelis.

Estas discrepncias so mais provavelmente devido limitao do mtodo de rastreio de PCR, em vez de ser verdadeiras diferenas. A combinao da amostragem de genes obtidos d uma planria arquetpica com uma famlia de pelo menos oito genes distribudos em seis classes (laboratrio, pb, Hox3, Dfd, Scr e ANTP). A ausncia de um gene relacionado Abd-B pode ser devido mesma limitao tcnica, tal como discutido acima para os aneldeos. Uma interpretao incio deste surpreendente diversidade de genes (Balavoine e Telford, 1995) foi feita em um contexto ainda esmagadoramente favorvel hiptese de surgimento precoce dos platelmintos. Um exame das seqncias levou a uma nova interpretao (Balavoine, 1997) em favor de uma posio dos platelmintos dentro dos lophotrochozoans. Sequncias adicionais por Bayascas et al. (1997) j reforou o caso. O argumento baseado na composio da classe ANTP. Os outros genes conservados de laboratrio e de classe Dfd do relativamente pouca informao. Pode haver at trs genes no Dugesia planria representando a classe ANTP. Tal como explicado no Balavoine (1997), a dupla de genes Pnox1a e Pnox1b de Polycelis correspondendo a Dthox-F no Dugesia, fazer codificar um pptido UBD-A (Fig. 5). Seus homeodomnios so bastante semelhantes s do homeodomnio Lox4 dos aneldeos. Dois outros genes, Dthox-E e C-Dthox de Dugesia (Pnox7 de Polycelis) est claramente relacionado com o gene Lox5 dos aneldeos, incluindo uma similaridade em nove aminocidos situado a jusante do homeodomnio. Este padro particular pode ser chamado de "Lox5" pptido (Figura 5). O pptido Lox5 no encontrada em qualquer gene de artrpodes, em particular em ANTP. Pode haver uma semelhana distante com a parte correspondente da Hox6 em amphioxus, mas a sua importncia duvidosa, pois os genes Hox6 nos vertebrados no mostram qualquer motivo fortemente conservada nesta poro da protena. Os genes Dthox-E e C-Dthox de Dugesia poderia ser o produto de uma duplicao de esforos relativamente recente na planarians.

Tomadas em conjunto, essas semelhanas sugerem fortemente que os platelmintos so parte da assemblia protostomado. As semelhanas adicionais dos genes Lox4 Lox5 e mostram que eles podem ser mais estreita do que a aneldeos para artrpodes. A nica outra explicao possvel seria a de que as seqncias de Lox5, Lox2 e Lox4 esto muito mais perto dos genes de classe ANTP ancestrais protostomes e que os genes tm vindo a mudar muito mais rpido em artrpodes. Como vimos, a conservao notvel ANTP, Ubx e abd-A em panarthropods suporta exatamente o oposto. Nenhuma gene Lox2 foi encontrado em qualquer planarian, sugerindo a possibilidade de que poderia ser verdadeiramente ausente. Mas se Pnox1a e-b so realmente os ortlogos de Lox4, ento Lox2 foi perdido secundariamente em planrias. Ele ainda pode ser encontrado em outros platelmintos.

O processo de duplicao de genes que deu origem a estas combinaes nicas de genes de classe ANTP ainda incerto. Pode-se propor duplicaes especficas em cada superphylum, mas as relaes adicionais de ortologia pode no aparecer por causa do longo tempo de divergncia que separa estes superphyla. Este quadro no deve assim ser considerado como uma indicao definitiva, mas como uma hiptese de trabalho.

Vrias questes ainda precisam ser investigados em platelmintos. Existe algum grupo de platelmintos possuem um gene Lox2? Qual a organizao cromossmica destes genes eo que ele diz sobre os seus relacionamentos? Ser que esses genes tm padres de expresso durante a embriognese, que se assemelham aos dos aneldeos (Kourakis et al., 1997)?

Platelmintos perderam a nus, celoma e possivelmente o SEGMENTAO

Temos o apoio, tanto do 18S rDNA e dos genes Hox, para uma rvore de trs ramificada de metazorios coelomate, nomeadamente os deuterostomes, os panarthropods (possivelmente o ecdysozoans) e os lophotrochozoans. Os vermes, de acordo com os elementos a partir dos genes Hox, pode ser parte da montagem lophotrochozoan, como representado na Figura 3.

Esta topologia da rvore bilaterian conduz a uma nova interpretao da evoluo dos planos do corpo. Em primeiro lugar, isso contradiz profundamente o esquema planuloid / acoeloid. Os platelmintos no parecem ser um grupo em que a haste parafilticos filos coelomate emergir. O ponto de vista apresentado por filogenia molecular o oposto: platelmintos aparecem como um grupo monofiltico (com a possvel exceo de acoels e catenulids), que est enraizado dentro do ramo protostomado (e no na sua base). O que verdadeiro para os vermes tambm verdadeiro para o outro filo "acoelomate", os nemertines, que pertencem claramente ao ramo lophotrochozoan. Alm disso, os vrios pseudocoelomates, que tambm tm sido vistos como potenciais "tentativas iniciais" na linhagem bilaterian, esto agora a ser mostrado relacionadas quer com artrpodes (Aguinaldo et ai., 1997) ou para lophotrochozoans (Mackey et ai., 1996) .

Esta rvore de trs ramificada no suporta toda a vista archecoelomate tambm, porque um dos princpios fundamentais da teoria, o estado ancestral de um plano de corpo trimeric, no cabe essa rvore muito bem. Multimery teria evoludo pelo menos trs vezes a partir de trimery (em aneldeos, artrpodes e cordados), se quisermos manter a viso de que o trimery visto em equinodermos larvais, hemichordates e lophophorates homlogo. Devido posio dos lophophorates dentro protostomados, esta homologia agora parece pouco provvel.

A topologia da rvore coelomate defende um ancestral ainda mais complexo do que o sugerido pela teoria archecoelomate, ou seja, um ancestral segmentado coelomate. A Figura 3 mostra a distribuio da coelome e segmentao entre os filos. A maioria deles so coelomates, que, naturalmente, pode ser melhor explicada pelo fato de que o ancestral j era um coelomate. Vises tradicionais manter pelo menos uma origem diphylic do celoma. Esta opinio se baseia principalmente no fato de que a ontognese do celoma suposto seguir caminhos radicalmente diferentes em deuterostomes e protostomes. Em termos gerais, o

caminho fundamental na deuterostomes suposto ser um outpocketing enteroclica de trs pares de cavidades celmicos que, em protostomes ou pelo menos o hipottico articula, o processo seria schizocoely em somites decorrentes do desdobramento das bandas mesodrmicas. No entanto, essa dicotomia clara no se encaixa na rvore de trs ramificada muito bem. Enterocoely ocorre em ambos os protostomes (braquipodes) e deuterostomes e schizocoely tambm aparece em ambos (as cavidades celmicos posteriores em Branchiostoma). Da mesma forma, multimery encontrado em (cephalochordates e vertebrados so multimrico, no h nenhum vestgio de trimery em qualquer fase do seu desenvolvimento). A plasticidade marcante na ontogenia do celoma foi ilustrada por Remane (1963) em hemichordates, mostrando que as diferentes origens embriolgicos de rgos no pode ser usado como um critrio para refutar homologia. A ocorrncia de adultos segmentados (e o facto de que esta a segmentao baseada na separao de bandas mesodrmicos em somites) em todos os trs ramos a caracterstica marcante da rvore bilaterian.

O argumento para a ascendncia de segmentao tem sido dado apoio decisivo recentemente pela embriologia molecular comparativa. Na mosca, a segmentao do embrio determinado por uma cascata de genes reguladores do desenvolvimento, incluindo (em ordem hierrquica) os genes cujos produtos maternos definem gradientes morfogenticas largos no ovo, a "lacuna" que convertem-genes destes gradientes e em regies gradientes de menor alcance, os genes "de regras de par", que definem os segmentos em um caminho alternativo e os genes segmento de polaridade que refinar as fronteiras entre esses segmentos. O homlogo do gene de polaridade de segmento engrailed, que expressa na parte posterior dos segmentos na mosca, tambm expresso na parte posterior de somitos do amphioxus (Holland et ai., 1997). Alm disso, um homlogo do gene-regra par cabeludo expresso numa forma par regra durante o somitognese no peixe-zebra (Muller et al., 1996). Uma vez que a nica razo de ser de um gene-regra par definir segmentos, isto um argumento decisivo em favor do carcter ancestral da segmentao (Kimmel, 1996; De Robertis, 1997).

Neste contexto, a falta de nus, celoma e segmentao em vermes obviamente secundrio, implicado pela sua posio no interior das protostomados filogentica.

Prognese: um mecanismo possvel para a perda de caracteres coelomate IN platelmintos

Como a perda de tais rgos vantajosas celoma eo nus ser explicados? A resposta pode ser que a histria de adaptao dos ancestrais dos platelmintos fez esses rgos redundante. Rieger (1980) sublinhou que aneldeos de tamanho muito pequeno, adaptada a um modo intersticial de vida, tendem a perder o celoma. A evoluo para uma pequena dimenso, tambm pode explicar a perda de um sistema circulatrio. Eu j mencionei como um intestino

diverticulate, como pode ser visto em muitos platelmintos, poderia ter substitudo um intestino em forma de tubo complementada com um sistema circulatrio (Balavoine, 1997).

possvel responder a crticas de Hyman (citado na introduo): pode todas essas perdas de rgos ocorreram concomitantemente, sem deixar qualquer taxon intermedirio bvio em fauna modernos? Rieger (1986) e Westheide (1987) propuseram prognese, ou seja, atingiu a maturidade sexual, numa fase de desenvolvimento das larvas, como um possvel mecanismo para explicar uma organizao mais simples em animais intersticiais. Esses autores afirmam que prognese, se seguido pela extino das espcies-tronco ancestral, pode produzir planos corporais alheios a qualquer outro grupo moderno (criando, assim, instantaneamente o que se pode chamar de um novo filo).

Quanto aos platelmintos esto em causa, o caso de prognese pode ser defendido pela comparao dos ciclos de nemertines e platelmintos Polyclad vida. Nielsen (1995) um dos mais recentes defensores de uma relao estreita entre os vermes e nemertines, principalmente com base nas semelhanas entre os seus tipos de larvas. O Muller e Gotte de larvas de polyclads eo pilidium heteronemertines partes de um hyposphere reduzida, a ausncia do sistema nervoso ventral e uma falta de nus. Eles tm algumas diferenas, tais como o liao geral da ectoderme nas larvas verme, mas nenhum desses contradizem uma origem comum dessas larvas.

Diferenas importantes so encontrados em metamorfose. Em heteronemertines, os pares de discos embrionrios so formados a partir da ectoderme larval. Estes discos rodeiam o intestino das larvas e, eventualmente, se fundem para formar o ectoderma adulto. Nesse ponto, um rudimento adulto , portanto, presente no interior da larva pilidium. O seu eixo ntero-posterior inclinada a 90 graus em relao ao eixo principal das larvas. Numa fase posterior, um nus formado. O worm juvenil ento rompe o ectoderma larval. Esta uma metamorfose completa com uma pequena contribuio dos tecidos das larvas para a juvenil resultante. durante este processo que as cavidades mesodrmica, que podem ser consideradas como derivados da celmicos (rhynchocoele e dos vasos sanguneos), da forma.

Por outro lado, a metamorfose da larva Muller em um jovem verme aparece mais "gil" (Brusca e Brusca, 1990). Alguns adultos caracteres j esto presentes na larva, como liao ubqua da ectoderme e um par de ocelos. O eixo principal da larva d o eixo ntero-posterior do adulto aps o alongamento. A faringe se forma em torno da boca de larvas para dar o boca do adulto, o qual, assim, retm a posio posterior-ventral do blastporo. O parnquima do verme plana origina a proliferao do mesnquima larval. A maioria dos tecidos do adulto parecem assim estar em continuidade com os tecidos ontognico correspondentes da larva.

 possvel interpretar todo o processo de desenvolvimento de um Polyclad como uma combinao de transformaes heterocrnicos a partir de um antepassado coelomate com uma larva trochophore-like e metamorfose completa, assim como nemertines ou aneldeos (Fig. 6). A presena de ocelos e ciliatura contnua na larva iria resultar a partir da acelerao do desenvolvimento desses caracteres particulares e sua transferncia antes de metamorfose. Em seguida, o desenvolvimento abreviado pela perda de uma metamorfose completa, ou seja, o nus nunca formada, nem qualquer sistema circulatrio. A maturidade sexual assim obtida por um indivduo que retm uma morfologia "larval".

[Figura 6 ILUSTRAO omitidos]

Nemertines pode servir como um exemplo de uma fase intermdia no processo. Eles j perderam o nus na fase larval. Alm disso, a diviso das bandas mesodermal emparelhados, que do origem s cavidades celmicos em aneldeos e outros filos spiralian, tambm est faltando. Portanto nemertines carecem de uma grande cavidade do corpo e, portanto, so consideradas como sendo "acoelomate." Se essa condio intermediria o sinal da estreita afinidade com platelmintos ou devido evoluo paralela tem ainda a ser descoberto.

A hiptese de prognese sempre pareceu ser uma "boa histria". Ele fornece uma explicao conveniente para a evoluo dos planos do corpo, em muitos casos, mas no facilmente verificvel. Recentemente, esta situao alterou-se com o desenvolvimento da embriologia molecular comparativa. Comparao de padres de expresso de reguladores de desenvolvimento conservadas podem dar novos insights sobre esta questo crucial de como os eventos importantes da heterocronia que afetam o desenvolvimento indireto pode ter gerado novos planos corporais.

AGRADECIMENTOS

Agradeo Andre Adoutte sem cujo apoio as idias expressas neste artigo nunca teria chegado juntos. Sou grato tambm ao Michael Akam, Claus Nielsen, Christen Mirth, Renaud de Rosa e dois revisores annimos pelos comentrios e sugestes valiosas.

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Editor do correspondente: Douglas H. Erwin

Laboratoire de Biologie Cellulaire 4, URA 2227 du CNRS: "Dveloppement et Evolution," Universite Paris-Sud, 91405, Orsay, Frana

(1) A partir do Simpsio relaes evolutivas de Metazoan Phyla: Avanos, problemas e abordagens apresentadas no Encontro Anual da Sociedade de Biologia Integrativa e Comparativa, 3-7 Janeiro de 1998, em Boston, Massachusetts.

(2) E-mail: guillaume.balavoine @ bc4.u-psud.fr