A Tecnologia do DNA Recombinante A Base da Biotecnologia Industrial A Evoluo das Tcnicas de Anlise do DNA

At a dcada de 70, o DNA era o componente mais difcil de ser analisado. Sua sequncia de nucleotdeos (monmeros do DNA/RNA, compostos por uma base nitrogenada, uma pentose e um grupo fosfato.) de enorme tamanho e monotonia qumica era geralmente analisada por meios indiretos como a sequncia de protenas e anlise gentica. A partir da dcada de 70, novas tcnicas foram criadas para anlise, isolamento e purificao desses compostos. Muitas dessas tcnicas so provenientes de ramos como: Microbiologia, Bioqumica, Imunologia e Gentica Microbiana. Depois disso, o DNA tornou-se uma molcula fcil de ser analisada. A Tecnologia do DNA Recombinante um conjunto de tcnicas, de ampla aplicao. Pode ser usada para estudar mecanismos de replicao e expresso gnica, na determinao da sequncia de um gene (e por tabela a protena que ele codifica), ou no desenvolvimento de 'novas' culturas microbianas, capazes de resistir a certos antibiticos ou transmitir determinadas caractersticas. Clonagem Molecular Aumentando a Populao de Organismos Selecionados A origem do termo Clonagem Molecular vem da Gentica Bacteriana que considera uma colnia de bactrias como um clone, pois todos os indivduos so geneticamente idnticos bactria inicial. Essa a tcnica central da tecnologia do DNA Recombinante. Ela consiste no isolamento e propagao de molculas de DNA idnticas. H pelo menos dois estgios importantes:

Elaborao do DNA recombinante: O inserto (fragmento de DNA de interesse) ligado ao vetor (uma outra molcula de DNA) para formar o DNA Recombinante. Inserindo o DNA Recombinante numa clula: Numa clula hospedeira compatvel introduzida a molcula de DNA recombinante, num processo chamado de transformao O DNA bacteriano pode se recombinar com DNA humano, vegetal ou de qualquer outra espcie, abrindo a possibilidade de clonar ou isolar protenas das mesmas.

Enzimas de Restrio As 'tesouras biolgicas' do DNA Para que fragmentos de DNA possam ser selecionados, as chamadas Enzimas de Restrio so utilizadas. As enzimas de restrio ou endonucleases de restrio so divididas em vrias classes, dependendo da estrutura, da atividade e dos stios de reconhecimento e clivagem. O interesse por estas enzimas aumentou em 1973, quando se percebeu que elas poderiam ser usadas para fragmentar o DNA deixando extremidades de fitas simples de DNA, que permitiam a ligao de outros fragmentos. As enzimas do tipo II, as mais importantes na Tecnologia do DNA recombinante, so protenas monomricas ou dimricas e clivam ('cortam') o DNA no mesmo stio do seu reconhecimento. (O stio de reconhecimento deste tipo de enzima normalmente uma sequncia palndrmica, ou seja, ela tem um eixo de simetria e a sequncia de bases de uma fita a mesma fita complementar, quando lida na direo oposta. Atualmente, mais de 1000 enzimas de restrio j foram identificadas.

DNA Recombinante e a Indstria Esse conjunto de tcnicas, permite aos diversos setores da indstria criarem novos produtos ou aprimorarem seus processos para obteno de produtos finais. Temos alguns exemplos como: A produo de insulina artificial em escala industrial, a modificao de leveduras para potencializar a produo de lcool no setor de combustveis, criao de novas vacinas, melhoramento gentico de linhagens de bactrias importantes para o setor alimentcio, gerao de organismos 'mutantes' para diminuir ou anular o uso de agrotxicos nas plantaes e at mesmo o uso de clulas modificadas na biorremediao.

O Processo de Gerao do DNA Recombinante Passo-a-Passo

Os pesquisadores querem estudar um gene que produz uma protena que no se sabe a funo. Os pesquisadores recortam (utilizando Enzimas de Restrio), do DNA, o gene de interesse. Esse fragmento de DNA contendo o gene multiplicado por PCR (Polimerase Chain Reaction - um mtodo de amplificao (de criao de mltiplas cpias) de DNA (cido desoxirribonucleico) sem o uso de um organismo vivo, por exemplo, Escherichia coli (bactria) ou leveduras.). Para obter vrias cpias do mesmo fragmento (ou da mesma informao).

A mesma enzima que clivou ('cortou') o gene do DNA utilizada para clivar o plasmdeo (material gentico circular no ligado ao cromossomo que fica espalhado pelo hialoplasma das bactrias) bacteriano. Lembre-se que o fragmento de DNA, ao ser clivado, gera pontas 'adesivas' que so complementares ao plasmdeo se este for clivado com a mesma enzima. A seguir o plasmdeo clivado misturado com os fragmentos de DNA (contendo o gene) e uma enzima chamada ligasse cola os fragmentos ao plasmdeo, produzindo o chamado DNA recombinante. Isso feito, o DNA recombinante introduzido em uma bactria hospedeira. A bactria hospedeira colocada em um meio nutritivo seletivo, apenas aquelas que possuem o DNA recombinante crescem, formando colnias. Aps muitas geraes de bactrias, o produto da expresso dos genes, as protenas desejadas, so purificadas das bactrias (so separadas das protenas das bactrias). Acompanhe na imagem a ilustrao desse processo (nesse caso a replicao de DNA humano): CONCLUSO No desenvolvimento industrial, em comparao com os avanos da Medicina e da Agricultura, o DNA recombinante ainda est em sua infncia, mas apesar disso, vem crescendo com fora. Um dos objetivos fundamentais a produo de baixo custo de matrias-primas renovveis que possam substituir os recursos fsseis. Alm disso, a tecnologia do DNA recombinante vai ajudar a maximizar recursos industriais utilizando alternativas biolgicas, que so altamente sustentveis e

por consequncia os preos dos produtos (dependendo do produto e das tcnicas de purificao do mesmo) podem at reduzir.