PROTOCOLO PARA LA DETERMINACION DE NITROGENO EN EL CHOLADO

DIANA CAROLINA GUZMAN JAIRO PRIETO ROJAS MARIA ISABEL HENAO RICK NARANJO LOPEZ SANDRA MILENA ROMERO

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE SENA CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL ANLISIS DE MUESTRAS QUMICAS BOGOTA 2010

PROTOCOLO PARA LA DETERMINACION DE NITROGENO EN EL CHOLADO

DIANA CAROLINA GUZMAN JAIRO PRIETO ROJAS MARIA ISABEL HENAO RICK NARANJO LOPEZ SANDRA MILENA ROMERO

JUAN CARLOS SALINAS (INSTRUCTOR DE QUIMICA)

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE SENA CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL ANLISIS DE MUESTRAS QUMICAS BOGOTA 2010

INTRODUCCIN El nitrgeno es el elemento qumico que permite diferenciar las protenas de otros compuestos, particularmente de grasas y carbohidratos. Sin embargo, la fraccin de protena del sistema biolgico no es la nica fuente de nitrgeno ya que puede derivarse tambin de ppticos, aminocidos libres y compuestos nitrogenados de naturaleza no proteica (generalmente presentes en menor proporcin). Por ello al determinar el contenido de nitrgeno en un sistema biolgico se califica de nitrgeno total y al utilizar este dato para calcular el porcentaje de protena del sistema se califica de cruda. La determinacin del nitrgeno sigue siendo el mtodo analtico ms til para cuantificar la fraccin de protenas sin interferencias de carbohidratos y lpidos. En el desempeo profesional si lo deseable es conocer el porcentaje de protena, se determina el contenido de nitrgeno total en la muestra a objeto del estudio, luego se precipita la fraccin de protenas y se cuantifica el nitrgeno no proteico del sobrenadante. La diferencia con el contenido de nitrgeno total permite establecer el contenido de nitrgeno proteico. Para calcular el contenido de protena cruda en funcin al contenido de nitrgeno total, se recurre al factor de conversin, definido en funcin del tipo de alimento. El factor representa el contenido de nitrgeno por 100 g de protenas en ese sistema. El factor 6,25 es el ms comnmente usado. La protena cruda es una de las determinaciones que integra la COMPOSICIN PROXIMAL o ANLISIS PROXIMO de los alimentos. La fraccin de protena cruda de los sistemas alimenticios, es importante desde el punto de vista nutricional, de las propiedades organolpticas de los alimentos. En los alimentos de origen animal, influyen significativamente en su textura. En la harina de trigo y en el pan constituye el mejor ndice de la calidad panadera. Para cuantificar el nitrgeno total en los alimentos y en la materia orgnica en general se requiere la conversin completa del nitrgeno en su forma nativa a nitrgeno gaseoso o a una sal inorgnica de amonio (estado totalmente reducido del nitrgeno). La siguiente etapa del anlisis es la determinacin precisa y exacta de alguna de las conversiones antes sealadas. Se han descrito y desarrollado tres (3) mtodos, cada uno de ellos lleva el nombre de su creador: Dumas, Kjeldahl y Ter Meulen.

1. OBJETIVOS

Determinar el contenido de nitrgeno total del cholado extrado de su respectiva muestra problema.

2. MARCO TEORICO 2.1. FUNDAMENTO:

El mtodo de Kjeldahl se basa en la hidrlisis cida de la materia orgnica de la muestra por calentamiento con cido sulfrico concentrado y sulfato de potasio en presencia de un catalizador sulfato de cobre. El nitrgeno se reduce en la sal sulfato de amonio, de la cual se libera con hidrxido de amonio en la forma de amoniaco y se destila. El destilado se valora con una solucin patrn de cido clorhdrico o sulfrico. 2.2. Reacciones llevadas a cabo en el mtodo de Kjeldahl

DIGESTIN: Protena(s) + H2 SO4(c) + Catalizador(s) LIBERACIN DEL NH3: NH4HSO4 (ac) + 2 NaOH (ac) ARRASTRE CON VAPOR: NH3 (g) + H2O (g) RECOLECCIN: NH4OH (ac) + H3BO4 (ac) TITULACIN: NH4H2BO4 (AC) + HCI (AC)

CO2 (g) + H2O (g) + NH4HSO4 (ac) NH3 (g) + Na2SO4 (ac) + H2O(g)

NH4OH (ac) NH4H2BO4 (ac) + H2O NH4CI (AC) + H3BO4 (AC)

Viraje del Indicador Tashiro Colores Individuales Rojo de Metilo -Azul de Metileno Rojo Azul Amarillo Azul Mezcla Prpura Verde Medio cido Bsico

3. PROTOCOLO PARA LA DETERMINACION DE NITROGENO EN EL CHOLADO 3.1. Materiales 3.2. 3 Baln de Kjeldahl Manta de calentamiento 3 Pinzas nueces 3 Erlenmeyer de 250 mL Bureta Pinza para bureta Soporte universal 3 Baln aforado de 100 mL 3 Baln aforado de 1000 mL Pipeta aforado de 10 mL Pipeta volumtrica de 5 mL 4 Beaker de 50 mL Balanza analtica Esptula Agitador Frasco lavador Pipeteador Equipo digestor Kjeldahl

Reactivos Acido brico Etanol al 95% Rojo de metilo Verde de bromocresol Sulfato de cobre Sulfato de potasio Acido clorhdrico concentrado Acido sulfrico concentrado Hidrxido de sodio al 40% (libre de nitrgeno)

3.3.

Preparacin de soluciones Solucin indicadora: 0,1% de rojo de metilo y 0.2% de verde de bromocresol en alcohol al 95% Solucin estandarizada de HCl 0.02 M: tomar 1,6 mL de acido clorhdrico concentrado y llevarlo a 1 L en un baln aforado.

3.4.

Procedimiento:

Pesar 1 g de muestra en el baln de Kjeldahl Agregar 2 g de la mezcla catalizadora y 4 mL de acido sulfrico concentrado Poner los balones en la menta de calentamiento. (todo dentro de la cabina de extraccin) Rotar el baln espordicamente y calentar durante 45 minutos hasta que la muestra este transparente Apagar la manta de calentamiento Y esperar a que el baln se enfri por 15 minutos Retirar el baln de la manta de calentamiento y terminarla de enfriar cuidadosamente por enfriamiento exterior del baln al chorro de agua Agregar cuidadosamente 50 mL de agua destilada al baln antes de que solidifique el solido digerido Llevar al baln Kjeldahl al equipo de destilacin buch y agregarle manualmente 25mL de hidrxido de sodio al 40% En el recipiente de recoleccin poner 100 mL del acido brico al 4% y unas gotas del indicador Encender el equipo, purgar el equipo y dejar destilar 2/3 partes del contenido del baln o hasta que se recojan 100 mL del destilado Apagar el equipo y retirar los recipientes Traspasar cuantitativamente la muestra del recipiente que tenia el acido brico a un Erlenmeyer de 250 mL Titular el contenido del Erlenmeyer con la solucin de acido clorhdrico estandarizada (el cambio de color es de azul verdoso a rojo vino) NOTA: realice un blanco al cual se le realice todo el procedimiento anterior a excepcin de la adicin de la muestra problema. 3.5. Resultados:

3.5.1. Determinacin de nitrgeno en el cholado (muestra de las 1:00pm) Se peso 1,0077 g de muestra en el baln de Kjeldahl Se agrego 2 g de la mezcla catalizadora y 4 mL de acido sulfrico concentrado Se colocaron los balones en la menta de calentamiento. (todo dentro de la cabina de extraccin) Se roto el baln espordicamente y se calent durante 45 minutos hasta que la muestra quedo transparente.

 Se apago la manta de calentamiento y se espero a que el baln se enfriara por 15 minutos. Se retiro el baln de la manta de calentamiento y se termino de enfriar cuidadosamente por enfriamiento exterior del baln al chorro de agua Se agrego cuidadosamente 50 mL de agua destilada al baln antes de que se solidificara el slido digerido Se llevo el baln Kjeldahl al equipo de destilacin buch y se agrego manualmente 25mL de hidrxido de sodio al 40% En el recipiente de recoleccin se coloco 100 mL del acido brico al 4% y unas gotas del indicador Se encendi el equipo, se purgo y se dejo destilar 2/3 partes del contenido del baln Se apago el equipo y se retiraron los recipientes No se procedi a titular ni a estandarizar porque la muestra no viro, por lo cual no era necesario estandarizar el HCl. NOTA: No se realizo un blanco debido a que la muestra de cholado no contiene un porcentaje de nitrgeno significativo para este mtodo. 3.5.2. Determinacin de nitrgeno en el cholado (muestra de las 4:30pm) Se peso 1,0044 g de muestra en el baln de Kjeldahl Se agrego 2 g de la mezcla catalizadora y 4 mL de acido sulfrico concentrado Se colocaron los balones en la menta de calentamiento. (todo dentro de la cabina de extraccin) Se roto el baln espordicamente y se calent durante 45 minutos hasta que la muestra quedo transparente. Se apago la manta de calentamiento y se espero a que el baln se enfriara por 15 minutos. Se retiro el baln de la manta de calentamiento y se termino de enfriar cuidadosamente por enfriamiento exterior del baln al chorro de agua Se agrego cuidadosamente 50 mL de agua destilada al baln antes de que se solidificara el slido digerido Se llevo el baln Kjeldahl al equipo de destilacin buch y se agrego manualmente 25mL de hidrxido de sodio al 40% En el recipiente de recoleccin se coloco 100 mL del acido brico al 4% y unas gotas del indicador Se encendi el equipo, se purgo y se dejo destilar 2/3 partes del contenido del baln Se apago el equipo y se retiraron los recipientes

 No se procedi a titular ni a estandarizar porque la muestra no viro, por lo cual no era necesario estandarizar el HCl. NOTA: No se realizo un blanco debido a que la muestra de cholado no contiene un porcentaje de nitrgeno significativo para este mtodo.