Ciencia Animal Nutrition Lab PREPARACIN DE LAS CENIZAS PARA ANLISIS DE MINERALES 1) Ash 1 - a 2-g de la muestra en el horno de mufla.

2) Transferencia de residuos de cenizas de 250 ml vaso de precipitados. 3) Se aaden 50 ml de HC1 (1 parte de HCl + 3 partes de agua) y aadir unas gotas de HNO3, llevar a ebullicin bajo una campana. 4) Enfriar y filtrar en un 50 - o 100-ml matraz volumtrico de que se haya lavado con cido diluido. 5) Se diluye a volumen con H20 desionizada. Nota: Algunos minerales no pueden ser solubles en 25% de HCl. Compruebe referencia AOAC u otro manuales para obtener informacin sobre los minerales especficos. 20 Determinacin de protena cruda por el mtodo de Kjeldahl. Junto con la materia seca y cenizas anlisis, el procedimiento de Kjeldahl es uno de los anlisis ms comunes realizados en la nutricin laboratorio. Aunque no es una medida de la protena per se, proporciona una estimacin del contenido de este nutriente importante en los alimentos. Protena siempre parece estar en corto suministro, tanto en la alimentacin humana y animal, y una estimacin precisa del contenido de protena es de vital importancia en la formulacin de dietas para el desempeo animal ptima. El mtodo Kjeldahl se remonta a la dcada de 1880 cuando Johan Kjeldahl utilizado sulfrico y cidos fosfricos para descomponer materiales orgnicos. El mtodo puede ser dividido convenientemente en tres fases: digestin, destilacin y valoracin. La fase de digestin es la primera fase del anlisis, y est diseado para oxidar orgnica importa a CO2 y H2O, mientras se reduce el nitrgeno en amonaco. El cido sulfrico se emplea como el

principio del mtodo de descomposicin de la materia orgnica. El cido fosfrico tambin puede ser utilizado en conjuntamente con el cido sulfrico, pero una mezcla exacta de los dos cidos es crtico, y por lo general la desventajas del uso de dos cidos superan a las ventajas. Un nmero de catalizadores han sido empleados en la fase de digestin. Sulfato de potasio es casi siempre para elevar el punto de ebullicin de H2SO4 y de ese modo aumentar la tasa de digestin. Un nmero de otros catalizadores se han utilizado para ayudar en la reduccin de nitrgeno incluyendo mercrico xido, sulfato de cobre y selenio. El xido de mercurio y sulfato de cobre parece ser ms popular y junto con sulfato de potasio, se pueden comprar en catalizador empaquetado individualmente packs. Debido a las preocupaciones medioambientales, el uso de catalizadores a base de mercurio ha disminuido en los los ltimos aos. A la terminacin de la fase de digestin, la materia orgnica ha sido descompuesto en CO2 y H2O, y el nitrgeno se ha cambiado a sulfato de amonio. Digestin requiere una temperatura de aproximadamente 350 C y alrededor de 2 a 3 h para la mayora de las muestras de piensos. Una buena regla del pulgar es hervir el recipiente hasta que el contenido se aclaran y luego hervir durante un adicional de 30 min a 1 h. Debemos tener en cuenta en este punto que los nitratos no est completamente recuperado en los procedimientos Kjeldahl ms estndar. Debera un deseo de recuperar todo el nitrato-nitrgeno en una muestra, la adicin de cido saliclico como agente reductor en la mezcla de reaccin se realizar la tarea. La fase de destilacin es el segundo paso del procedimiento e implica la adicin de un exceso de fuerte NaOH a la muestra de la fase de digestin, despus de la dilucin adecuada del recipiente con agua destilada. Especficamente, el matraz de digestin se enfra y es de 300 a 400 ml de H2O destilada , seguido de polvo de zinc y perlas de vidrio. Luego, 100 ml de una solucin saturada de NaOH

Se aade cuidadosamente el cuello del matraz. La base libera amoniaco a partir de la forma de sulfato, y cuando se aplica calor al recipiente, NH4 + OH-se destila en un vaso de precipitados que contiene una brico cido / solucin indicadora. El cido brico simplemente sirve para mantener el amoniaco en solucin. Zinc polvo y piedras de ebullicin se incluyen para proporcionar ebullicin suave durante el proceso de destilacin. El proceso de la titulacin es simplemente una cuestin de neutralizar el NH4 conseguidas + OH-con un cido estndar. Normalmente, HCl o H2SO4 se utiliza para esta porcin del procedimiento, y el cido se formula de manera que 1 ml de cido se neutralizan 1 o 2 mg de nitrgeno. Derivacin de 0,1428 N de HCl, que se titule 2 mg de nitrgeno / ml de cido se adjunta a este captulo. Ms bien 21 que la preparacin de HCl de una normalidad conocida, a menudo es ms conveniente comprar estandarizado cido a partir de fuentes comercial (por ejemplo, 1 ml de 0,1 N HCl se neutralizan 1,4 mg de amonacoN). Una vez que los mililitros de cido utilizados en el proceso de titulacin son conocidos, el nitrgeno y el crudo contenido de protena se puede calcular. Un ejemplo de este clculo se muestra en la Tabla 3-4. Generalmente, las muestras para ser analizadas por el nitrgeno Kjeldahl se pesan y se envolvi en filtro papel y luego se coloca en el recipiente de reaccin. Que contiene la muestra en papel de filtro es simplemente una mtodo para prevenir la excesiva formacin de espuma cuando se encuentra suelto, muestras de suelo son sometidos H2SO4 al tratamiento en la fase de digestin. Sin embargo, debido a que el papel de filtro contiene algunos nitrgeno, es esencial para ejecutar un blanco de papel de filtro (papel de filtro + H2SO4 + catalizadores) para corregir

cualquier adicin de nitrgeno. Esto explica la sustraccin en blanco se muestra en los clculos de la Tabla 3-4. Los procedimientos estndar utilizados en la alimentacin animal de laboratorio para el anlisis Kjeldahl se incluyen en esta captulo. Antes de dejar el anlisis Kjeldahl, sin embargo, vale la pena considerar lo que realmente mide. Se llama "crudo", ya que no representa necesariamente un nitrgeno amino o verdadera protena, pero puede contener todos los tipos de nitrgeno no proteico (NPN) como la urea, amidas, cidos nucleicos y aminocidos libres. Generalmente, para el rumiante esta inclusin de NPN no es un preocupacin importante debido a que estos compuestos, as como protena verdadera se convierte parcialmente amonaco por los microorganismos ruminales y posteriormente se utiliza para la sntesis de protena microbiana. Si conocimiento de la verdadera un amino-linked (protena) el contenido de un pienso se desea, otros mtodos deberan ser usado. Los estudiantes deben consultar el manual AOAC para obtener ms informacin sobre este tema. En general, el anlisis de Kjeldahl proporciona una estimacin bastante buena del contenido de protena verdadera alimentos ms mixto, henos, granos, semillas y comidas. Los problemas se encuentran con pasto exuberante cultivos y los alimentos fermentados en que una proporcin bastante grande de nitrgeno total puede estar presente como NPN. La ltima pregunta es "de dnde viene el factor 6,25 en los clculos vienes?" Ms obra original con protenas mostr que un promedio de alrededor del 16% de nitrgeno. Por lo tanto, si el nitrgeno contenido es sabido, uno puede simplemente multiplicar por 100/16 = 6,25 para estimar el contenido de protena. Desafortunadamente, todas las protenas no son 16% de nitrgeno, y en los casos en que la divergencia del 16%

valor es conocido, otros factores deben ser utilizados. Por ejemplo, las protenas de leche combinados contienen aproximadamente 15,7% de nitrgeno, y un factor de 6,38 se debe utilizar (Maynard et al., 1979). Los estudiantes deben consultar Maynard et al. (1979) para la lectura adicional y referencias sobre este tema. 22 Tabla 3-4. Clculo del contenido de protena bruta a partir del anlisis Kjeldahl Pan + Muestra ml de cido ml de cido corregido Rep Pan peso de muestra en peso en peso de muestra utilizado en dmf ml de cido en blanco 1 1,0000 2,0000 1,0000 .900 20,2 .2 20 2 1,0000 2,1000 1,1000 .900 20,7 .2 20,5 Miligramos de N en la muestra Rep 1 = 20 x 1,4 mg de N / ml de cido usando HCl 0,1 N = 28 mg Rep 2 = 20,5 x 1,4 mg de N / ml de cido usando HCl 0,1 N = 28,7 mg N% en la toma Rep 1 = 28 mg 1.000 mg = 0,028 x 100 = 2,8% Rep 2 = 28,7 mg 1.100 mg = 0,0261 x 100 2,61% % De PC en la muestra, dmb Rep 1 = 2,8 x 6,25 = 17,5% 0.90 = 19.44% Rep 2 = 2,61 x 6,25 = 16,31% 0.90 = 18.13% x = 18,79% s = .93 CV = 4,92% 23 Ciencia Animal Nutrition Lab PROCEDIMIENTO PARA nitrgeno Kjeldahl - Mtodo MACRO

ATENCIN: PROTECCIN FRENTE y batas de laboratorio son necesarios para todos PARTES DE ESTE PROCEDIMIENTO. I. Procedimientos Tamao de la muestra A. A. Fuentes, las heces y muestras secas - pesa una muestra de 1 g, y la transferencia a un filtro sin cenizas # papel, doblado para evitar la prdida de muestra. La orina B. - Medida 5 ml de muestra de orina en un matraz Kjeldahl de 800 ml. Asegrese de que el espcimen es a temperatura ambiente y se suspendi uniformemente. B. Catalyst - Utilice Kel-Pac 2 Gunning, que contiene 10 g de K2SO4 ms 0,30 g de CuSO4. Para ciertos procedimientos, puede ser preferible usar 15 g de K2SO4 anhidro ms 0.7 g de HgO. 1. Blanks - reactivos Kjeldahl generalmente contienen pequeas cantidades de nitrgeno, que deben estar medido y corregido en los clculos. Preparar "espacios en blanco" para muestras secas por doblando una hoja de # 1 filtro sin cenizas y colocarla en el matraz Kjeldahl. Tratar espacios en blanco exactamente igual que las muestras a analizar, y restar la cantidad de cido para titularse los espacios en blanco de la cantidad de cido ajustadas individualmente para muestras. 2. Normas - Pesar dos (2) 0,1-g muestras de urea, la transferencia n 1 en papel de filtro sin cenizas y tratar exactamente igual que las muestras. Calcular el porcentaje de recuperacin de nitrgeno de urea normas. C. cido - grado reactivo complemento, H2SO4 concentrado a un matraz de Kjeldahl. Para las muestras secas (alimentos y heces) de 1-g tamao, aadir 25 mL y para muestras secas de un tamao de 2-g, aadir 35 ml; para la orina y muestras acuosas, aadir 25 ml. La relacin de cido a la sustancia seca es importante, ya que el punto de ebullicin

temperatura se ve afectada por la relacin de cido a sales en la mezcla. Adems, si es demasiado cido utilizado, reacciones violentas puede ocurrir en un paso posterior cuando se aade lcali. Digestin D. - gire soplador para rack de digestin y los quemadores de la configuracin del '5 '. Despus de aadir muestra, catalizador, y el cido a matraz, lugar en quemadores de bastidor digestin. Gire frascos sobre cada 15 minutos para acelerar la oxidacin del carbono. Si se produce un exceso de espuma, frasco fresco y aadir alrededor de 0,5 g de cera de parafina purificada. Despus de todas las muestras son claras, aumentar el calor a 'Hola' ajuste y digerir por 30 minutos ms. Baje el fuego y deje frascos se enfren. No retire frascos de quemadores y no encienda el soplador hasta frascos son fras al tacto. E. Dilucin - cuando frascos estn fros al tacto, aadir 400 ml de agua desionizada. Remolino contenido a disolver sales - esto es muy importante! F. Preparacin de recibir matraz de destilacin al vapor - aadir 75 ml de cido brico preparado 24 solucin (2,9% de cido brico que contenga un indicador prpura de metilo) a un limpio Erlenmeyer de 500-mL matraz y su lugar en el estante estante destilacin. Colocar el tubo de suministro desde el condensador al matraz, asegurndose de que el tubo se extiende muy por debajo de la superficie de la solucin de cido brico. VUELTA EL AGUA EN EL SISTEMA DE DESTILACIN y encienda los quemadores en el '4 ' poniendo. G. Preparacin de la muestra para la destilacin - Paso 1 debe hacerse bajo el cap como H2S txicos emitido tras la adicin de zinc. 1. Aadir aproximadamente 0,5 g de zinc en polvo al frasco, mezclar bien y dejar reposar. Aadir una cucharada de piedras de ebullicin.

Careta, guantes y delantal DEBE SER USADO PARA LA PRXIMA PASOS 2. Despus de digerir se ha asentado, medir 100 ml de saturado, NaOH acuoso (50% peso / vol) en un cilindro graduado. Slant matraz Kjeldahl preparado que contiene la solucin de anlisis alrededor de 45 desde la posicin vertical. Vierta lentamente NaOH! en un matraz de modo que una capa se forma en la parte inferior. NO MEZCLAR! 3. Conecte matraz para destilacin asamblea-condensador. NO MEZCLAR contenido del matraz hasta Firmy adjunta. Sosteniendo firmemente frasco, por lo que el corcho est perfectamente en su lugar, el contenido del remolino para mezclar completamente. Inmediatamente establecer frasco en el calentador. Retirar matraz receptor de destilacin de condensador de tubo de suministro momentneamente para permitir que la presin se iguale y evitar volver succin. H. Destilacin 1. Continuar la destilacin hasta aproximadamente 250 ml de destilado que se ha recogido en matraz receptor. 2. Apague el calentador. Retire parcialmente matraz receptor y enjuague con agua desionizada tubo de suministro agua, recogiendo el agua de enjuague en matraz receptor. 3. Reemplazar matraz receptor con un vaso de precipitados que contiene 400 ml de agua desionizada. Esta agua ser aspirada de nuevo en el matraz de Kjeldahl medida que se enfra, lavar el condensador tubo. Titulacin I. - destilado titular verde de nuevo a original prpura using.1 N HC1, y el volumen rcord de cido utilizado en la titulacin.

J. limpieza de frascos - despus que el agua ha sido absorbida de nuevo en matraces Kjeldahl, dejar enfriar y luego vierta lquido en el fregadero, la captura de las piedras de ebullicin en un vaso de precipitados. Lavar frascos, INTERIOR Y FUERA!, Con agua del grifo, luego enjuague con cido diluido, seguido de agua desionizada. Coloque boca abajo sobre bastidores matraz Kjeldahl se seque. Asegrese de lavar el interior y fuera de frascos! 25 Limpieza del rea K. - rea de trabajo debe ser una esponja limpia y todos los reactivos, insumos y cristalera volvi a almacenamiento adecuado. Asegrese de que todas las encimeras estn libres de cualquier derrame de cido, reactivos alcalinos o de otro! NOTA L. - Adin muestras se digieren en el ajuste '3 'para la digestin entero - no se conviertan a 'Hi' ajuste. Se diluye con 500 ml de agua desionizada.