Determinacion de PB en Sangre Usando Espectrofotometria de Absorcion Atomica

S.E.P.
D.G.E.S.T
S.E.S
INSTITUTO TECNOLGICO DE AGUASCALIENTES
INGENIERA QUMICA
PROYECTO: DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO
RESIDENTE: Mara Del Sol Velzquez Lpez
ASESOR INTERNO: Dr. Jorge Medina Valtierra
ASESOR EXTERNO: IBQ. Ma. Del Socorro Castaeda Ramrez
Aguascalientes, Ags. 2010
DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.
1. INTRODUCCIN.
El plomo es un metal gris, blando y maleable que se obtiene por fundicin refinamiento de las minas secundariamente por el reciclamiento de los materiales de desecho que contengan plomo, como por ejemplo de las bateras de los automviles.
Las propiedades fisicoqumicas del Pb y de los compuestos que de l se derivan han favorecido la elaboracin de una gran variedad de productos. Sin embargo, la exposicin a este metal, dependiendo de las concentraciones de plomo en sangre y en tiempos de exposicin puede provocar daos en la salud.
La exposicin al plomo puede ocurrir al respirar aire o polvo en el lugar de trabajo, o al consumir alimentos o agua contaminados. Los efectos del plomo son los mismos si se ingiere o se inhala.
La intoxicacin se presenta despus de que se est expuesto a este metal, existen diferentes fuentes de exposicin como pigmentos para pinturas, soldadura, verduras, suplementos de calcio y balas retenidas por arma de fuego ente otros. Las grandes concentraciones de Pb en sangre puede provocar dao hematopoytico, inmunolgico, esqueltico y en los sistemas nervioso central y perifrico. Adicionalmente, la exposicin a plomo puede tener efectos en la reproduccin.
Las mujeres embarazadas expuestas a niveles altos pueden tener hijos con menor peso al nacimiento, as como mayor riesgo de aborto espontneo, aun en niveles de plomo relativamente bajos.
El mtodo de espectrofotometra de absorcin es el ms usado para conocer los niveles de plomo en el organismo; las concentraciones tan pequeas que se tienen solo son posibles detectarlas con el de horno de grafito debido a su alta sensibilidad.
1.1. OBJETIVOS.
GENERAL. Desarrollar una tcnica de espectrofotometra de absorcin atmica con horno de grafito para determinar la concentracin del Pb en la sangre.
ESPECIFCOS: Determinar la concentracin [g/dL] de Pb en muestras de sangre. Encontrar los tiempos de residencias ptimos as como las temperaturas adecuadas para cada una de las etapas de la tcnica. Determinar la mejor curva de calibracin con respecto a su coeficiente de correlacin. Determinar cul modificador de matriz (tcnica usada para tener una mejor
separacin del elemento analto) es el que proporciona mejores resultados.
1.2.
JUSTIFICACIN.
La presencia del plomo ha sido observada no solo en minerales y procesos qumicos, sino tambin en sistemas naturales alrededor del mundo como en Amrica y en algunos pases Europeos. Por otro lado, los altos niveles de Pb en el agua potable y actividades cotidianas (fumigar, pintar, cermica por mencionar algunos) del hombre han sido un dao a la salud en este siglo.
El valor criterio para la mxima concentracin de plomo en sangre en nios, mujeres embarazadas y en periodo de lactancia es de 10 g/dL, para el resto de la poblacin expuesta no ocupacionalmente es de 25 g/dL.
Debido a la toxicidad y los efectos nocivos de este elemento en la salud, existe la urgente necesidad de optimizar una tcnica para su determinacin. Un mtodo efectivo, simple y apropiado para la determinacin de este elemento es la tcnica de Absorcin
Atmica ya que debido a sus concentraciones tan bajas solo es posible detectarlas con el horno de grafito. Diversos estudios muestran resultados satisfactorios en la aplicacin de este mtodo.
1.3.
CARACTERIZACIN DEL REA.
El siguiente proyecto de llev a cabo en el Laboratorio Estatal de Salud Pblica (LESP) en el departamento de control ambiental en el rea de instrumentacin.
Fig. 1 Laboratorio Estatal de Salud Pblica
Es un Laboratorio diseado para apoyar a las actividades del Instituto de Salud del Estado de Aguascalientes, colaborando con la Direccin de Regulacin Sanitaria al realizar anlisis microbiolgicos y fisicoqumicos de alimentos aguas y bebidas y de igual manera con la Direccin de Servicios de Salud en la prevencin y control de enfermedades a travs de programas, tambin se ofrece abiertamente nuestros servicios a usuarios de la poblacin en general.
El Laboratorio se encuentra en el Departamento de Control Ambiental como parte del complejo conocido como Tercer Milenio ubicado en la Avenida Siglo XXI No. 105, Cd. Satlite Morelos, C.P. 20270 en la Ciudad de Aguascalientes, Ags.
1.4.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.
Uno de los principales problemas es el de realizar la calibracin ya que durante el anlisis existen interferencias que son un tanto difciles de controlar. As como se espera que con los tiempo de residencia, temperatura de atomizacin y rampas de temperatura utilizados la materia orgnica contenida en las muestras de sangre se calcine en mayor proporcin para mejorar el anlisis.
La intoxicacin por plomo es un problema global, debido a la toxicidad de dicho contaminante y los efectos adversos al medio ambiente y a la salud humana, tales como daos en la sangre, sistema reproductivo, cardiovascular y nervioso central por
mencionar algunos. Por lo tanto, dicho elemento debe ser removido del cuerpo de la persona expuesta. Una tcnica de evaluacin del contenido de plomo en sangre, recomendada por la OMS y la EPA; sangre es por absorcin atmica por Horno de Grafito.
1.5.
ALCANCES Y LIMITACIONES.
Se logr cumplir con los objetivos planteados anteriormente para este proyecto, considerando los resultados obtenidos como satisfactorios. No hubo aspectos limitantes, puesto que se cont con el apoyo suficiente para llevar a cabo el proyecto.
2.
MARCO TERICO.
2.1.
Plomo.
El plomo es un metal gris, blando y maleable que se obtiene por fundicin refinamiento de las minas secundariamente por el reciclamiento de los materiales de desecho que contengan plomo [1].
No obstante, el plomo tambin posee propiedades como elemento protector contra la radiacin generada por otros tipos de energa atmica, anti-corrosivo su resistencia a los cidos (debido a que forma una capa de xidos de plomo) lo convierte en un metal ideal para la fabricacin y manejo de compuestos como el acido sulfrico y el acido ntrico [2].
2.2.
FUENTES DE INTOXICACIN.
El plomo es el metal txico ms ampliamente distribuido en el medioambiente constituye aproximadamente el 0.00001% de la corteza terrestre. Los usos industriales del plomo son muy numerosos, por lo que las intoxicaciones han sido frecuentes. Las fuentes de exposicin a plomo varan de un lugar a otro [3].
2.3.
PLOMO EN EL AMBIENTE.
Las fuentes emisoras de plomo a la atmosfera son las industrias que fabrican bateras, las fabricas de pinturas, soldaduras, cables, municiones, as como las industrias del hierro y el acero, la del petrleo y petroqumica, la textil, la de celulosa y papel, y la metalurgia [3].
2.4.
APLICACIONES EN LA ACTUALIDAD.
Sin duda, el mayor uso del plomo se da por la fabricacin de las bateras (la primera creada en 1859 por Gaston Plante), aproximadamente el 71% de todo el plomo se utiliza para esta aplicacin [2].
Otra aplicacin es en la medicina, pues debido a su elevada densidad, es un buen protector contra la radiacin producida por los equipos de rayos x. Adems se emplea en la fabricacin de forros protectores para cables (elctricos, de televisin, internet),
materiales de construccin, material de soldadura, como qumico para la refinacin del petrleo, como catalizador en la fabricacin de espuma de poliuretano, proteccin de madera contra el ataque de hongos marinos, los arsenatos de plomo se utilizan como insecticidas, al azuro de plomo como explosivo [2]. Pigmentos para las pinturas, alimentos enlatados en la soldadura, cermica tradicional [3].
Fig. 2 Usos del plomo en Mxico
Los nios son la poblacin ms susceptible, particularmente los lactantes, neonatos y no nacidos. El contenido de plomo en los suelos cercanos al hbitat infantil presenta controversia debido a su interaccin mano-boca [4].
2.5.
TOXICOCINTICA.
En el humano las tres principales vas de entrada al cuerpo son: la respiratoria, ya sea en forma de partculas (gas o vapor) en forma elemental o como combinaciones inorgnicas u orgnicas; la drmica y la oral cuando se ingiere bebidas o alimentos contaminados.
El plomo puede ser inhalado y absorbido a travs del sistema respiratorio ingerido y absorbido por el tracto gastrointestinal; la absorcin percutnea del plomo inorgnico es mnima, pero el plomo orgnico si se absorbe bien por esta va. Despus de la ingestin de plomo, ste de absorbe activamente, dependiendo de la forma, tamao, trnsito gastrointestinal, estado nutricional y la edad; hay mayor absorcin de plomo si la partcula es pequea, si hay deficiencia de hierro y/ o calcio, si hay gran ingesta de grasa inadecuada ingesta de caloras, si el estmago est vaco y si se es infante, ya que en ellos la absorcin de plomo oscila en 30 a 50 % mientras que en el adulto es de 10 %.
Luego de su absorcin el plomo se distribuye en compartimentos orgnicos, en primer lugar circula en sangre unido a los glbulos rojos, pues el 95 % del plomo est unido al eritrocito, luego se distribuye a los tejidos blandos como hgado, rin, mdula sea y sistema nervioso central que son los rganos blanco de toxicidad, luego de 1 a 2 meses el plomo se difunde a los huesos donde es inerte y no txico.
Finalmente se excreta por orina en un 90 %, y en menor cantidad en la bilis, piel, cabello, uas, sudor y leche materna. Hay que recordar que en el hueso est depositado el 90 % del plomo y que una disminucin de la plumbemia sin quelacin indica esta distribucin a tejido blando y hueso [1].
2.5.1. MECANISMO DE ACCIN.
La facilidad con que este penetra y se distribuye en el organismo obedece a esta misma propiedad, ya que emplea, entre otros, los mecanismos de transporte para la absorcin de calcio, zinc y magnesio y otros metales requeridos por el organismo. Las vas seguidas por el plomo para su absorcin dependen en algunos casos del compuesto especfico del plomo del que se trate, siendo las ms significativas las vas digestivas y pulmonares. Una vez en el torrente sanguneo la mayor parte del plomo se une a protenas eritrocitarias plasmticas, quedando una pequea porcin en estado libre. Despus aqu se acumula en mayor o menor medida.
Entre los sitios proteicos para cationes polivalentes que ocupa el plomo podemos mencionar los de unin al zinc por los que tiene una afinidad muy elevada, y los del calcio, por los que si bien es menor, sigue siendo ms alta que la del propio calcio. Pese a ello, dada la amplia distribucin e importancia que tiene estos ltimos en la fisiologa celular, actualmente se considera la sustitucin de iones calcio en la maquinaria proteica como el principal mecanismo toxicologico del plomo.
En el caso de los metales (sodio, potasio, magnesio, calcio, zinc, etc.) que el organismo puede manejar como cationes, la maquinaria molecular logra diferenciarlos al establecer con ellos interacciones basadas en el reconocimiento de caractersticas especficas de cada in (radio inico, carga elctrica, configuracin electrnica, etc.,) sin comprometer en ello la eficiencia funcional del sistema. Sin embargo, la posibilidad de diferenciar entre cationes, se pierde en presencia de dos o ms iones distintos como Pb+2, Cd+2, que presentan interacciones inicas anlogas, lo que permite que estos cationes normalmente ausentes en los sistemas biolgicos puedan usurpar estos sitios de unin con distintas repercusiones para el metabolismo celular [5].
2.5.2. PLOMO Y SITIOS DE UNION A CALCIO.
Al ser el calcio un catin con carga positiva (Ca2+), sus sitios de unin en las protenas suelen estar conformados por agrupaciones de residuos cargados
negativamente, en general glutamatos aspartatos, ubicados de tal manera que establecen interacciones optimas con el catin para el cual constituyen en conjunto una afectiva trampa molecular. Para ellos los tomos de oxgeno (usualmente 6 7) provenientes de grupos carboxilatos o carbonilo de la protena se disponen alrededor del calcio para conformar una esfera de coordinacin para el catin. La arquitectura particular de este sitio determina la afinidad de la asociacin del calcio con la molcula. La importancia de esta asociacin radica en los cambios que ocasiona en las relaciones estructura-funcin de la protena. El equilibrio de cargas elctricas resultante de la interaccin entre los oxgenos coordinantes (de carga negativa) y el in coordinado (de carga positiva) reduce la carga neta de la protena, lo que modifica sus interacciones electrostticas con otras molculas. Al mismo tiempo, al actuar al catin como un eslabn entre los diferentes grupos coordinantes, propicia que la protena adquiera una estructura tal que estos quedan confinados espacialmente a su alrededor, lo que a su vez se traduce en la adopcin de una conformacin determinada.
Si consideramos que el funcionamiento de las protenas est definido por su estructura, para controlar la actividad de diferentes componentes celulares basta con regular la concentracin y asociacin de un in especifico con las protenas capaces de albergarlo.
En el caso del plomo, tambin catin metlico divalente, sus caractersticas inicas le permiten formar interacciones con los sitios de unin para el calcio de manera similar a como lo hara el ion nativo, pero estableciendo importantes diferencias que constituyen el fundamento de la toxicidad de este metal. Al ser el radio inico del plomo ligeramente superior a su electronegatividad considerablemente mayor a los del calcio, es capaz de establecer interacciones muy favorables con los grupos coordinantes en la protena [5].
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Empero, al ser distinta su configuracin electrnica, dicha asociacin difiere espacialmente de la establecida por el calcio. A diferencia del calcio y el zinc, en los cuales las cargas elctricas se distribuyen en forma esfrica alrededor del ion y propician un arreglo regular de los grupos que lo coordinan en la protena, en el caso del plomo la distribucin de cargas tiende a ser irregular debido a la presencia de un par inert e de electrones en uno de sus orbitales. Esto se traduce en la disposicin hemidireccional (hacia un solo lado) de los grupos de coordinacin de la protena, lo que altera su estructura. Este efecto ms notorio en sitios con pocos grupos coordinantes para el metal, como es el caso de los que unen preferentemente al zinc. Acorde con lo anterior, se ha observado que la activacin por el plomo de muchas de las protenas de unin al calcio suele ser anormal [5].
Fig. 3 Esferas de coordinacin del Ca+2 y Pb+2
2.5.3. INTOXICACIN.
La toxicidad depende de la dosis que se ingiera, as como la cantidad excretada [6]. El sistema nervioso desarrolla los efectos ms crticos o ms sensibles en los nios o lactantes. Pueden verse afectados de forma aguda o crnica; la primera da lugar a una encefalopata con signos de hipertensin craneal [4].
La toxicidad aguda se presenta luego de una exposicin respiratoria a altas concentraciones es ocasional, provocando un cuadro gastrointestinal aparece con niveles sanguneos de 80 g/dL y los sntomas son la letrgica, vmitos, heces negras, diarrea o
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estreimiento, irritabilidad, prdida del apetito y mareos, progresando con ataxia y reducido el nivel de consciencia, que termina en coma y muerte. La recuperacin va acompaada a menudo de importantes secuelas, entra las que se pueden concluir epilepsia, retraso mental, neuropata ptica y ceguera en algunos casos [4].
La toxicidad crnica es la ms frecuente y se manifiesta con compromiso multisistmico: hematopoytico, del sistema nervioso, gastrointestinal, rin y sistema reproductor [1].
Los pacientes acuden a los servicios de salud por dolor abdominal, astenia, cefalea irritabilidad, dificultad en la concentracin y constipacin, entre otros, varios sntomas y signos se muestran en la Tabla 1.
Tabla 1. Intoxicacin por plomo Sistema Sistema Nervioso Central Toxicidad Fatiga, malestar, Cefalea, Tremor Irritabilidad, animo deprimido Disminucin de la libido Delirio, ataxia, convulsin ,coma Sistema Nervioso Perifrico Gastrointestinal Debilidad motora Anorexia, Nausea, Constipacin Prdida de peso, Dolor abdominal Ribete de Burton Sangre (hem) Renal Anemia y Punteado basfilo Insuficiencia renal crnica Nefritis intersticial y Proteinuria leve Reumatolgico Cardiovascular Reproductivo Mialgias, artralgias Hipertensin Oligospermia
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Fig. 4 Ribete de Burton [1].
Algunos pacientes con mala higiene oral pueden tener el Ribete de Burton lnea de Sulfuro que consiste en una lnea oscura entre la base del diente y la enca, debido a que el sulfuro liberado por las bacterias se une al plomo: sulfuro de plomo.
Los trabajadores expuestos por mucho tiempo y sin medidas de proteccin personal pueden presentarse con una polineuropata perifrica, que afecta
predominantemente los miembros superiores, los msculos extensores que los flexores y ms el lado dominante, lo que se ha dado en llamar la mano del pintor (Fig. 6) porque se presentaba en estos trabajadores por el uso de pinturas con alto contenido de plomo. La encefalopata plmbica caracterizada por trastorno del sensorio y convulsiones se presenta en pacientes con plomo en sangre mayor de 100 mg/dL.
Fig. 5 La mano del pintor [1].
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El diagnstico de la intoxicacin por plomo suele ser difcil, ya que el cuadro clnico es sutil y los sntomas inespecficos.
A pesar de ser una de las enfermedades laborales ms antiguas, muchos de los trabajadores expuestos no cuentan con las medidas de proteccin personales adecuadas y se intoxican no slo ellos sino sus familias, ya que transportan el plomo al hogar en sus vestimentas, recurdese aqu que los nios son la poblacin ms vulnerable para este tipo de intoxicacin [1].
2.5.4. TRATAMIENTO.
El tratamiento consiste en alejamiento de la fuente de exposicin y tratamiento quelante si la plombemia es mayor de 60 g/dL o segn clnica. Los quelantes usados son los mismos que para cualquier intoxicacin plmbica: [1].
a) Edetato-Disdico-Clcico (EDTA Ca) a dosis de 30 - 50 mg/kg/da.
b) Dimercaprol (BAL) en casos de encefalopata o plombemia mayor a 100 mg/dl en adultos y mayor a 60 mg/dl en nios a dosis de 3 a 5 mg/kg/dosis.
c) cido dimercaptosuccnico (DMSA), tiene la ventaja de que provoca pocos efectos adversos y de que se usa por va oral a dosis de 10 mg/Kg/ dosis repartidos cada 8 horas por 5 das.
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2.5.5. RECOMENDACIONES.
Las siguientes son recomendaciones de la Organizacin Internacional del Trabajo (OTI) para la prevencin en trabajadores expuestos [1]:
a) Dentro de lo posible reemplazar el plomo por sustancias menos txicas. b) Los trabajadores deben contar con un equipo de proteccin individual (EPI) como son mscaras con filtros especiales para Pb y ropa protectora, que debe lavarse o cambiarse regularmente. c) Evitar la ropa con vueltas, pliegues y bolsillos en los que se pueda acumular el polvo. d) Se debe disponer de armarios especiales para el EPI, con compartimentos separados para la ropa de calle, y de instalaciones sanitarias con duchas de agua caliente, que debern utilizarse. e) No llevar la ropa de trabajo a la casa. f) Dar a los trabajadores el tiempo necesario para lavarse antes de comer y debe estar prohibido comer y fumar en las proximidades de las reas en que se procesa el plomo.
2.6.
PANORAMA DE LA PROBLEMATICA NACIONAL.
ZACATECAS. La comunidad de San Ignacio se ubica a 23, 19' norte y 102, 59' oeste. Es el centro de poblacin ms prximo a una la planta recicladora de metales Gildardo Gmez Alonso [7].
Entre los habitantes de las comunidades de San Ignacio, Ro Florido, Bauelos y la colonia Morelos, pertenecientes al municipio de Fresnillo en el estado de Zacatecas, existe inquietud por las actividades de una empresa denominada Reciclado de Metales Gildardo Gmez Alonso, que se ubica en medio de una zona agropecuaria y a una
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distancia aproximada de 500 metros de la comunidad de San Ignacio. Una de las actividades de la empresa es la desbismutacin del plomo, donde se manejan compuestos ricos en este metal; una vez recuperado el bismuto, el resto se convierte en desecho. El manejo inadecuado de materiales con plomo ha sido causante de numerosos problemas ambientales en diversos lugares del estado de Zacatecas [7].
COAHUILA (TORREN). En la Sierra de Peoles, Municipio de San Pedro del Gallo, Estado de Durango, se localizan tres minas; la de Jess Mara en el Cerro del Capitn, la de Nuestra Seora del Refugio en el Cerro de Peoles y la de San Rafael en las cercanas del Cerro de la Cr uz de Peoles. En esta sierra nace la empresa minera Peoles el 1 de febrero de 1887 [8].
Originalmente en Torren solo estaba la planta fundidora de plomo y plata, pero en 1973 se instal una planta electroltica de zinc y en 1975 se aadi la refinera de plomo y plata. Finalmente se agreg la planta de Bermejillo, Durango, donde se produce xido de zinc, polvo de zinc, sulfato de cobre y xido de antimonio.
Es importante recalcar que la empresa Met-Mex Peoles es solo una compaa del conglomerado Industrias Peoles que incluye tanto al complejo metalrgico de Torren como una docena de minas en operacin en todo el pas y una divisin de productos qumicos industriales tales como xidos de magnesio, sulfatos de sodio, cal y xidos de zinc. MMP tiene el primer lugar mundial en la produccin de plata y es el primer lugar en Latinoamrica en la produccin de oro, plomo y zinc. En Mxico, es el nico productor de plomo primario. Referencias
La concentracin de plomo en la atmsfera cercana a la planta de Peoles ha rebasado este lmite mximo desde hace varios aos. Tampoco exista una norma sobre presencia de plomo en sangre, apenas el 25 de junio de 1999 se promulg una Norma
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Oficial Mexicana de Emergencia con vigencia de seis meses, que fue emitida a la luz de la gravedad del caso de Torren. Referencias
El Complejo Metalrgico de MMP, del cual forma parte la planta fundidora responsable de los casos de envenenamiento que se presentan en Torren, se encuentra en una regin Semidesrtica, con baja precipitacin pluvial y con vientos de alta velocidad en determinadas temporadas del ao. Lo anterior es un factor agravante para que cualquier contaminante particulado presente altas concentraciones en el aire. Tampoco existe una capa vegetal natural que impida que dichos contaminantes puedan ser transportados del suelo al aire [8]. Mencionar que en mexico la principal poblacion expuesta es la que trabaja en reciclado refinacin y extraccin de plomo, y que por alimentos o agua contaminada es relativamente insignificante.
2.7.
LOS MTODOS ESPECTROSCPICOS.
2.7.1. ABSORCIN ATMICA

La espectrofotometra es el mtodo de anlisis opto electrnico ms usado en las investigaciones qumicas y biolgicas. Se refiere a la medida de cantidades relativas de luz absorbida por un analito, en funcin de la longitud de onda [9].
Cada componente de la solucin tiene su patrn de absorcin de luz caracterstico. Comparando la longitud de onda y la intensidad del mximo de absorcin de luz de una muestra versus soluciones estndar, es posible determinar la identidad y la concentracin de componentes disueltos en la muestra (solucin incgnita).
Fig. 6 Absorcin Atmica
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En el estado estable el tomo absorbe energa
de una longitud de onda
especfica provocando el estado excitado. El nmero de tomos en el camino de la energa incrementa, la cantidad de luz absorbida tambin incrementa. Por medicin de la cantidad de energa absorbida, de puede determinar cuantitativamente la cantidad de analito. El uso de energas especiales y una seleccin cuidadosa de longitudes de onda es recomendable para cada elemento [9].
La espectroscopia de absorcin atmica es un mtodo para la deteccin y la determinacin de elementos qumicos, particularmente elementos metlicos, se fundamentan en medir la cantidad de radiacin que producen o absorben las especies moleculares o atmicas de inters [10]. Se han convertido quizs en las herramientas ms empleadas para dilucidar la estructura molecular y para la determinacin cuantitativa y cualitativa de compuestos orgnicos e inorgnicos [11].
Las regiones del espectro que se han utilizado abarcan los rayos gamma, rayos x, radiacin ultravioleta (UV), radiacin infrarroja (IR), microondas y radiofrecuencias (RF).
Fig. 7 Espectro Electromagntico
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2.7.2. INTERACCIN DE LA RADIACIN CON LA MATERIA

Los tipos ms interesantes de interacciones en espectroscopia abarcan transiciones entre diversos niveles de energa de especies qumica. Otros tipos de interacciones como la reflexin, refraccin, dispersin elstica, interferencia y difraccin, estn ms relacionados con las propiedades generales de la materia, no con los niveles de energa de molculas o tomos especficos.
2.7.3. ABSORCIN DE LA RADIACIN

Cada especie molecular puede absorber sus propias frecuencias caractersticas de radiacin electromagntica. Este proceso transfiere energa a la molcula y disminuye la intensidad de la radiacin electromagntica incidente. As pues, la absorcin de la radiacin atena el haz en concordancia con la ley de absorcin.
2.7.4. LEY DE BEER

Segn la Ley de Beer, la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de la especie absorbente c y a la longitud del trayecto b del medio de absorcin, como expresa la siguiente ecuacin:
A=
=abc
Los trminos
se refieren a la energa de un haz de ha cruzado celdas que
contienen el blanco y el analito respectivamente. Aqu es donde aparece la constante de absortividad. Dado que la absorbancia es una cantidad sin unidades la absortividad debe tener unidades que eliminen a las de b y c.
Si la ecuacin se expresa con moles por litro, y b en centmetros, la constante de absortividad cambia a un smbolo especial :
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A= bc donde tiene las unidades de L mol-1 cm-1
2.8.
TIPOS DE ESPECTROMETRA
Hay tres grandes tipos de mtodos espectromtricos para identificar los elementos presentes en la materia y determinar sus concentraciones:
1) Espectrometra ptica 2) Espectrometra de masas 3) Espectrometra de rayos X
2.8.1. ESPECTROMETRA PTICA

En la espectrometra ptica, los elementos presentes en una muestra se convierten en tomos o iones elementales en estado gaseoso por medio de un proceso denominado atomizacin. De esta manera se mide la absorcin ultravioleta/visible, la emisin o la fluorescencia de las especies qumicas en el vapor.
2.8.2. ESPECTROMETRA DE MASAS

En la espectrometra de masas atmica, las muestras tambin se atomizan, sin embargo, en este caso, los tomos en estado gaseoso se convierten en iones positivos (generalmente con una nica carga) y se separan en funcin de su relacin masa-carga. Los datos cuantitativos se obtienen por el recuento de los iones separados.
La espectrometra de masas atmica ofrece numerosas ventajas frente a los mtodos espectromtricos pticos como son espectros sencillos, capacidad para medir relaciones isotpicas atmicas y lmites de deteccin de hasta tres rdenes de magnitud mejores que los mtodos pticos.
2.8.3. ESPECTROMETRA DE RAYOS X

La espectrometra de rayos x, al igual que la espectroscopia ptica, se basa en la medida de la emisin, absorcin, dispersin, fluorescencia y difraccin de la radiacin
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electromagntica. Este mtodo es muy utilizado para la determinacin cualitativa y cuantitativa de todos los elementos de la tabla peridica con nmeros atmicos superiores al del sodio [12].
En la espectrometra de rayos x, no se necesita atomizar, ya que, para la mayora de los elementos los espectros de rayos x, son independientes de cmo se encuentran dichos elementos combinados qumicamente en una muestra. Las medidas pueden, por tanto, realizarse en la medida directa del espectro de fluorescencia, absorcin o emisin de la muestra [12].
2.9.
CAMPOS DE
APLICACIN DE LA ESPECTROFOTOMETRA DE
ABSORCIN ATMICA [13].

2.9.1. Anlisis clnicos. Para el anlisis de elementos traza como son Pb, Cu, Zn, Ca, Mg y Fe. 2.9.2. Aguas residuales urbanas o industriales.- Para el control de los efluentes lquidos requieren determinar Zn, Cu, Cr, Cd, Ni, Se, Pb, Se, Ba, Co, As. 2.9.3. Industria farmacutica. Control de calidad de medicamentos como: Li en tabletas de carbonato de litio, Zn en cremas de aplicacin externa, Co, Zn, Fe, Cu, Ca, Mn en polivitamnico, Ca, Mg, Bi, Al, Ti y Si en anticidos. 2.9.4. Metalurgia. Se determinan normalmente Fe, Pb, Ni, Cr, Mn, Co, Sb, etc., en aleaciones con base Cu, Zn, Al, Pb, Fe y Sn entre otras. 2.9.5. Derivados del petrleo.- Algunas determinaciones son: naftas, lubricantes, aceites Usados y gasolina [13].
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2.10. MTODO ANALTICO
2.10.1. ESPECTROFOTOMETRA CON HORNO DE GRAFITO

Los hornos se utilizan principalmente para atomizar slidos, lodos y disoluciones para medidas por absorcin atmica. Un diseo frecuentemente utilizado consiste en un tubo de grafito con un dimetro interno de unos pocos milmetros. Debido a que el tubo del horno se calienta al hacer pasar una corriente elctrica a travs del grafito (que acta como una resistencia) el mtodo tambin se llama atomizacin electrotrmica [17].
Son dos los tubos de grafito reconocidos; uno est hecho de grafito de alta densidad y el otro est hecho de la misma manera pero est recubierto de una delgada capa de grafito piroltico e incluyen en su interior una plataforma de grafito denominada plataforma de Lvov. Ambos grafitos son bastante pequeos.
El de horno de grafito, tiene un cilindro hueco colocado de manera que la radiacin d la fuente externa (una lmpara de ctodo hueco de descarga sin electrodo) pasa por el centro del cilindro.
El interior del cilindro est recubierto con grafito pirolizado. Los electrodos que se encuentran en los bordes del cilindro se conectan a una fuente de poder de alta corriente y bajo voltaje, capaz de liberar 3.6 Kw en las paredes del cilindro. Las muestras lquidas se introducen con una microjeringa a travs de un orificio pequeo que se encuentra en la parte de arriba independientemente, con una rampa de temperatura y un tiempo de mantenimiento isotrmico disponibles para cada etapa (tiempo de residencia).
El tiempo de vida de cada tubo es de aproximadamente de 50 300 determinaciones dependiendo del tiempo de atomizacin. Temperatura, flujo de gas y muestra. La precisin del tubo puede disminuir dependiendo el desgaste del tubo [17].
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2.10.2. ATOMIZACIN CON HORNO DE GRAFITO

En tubos de grafito, la muestra es depositada dentro de un pequeo tubo de grafito el cual puede ser calentado elctricamente. Debido al incremento la temperatura en una serie de pasos: los procesos de secado, pretratamiento trmico de a matriz y disociacin a tomos libres (atomizacin) pueden ser separadas [15].
Durante los pasos de secado y el pretratamiento trmico, una corriente de gas inerte pasa a travs del tubo para remover los vapores de solvente y la matriz. Una amplia diferencia de la absorcin atmica de flama es que algunos componentes de la matriz son removidos antes de la atomizacin y que la atomizacin tiene lugar en una atmosfera de gas inerte.
Durante la atomizacin una corriente de gas a travs del tubo de grafito debe detenerse, o, por ciertas aplicaciones, reducirse para que los tomos libres permanezcan en el haz de radiacin lo mayor posible. Para el gas detenido tubo de 28mm de longitud, el tiempo de residencia es de orden de varias decimas de segundo, el cual es
aproximadamente 100 veces mayor que en flama, donde los tomos pasan a travs en pocos milisegundos debido al flujo de gas. En consecuencia, un considerable nmero mayor de tomos estn disponibles para absorcin de radiacin.
Permitiendo de esta manera el uso de muy pequeas alcuotas de muestra o la deteccin de muy pequeas cantidades de traza.
En absorcin atmica con horno, pequeas alcuotas de muestras estn dispensadas dentro del tubo de grafito. De esta manera, para muestras de concentracin muy bajas dispensar un volumen mayor dentro del tubo lleva a una seal incrementada, mientras para muestras de concentraciones mayores o altas solo se requieren volmenes muy pequeos [15].
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Ya que no se emplea un nebulizador neumtico en absorcin atmica en horno, las propiedades fsicas de la muestra; tales como viscosidad y tensin superficial en contraste con la tcnica de flama, tienen mnima influencia en la sensibilidad de atomizacin, las muestras son dispensadas dentro del tubo de grafito con una micropipeta o un accesorio similar (microjeringa). Adems como la muestra no necesita ser nebulizada y no se requiere de un fino aerosol en el horno de grafito, no se pierde muestra en la cmara de spray, etc., resultando en otro factor importante en la eficiencia de la
atomizacin. Finalmente, el anlisis en horno de horno de grafito no estn limitadas a muestras en la fases liquida; muestras slidas pueden ser colocadas dentro del tubo tambin [15].
La tcnica de absorcin atmica por horno de grafito, provee los medios para la determinacin de metales y metaloides en el rango de picogramos. La atomizacin en horno de grafito debe escogerse para un anlisis en vez de la flama por una de las siguientes razones:
La atomizacin con horno de grafito ofrece sensitividades y limites de deteccin 100-1000 veces mejores que la flama para muchos metales. Esto permite, por ejemplo, la determinacin de varios elementos en varias matrices a niveles menores de un g/L sin preconcentracin de la muestra. El tamao de la muestra es muy pequeo, tpicamente 5-50 l. Esta capacidad ha probado ser til en muchos campos donde sera deseable usar pequeas cantidades de muestra como sea posible. Muestras liquidas no necesariamente deben estn completamente en solucin. Muestras slidas, por ejemplo plsticos, uas, segmentos de cabello, materiales de planta pulverizados, tejidos o rocas, pueden ser analizados sin preparacin de la muestra mientras la homogeidad de la muestra permita una determinacin reproducida.
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2.10.3. TEMPERATURA Y TIEMPO DE SECADO

El propsito del paso de secado es evaporar lquidos de baja ebullicin de la muestra. La temperatura de secado debe ser seleccionada en base al punto de ebullicin del solvente o de cualquier componente en la muestra slida [15].
2.10.4. SECADO EN LA PARED DEL TUBO

Cuando una muestra es depositada en la pared del tubo, la temperatura preseleccionada debe ser rpidamente alcanzada despus de ser activada. Para
soluciones liquidas acuosas una temperatura de secado de aproximadamente 100 a 130 C es ptima.
El tiempo de secado depende del volumen de la muestra. Los cuales son los siguientes: 10 l --- 15 seg 20 l 20seg 50 l 40seg 100 l 60seg
Las soluciones que contienen grandes cantidades de disolvente necesitan largos tiempo de secado. Con muchos tipos de muestras slidas, pequeas, requieren tiempo de secado. Tejidos biolgicos y materiales higroscpicos, cualquiera, demanda largos tiempo de secado y rampas de secado que son sumamente tiles.
Se debe asegurar que ocurra una evaporacin rpida y no una ebullicin debido al uso de una alta temperatura de secado. La ebullicin puede ser detectada por un sonido de silbido que emana desde el horno. Con muestra complejas que contienen mezclas de solventes, una rampa de secado (con incrementos bajos de temperatura) es lo ms til.
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La ebullicin de una muestra tambin puede ser monitoreada visualmente observando dentro del horno usando un espejo, o con el horno rotando fuera del haz de la muestra. Debe tenerse cuidado de asegurar que este procedimiento no sea seguido por el paso de atomizacin. La intensidad de la radiacin generada en el horno durante el paso de atomizacin es potencialmente peligrosa para los ojos.
Si la solucin de la muestra ebulle vigorosamente, el analito quedar adherido a las paredes laterales del horno de grafito y no en la plataforma Lvov, y como consecuencia se tendr una pobre precisin analtica por la perdida del analito.
2.10.5. TEMPERATURA Y TIEMPO DE PRETRATAMIENTO TRMICO

El paso de pretratamiento trmico se usa para remover algunos de los componentes de la matriz los cuales son ms voltiles que el compuesto del elemento de inters antes de la atomizacin. Este disminuye la posibilidad de atenuacin del fondo como una interferencia qumica.
Para diluir muestras acuosas un tiempo de pretratamiento mnimo de 10 s 300 a 500 C es suficiente. En algunos casos los parmetros tiene que ser optimizados para muestras seguras, e incrementar una rampa de temperatura podra encontrarse para ser ms til.
Dos objetivos en conflicto pueden ser mantenidos en mente cuando se determina la temperatura del pretratamiento y el tiempo:
a. Un tiempo de pretratamiento suficientemente largo y una temperatura de pretratamiento suficiente alta puede ser utilizada para volatilizar completamente una posible interferencia o humo producido por la matriz.
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b. El tiempo de pretratamiento puede ser corto y la temperatura suficientemente baja para asegurar no perder el elemento analito durante el paso de pretratamiento trmico. Ambos de estos objetivos pueden ser normalmente conocidos por el analito (o compuestos) de baja volatilidad en matrices, esto es fcil para carbonizar o para
volatilizar a bajas temperaturas. Para el analito, cualquier forma de compuesto voltil, deben tomarse precauciones para que el analito no se se pierda o atomice durante el paso de pretratamiento trmico, especialmente si tienen que ser determinados en
presencia de un material de un modificador de matriz de volatilidad baja [15].
La mxima temperatura para el pretratamiento trmico
es determinada por la
estabilidad trmica del elemento bajo estudio, o del compuesto en el cual est presente. El tiempo para el pretratamiento trmico, as como el programa de temperatura (rampa y tiempo de residencia) son determinados por los componentes de la matriz. Para matrices desconocidas, una cuidadosa observacin de seales no especificadas durante el paso de pretratamiento trmico es ampliamente recomendada. El uso de modificador de matriz es indispensable, y la seal del fondo debe ser monitoreada durante el pretratamiento trmico y la atomizacin. El tiempo del pretratamiento podra ser bastante largo para permitir que la seal del background (ruido de fondo) regrese a la lnea base de la atomizacin.
Los parmetros de secado y atomizacin son tomadas de las condiciones recomendadas del manual de operacin, y el tiempo del pretratamiento trmico ajustado a 30 s o ms, depender de la cantidad de atenuacin del ruido de fondo. Una alcuota de muestra puede ser seleccionada para obtener una seal de absorbancia de .2 a .5 unidades de absorbancia, con una temperatura de pretratamiento trmico a 200 C.
Aplicando las condiciones recomendadas para la atomizacin, la muestra ahora es analizada usando incrementos de temperaturas normalmente en incrementos de 100 C.
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Una grafica de temperatura de pretratamiento contra la seal de absorcin es como la que se muestra en la fig. .Como las temperaturas del pretratamiento son bajas, la
absorbancia normalmente permanece constante hasta que se alcanza la mxima temperatura del pretratamiento, el cual en este caso es 600 C [15].
Fig. 8 Optimizacin de la temperatura del pretratamiento trmico.
Normalmente no es necesario para establecer enteramente la curva de pretratamiento comenzar desde 200 C arriba del punto donde el elemento de inters est casi completamente volatilizado durante el paso de pretratamiento trmico. En lugar, la temperatura de pretratamiento dada en la seccin de las condiciones recomendadas es tomada primero, y en adicin una temperatura baja de 100 C y 100 C ms alta que esta. La seal es obtenida por la misma temperatura baja, adems la seal para la temperatura alta es ms baja que la temperatura dada en las condiciones recomendadas, la temperatura recomendada puede ser usada directamente para el pretratamiento de la muestra [15].
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Si las tres replicas obtenidas indican una declinacin de la sensibilidad con un incremento de la temperatura, la curva de pretratamiento debe ser extendida a temperaturas ms bajas, y la mxima temperatura trmica de pretratamiento para la matriz bajo investigacin [15].
Si la volatilidad de un elemento en una muestra especfica de matriz es considerablemente ms alta que lo usual, por una temperatura de pretratamiento mucho menos que las condiciones recomendadas, la matriz de modificacin debe ser usada para restablecer las condiciones previas. Esto no es aconsejable para usar un temperatura de pretratamiento considerablemente (mayor de 200 C) menor a las dadas en las condiciones recomendadas esto puede dar lugar a una separacin poco efectiva de
materiales acompaados de paso demasiado grande de temperatura entre el proceso de pretratamiento y atomizacin.
Como la muestra contiene otros elementos o compuestos que pueden generar una absorcin reflejado en el background, estas interferencias pueden ser removidas o destruidas en el paso de pretratamiento trmico, el procedimiento de optimizacin para los parmetros de pretratamiento trmico pueden ser ms complejos por el humo que producen las muestras ms que las soluciones puras.
El uso de corrector de fuente continua o por efecto Zeeman, es generalmente recomendable cuando se trabaja con horno de grafito. El uso de una fuente continua (una lmpara de deuterio o de tungsteno) no puede compensar una atenuacin no especfica superior a 0.8 A. De ser posible el corrector de fondo no debe exceder una absorbancia de 0.5 A para una mejor compensacin. Si el corrector de fondo de efecto Zeeman es usado, puede compensar seales no especificas de hasta 2.0 A. Adems , solo el corrector de fondo de efecto Zeeman puede compensar para una absorcin molecular que tiene una fina estructura, considerando que se obtiene una distorsin considerable de la seal cuando se usa un corrector de fondo de fuente continua se usa con este propsito.
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Durante la atomizacin, la temperatura del pretratamiento trmico y el tiempo son tiles para registrar ambas seales de salida y el corrector de fondo. Esto puede ser hecho simultneamente y secuencialmente dependiendo de la capacidad de cada instrumento usado [15]. Esto no es posible para reducir el fondo a valores en los cuales son fcilmente compensados como la temperatura de pretratamiento trmico y el tiempo donde el analito no es todava volatilizado, una matriz apropiada puede ser aplicada para reducir las interferencias [8].
2.10.6. RAMPA DE TEMPERATURA

La rampa de temperatura permite al analito aumentar la temperatura del horno a un ritmo controlado para asegurar un mejor manejo de muestras complejas dentro del horno.
Algunas veces los anlisis de muestras complejas (particularmente de matrices orgnicas), el uso de incrementos de temperatura paso a paso no es satisfactorio pues presentan una pobre precisin analtica. Esto es porque el pretratamiento trmico en cualquier paso del programa puede ser incompleto, y dando como resultado que la muestra se proyecte a las paredes del tubo y se pierda analito.
Mediante el uso
de un programa de rampa de temperatura HGA integrado
(Heated Graphite Atomizer) cada uno de los componentes en una muestra multicomponente puede ser sujeto a un pretratamiento trmico ms estrechamente con la necesidad de los componentes.
Una muestra puede contener ms de un componente en la matriz que puede requerir ampliamente diferentes temperaturas de pretratamiento para completar la destruccin de la matriz. Si tambin son usadas altas temperaturas de pretratamiento
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inicialmente, puede ocurrir sin una rampa de temperatura, el componente ms voltil de la matriz puede disociarse, fundirse o hervirse demasiado rpido salpicando la muestra dentro del tubo del horno puede ocurrir, guiando una pobre precisin y prdida de muestra [15].
Directrices tpicas para la configuracin inicial, ser regida por las siguientes consideraciones: a) El tiempo de pretratamiento trmico estar en funcin a la cantidad de matriz a ser removida. b) La temperatura de pretratamiento trmico inicial en la que la rampa puede
comenzar es seleccionada ligeramente por debajo del punto donde el componente ms voltil empieza a ebullir o a descomponerse. Un mtodo gradual de incrementos arriba de esta temperatura puede mantener un tiempo de anlisis lo ms corto posible. c) La rampa final de temperatura puede ser algunos 50C por encima del punto de ebullicin o la descomposicin del componente el cual tiene que ser removido por debajo de la temperatura en la que el analito se pierde. La rampa debe siempre ser seguida por un periodo isotrmico (tiempo de residencia) que permite una remocin completa o una descomposicin de los componentes de la matriz. d) La velocidad de la rampa puede ser influenciada por reacciones qumicas que ocurren en el tubo de grafito y pueden ser seleccionadas de manera semejante esta reacciones no llegan a ser tan violentas. e) Si una muestra contiene una matriz de varios componentes complejos de diferentes propiedades trmicas, una secuencia de pasos y rampas de temperatura, seguida por periodos isotrmicos pueden ser usados para obtener ms eficiencia en el pretratamiento trmico en tiempos ms cortos. f) La mxima temperatura de pretratamiento ser otra vez determinada por la estabilidad trmica del elemento a analizar, y la estabilidad trmica puede determinarse usando un procedimiento en la seccin previa.
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La rampa de temperatura es tambin usada cuando se aplica en conjunto con el pretratamiento trmico de la muestra en el horno. Despus, la adicin de varios agentes a la muestra requiere incrementos graduales de temperatura para controlar la velocidad de las reacciones qumicas [15].
2.10.7. TEMPERATURA Y TIEMPO DE ATOMIZACIN La temperatura seleccionada para la atomizacin puede ser alta para garantizar la completa volatilizacin del analito en pocos segundos. La seleccin de una baja temperatura de atomizacin se elige para dar una mxima, sensibilidad en el pico del rea o de altura. La velocidad de calentamiento puede tener una influencia dramtica en la sensibilidad de la altura del pico en una temperatura dada. Una rpida velocidad de calentamiento y una baja temperatura de atomizacin son generalmente preferibles sobre una baja velocidad de calentamiento y una alta temperatura de atomizacin. Esta influencia es mucho menos pronunciada en el rea de pico [15].
El tiempo total de atomizacin (rampa y tiempo de residencia) son suficientemente largos para permitir que la seal regrese a la lnea base, a menos que la evaluacin de la altura del pico y un paso adicional de calentamiento sean usados. El corriente de gas inerte en tubo de grafito es usualmente interrumpido durante la atomizacin para aumentar la sensibilidad.
2.10.8. OPTIMIZACIN ATOMIZACIN
DEL
TIEMPO
LA
TEMPERATURA
DE
La temperatura a la cual el elemento es volatilizado depende de las propiedades del compuesto en el cual est presente. muestras Por lo tanto son diferentes para diferentes
y soluciones de referencia si no se usa la matriz de modificacin. La por un compuesto bien definido del analito y
optimizacin solo se puede llevar a cabo
una matriz constante en el cual est presente. Esta otra es una buena razn para aplicar un modificador de matriz al tiempo dentro del horno AAS.
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La temperatura de atomizacin puede ser optimizada usando un conveniente volumen de una solucin de referencia teniendo una suficiente concentracin para dar una absorbancia de 0.2 a 0.5 A.
Cuando se conoce el compuesto y cantidad del elemento a determinar se puede elegir temperatura ptima de atomizacin, sino es as, esta se debe determinar
experimentalmente. Esta determinacin involucra una serie de mediciones de la seal de atomizacin contra la temperatura de atomizacin [15].
Las condiciones iniciales para HGA (Atomizador de Grafito Calentado) son las siguientes: Temperatura de secado de acuerdo a lo antes mencionado hasta completar la evaporacin del solvente. Optimizacin de la temperatura del pretratamiento trmico. Atomizar por 5 a 10 segundos a una temperatura de 100 C cerca de la
temperatura del pretratamiento trmico usando un gas stop y un poder mximo de calentamiento. Calentar a 2650 C usando un gas a una velocidad suficientemente largo para permitir que la seal residual regrese a la lnea base.
La solucin de referencia es atomizada y el rea (o la altura) de la atomizacin midiendo el pico. La determinacin entonces se repite usando altas temperaturas de atomizacin, con incremento de 100 C [15].
La figur 9, ilustra la seal de la atomizacin estabilizada (rea de pico altura de pico) contra la temperatura de atomizacin. Para muchos elementos, el resultado es alcanzado cuando se llega a la meseta con incrementos de temperatura y da como resultado no tan lejano el incremento en la seal. La ptima temperatura de atomizacin puede entonces ser una temperatura baja teniendo la seal mxima. En este caso se
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ilustra como seria a 2600 C. La temperatura ptima de atomizacin es bsicamente baja para el rea de pico evaluada en comparacin con la altura de pico. Para elementos que son extremadamente de baja volatilidad, una seal no tan lejana puede ser alcanzada con incrementos de temperatura arriba de 2700 C. Para estos elementos, una temperatura alta puede ser considerada ptima. El analista puede operar a bajas
temperaturas, de cualquier modo, extiende la vida del tubo de grafito. Por esta razn, la temperatura recomendada es la seccin de condiciones ptimas del manual est limitada a 2650 C [15].
Fig. 9 Optimizacin de la Temperatura de Atomizacin
Esto puede ser notado cuando se usa un tubo de grafito sin el recubrimiento piroltico, ya que la temperatura ptima de atomizacin difiere de la usada con tubos recubiertos pirolticamente. Tambin la temperatura puede variar dependiendo de cada medicin de la seal, rea de pico o altura de pico, donde las seales medidas pueden tener diferentes caractersticas. En el rea de pico la temperatura de atomizacin es bsicamente baja y optima con la altura de pico [15].
NOTA: A temperaturas altas, la precisin a analtica se degrada.
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El tiempo de atomizacin es generalmente seleccionado para que sea lo ms corto posible mientras se completa la volatilizacin, registrando los datos de las seales del analito cuando la temperatura optima de atomizacin regrese a la lnea base. La lnea base o cero es determinada por una corrida similar a un blanco en el HGA [15].
Si el tiempo de atomizacin es demasiado corto, restos del analito puede ser retenido en el horno y dar resultados errneos para muestras consecutivas. Cuando se completa la volatilizacin y la seal regresa a la lnea base es particularmente importante cuando se trabaja con el rea de la seal, ya que la integracin del rea ofrece mejores resultados que la altura del pico.
Cuando se trabaja en modo de altura de pico, no es necesario esperar hasta que la seal regrese al cero. Puede ser muy ventajoso esperar solo hasta que al mximo del pico es alcanzado, particularmente cuando se usan temperaturas bajas de atomizacin. Los residuos de los componentes de la muestra tienen entonces que ser removidos del tubo del horno, en un paso adicional de calentamiento ms elevado y a una alta
velocidad de flujo del gas para realizar la limpieza, y as evitar cualquier efecto residual.
Cuando se usa el rea de pico integrada, la precisin es frecuentemente menor cuando se aplican tiempos de integracin muy largos.
La atomizacin a temperatura estabilizada ofrece las siguientes ventajas:
a) Temperaturas efectivas de atomizacin bajas. b) Mayor vida del tubo. c) Alta sensibilidad para elementos refractarios. d) La posibilidad para separar seales de elementos especficos de la seal de fondo de absorcin de la matriz [15].
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2.10.9. HORNO DE PLATAFORMA DE TEMPERATURA ESTABILIZADA

El horno de plataforma de temperatura estabilizada reduce las interferencias a un mnimo absoluto. Esto fue propuesto primero por Slavin y Manning e incluye las siguientes condiciones:
Mximo poder de calentamiento. Atomizacin en la plataforma de Lvov. Mnima diferencia de la temperatura de 1000C o menos entre el pretratamiento trmico y la atomizacin.
Uso de modificadores de matriz. Detener el flujo de gas durante la atomizacin. Integracin del rea del pico.
Todos estos parmetros deben ir juntos para garantizar la ventaja completa del horno de plataforma de temperatura estabilizada, el cual es libre de interferencias. Si una o ms de estas condiciones no son aplicadas, ninguna mejora, o solo una pequea mejor, sobre resultados previos podran ser encontrados [15].
2.10.10.
ATOMIZACIN DE LA PLATAFORMA LVOV
Mientras el mximo poder de calentamiento se usa para calentar el tubo de grafito a la temperatura preseleccionada tan rpido como sea posible, la plataforma de Lvov es necesaria para retrasar la atomizacin del analito tanto como sea posible. Durante ese intervalo, al tubo de grafito y el gas inerte se les permite calentarse. En la adicin los contactos que rodean el tubo de grafito son calentados lo mejor posible y reduce el gradiente de temperatura a lo largo del tubo por la radiacin que regresa [15].
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3. INSTRUMENTACIN EN ABSORCIN ATMICA
3.1. ESPECTROFOTMETRO
El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. [12]
3.1.1. ESPECTROFOTMETRO DE HAZ SENCILLO

Consiste en varias fuentes de ctodo hueco, un contador o una fuente de alimentacin de impulsos, un atomizador, un espectrofotmetro sencillo de red de difraccin y un detector. El haz de luz proveniente de la fuente pasa directamente a travs de todos los componentes del instrumento hasta llegar al detector.
Fig. 10 Diagrama de un espectrofotmetro de haz sencillo
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3.1.2. ESPECTROFOTMETRO DE DOBLE HAZ

El haz que proviene de la fuente de ctodo hueco se divide mediante un cortador reflectante, una mitad pasa a travs de la llama (deposito de la muestra) y la otra mitad fuera de ella. Los dos haces se juntan mediante un espejo semiplateado y llegan a un monocromador de red Czerney-Turner, un tubo fotomultiplicador acta como detector. La salida de este se utiliza para alimentar un amplificador de cierre sincronizado con el movimiento del cortador. Se amplifica entonces la relacin entre las seales de referencia y de la muestra, y pasan al sistema de tratamiento de datos, que puede ser un medidor digital o un registrador de seal.
Hay que resaltar que los instrumentos de absorcin atmica de doble haz, el haz de referencia no pasa a travs de la llama, y, por consiguiente, no existe una correccin de la prdida de potencia radiante debida a la absorcin o dispersin de la radiacin por la propia llama.
Fig. 11 Diagrama de un espectrofotmetro de doble haz [12].
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Un espectrofotmetro tpico posee 4 componentes bsicos:
Fig. 12 Componentes bsicos de un espectrofotmetro.
Una fuente de radiacin que tiene intensidad constante en el rango de longitud de onda que cubre (usualmente es lmpara de tungsteno para luz visible, y deuterio para ultravioleta), Un compartimento para la muestra o quemador. un monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimento de la muestra, Un detector, que mide cuantitativamente la radiacin que pasa por la muestra.
3.1.3. FUENTE DE RADIACIN

Los mtodos analticos basados en la absorcin atmica son potencialmente muy especficos, ya que las lneas de absorcin atmica son considerablemente estrechas (de 0,002 a 0,0005 nm) y las energas de transicin electrnica son especficas de cada elemento. Existen dos tipos de lmparas de ctodo hueco y de descarga sin electrodo [12].
3.1.3.1.
LMPARA DE CTODO HUECO
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Este tipo de lmparas consiste en un nodo de wolframio y un ctodo cilndrico cerradas hermticamente en un tubo de vidrio lleno con nen / argn a una presin de 1 a 5 torr. El ctodo est constituido con el metal cuyo espectro se desea obtener, o bien, sirve de soporte para una capa de dicho metal.
Cuando se aplica un potencial del orden 300 V entre los electrodos se produce la ionizacin del gas inerte. Al tiempo que los iones y electrones migran hacia los electrodos, los cationes adquieren la suficiente energa cintica como para arrancar algunos de los tomos metlicos de la superficie del ctodo y producir una nube atmica, a este proceso se le conoce como chisporroteo [12].
Una parte de estos tomos se excitan con la luz que pasa a travs de ellos y, de este modo, al volver al estado fundamental emiten su radiacin caracterstica, los tomos metlicos se vuelven a depositar difundiendo de nuevo hacia la superficie del ctodo o hacia las paredes del vidrio.
Adems, las corrientes mayores provocan un aumento del nmero de tomos no excitados en la nube. Los tomos no excitados, a su vez, son capaces de absorber la radiacin emitida por los tomos excitados, esta autoabsorcin reduce la intensidad, sobre todo en el centro de la banda de emisin.
Fig. 12 Diagrama de una Lmpara de ctodo hueco [12]
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3.1.3.2.
LMPARA DE DESCARGA SIN ELECTRODOS
Las lmparas de descarga sin electrodos (EDL) son fuentes de espectros atmicos de lneas muy utilizadas y, por lo general, producen intensidades radiantes que son de uno o dos rdenes de magnitud superiores a las lmparas de ctodo hueco. Una lmpara tpica est constituida por un tubo de cuarzo hermticamente cerrado que contiene un gas inerte, como el argn, a unos pocos torr. y una pequea cantidad de metal (o su sal) cuyo espectro se desea obtener.
La lmpara no contiene electrodos, pero en su lugar, para su activacin se utiliza un campo intenso de radiofrecuencia o de radiacin de microondas. De esta forma, se producir la ionizacin del argn, originndose iones que son acelerados por la componente de radiofrecuencia del campo hasta que se adquiere la suficiente energa para excitar a los tomos del metal cuyo espectro se desea.
Fig. 14 Diagrama de una Lmpara de Descarga Sin Electrodo [12].
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3.1.4. COMPARTIMENTO PARA LA MUESTRA

Los atomizadores electrotrmicos se usan para medidas de absorcin atmica y fluorescencia atmica [12].
Los atomizadores electrotrmicos ofrecen la ventaja de su elevada sensibilidad para pequeos volmenes de muestra hasta mil veces ms pequeas que el mtodo comn de flama. En general se utilizan volmenes de .5 l y 20 l.
Fig. 15 Partes principales de atomizador electrotrmico (pared del atomizador, entrada de la luz, salida de la luz, plataforma Lvov, inyeccin de la muestra y extremos) [12].
3.1.5. MONOCROMADOR
Dispositivo que selecciona luz de una nica longitud de onda; el nica requisito es que pase la lnea de resonancia seleccionada y no otras lneas en el espectro que sale del ctodo metlico o del gas inerte. Por lo general se encuentra que la lnea de la fuente es satisfactoria porque est separada de las otras lneas y no se necesita el mejor de los monocromadores para aislarla [14].
Los monocromadores tienen generalmente una rendija de difraccin para dispersar la radiacin en sus longitudes de onda. Cuando se hace girar la rendija se logra diferentes longitudes de onda pasen a travs de la rendija de salida [14].
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3.1.6. DETECTOR
El detector es el dispositivo encargado de captar la seal ptica proveniente del monocromador y transformarlo en una seal electrnica capaz de ser convertida en un valor legible. El ms comn es el fotomultiplicador, tubo de vaco provisto de placas fotosensibles que recibe los fotones, los convierte en impulsos electrnicos y multiplica hasta obtener la suficiente intensidad elctrica [15].
Cuando se mide absorcin atmica, el detector debe discriminar entre dos seales: la que proviene de la fuente y la que proviene de la flama. La flama sirve de portamuestra y emite radiaciones que interfieren con el anlisis. Esa interferencia se elimina colocando el monocromador o filtro entre la flama y el detector. Sin embargo, esto no elimina la emisin de los tomos que fueron excitados por la flama y esta emisin es de la misma longitud de onda que la que suple la lmpara que est absorbiendo la muestra [15].
3.2.
INTERFERENCIAS
Mencionar que son las interferencias y como afectan el resultado.

Espectrales.-Las interferencias espectrales son originadas, por seales alteradas de la longitud de onda de radiacin electromagntica seleccionada [16]. No Espectrales.-Las interferencias no espectrales son aquellas que causan errores y que pueden dar origen a lecturas mayores o menores a los valores normales [16].
3.2.1. FUENTES DE RUIDO EN LOS ANLISIS INSTRUMENTALES

Ruido qumico.- proviene de multitud de variables incontroladas que afectan a la qumica del sistema que se analiza, entre los distintos ejemplos pueden citarse variables no detectadas como [12]:
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De temperatura De presin que afectan al equilibrio qumico Fluctuaciones en la humedad relativa (que cambian la humedad de las muestras) Vibraciones (conducen a una estratificacin de los slidos pulverulentos). Cambios en la intensidad de la radiacin Humos del laboratorio que interaccionan con las muestras.
3.3.
MTODOS DE CORRECIN
3.3.1. MTODO DE CORRECCIN DE LAS DOS LNEAS

El procedimiento de correccin de las dos lneas utiliza una lnea que proviene de la fuente de radiacin como referencia. Esta lnea debera estar lo ms prxima a la lnea del analito, pero no debe ser absorbida por ste. Si se renen estas condiciones, se supone que cualquier disminucin en la potencia de la lnea de referencia respecto a lo observado durante la calibracin se debe a la absorcin o dispersin por los componentes de la matriz de la muestra. Esta disminucin en la potencia se utiliza para corregir la absorbancia de la lnea del analito.
La lnea de referencia puede deberse a una impureza en el ctodo de la lmpara, a una lnea del nen o argn que contiene la lmpara, o a una lnea de emisin no resonante del elemento que se analiza. Lamentablemente, no siempre se dispone de una lnea de referencia adecuada [12].
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3.3.2. MTODO DE CORRECCIN DE UNA FUENTE CONTINUA

En esta tcnica de correccin de fondo, se utiliza una lmpara de deuterio como fuente de radiacin continua en toda la regin ultravioleta [12].
La configuracin del chopper se modifica para que la radiacin de la fuente continua y la de la lmpara de ctodo hueco pasen alternamente a travs del atomizador de tubo de grafito. La absorbancia de la radiacin de deuterio se resta entonces a la del haz del analito. La anchura de rendija se ajusta con un ancho suficiente para que la fraccin de radiacin de la fuente continua que se absorbe por los tomos de la muestra sea despreciable. Por tanto, la atenuacin de la potencia de radiacin continua durante el paso a travs de la muestra atomizada indica solamente la absorcin de banda ancha o la dispersin producida por los componentes de la matriz de la muestra. De esta forma se consigue una correccin de fondo.
Una de las fuentes de error es la inevitable degradacin de seal/ruido que acompaa al uso adicional de una lmpara y un cortador.
3.3.3. CORRECCIN DE FONDO BASADA EN EL EFECTO ZEEMAN

Cuando un vapor atmico se expone a un intenso campo magntico (10 kG), se produce un desdoblamiento de los niveles de energa electrnicos de los tomos, lo que conduce a la formacin de diversas lneas de absorcin para cada transicin electrnica. Estas lneas estn separadas unas de otras en unos 0.01nm, siendo la suma de las absorbancias de estas lneas exactamente igual a la de la lnea de la cual proceden. Este fenmeno, comn para todos los espectros atmicos, se denomina efecto Zeeman.
Los instrumentos con efecto Zeeman permiten una correccin ms exacta del fondo que los mtodos descritos anteriormente. Estos instrumentos son especialmente
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tiles en atomizadores electrotrmicos y permiten la determinacin directa de elementos es muestras de orina y sangre.
3.4.
PARAMETROS DE OPERACIN
3.4.1. LONGITUD DE ONDA

La longitud de onda es caracterstica de cada elemento, el corrector de fondo de efecto Zeeman de utiliza para longitudes cercanas a 250 nm [11].
Para
obtener
la
mxima
sensibilidad,
las
medidas
de
absorbancia
espectrofotomtrica se realizan a una longitud de onda que corresponda a una mximo de absorcin, ya que el cambio en la absorbancia por unidad de concentracin es mayor en este punto. Adems, la curva de absorcin suele ser horizontal en un mximo, lo que origina un buen cumplimiento de la Ley de Beer y una menor incertidumbre en el ajuste de la longitud de onda del instrumento.
3.4.2. RENDIJA (Slit)

Las rendijas del monocromador juegan un papel importante para determinar sus caractersticas de funcionamiento y calidad as como se utiliza tambin para reducir los niveles de ruido. Las mordazas de la rendija se fabrican mediante un cuidadoso proceso mecnico en dos piezas de metal a las que se les hacen bordes afilados de superficie dura y pticamente plana mediante una herramienta de diamante. Una rendija comn para la regin visible contiene entre 300 y 2000 surcos/nm; todos los surcos tiene que ser del mismo tamao, exactamente paralelos e igualmente espaciados a lo largo de toda la rendija as como en el mismo plano. En algunos monocromadores, las aberturas de las dos rendijas son fijas; aunque se pueden ajustar con un mecanismo micromtrico [11].
3.4.3. SENSIBILIDAD
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En general se acepta que la sensibilidad de un instrumento o de un mtodo es una medida de su capacidad de diferenciar pequeas variaciones en la concentracin del analito. Dos factores limitan la sensibilidad: la curva de calibrado y la reproducibilidad o precisin del sistema de medida. Entre dos mtodos que tengan igual precisin, ser ms sensible aquel cuya curva de calibracin tenga mayor pendiente. Un corolario a esta informacin es que si dos mtodos tienen curvas con igual pendiente, ser ms sensible aquel que presenta la mejor precisin [11].
3.4.4. LIMITE DE DETECCIN

La definicin cualitativa ms aceptada para el lmite de deteccin es la mnima concentracin o la mnima masa de analtica que se puede detectar para un nivel de confianza dado. Este lmite depende de la relacin entre la magnitud de la seal analtica y el valor de las fluctuaciones estadsticas de la seal del blanco [12].
3.4.5. EXACTITUD
En condiciones normales, el error relativo asociado con el anlisis de absorcin con llama es del orden del 1 al 2%. Cuando se toman precauciones especiales, esta cifra puede reducir a unas pocas decimas por cien. Por lo general, los errores que se obtienen con la atomizacin electrotrmica son de 5 a 10 veces mayores que los de la atomizacin con llama.
3.4.6. PREPARACIN DE LA MUESTRA

Una de las ventajas de la atomizacin electrotrmica es que algunos materiales pueden ser atomizados directamente evitando de esta manera la etapa de la disolucin. Por ejemplo, las muestras de sangre, derivados del petrleo y disolventes orgnicos pueden pipetearse y transferirse directamente al horno para su calcinacin y atomizacin [12].
47
3.4.7. CURVA DE CALIBRACIN

Para realizar el mtodo de la curva de calibracin se introducen en el instrumento varios estndares que contienen concentraciones exactamente conocidas del analito y se registra la seal instrumental. Normalmente esta seal se corrige con la correspondiente seal del blanco. A menudo se obtienen representaciones graficas lineales concentracin [12]. en un amplio intervalo de
La mejor linealidad para la curva de calibrado se obtiene midiendo el rea de pico de la cual de las tres replica se hace un promedio y esta se le resta a los promedios de cada uno de los puntos de la curva. [12]
3.4.8. MTODO DE LA ADICIN DE ESTNDAR

El mtodo de la adicin de estndar es til para analizar muestras muy complejas en las que la probabilidad de que se produzcan efectos debidos a la matriz es considerable. Este mtodo pude aplicarse de diferentes formas. Una de las ms habituales implica la adicin de diferentes volmenes de una solucin estndar a varias alcuotas de la muestra del mismo tamao. Despus, cada disolucin se diluye a un volumen fijo antes de efectuar la medida. Teniendo as una concentracin conocida en cada muestra eso sirve tambin para hacer el clculo del porciento de recuperacin, teniendo que cumplir con una recuperacin del 20% para que pueda ser aceptable [11].
3.4.9. MODIFICADOR DE MATRIZ

Un modificador de matriz es una especie que por s misma no causa
interferencias, pero que se agrega a las muestras, estndares y blancos en cantidad suficiente para conseguir que la respuesta analtica sea independiente de la concentracin de las especies que producen interferencia [12]. El modificador de matriz fue propuesto por Ediger como una tcnica para tener una mejor separacin del analito del compuesto haciendo la matriz ms voltil y/o
48
estabilizando el analitopara que no reaccione con componentes de la matriz y dificulte su cuantificacin. Un agente acido o sal, es aadido a la muestra en una alta concentracin en relacin al analito [15].
La matriz tambin ayuda para evitar mltiples picos
durante la atomizacin
causados por diferentes compuestos del analito presente en la muestra original que son volatilizados a diferentes temperaturas [15].
3.5.
CONTROL DE CALIDAD
Se debe operar un programa de control de calidad (CC) al efectuar al anlisis y son los siguientes:
Registros que se deben mantener para cada muestra y en el laboratorio: Los nombres y los analistas que ejecutaron los anlisis y en encargado de control de calidad que verifico los anlisis. Las bitcoras manuscritas del analista y del equipo en los que se contengan los siguientes datos: a) Identificacin de la muestra b) Fecha de anlisis c) Procedimiento cronolgico utilizado d) Cantidad de muestra utilizada e) Numero de muestras de calidad utilizadas, adems incluir muestras fortificadas, estndares y blancos al momento de realizar el anlisis. f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin g) Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados
De tal forma que permita a un evaluador externo reconstruir cada determinacin mediante el seguimiento de la informacin desde la recepcin de la muestra hasta el resultado final.
49
4.0.
3.6.
1.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
lavado en una solucin de cido ntrico al 30%
El material a utilizar debe estar
enjuagndolo con agua desionizada y dejndolo secar durante un mnimo de 12 horas. NOTA: Todo el material utilizado se verific y nicamente se utiliza material tipo clase A B
1.1. EQUIPO 1.1.1. Spectrometer Analyst 800. 1.1.2. Tubos de grafito piroltico. 1.1.3. Plataformas de Lvov. 1.1.4. Lmpara de plomo de ctodo hueco o de descarga sin electrodo. 1.1.5. Copas de muestreo.
1.2. MATERIAL 1.2.1 Micropipetas (100 l y 1000 l) y puntas de micropipetas 1.2.2. Vasos de precipitados 1.2.3. 1.2.4. Matraces volumtricos clase A de: 10, 100 y 1000 ml. Agitadores
1.2.5. Balanza analtica 1.2.6. Computadora equipada con el programa 1.2.7. Recipientes de plstico: uno para desechar el material utilizado y el segundo con cloro para desechar las muestras de cloro. 1.2.8. Rotuladores 1.2.9. Cinta adhesiva 1.2.10. Recipiente de polipropileno de 2 litros
50
1.2.11. Guantes de ltex para trabajo de laboratorio. 1.2.12. Refrigerador (4 a 8 C). 1.2.13. Tubos vacutainer con heparina sdica
1.3. REACTIVOS 1.3.1. Solucin estndar de Pb de 1000 g/ml 1.3.2. 1.3.3. 1.3.4. 1.3.5. 1.3.6. Acido ntrico (HNO3) ultrapuro. Fosfato dibsico de amonio ultrapuro (NH4)2 HPO4. Octil-fenoxi-polietoxietanol (Tritn X-100). Agua desionizada y acidificada con acido ntrico al 5% Muestras de sangre tomadas con las respectivas precauciones.
Abrir las llaves de gas y ajustarlos a 80 psig (para aire, nen y argn) y 16 psig para acetileno.
3 4 5
Encender los reguladores de energa del equipo y de la computadora. Prender la computadora y seleccionar al icono de Win LAB AA 32. Abrir el mtodo en el workspace (previamente creado o guardado) y seleccionar el tipo de tcnica a utilizar (llama, horno de grafito o generador de hidruros).
Encender la las lmparas a utilizar y dejarlas durante 15 min para que alcancen su mxima energa, elegir la longitud de onda y el Slit recomendado por el manual del equipo dependiendo el metal que se quiera determinar.
Preparar las soluciones de trabajo:
7.1. Solucin de lavado para el automuestreador Colocar al menos 200 ml de agua en un recipiente de polipropileno de 2 litros previamente lavado, agregar al recipiente de polipropileno 10 ml de Tritn X-100 medidos con una probeta o pipeta volumtrica de 10 ml, agitar hasta disolucin. Lavar 3 veces pipeta volumtrica o la probeta con agua y agregar el agua de lavado al recipiente de
51
polipropileno, llenar con agua el recipiente de polipropileno hasta un 90% de su volumen total y agitar para mezclar la solucin por ultimo adicionar el agua faltante segn lo permita el nivel de espuma formado (esta solucin se prepara segn se requiera por el equipo). [18] 7.2. Preparar estndares de Pb 10 g/dl y 10 g/ml. NOTA: todas las soluciones estndar se aforan con una solucin de agua acidificada con acido ntrico al 5%; la solucin de 10 g/dl se prepara de dos maneras diferentes como se describe a continuacin.
7.2.1. Solucin Estndar de Pb de 10 g/dl: a) A partir de una solucin de 1000 g/L: En un matraz volumtrico de 100 ml aadir .1 ml (100 l) de una solucin estndar de Pb [1000 g/ml], 0.5 ml (500 l) de Tritn x-100, 5 ml de cido Ntrico y aforar. Posteriormente se hace una dilucin 10:100 para obtener una concentracin de 10 g/dl (unidades comnmente en las cuales se expresan resultados).
b) A partir de una solucin de 100 g/L: Con Adicin de Tritn X-100 En un matraz volumtrico de 100 ml aadir 0.01 ml (10 l) de una solucin estndar de Pb [1000 g/ml], 0.5 ml (500 l) de Tritn X-100, 5 ml de cido Ntrico y aforar.
Sin Adicin de Tritn X-100: En un matraz volumtrico de 100 ml aadir 0.01 ml (10 l) de una solucin estndar de Pb [1000 g/ml], 0.5 ml (500l) de Tritn x-100, 5ml de cido Ntrico y aforar.
7.2.2. Solucin Estndar de Pb de 10 g/ml: En un matraz volumtrico de 100 ml aadir 1 ml (1000 l) de solucin estndar de Pb [1000 g/ml], 5 ml de cido ntrico, 5 ml de Tritn x-100 (500 l) y aforar con agua.
52
8.
Preparacin de la curva de calibracin
NOTA: Las curvas de calibracin se aforan con una solucin de agua acidificada con cido ntrico al 5%, algunas curvas se hacen manualmente y otras por el equipo en las cuales la solucin estndar se coloca en un vial y el equipo una vez programado con los rangos de concentracin hace las diluciones correspondientes.
Para la curva de calibracin de la solucin estndar de Pb de 10 g/dL a) y b) se elaboran de la siguiente manera:
Tabla 2. Curva de Calibracin para la solucin estndar de 10 g/dL (echa manualmente) Volumen del matraz en ml ml Agregados de la solucin estndar para la curva de Concentracin de las soluciones de trabajo en g/dL ml Agregados de la solucin estndar para la curva de 0-10 g/dL 0 1 2 3 4 6 0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10 Concentracin de las soluciones de trabajo en g/dL
0-6 g/dL 10 10 10 10 10 10 0 1 2 3 4 6
NOTA: Una vez que se tienen las soluciones de trabajo se colocan en viales para introducirlas al automuestreador y comenzar el anlisis.
53
Para realizar la curva de calibracin con la solucin de Pb de 10 g/ml se elabora de la siguiente manera:
Tabla 3. Curva de Calibrado para la Solucin de 10 g/ml + Tritn Volumen del matraz en ml l Agregados de la Solucin Intermedia de Pb de 10 g/ml 10 10 10 10 10 10 0 50 100 250 500 750 500 500 500 500 500 500 l de HNO3 Concentracin de las soluciones de trabajo en g/dL 0 5 10 25 50 75
NOTA: Una vez que se tienen las soluciones de trabajo se colocan en viales para introducirlas al automuestreador y comenzar el anlisis.
9.
Preparacin de los modificadores de matriz (NH4H2PO4 y MgNO3). NOTA: los modificadores de matriz se aforan con agua desionizada.
9.1. Modificador de matriz de Fosfato de Amonio Monobsico (NH4H2PO4) Sin adicin Tritn x-100: Se pesan 0.2 gr de Fosfato de Amonio Monobsico, se mezcla en poco agua hasta disolver y se afora en un matraz volumtrico de 100 ml.
Con adicin de Tritn x-100:
54
Se pesan 0.2 gr de Fosfato de Amonio Monobsico, se mezcla en poca agua hasta que se disuelva, se agregan 0.2 ml (200 l) de cido Ntrico, 0.5 ml (500l) de Tritn x100 y se afora en un matraz volumtrico de 100 ml.
9.2. Modificador de matriz de Nitrato de Magnesio [Mg (NO3)2]: Se pesa 0.06gr de Nitrato de Magnesio, se mezcla con poco agua hasta disolver y se afora en un matraz volumtrico de 100 ml.
10. Preparacin de la muestra de sangre Las muestras de sangre se obtienen tomndolas directamente del paciente al cual se le pretende analizar Pb, se extrae la sangre por va intravenosa asegurndose de usar guantes (se debe considerar la sangre como un medio de enfermedades contagiosas) depositndola en un tubo llamado vacutainer el cual est previsto de heparina sdica para evitar la coagulacin. Una vez depositada la sangre en el tubo aproximadamente 5 m l se rotula con el nombre, sexo y edad de la persona; si el anlisis se va realizar en el momento no es necesario refrigerar de lo contrario debe permanecer la sangre en refrigeracin a 3-4 C hasta el anlisis.
10.1. Para la solucin de 10 g/dL a) y b) Se toma un tubo de 10 ml, se aade 1 ml de sangre y 4 ml de solucin estndar, se cierra y se lleva al bortex; despus la muestra ya est lista para ser cuantificada.
Tabla. 4 Preparacin de la muestra de sangre de 10 g/Dl Muestra 1 2 3 4 5 Volumen del tubo en ml 10 10 10 10 10 1 1 1 1 1 ml de Sangre ml de Solucin Estndar 4 4 4 4 4
55
10
NOTA: una vez preparada la muestra se lleva al vortex en donde su principal funcin es la de romper las clulas de la sangre, cuidando de que no se sedimente o se separe la sangre en dos fases si esto ocurre se agita antes de ser leda 10.2. Para la solucin de 10 g/ml Se hacen dos tipos de muestra una fortificada y una sin fortificar para conocer la concentracin Pb en la sangre.
Tabla 5. Preparacin de muestra sin fortificar. Solucin de trabajo en g/Dl Volumen del tubo rotulado en ml 0 5 10 25 50 75 10 10 10 10 10 10 l agregados de la muestra de sangre 200 200 200 200 200 200 800 800 800 800 800 800 l agregados del modificador de matriz
Tabla 6. Preparacin de la muestra de sangre fortificada Solucin de trabajo en g/dL 0 5 10 25 50 75 Volumen del tubo rotulado en ml 10 10 10 10 10 10 l agregados de la muestra de sangre 100 100 100 100 100 100 l agregados de la solucin estndar 100 100 100 100 100 100 l agregados del modificador de matriz 800 800 800 800 800 800
56
Una vez que tienen las muestras de sangre se llenan los viales y se colocan en el automuestreador para ser cuantificadas.
11. Mantenimiento previo al manejo del equipo.
12. Alinear el tubo de grafito, usando una lmpara de cobre o bien del metal que se va a cuantificar, en nuestro caso la lampara de Pb. Posteriormente realizar la alineacin del tip del automuestreador en el orificio del tubo de grafito y ajustar la profundidad de inyeccin (estas operaciones se realizan con gogles para proteger los ojos de la radiacin ultravioleta).
13. Revisar que el horno de grafito se encuentre en buen estado, si no es as cambiarlo por uno nuevo y darle su acondicionamiento que es el siguiente proceso de temperaturas y posteriormente una limpieza a 2500 C
Tabla 7. Acondicionamiento del Tubo de grafito Paso Temperatura Rampa de Tiempo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 2000 20 2200 20 2300 20 2400 20 2500 60 1 10 1 10 1 10 1 1 Tiempo de Residencia 2 20 10 20 10 20 10 20 5
57
14. - Ajustar el equipo si se requiere que se introduzcan los puntos de la curva uno por uno o se hagan las diluciones automticamente, ingresarle las concentraciones a las cuales se va hacer la calibracin y las temperaturas de cada paso as como sus tiempos de residencia y las rampas.
Tabla 8. Primer Programa de Temperaturas Temperatura C 110 130 850 20 1600 2500 Rampa de tiempo (Seg.) 1 15 10 10 0 1 Tiempo de Residencia (Seg.) 20 10 20 5 5 3 Flujo de Gas (ml/min) 250 250 250 250 0 250
Tabla 9. Segundo Programa de Temperaturas Temperatura C 110 130 550 850 20 1600 2500 Rampa de tiempo (Seg.) 1 15 10 10 10 0 1 Tiempo de Residencia (Seg.) 20 10 5 5 5 5 3 Flujo de Gas (ml/min) 250 250 250 250 250 0 250
58
15. Prender el extractor y comenzar la calibracin; una vez efectuada la calibracin el coeficiente de correlacin debe ser mayor a .995, si no es as, recalibrar los puntos que se salieron de la curva o en su defecto volver a realizar la calibracin.
16. Analizar las muestra previamente preparadas.
17. Una vez efectuado el anlisis se desechan los puntos de la curva y las muestras (si los residuos son lquidos se depositan en un recipiente que contenga una solucin de cloro y de lo contrario si son slidos se desechan en el recipiente correspondiente a los residuos biolgicos infecciosos.
18. Se reportan los resultados obtenidos as como las curvas y el coeficiente de correlacin obtenido en cada curva.
59
4. RESULTADOS Y DISCUSIN
Se utiliz una solucin estndar (a)10 g/dL con un modificador de matriz de NH4H2PO4 sin Tritn + Mg (NO3)2 y el primer programa de temperaturas (que es el que viene en el equipo como mtodo recomendado) se obtuvieron las siguientes curvas:
Fig.16 Curva de Calibracin
Como se puede observar se tiene una tendencia lineal que no es del todo aceptable ya que el coeficiente mnimo requerido es de .995 y no se us para determinar la concentracin de Pb en sangre. Tabla 10. Resultados del anlisis
60
Estndar
Concentracin Real g/dL
Concentracin Terica g/dL 0 .5 1.0 2.0 3.0 4.0
Absorbancia
BLANCO 1 2 3 4 5
0.446 .429 .968 1.91 3.35 3.8
0 0.0057 0.0138 0.0279 0.0494 0.0561
Fig.17 Curva de Calibracin
Se logr una mejora en cuanto a la linealidad usando el mismo modificador de matriz aunque la curva se us para calibrar y para determinar la concentracin de Pb en sangre; se incremento el rango de anlisis hasta 6 g/dL; la grafica fue realizada por el equipo; la variabilidad en el coeficiente de correlacin puede ser debido a que los tiempos no son los ms ptimos para la determinacin de Pb en sangre.
Tabla 11. Resultados del anlisis Estndar Concentracin Real Concentracin Terica Absorbancia
61
g/dL BLANCO 1 2 3 4 5 -.05 .958 1.872 3.322 4.034 5.867
g/dL 0 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 0 0.0198 0.0379 0.0665 0.0806 0.1168
Se analiz solo 1 blanco y una mujer de 22 aos (no se encontraba en periodo de gestacin) y se hizo una adicin de estndar de 5 g/dL para calcular el porcentaje de recuperacin.
Tabla 12. Resultados de las muestras de Pb en sangre Muestras Sexo y Edad de la Persona Concentracin de adicin de estndar en g/dL 1 2 3 4 Blanco Blanco Mujer 22 Mujer 22 0 5 0 5 Concentracin despus del anlisis en g/dL 0 3.538 .3652 .5396 0 70.76 0 100.61 % de Recobro
Se esperaban mejores porcentajes de recuperacin debido a que puede haber prdidas de muestra en la etapa de atomizacin o los tiempos de residencia y quizs las rampas de temperatura no son las ptimas para volatilizar los diferentes compuestos de la matriz durante los pasos de la tcnica.
62
Se ampli el rango de anlisis hasta 10 g/dL, ya que la concentracin crtica es de 10 g/dL y se sigui usando el primer programa de temperaturas; decrecio se us la solucin estndar (a), la linealidad
as que no se us para determinar la
concentracin de Pb en sangre.
Fig. 18 Curva de calibracin
El coeficiente de correlacin no cumple con las especificaciones requeridas para el anlisis Tabla 13.Resultados del anlisis
63
Estndar
Concentracin Terica g/dL 0 2 4 6 8 10
Absorbancia
BLANCO 1 2 3 4 5
.2948 1.742 4.397 5.545 7.276 10.75
0 0.0371 0.1052 0.1346 0.179 0.2679
Se us una solucin de 10 g/dL b) sin tritn, y se mantuvo el primer programa de temperaturas que es el recomendado por el equipo.
El coeficiente obtenido durante esta calibracin fue de .990003, y ya que no cumple con el mnimo de r2, no se us para determinar la concentracin de plomo en sangre, se modific la temperatura de limpieza a 2500C. Tabla 14. Resultados del anlisis Estndar Concentracin Real Concentracin Terica Absorbancia
64
g/dL BLANCO 1 2 3 4 5 -.68 2.148 4.607 6.494 8.002 9.43
g/dL 0 2 4 6 8 10 0 0.1267 0.2368 0.3213 0.3889 0.4529
Se utiliz una solucin estndar (b) 10 g/dL + tritn y un modificador de matriz de NH4H2PO4 sin tritn y el primer programa de temperatura se obtuvieron las siguientes curvas.
Se obtuvo una gran mejora ya que aadiendo el Tritn x-100 se eliminaron algunas interferencias durante la calibracin obteniendo una linealidad de .997653 en un rango de 0-10 g/dL.
Tabla 14. Estndar Concentracin Real g/dL Concentracin Terica g/dL Absorbancia
65
BLANCO 1 2 3 4 5
-.0908 1.764 4.204 6.362 8.059 9.701
0 2 4 6 8 10
0 0.0728 0.1685 0.2532 0.3198 0.3842
Se utiliz una solucin (b) 10 g/dL, la linealidad no es la aceptable para poder realizar el anlisis aun as se analizaran muestras de sangre para determinar el porcentaje de recuperacin, la calibracin se hizo manualmente, el modificador utilizado fue Fosfato de Amonio sin Tritn.
Aunque se us la misma solucin que en el caso anterior se puede observar que no existe buena reproducibilidad, aun as los datos obtenidos son satisfactorios.
Tabla 16. Resultado del anlisis
66
Estndar
Absorbancia
1 2 3 4 5 6
.2116 2.26 3.731 5.513 7.682 10.6
0 0.0346 0.0594 0.0895 0.1261 0.1754
Los resultados obtenidos de las muestras son los siguientes:
Tabla 17. Resultados de muestras de Pb en sangre Muestras Sexo y Edad de la Persona Concentracin de Adicin de estndar en g/dL 1 2 3 4 5 6 Hombre 25 Hombre 25 Hombre 25 Mujer 22 Mujer 22 Mujer 22 0 3.0 3.0 0 2.5 2.0 Concentracin despus del anlisis en g/dL 0 2.948 3.324 0 2.331 2.222 0 98.26 110.8 0 93.24 111.11 % de Recobro
Se analizaron 2 personas una del sexo femenino y otra del sexo masculino, los resultados son satisfactorios ya que estn dentro del lmite permitido 20 % de
recuperacin, adems de que las personas que se han analizado ninguna de ellas rebasan el lmite sealado en la norma.
67
Se us el segundo programa de temperaturas, con este programa se pretenden eliminar las interferencias causadas por la matriz (sangre completa); para este programa se ampliaron los tiempos de secado y las rampas de temperatura para garantizar que los diferentes compuestos orgnicos de la matriz se volatilicen con los incrementos graduales de temperatura.
Esta curva de calibracin se obtuvo a partir de la solucin de 1000 g/L a) con un modificador de Fosfato de Amonio + tritn, se mejor la linealidad, esta curva se us nicamente como calibracin; curva realizada por el equipo. Tabla 18. Resultados del anlisis
68
Estndar
Absorbancia
BLANCO 1 2 3 4 5
.4083 1.842 3.825 5.702 7.713 10.51
0 0.0518 0.1233 0.1911 0.2637 0.3646
Fig. 23 Curva de calibracin Se uso una solucin estndar de 10 g/dL (b) con adicin de tritn x-100 obteniendo as un coeficiente de r2 regular pero inferior a 0.995. Sin embargo los resultados obtenidos son buenos con el segundo programa de temperaturas.
Tabla 19. Resultados del anlisis Estndar Concentracin Real g/dL BLANCO 1 2 -.049 2.199 4.221 Concentracin Terica g/dL 0 2 4 0 0.0783 0.1487 Absorbancia
69
3 4 5
5.707 7.374 10.55
6 8 10
0.2005 0.2585 0.3691
Los resultados obtenidos en cuanto a la concentracin de Pb en sangre estn dentro de los lmites permitidos 20 %.
Se utiliz una solucin de 10 g/dL (b) + tritn x-100 y el modificador de matriz de NH4H2PO4 + tritn x-100 y el segundo programa de temperaturas se obtuvieron las siguientes curvas:
Fig. 24 Curva de calibracin.
La calibracin est cerca de la linealidad,
sin embargo se har una nueva
calibracin para tratar de mejorar el coeficiente r2, ya que existe variabilidad en cuando a la repetibilidad de los resultados en cada uno de los puntos de la curva.
Se obtuvieron mejores resultados usando la solucin estndar con adicin de tritn x-100 y modificador de Fosfato de amonio con adicin de tritn. Estas condiciones proporcionan mejores resultados a diferencia del nitrato de magnesio, el Fosfato de
70
amonio y la solucin estndar con adicin de tritn x-100 garantizan la eliminacin de interferencias durante el anlisis.
Tabla 20. Resultados del anlisis. Estndar Concentracin Real g/dL 1 2 3 4 5 6 -.2764 1.918 4.409 6.221 8.042 9.687 Concentracin Terica g/dL 0 2 4 6 8 10 0 0.0905 0.1933 0.2681 0.3432 0.4111 Absorbancia
Existe una mejor reproducibilidad de los resultados lo cual favorece que el coeficiente de correlacin sea superior a 0.995.
71
Se uso una solucin estndar de 10 g/dL (b) con adicin de tritn x-100 y un modificador de matriz de NH4H2PO4 + Tritn.
Se puede observar que el coeficiente de correlacin mejor bastante. La curva fue realizada por el equipo. Y nuevamente se confirm que el tritn x-100 mejora el anlisis.
Tabla 21. Resultados del anlisis Estndar Concentracin Real g/dL 1 2 3 4 .0915 1.799 3.909 6.241 Concentracin Terica g/dL 0 2 4 6 0 0.0487 0.1088 0.1753 Absorbancia
72
5 6
8.139 9.821
8 10
0.2294 0.2773
Se repitieron las condiciones anteriores para el anlisis obteniendo as los siguientes resultados:
Se us una solucin de 10g/dL + Tritn. El coeficiente de correlacin es aceptable y cubre con lo requerido, sin embargo la curva fue realizada manualmente y se espera obtener mejores resultados haciendo la calibracin automatizada usando el segundo programa de temperaturas.
Tabla 22. Resultados del anlisis Estndar Concentracin Real g/dL BLANCO 1 2 -.0712 1.999 3.826 Concentracin Terica g/dL 0 2 4 0 0.0432 0.0813 Absorbancia
73
3 4 5
6.316 8.252 9.679
6 8 10
0.1333 0.1737 0.2034
Se utiliz una solucin estndar de 10 g/mL
y un modificador de matriz de
NH4H2PO4 + tritn x-100 siguiendo las recomendaciones de la Norma Oficial mexicana NOM-199-SSA1-2000, Salud Ambiental Niveles de plomo en sangre y acciones como criterios para proteger la salud de la poblacin expuesta no ocupacionalmente. La curva de calibracin se amplio a 100 g/dL en el limite superior de la curva.
La curva de calibracin se realiz con el equipo y se logro obtener una muy buena linealidad, se intentara hacer una nueva calibracin manualmente para corroborar la exactitud y precisin de las mediciones manualmente, la presente curva se us para determinar la concentracin de Pb en sangre en g/dL.
74
Los resultados obtenidos son los siguientes: Tabla 23. Resultados del anlisis Estndar Concentracin Real g/dL BLANCO 1 2 3 4 5 -0.438 3.574 11.27 25.36 51.29 73.95 Concentracin Terica g/dL 0 5 10 25 50 75 0 0.0093 0.0273 0.0601 0.1204 0.1732 Absorbancia
Como se puede observar al igual que mejor el coeficiente de correlacin, la reproducibilidad de los datos tambin es bastante buena.
Los resultados de concentracin de Pb son los siguientes: Tabla 24. Resultados de Plomo. Muestras Sexo y Edad de la Persona Concentracin de Adicin de Estndar en g/dL 1 2 3 4 5 6 Blanco Blanco Blanco Blanco Blanco Blanco 0 5 10 25 50 75 Concentracin obtenida despus del anlisis g/dL 0 8.78 17.61 28.64 55.66 81.38 0 175.6 176.1 114.56 111.32 108.50 % de Recobro
75
Solo se analizaron blancos fortificados (muestras sin sangre) y los porcentajes de recuperacin son satisfactorios de acuerdo a la adicin de estndar de cada muestra.
Debido a que logramos observar que con la curva de 0-75 g/dL
usando la
solucin estndar de 10 g/ml con adicin de tritn x-100 y el modificador de matriz de Fosfato de Amonio Monobsico con tritn x-100 obtenemos resultados definiremos los parmetros usados en esta curva como los ptimos para desarrollar la tcnica
Realizando la calibracin manualmente (es decir elaborando las diluciones de cada punto de la curva manualmente) se logr un coeficiente de correlacin el cual a comparacin de las otras curvas y con otros modificadores resulta ser el mejor usando el segundo programa de temperaturas, obteniendo as una r2 de 0.999243.
MENCIONAR
CUALES
SON
LAS
TEMPERATURAS
EMPLEADAS
EN
LAS
CONDICIONES RECOMENDADAS, AS COMO LAS DEL SEGUNDO PROGRAMA DE TEMPERATURAS Y PODER DISCUTIR SOBRE ELLAS.
76
Los parmetros usados para la calibracin y que resultan ptimos son los siguientes:
Solucin estndar de 10 g/ml con adicin de tritn x-100 (elaborada segn las recomendaciones de la Norma Oficial mexicana NOM-199-SSA1-2000, Salud Ambiental Niveles de plomo en sangre y acciones como criterios para proteger la salud de la poblacin expuesta no ocupacionalmente). Modificador de matriz de Fosfato de Amonio Monobsico con adicin de tritn x-100. Segundo programa de temperaturas usado en esta tcnica.
Resultados obtenidos: Tabla 25. Resultados del anlisis Estndar Concentracin Real g/dL BLANCO 1 2 3 4 5 -0.86 5.281 9.602 25.48 51.87 73.63 Concentracin Terica g/dL 0 5 10 25 50 75 0 0.0156 0.0266 0.0669 0.1339 0.1891 Absorbancia
La reproducibilidad y repetibilidad de los datos permanece con una tendencia aceptable y se consideran resultados satisfactorios para el anlisis.
77
Los resultados obtenidos fueron los siguientes: Tabla 26. Resultados de Plomo en Sangre. Muestras Sexo y Edad de la Persona Concentracin de Adicin de Estndar en g/dL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Blanco Mujer 20 Mujer 20 Mujer 25* Mujer 25* Mujer 27* Mujer 27* Mujer 27* Mujer 27* 0 0 50 0 50 0 50 0 50 Concentracin despus del anlisis en g/dL 0 1.805 57.55 1.381 57.74 1.932 60.15 2.825 60.33 0 0 111.49 0 112.718 0 116.436 0 115.01 % de Recobro
*la persona se encuentra en estado de gestacin
Se analiz 1 blanco y tres personas del sexo femenino, de las cuales 2 se encontraban en periodo de gestacin; se puede observar que existe un ligero incremento de la concentracin de Pb en la sangre de estas personas debido a que el plomo se almacena en hueso, y en este proceso biolgico el plomo es removido del hueso para despus pasar la torrente sanguneo. Aun as permanecen todava muy por debajo del lmite para mujeres embarazadas 10 g/dL.
78
5. CONCLUSIN
En el presente proyecto se logr determinar la concentracin de Pb en sangre, analizando un total de 4 blancos y 6 personas de las que 5, son del sexo femenino (dos en estado de gestacin) y 1 del sexo masculino; las personas del sexo femenino que se encontraban en periodo de gestacin presentaron ligeramente una concentracin ms alta de lo normal no excediendo el lmite permitido de Pb en sangre, segn la NORMA Oficial Mexicana NOM-199-SSA1-2000, Salud ambiental. Niveles de plomo en sangre y acciones como criterios para proteger la salud de la poblacin expuesta no ocupacionalmente.
Se determin que el Fosfato de Amonio resulta ser el mejor modificador de matriz obteniendo un coeficiente de correlacin de 0.999234 el cual fue el ms cercano a la linealidad; obteniendo tambin porcentajes de recuperacin en las muestras fortificadas del 20% lo cual es ptimo para el anlisis.
Los resultados obtenidos muestran que la tcnica de determinacin
de dicho
elemento es aceptable, confiable y sensible ya que los resultados obtenidos serian muy difcilmente cuantificables usando otra tcnica de absorcin atmica por las
concentraciones tan bajas que se presentan.
Es importante tratar de mantener los valores dentro del lmite permisible y evitar la aparicin de signos y daos irreversibles.
79
Los datos mostrados en el apartado 4. Resultados y Discusin son los ms representativos de todo el anlisis que se llevo a cabo, ya que la gran mayora no cumplan con el coeficiente mnimo de 0.995 no se incluyeron en el reporte.
6. BIBLIOGRAFA
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80
Autnoma de Zacatecas, Salud pblica, Niveles de plomo en la poblacin de alto riesgo y su entorno en San Ignacio, Fresnillo, Zacatecas, Mxico mayo/jun. 2006 8. Francisco Valds Perezgasga, Vctor M. Cabrera Morelos. La contaminacin por metales pesados en Torren, Coahuila, Mxico, primera edicin Torren, Coahuila, Septiembre de 1999. 9. Perkin Elmer, Analytical Methods for Atomic Absorption Spectrometry, 1964-2000, pgs. 3-5, 96. 10. Harold F. Walton y Jorge Reyes, Anlisis Qumico e Instrumental Moderno, Ed. Revert S.A., 2005. 11. Douglas A Skoog, Donald M. West, F. James Holler y Stanley R. Crouch, Fundamentos de Qumica Analtica Octava Edicin, Ed. Thompson. Pgs. 729735,805-807. 12. Douglas A. Skoog, F. James Holler y Timothy A. Nieman, Principios de Anlisis Instrumental 5 Edicin, Ed. Mc Graw Hill, 2001, pgs.124-126, 223-225, 227-235, 238,239. 13. Dr. Guillermo Pandolfi. Aplicaciones de la Absorcin Atmica. Laboratorio Bromatolgico Laboratorio Industrial. Abril 2010. 14. Ing. Sandra Patricia Flores Esquivel. Estandarizacin de los mtodos analticos para la determinacin de metales pesados en agua para uso y consumo humano, aguas purificadas, hielos por Pg. 27. 15. Perkin Elmer, Atomic Spectrometry The THGA Graphite Furnace Techniques and Recommended Conditions, 1991-1999, Pgs. 2-4, 2-22, 7-41. 16. Universidad Autnoma de Chihuahua. Espectrometra de Absorcin Atmica. Facultad de Ciencias Qumicas. 17. Kenneth A. Robinson y Judith F Robinson, Anlisis instrumental, Ed. Prentice Hall, 2001. Espectrofotometra Atmica. Tesina. Enero 2005.
81
18. NORMA Oficial Mexicana NOM-199-SSA1-2000, Salud ambiental. Niveles de plomo en sangre y acciones como criterios para proteger la salud de la poblacin expuesta no ocupacionalmente.
7. ANEXOS
7.4.
RECOMENDACIONES SEGN EL MANUAL DEL EQUIPO PARA Pb.
Longitud de onda: 283.3nm Slit bajo: 0.7nm Modificador de matriz:

0.050mg NH4H2PO4 + 0.003 mg Mg(NO3)2 0.005mg Pd + 0.003 mg Mg(NO3)2 usando una temperatura de pretratamiento de 1000C
Lmpara: Descarga sin electrodo. Temperatura de pretratamiento en C: 850 Temperatura de atomizacin en C: 1500 Tiempo de atomizacin: 3 seg. Variacin: 20 %
Tabla 27. Parmetros Recomendados para Plomo Longitud de onda (nm) (nm) 283.3 0.7 0.43 Slit Ruido relativo Concentracin caracterstica (mg/L) 0.45 Concentracin caracterstica check (mg/L) 20.0 20.0 Rango lineal
82
217.0 205.3 202.2 261.4 368.3 364.0
0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7
1.0 1.4 1.8 0.35 0.40 0.33
0.19 5.4 7.1 11.0 27.0 67.0
9.0 250.0 350.0 500.0 1200.0 3000.0
20.0 -------------------------------
Precaucin: este elemento es bastante toxico y debe ser manejado con mucho cuidado.
7.5.
NORMA
OFICIAL
MEXICANA
NOM-199-SSA1-2000,
SALUD
AMBIENTAL. NIVELES DE PLOMO EN SANGRE Y ACCIONES COMO CRITERIOS PARA PROTEGER LA SALUD DE LA POBLACIN EXPUESTA NO OCUPACIONALMENTE.
Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.Secretara de Salud. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-199-SSA1-2000, SALUD AMBIENTAL. NIVELES DE PLOMO EN SANGRE Y ACCIONES COMO CRITERIOS PARA PROTEGER LA SALUD DE LA POBLACION EXPUESTA NO OCUPACIONALMENTE. ERNESTO ENRIQUEZ RUBIO, Presidente del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, con fundamento en los artculos 39 de la Ley Orgnica de la Administracin Pblica Federal; 4 de la Ley Federal de Procedimiento Administrativo; 3o. fraccin XIII, 13, apartado A fraccin l, 116 y 118 fracciones l y VII de la Ley General de Salud; 41, 43 y 47 fraccin IV de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin; 28 y 34 del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin; 2 literal C fraccin II, 34 y 36 fraccin V del Reglamento Interior de la Secretara de Salud, y 2 fracciones VII y VIII, 7 fraccin XVI, y 12 fracciones I y VI del Decreto por el que se crea la Comisin Federal para la Proteccin contra Riesgo s
83
Sanitarios, me permito ordenar la publicacin en el Diario Oficial de la Federacin de la siguiente: Norma Oficial Mexicana NOM-199-SSA1-2002, Salud Ambiental. Niveles de plomo en sangre y acciones como criterios para proteger la salud de la poblacin expuesta no ocupacionalmente. CONSIDERANDO Considerando con fecha 30 de mayo de 2000, en cumplimiento del acuerdo del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, y lo previsto en el artculo 47 fraccin I de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, se public en el Diario Oficial de la Federacin el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana, a efecto de que dentro de los siguientes sesenta das naturales posteriores a dicha publicacin, los interesados presentaran sus comentarios a dicho Comit. Que con fecha previa, fueron publicadas en el Diario Oficial de la Federacin las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comit, en trminos del artculo 47 fraccin III de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin. Que en atencin a las anteriores consideraciones, contando con la aprobacin del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, se expide la siguiente: NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-199-SSA1-2000, SALUD AMBIENTAL. NIVELES DE PLOMO EN SANGRE Y ACCIONES COMO CRITERIOS PARA PROTEGER LA SALUD DE LA POBLACION EXPUESTA NO OCUPACIONALMENTE PREFACIO En la elaboracin de la presente Norma participaron las siguientes dependencias, instituciones, organismos y personas. SECRETARIA DE SALUD.
84
Comisin Federal para la Proteccin contra Riesgos Sanitarios Direccin General de Salud Ambiental Laboratorio Nacional de Salud Pblica Subsecretara de Prevencin y Proteccin de la Salud Direccin General de Promocin para la Salud Centro Nacional de Vigilancia Epidemiolgica Instituto Nacional de Perinatologa Instituto Nacional de Neurologa y Neurociruga Manuel Velasco Surez Instituto Nacional de Salud Pblica Centro Nacional de Salud Ambiental SECRETARIA DEL TRABAJO Y PREVISION SOCIAL Direccin General de Seguridad e Higiene en el Trabajo SECRETARIA DE DESARROLLO SOCIAL Fondo Nacional para el Fomento de las Artesanas INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL Coordinacin de Salud en el Trabajo INSTITUTO DE SEGURIDAD Y SERVICIOS SOCIALES DE LOS TRABAJADORES DEL ESTADO Jefatura de Servicios de Seguridad e Higiene en el Trabajo PETROLEOS MEXICANOS Gerencia de Regulacin y Desarrollo Mdico Instituto Mexicano del Petrleo Subdireccin de Proteccin Ambiental. Gerencia Ciencias del Ambiente UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO Facultad de Qumica
85
UNIVERSIDAD JUAREZ DEL ESTADO DE DURANGO Facultad de Medicina UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON Facultad de Medicina Departamento de Farmacologa y Toxicologa Centro de Informacin Toxicolgica UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIHUAHUA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE SAN LUIS POTOSI Facultad de Medicina Laboratorio de Toxicologa Ambiental HOSPITAL ABC, I.A.P. INSTITUTO DE SALUD, AMBIENTE Y TRABAJO SERVICIOS INDUSTRIALES PEOLES, S.A. DE C.V. ASOCIACION NACIONAL DE FABRICANTES DE ACUMULADORES, A.C. CORPORACION PIPSA, S.A. DE C.V. ELECTRICA AUTOMOTRIZ OMEGA, S.A. DE C.V. ENERTEC MEXICO, S. DE R.L. DE C.V. GRUPO IMSA, S.A. DE C.V. INDUSTRIAL MINERA MEXICO, S.A. DE C.V. INDUSTRIAL TECNICA RAYO, S.A. DE C.V. PYOSA, S.A. DE C.V. ZINC NACIONAL, S.A.
86
DR. MANUEL VELASCO GUTIERREZ
INDICE 0. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Introduccin Objetivo Campo de aplicacin Referencias Definiciones Smbolos y abreviaturas Especificaciones Acciones bsicas de proteccin Mtodos de prueba Bibliografa Concordancia con normas internacionales y mexicanas Observancia de la norma Vigencia
Apndice A Apndice B 0. Introduccin El plomo (Pb) es un metal pesado que se encuentra extensamente distribuido en la Tierra. Las propiedades fsico-qumicas de este elemento y de los compuestos que de l
87
se derivan han favorecido la elaboracin de una gran variedad de productos, siendo uno de los metales que ms se han utilizado a lo largo de la historia. Actualmente las fuentes ms usuales de exposicin al plomo son las emisiones de las industrias
minerometalrgicas y metalmecnicas, los establecimientos recicladores de bateras. Los pigmentos para pinturas, la produccin y el uso alfarera vidriada para la preparacin y almacenamiento de alimentos, que es considerada la principal fuente de exposicin a plomo en Mxico. Algunos remedios tradicionales como el azarcn (usado como tratamiento para la diarrea), tienen un alto contenido de plomo y han producido intoxicacin en nios mexicanos. La absorcin del plomo depende tambin de forma importante del estado nutricional del individuo, siendo mayor si la dieta es pobre en calcio, hierro y/o protenas. El plomo absorbido se distribuye a tejidos blandos (hgado, rin, msculos y cerebro) y en exposicin crnica puede almacenarse en huesos y dientes. Ciertos estados fisiolgicos que causan movilizacin de calcio de huesos y dientes pueden ocasionar movilizacin de plomo a la sangre en el feto. El mtodo ms comn para conocer los niveles de plomo en el organismo es la medicin de la concentracin de plomo en sangre comnmente expresada en microgramos de plomo por decilitro (g/dl). La exposicin a este metal, dependiendo de las concentraciones de plomo en sangre y en tiempos de exposicin, puede provocar dao hematopoytico, inmunolgico, esqueltico, renal y en los sistemas nervioso central y perifrico. El riesgo de ingestin de plomo aumenta en los nios por su conducta exploratoria y sus juegos, que los hace tener mayor contacto con suelos contaminados, aunado a la mayor absorcin que ocurre en ellos comparada con los adultos.
88
El envenenamiento se manifiesta en un cuadro sintomtico determinado en los adultos por clicos, anemia, dolor de cabeza, fatiga, neuropata perifrica: Los nios como el grupo con mayor susceptibilidad muestran principalmente deficiencia en el desarrollo psicomotor, intelectual y de aprendizaje, y en los casos de intoxicacin aguda se presentan vmitos, anorexia, convulsiones, coma y encefalopata. El plomo ocasiona alteraciones en la biosntesis del grupo hemo por la inhibicin de enzimas que participan en su sntesis, ocasionando aumento en los niveles del cido 5-aminolevulnico, coproporfirinas y zinc protoporfirinas y puede ocasionar tambin dao renal a nivel glomerular o en la funcin renal. El meta-anlisis efectuado por Schwartz seala que el incremento de plomo en sangre de 10 a 20 g/dl estaba asociado con un decremento de 2.6 puntos de Coeficiente Intelectual, teniendo una tendencia ms pronunciada en niveles abajo de 15 g. El metaanlisis efectuado por Pockock S.J. seala que el duplicar la carga corporal de 10 a 20 g/dl se encuentra asociado a una reduccin de la escala completa del Coeficiente Intelectual de 1 a 2 puntos. Ambas revisiones no encuentran un nivel de umbral. Adicionalmente, la exposicin a plomo puede tener efectos en la reproduccin. Las mujeres embarazadas expuestas a niveles altos pueden tener hijos con menor peso al nacimiento, as como mayor riesgo de aborto espontneo, aun en niveles de plomo relativamente bajos. 1. Objetivo Esta norma oficial mexicana establece los niveles de plomo en sangre y las acciones bsicas de prevencin y control en poblacin expuesta no ocupacionalmente. 2. Campo de aplicacin Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para los prestadores de servicios de salud, as como para los laboratorios que realicen pruebas para la determinacin de plomo en sangre.
89
Asimismo, la presente Norma es aplicable como criterio de referencia en el desarrollo de programas de evaluacin e investigacin de los riesgos y daos a la salud de la poblacin, originados por la contaminacin ambiental debida al plomo. 3. Referencias NOM-087-ECOL-1995, Establece los requisitos para la separacin, envasado, almacenamiento, recoleccin, transporte, tratamiento y disposicin final de los residuos peligrosos biolgico-infecciosos que se generan en establecimientos que presten atencin mdica. NOM-017-SSA1-1994, Para la Vigilancia Epidemiolgica.
4. Definiciones Para los efectos de esta Norma se entiende por: 4.1. Accin o Acciones, a las medidas bsicas que se aplicarn para proteger la salud de la poblacin expuesta a plomo. 4.2. Autoridad sanitaria, a la Secretara de Salud y a los servicios de salud de las entidades federativas. 4.3. Coeficiente de variacin, a la desviacin estndar dividida entre el promedio aritmtico por cien. 4.4. Electroqumica, a la tcnica analtica en la cual la corriente que es generada mientras una especie qumica es oxidada o reducida; se usa para determinar la concentracin de la misma. 4.5. Exactitud, a la concordancia entre un valor obtenido experimentalmente y el valor de referencia.
90
4.6. Factores de Riesgo, a la existencia de caractersticas que aumentan la probabilidad de que aparezca un dao o una enfermedad en el individuo expuesto (edad, sexo, ocupacin, estado nutricional, lactancia, embarazo, etc.). 4.7. Fuente de exposicin, al utensilio, medio o establecimiento que pueda contaminar con plomo el ambiente o los alimentos. 4.8. Indicadores biolgicos de dao, a la alteracin bioqumica funcional o estructural que resulta de la reaccin del organismo a la exposicin al plomo (cido delta-aminolevulnico urinario, protoporfirina zinc en sangre y deshidratasa aminolevulnico para nios). 4.9. Lmite de cuantificacin, a la menor concentracin de plomo en una muestra que puede ser determinada con precisin y que corresponde al valor de diez veces la desviacin estndar relativa de la lectura del blanco. 4.10. Lmite de deteccin, a la mnima concentracin del analto en una muestra, que corresponde a tres veces la desviacin estndar de la lectura del blanco adecuado con una probabilidad del 99.87%. 4.11. Linealidad, al intervalo en el cual la respuesta instrumental es proporcional a la concentracin del analito de inters, cuya representacin es una recta. 4.12. Mdico especialista, al mdico con reconocimiento o ttulo de especialidad otorgado por institucin oficial educativa superior o de salud, con experiencia en el manejo de intoxicaciones con plomo. 4.13. Modificador de matriz, al reactivo qumico que se adiciona a las muestras y a los estndares para que se incremente la volatilidad de la matriz; estabiliza el analito de inters, transformndolo en un compuesto definido de propiedades conocidas; reduce interferencias espectrales y qumicas; permite establecer condiciones adecuadas de pretratamiento trmico y el uso de temperaturas ms altas en este paso, con lo cual se obtiene mejor separacin de los materiales asociados, mxima eliminacin de
91
interferencias y evita la aparicin de picos mltiples del analto de inters durante la atomizacin. 4.14. Nivel de plomo en sangre (NPS), al valor de la concentracin de plomo en sangre venosa expresada en microgramos por decilitro. 4.15. Notificacin, al procedimiento que obliga a los prestadores de servicios de salud, investigadores y laboratorios que realizaron el anlisis a informar por escrito los resultados del monitoreo de plomo en sangre. 4.16. Oxidacin, a la prdida de electrones de un elemento o compuesto. 4.17. Plomo, al elemento metlico que en su forma natural se encuentra como mineral, se extrae del subsuelo y se caracteriza por ser de color azul grisceo, maleable, dctil; y que puede formar compuestos capaces de contaminar el ambiente y los alimentos. Es resistente al cido sulfrico y soluble en cidos orgnicos (cido actico). 4.18. Precisin de un mtodo analtico, a la cercana de resultados sucesivos, obtenidos con el mismo mtodo o material, bajo las mismas condiciones. Usualmente se expresa en trminos del coeficiente de variacin. 4.19. Reduccin, a la ganancia de electrones de un elemento o compuesto. 4.20. Valor criterio, a las distintas concentraciones de plomo en sangre que indican las cantidades a las cuales basndose en la presuncin de efectos tempranos/subclnicos y posteriormente, adversos-distintas fases de prevencin han de realizarse. 4.21. Vigilancia epidemiolgica, al estudio permanente y dinmico del estado de salud, as como de sus condicionantes, en la poblacin. 5. Smbolos y abreviaturas 5.1 g/dl microgramos de plomo por decilitro de sangre (0.0483 mol de plomo/l de sangre), es la unidad de concentracin de plomo en sangre utilizada en esta Norma.
92
5.2 NSP nivel de plomo en sangre, al valor de la concentracin de plomo en sangre venosa expresada en microgramos por decilitro. 5.3 % /ml de sangre, porcentaje por mililitro de sangre 5.4 ml mililitros de sangre 5.5 m cm -1.miliohms por centmetro, medida de conductividad 5.6 nm nanmetro 5.7 l microlitro 5.8 / entre 5.9 C grados Celsius 5.10 % por ciento 5.11 g/ml gramos por mililitro
6. Especificaciones Los valores criterios que se utilizarn como referencia para determinar los niveles de concentracin de plomo en sangre son los siguientes: 6.1 El valor criterio para la concentracin de plomo en sangre en nios, mujeres embarazadas y en periodo de lactancia es de 10 g/dl. 6.2 El valor criterio para la concentracin de plomo en sangre para el resto de la poblacin expuesta no ocupacionalmente es de 25 g/dl. 6.3 Los prestadores de servicios de salud e investigadores en el campo de la salud y los laboratorios que realicen pruebas para la determinacin de plomo en sangre, deben
93
notificar a las autoridades sanitarias todos los casos que presenten niveles de plomo en sangre por arriba de los establecidos en los numerales 5.1 y 5.2. 6.4 La atencin mdica ser proporcionada por las instituciones mdicas de los sectores pblicos y privados del pas. 6.5 Las acciones de vigilancia epidemiolgica las realizar la autoridad sanitaria local, regional o estatal que corresponda. 6.6 Las acciones de promocin de la salud, fomento sanitario y atencin mdica debern ser supervisadas por el personal de salud local del sector pblico. 6.7 Toda persona que sea sometida a un estudio de plomo en sangre debe ser informada por el mdico o institucin tratante del resultado del estudio de la muestra.
7. Acciones bsicas de proteccin 7.1 Ver tabla 1. Acciones bsicas de proteccin en nios menores de 15 aos, mujeres embarazadas y en periodo de lactancia. 7.2 Ver tabla 2. Acciones bsicas de proteccin para el resto de la poblacin no expuesta ocupacionalmente mayor de 15 aos y excepto mujeres embarazadas y en periodo de lactancia. Tabla1. Acciones bsicas de proteccin en nios menores de 15 aos,
mujeres embarazadas y en periodo de lactancia Nivel sangre de plomo en Acciones Nios menores de 3 aos Acciones Nios de 3 a 15 aos Acciones Mujeres embarazadas y en periodo de lactancia < 10 g/dl No se establece accin No se establece accin No se establece accin
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Categora I 10-14 Categora II
especfica
especfica la prueba
especfica de Repetir la prueba de plomo
g/dl Repetir la prueba de plomo Repetir en sangre venosa
al plomo en sangre venosa en sangre venosa hasta
menos cada 3 meses, y al menos cada 3 meses, y que termine el periodo de elaborar historia clnica con elaborar historia clnica lactancia nfasis en los con nfasis en materna al
los menos cada 3 meses, despus de elaborar
antecedentes ambientales.
antecedentes
Notificar a la autoridad ambientales. sanitaria.
historia clnica, con nfasis los antecedentes
Notificar a la autoridad en
Informar a la familia acerca sanitaria. de la exposicin ambiental Informar a plomo, promover a la
ambientales y laborales. familia Notificar a la autoridad
y acerca de la exposicin sanitaria. a y plomo, Informar a la familia acerca fomentar de la exposicin ambiental plomo, promover y
fomentar buenos hbitos ambiental higinicos y alimenticios. promover
Hacer el seguimiento del buenos hbitos higinicos a caso. y alimenticios.
fomentar buenos hbitos
Hacer el seguimiento del higinicos, alimenticios, as caso. como medidas personales para reducir la exposicin al plomo. Hacer el seguimiento del caso. Dar binomio madre-hijo. 15-24 Categora III g/dl Repetir la prueba de plomo Repetir en sangre cada del venosa, 3 la prueba de Repetir la prueba de plomo seguimiento al
al plomo en sangre venosa, en sangre venosa hasta
menos despus
meses al menos cada 3 meses que termine el periodo de primer despus del primer lactancia materna, al
95
resultado hasta que el resultado hasta que el menos NPS sea < 10 g/dl y NPS sea < 10 g/dl y despus
cada del
meses primer
elaborar historia clnica con elaborar historia clnica resultado hasta que el nfasis en los con nfasis en los NPS sea < 10 g/dl y elaborar historia clnica con nfasis en los
antecedentes ambientales.
antecedentes
Realizar una evaluacin ambientales. mdica determinar atencin. Prescribir integral el tipo
para Realizar una evaluacin antecedentes ambientales de mdica determinar integral el tipo para y laborales. de Realizar una evaluacin mdica suplementos determinar integral el tipo para de
suplementos atencin.
alimenticios: hierro, calcio Prescribir
u otros, con base a la alimenticios: hierro, calcio atencin. evaluacin mdica integral. u otros, con base a la Prescribir Determinar el NPS de los evaluacin convivientes menores de integral. 15 aos, suplementos
mdica alimenticios: hierro, calcio u otros, con base a la
mujeres Determinar el NPS de los evaluacin mdica integral. seguimiento al
embarazadas y en periodo convivientes menores de Dar de lactancia. La autoridad 15 aos,
mujeres binomio madre-hijo. y en Determinar el NPS de los convivientes menores de aos, mujeres
sanitaria embarazadas
realizar
estudios
para periodo de lactancia. autoridad
identificar rutas y vas de La exposicin.
sanitaria 15
realizar
estudios para embarazadas y en periodo
Notificar a la autoridad identificar rutas y vas de de lactancia. sanitaria. exposicin. La autoridad sanitaria para
En el caso de identificar la Notificar a la autoridad realizar o las fuentes la de sanitaria.
estudios
identificar rutas y vas de
exposicin, sanitaria
autoridad En el caso de identificar la exposicin. las o las fuentes de Notificar a la autoridad
gestionar
medidas para su control o exposicin, la autoridad sanitaria.
96
eliminacin.
sanitaria gestionar las En el caso de identificar la las fuentes la de
En el caso de utensilios medidas para su control o o domsticos como exposicin, sanitaria identificados eliminacin. fuente la
exposicin,
autoridad las
de En el caso de utensilios sanitaria
gestionar
autoridad domsticos al como
identificados medidas para su control o fuente de eliminacin.
sealar
padre/madre o tutor cules exposicin, la autoridad En el caso de utensilios son los que se deben sanitaria eliminar. sealar o al domsticos tutor como identificados fuente la de
padre/madre
Hacer el seguimiento del cules son los que se exposicin, caso. deben eliminar.
autoridad
sanitaria sealar cules
Informar a la familia acerca Hacer el seguimiento del son los que se deben de la exposicin ambiental caso. a plomo, promover y Informar a la familia eliminar.
fomentar buenos hbitos acerca de la exposicin higinicos y alimenticios. ambiental promover a y plomo, fomentar
buenos hbitos higinicos y alimenticios. Hacer el seguimiento del caso. Informar a la familia acerca de la exposicin ambiental a plomo, promover y
fomentar buenos hbitos higinicos y alimenticios. 25-44 Categora IV g/dl Repetir la prueba de plomo Repetir pruebas de plomo Repetir pruebas de plomo en sangre venosa en sangre venosa cada en sangre venosa cada
mensualmente, hasta que dos meses, hasta que el mes, hasta que el NPS
97
el NPS sea menor de 25 NPS sea menor de 25 sea menor de 25 g/dl o g/dl. g/dl. termine el periodo de
Realizar una evaluacin Realizar una evaluacin lactancia materna. mdica integral por mdico mdica especialista, considerando mdico integral por Realizar una evaluacin
especialista, mdica integral por mdico
indicadores biolgicos de considerando indicadores especialista, considerando dao, para determinar tipo biolgicos de dao, para indicadores biolgicos de de atencin (manejo de determinar caso). Prescribir atencin suplementos caso). tipo (manejo de dao, para determinar tipo de de atencin (manejo de caso). suplementos Prescribir suplementos
alimenticios: calcio, hierro Prescribir
u otros, con base a la alimenticios: calcio, hierro alimenticios: calcio, hierro evaluacin mdica integral, u otros, con base a la u otros, con base a la a juicio del mdico tratante. evaluacin Notificar inmediatamente el integral, caso a la a mdica evaluacin juicio del mdica integral, a juicio del mdico tratante.
autoridad mdico tratante.
sanitaria.
Notificar inmediatamente Notificar inmediatamente el a la autoridad
Determinar el NPS de los el caso a la autoridad caso convivientes. sanitaria.
sanitaria.
La autoridad sanitaria debe Determinar el NPS de los Determinar el NPS en identificar la o las fuentes convivientes. de exposicin, y gestionar La las medidas para autoridad cordn umbilical del
sanitaria producto de la gestacin o
su debe identificar la o las al nio lo ms pronto fuentes de exposicin, y posible. las medidas Determinar el NPS de los o convivientes. La autoridad sanitaria debe sanitaria identificar la o las fuentes estudios de exposicin, y gestionar
control o eliminacin.
La autoridad sanitaria debe gestionar realizar estudios para para su
control
identificar rutas y vas de eliminacin. exposicin. La autoridad realizar
En el caso de utensilios debe
98
domsticos como exposicin, sanitaria
identificados para identificar rutas y las fuente la de vas de exposicin.
medidas
para
su
control o eliminacin.
autoridad En el caso de utensilios La autoridad sanitaria debe al domsticos identificados realizar fuente estudios para
sealar
padre/madre o tutor cules como
de identificar rutas y vas de
son los que se deben exposicin, la autoridad exposicin. eliminar. sanitaria sealar o al En el caso de utensilios tutor domsticos identificados fuente la de
Hacer el seguimiento del padre/madre caso.
cules son los que se como exposicin,
Informar a la familia acerca deben eliminar.
autoridad
de la exposicin ambiental Hacer el seguimiento del sanitaria sealar cules a plomo, promover y caso. a la son los que se deben familia eliminar.
fomentar buenos hbitos Informar higinicos y alimenticios.
acerca de la exposicin Hacer el seguimiento del ambiental promover a y plomo, caso. fomentar Informar a la familia acerca
buenos hbitos higinicos de la exposicin ambiental y alimenticios. a plomo, promover y
fomentar buenos hbitos higinicos y alimenticios. Dar binomio madre-hijo. 45-69 Categora V g/dl Adems de lo sealado en la categora IV. Adems de lo sealado en la seguimiento al
Notificar inmediatamente el caso, por el medio de categora lV. comunicacin ms rpido, a la autoridad sanitaria. Notificar inmediatamente el por el medio de
Referir el caso a mdico especialista dentro de las 48 caso, horas siguientes.
comunicacin ms rpido, a
Repetir prueba de plomo en sangre dentro de las 48 la autoridad sanitaria.
99
horas siguientes, con el fin de confirmar el NPS.
Referir el caso a mdico
Repetir las pruebas de plomo en sangre venosa al especialista dentro de las 48 menos cada mes hasta que el NPS sea menor a 45 horas siguientes. g/dl. Repetir prueba de plomo en
Es necesario el tratamiento farmacolgico con sangre dentro de las 48 agentes quelantes para disminuir los NPS por debajo horas siguientes, con el fin de 45 g/dl, bajo prescripcin y vigilancia por mdico de confirmar el NPS. especialista. Repetir las pruebas de
Referir al servicio de trabajo social, para seguimiento, plomo en sangre venosa al si es necesario. menos cada mes hasta que el NPS sea menor a 45 g/dl. La autoridad sanitaria debe identificar en el menor
tiempo posible la o las fuentes de exposicin, as como controlarla o eliminarla en su caso. Durante gestacin administrar quelante. Al trmino de la gestacin, valorar por mdico el no periodo se de debe
tratamiento
especialista la aplicacin del tratamiento farmacolgico y en caso necesario prescribir y vigilar tratamiento con quelantes para
agentes
100
disminuir los NPS por debajo de 45 g/dl. Referir a servicio de trabajo social, para seguimiento, si es necesario >70 Categora VI g/dl Adems de lo sealado en la categora V Adems de lo sealado en la
Repetir inmediatamente prueba de plomo en sangre, categora V. con el fin de confirmar el NPS. Una mujer en este nivel se considerar como
Un individuo en este nivel se debe considerar como debe CASO
DE
EMERGENCIA
PARA
ATENCION CASO DE EMERGENCIA PARA ATENCION MEDICA
MEDICA INMEDIATA.
Hospitalizar, evaluar por mdico especialista y INMEDIATA. empezar INMEDIATAMENTE el tratamiento Hospitalizar, mdico empezar INMEDIATAMENTE el evaluar por y
farmacolgico correspondiente. El tratamiento debe aplicarse en el hospital.
especialista
tratamiento correspondiente. El tratamiento debe aplicarse en el hospital. Repetir, al menos
semanalmente, la prueba de plomo en sangre venosa, hasta que la concentracin alcance la categora V. Para mujeres embarazadas el mdico especialista en coordinacin con el grupo gineco-obsttrico deben
evaluar la conveniencia de
101
iniciar
el
tratamiento
especfico, considerando la relacin riesgo-beneficio
(evaluacin de fetotoxicidad) seleccionando medicamento apropiado. el ms
Tabla2. Acciones bsicas de proteccin para el resto de la poblacin no expuesta ocupacionalmente mayor de 15 aos y excepto mujeres embarazadas y en periodo de lactancia Nivel de plomo en Acciones sangre Menor de 25 g/dl Informar a la poblacin femenina sobre los factores de riesgo por Categora I 25-44 Categora II exposicin a plomo. g/dl Notificar el caso a la autoridad sanitaria. Proporcionar a la familia educacin sanitaria respecto a fuentes de exposicin al plomo y nutricin. Repetir prueba de plomo en sangre al menos cada seis meses hasta alcanzar concentracin de la categora I. La autoridad de salud realizar la investigacin para identificar las fuentes y rutas de exposicin. Si los niveles persisten, la autoridad sanitaria debe gestionar ante la autoridad competente el control o eliminacin de la fuente de exposicin. Hacer historia clnica con nfasis en los antecedentes ambientales y ocupacionales. Realizar actividades de promocin de la salud y fomento sanitario
102
dirigidas
reducir
la
exposicin
a plomo. Prescribir dieta especial o suplementos alimenticios: calcio, hierro u otros, con base a la evaluacin mdica integral. Realizar determinacin de niveles de plomo en sangre a los convivientes. 45-69 Categora III g/dl Adems de lo sealado en la categora II; Repetir la prueba de plomo en sangre cada mes hasta que el NPS sea menor de 45 g/dl. Realizar valoracin mdica integral por mdico especialista para determinar tipo de manejo mdico e higinico-nutricional. Hacer seguimiento mdico integral. >70 Categora IV g/dl Adems de lo sealado en la categora III; Efectuar valoracin por mdico especialista, quien decidir la prescripcin de tratamiento farmacolgico con agentes quelantes y vigilar su aplicacin hasta que el NPS sea menor de 70 g/dl. Considerar el caso para atencin mdica inmediata.
8. Mtodos de prueba Los mtodos de prueba para la determinacin de plomo en sangre son los que se indican en el Apndice A de esta Norma, los cuales deben ser utilizados por los laboratorios que realicen anlisis para la determinacin de plomo en sangre y emitir los resultados de laboratorio de acuerdo al Apndice B, as como notificar a la autoridad sanitaria los resultados de las pruebas.
9. Bibliografa 9.1 Programa Nacional Salud 2001-2006. 9.2 (WHO). International Programme on Chemical Safety. Environmental Health Criteria 165. Inorganic lead. Geneva World Health Organization, 1995.
103
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104
9.13 Landrigan-PJ. Tood-AC. Lead poisoning. West-J-Med. 1994. Aug; 16(2):153-9. 9.14 Mushak-P. Crocetti-AF. Determination of numbers of lead exposure american children as a function of lead source: integrated summary of a report to the U.S. Congress on chilhood lead poisoning. Environ-Res. 1989 Dec.; 50(2):210-29. 9.15 Albert L. Introduccin a la Toxicologa Ambiental. Centro Panamericano de Ecologa Humana y Salud. (ECO-OPS/OMS). Metepec. Edo. de Mxico. Mxico, 1997. 9.16 Romieu Isabelle, Eduardo Palazuelos, Mauricio Hernndez Avila, Camilo Ros, Ilda Muoz, Carlos Jimnez and Gisela Cahero. Sources of Lead Exposure in Mexico City. Environmental Health Perspectives, Volume 102, Number 4, April 1994. 9.17 Gonzlez-Cosso Teresa, PhD; Karen E. Peterson, ScD, RD; Luz-Elena Sann, MD, MPHS; Eugenia Fishbein, BS; Eduardo Palazuelos, MD; Antonio Aro, PHD; Mauricio Hernndez-Avila, MD, ScD; and Howard Hu, MD, ScD. Decrease in Birth Weight in Relation to Maternal Bone-Lead Burden. Pediatrics Vo. 100, No. 5 November 1997. 10. Concordancia con normas internacionales y mexicanas Esta Norma es equivalente parcialmente con los criterios internacionales para las concentraciones de plomo en sangre en nios y adultos y acciones bsicas de proteccin a la salud, establecidos por el Centro para el Control y Prevencin de Enfermedades (CDC), la Agencia para Sustancias Txicas y Registro de Enfermedades (ATSDR), la Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos de Amrica (EPA), la Administracin de Drogas y Alimentos de E.U.A. (FDA), y la Organizacin Mundial de la Salud (OMS). 11. Observancia de la Norma La vigilancia del cumplimiento de esta Norma corresponde a la Secretara de Salud y a los gobiernos de los estados, en sus respectivos mbitos de competencia. 12. Vigencia
105
9.1 La presente Norma entrar en vigor al da siguiente de su publicacin en el Diario Oficial de la Federacin. Mxico, D.F., a 17 de mayo de 2002.- El Presidente del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, Ernesto Enrquez Rubio.Rbrica.
APENDICE A METODOS DE PRUEBA PARA LA DETERMINACION DE PLOMO EN SANGRE ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA CON HORNO DE GRAFITO, CORRECTOR DE FONDO, MODIFICADOR DE MATRIZ Y PLATAFORMA DE LVOV; Y VOLTAMPEROMETRIA DE REDISOLUCION ANODICA 1. Toma de la muestra Para que los resultados de las determinaciones de plomo en sangre sean confiables, la coleccin y el manejo de muestras son factores importantes que hay que controlar adecuadamente, por lo que la muestra debe ser colectada por puncin venosa en un lugar cerrado fuera del rea de exposicin y con las condiciones de higiene adecuadas para evitar la contaminacin de la misma. La sangre humana se debe manejar cuidadosamente considerndola como fuente potencial de enfermedades infectocontagiosas (hepatitis, SIDA, entre otras, por lo cual se deben cumplir las medidas de seguridad e higiene para el manejo y disposicin de materiales, sustancias y residuos biolgico, infecciosos (NOM-087-ECOL-1994). 1.1 Material requerido:
106
Todo el material utilizado en el desarrollo de este mtodo debe ser exclusivo para esta finalidad y no debe ser empleado para otras determinaciones, para disminuir la probabilidad de contaminacin por fuentes externas. 1.1.1 Tubos libres de plomo de 1 ml de capacidad con anticoagulante (para nios menores de 1 ao). 1.1.2 Tubos de extraccin de sangre al vaco de 3 a 10 ml de capacidad, que contengan anticoagulante. 1.1.3 Anticoagulantes en polvo: K3EDTA (EDTA al 15%/ml de sangre), Na2EDTA (1.5 mg de EDTA/ml de sangre), heparina sdica o de litio (143 unidades USP). Se recomienda usar EDTA-Tripotsico y disdico debido a que la heparina permite la formacin de microcogulos en muestras almacenadas. Si la persona sujeta a anlisis est bajo tratamiento farmacolgico con agentes quelantes, se debe obtener la muestra cinco das despus de haber tomado la ltima dosis. nicamente para el mtodo de prueba de voltamperometra de redisolucin andica. En caso de utilizar material con EDTA, se requiere que el tubo sea llenado por lo menos a dos tercios de su capacidad al tomar la muestra, para que la concentracin del anticoagulante sea la indicada. 1.1.4 Agujas estriles para toma mltiple 1.1.5 Adaptador o sujetador de plstico para los tubos al vaco. 1.1.6 Torniquete o liga de hule flexible. 1.1.7 Torundas de algodn. 1.1.8 Alcohol etlico 96.
107
1.1.9 Producto limpiador dermatolgicamente probado con eficiencia demostrada para eliminar plomo en piel. 1.1.10 Recipiente adecuado para el desecho de material con residuos peligrosos, biolgico-infecciosos (NOM-087-ECOL-1994). 1.1.11 Recipientes, contenedores trmicos o hieleras con refrigerantes en su interior 1.1.12 Etiquetas adhesivas 1.1.13 Charola de plstico o acero inoxidable 1.1.14 Palangana de plstico o acero inoxidable 1.1.15 Gasas estriles 1.1.16 Guantes desechables 1.1.17 Pao de lino estril 1.1.18 Alcohol isoproplico
1.2 Procedimiento: 1.2.1 Para sangre venosa 1.2.1.1 Lavar perfectamente el sitio de la toma de la muestra (brazo, antebrazo, taln, cara anterior de la mueca y el rea de puncin) con agua y algn producto limpiador dermatolgicamente probado, que arrastre el plomo, enjuagando con agua desionizada y dejar secar. 1.2.1.2 Etiquetar e identificar con tinta indeleble cada tubo para la toma de las muestras al menos con la siguiente informacin: a) nombre de la persona y b) nmero de clave o cdigo asignado por el laboratorio.
108
1.2.1.3 Realizar la puncin venosa y tomar la muestra. Obtener al menos 2 ml de sangre en el caso de personas mayores de 1 ao y 1 ml en nios menores de un ao. Para el mtodo de voltamperometra de redisolucin andica se debe colectar la sangre al
menos hasta dos tercios de la capacidad del tubo al tomar la muestra. 1.2.1.4 Agitar suavemente por inversin el tubo donde se colect la muestra, mnimo 20 veces, para mezclar el anticoagulante. 1.2.2 Para cordn umbilical. 1.2.2.1 La toma de la muestra en cordn umbilical debe realizarse en los primeros 30 minutos despus del parto. 1.2.2.2 Utilice una charola preparada y reciba la placenta en una palangana del equipo de obstetricia. 1.2.2.3 Extienda el cordn sobre el borde de la palangana con la pinza de la charola. Limpie con gasas cualquier lquido que exista en el cordn, desde el punto de unin a la placenta, hasta el punto que cuelga sobre el borde de la palangana. 1.2.2.4 Coloque un pao de lino estril bajo el cordn, de tal manera que quede situado bajo todo el cordn umbilical que descansa sobre la palangana. 1.2.2.5 Frote en una sola direccin, del punto de unin de la placenta al borde de la palangana, el cordn umbilical con una torunda de alcohol isoproplico. Repita este procedimiento con una segunda torunda. 1.2.2.6 Posteriormente enjuague el cordn umbilical con 10 ml de agua desionizada con una jeringa, teniendo cuidado de rociar del final del cordn (en el borde de la palangana) hacia la placenta. 1.2.2.7 Limpie el exceso de agua con una gasa estril, asegurndose de limpiar en una sola direccin, del borde de la palangana hacia la placenta. Cambie de guantes conforme sea necesario.
109
1.2.2.8 Etiquetar e identificar con tinta indeleble cada tubo al vaco para la toma de las muestras al menos con la siguiente informacin: a) nombre de la madre del nio, b) especificar que es sangre del cordn umbilical del producto y c) nmero de clave o cdigo asignado por el laboratorio. 1.2.2.9 Realizar la puncin utilizando el contenedor del tubo al vaco, inserte una aguja del nmero 20 en la parte limpia del cordn umbilical. Posteriormente inserte el tubo al vaco y obtenga al menos partes de sangre de la capacidad del tubo al vaco al tomar la muestra. 1.2.2.10 Agite suavemente 20 veces el tubo al vaco, permitiendo que el anticoagulante se mezcle con la sangre. 1.2.2.11 Mtodo de prueba para la Determinacin de Plomo en Sangre.
1.3 Manejo, Transporte y Almacenamiento: Cuando las muestras de sangre sean transportadas al laboratorio para su anlisis, se deben tener en cuenta las precauciones siguientes: 1.3.1 Si el tiempo utilizado para su transporte es menor a seis horas deben mantenerse en un intervalo de temperatura de 4 a 25C, hasta llegar al laboratorio donde sern refrigeradas a una temperatura de 4 a 8C para su conservacin. 1.3.2 El anlisis de la muestra no ser mayor a tres semanas a partir del da de la toma de la muestra. 1.3.3 Si el tiempo utilizado para su transporte es mayor a 6 horas se debe emplear un
recipiente trmico para mantener las muestras a una temperatura de 4 a 8C mediante refrigerantes.
110
1.4 Criterios de rechazo de muestras: El criterio para el rechazo de muestras es aplicable a: A) Aquellas cuyo volumen sea menor a 2 ml en el caso de personas mayores de un ao y 0.50 ml en nios menores de un ao, para espectrofotometra de absorcin atmica. B) En voltamperometra de redisolucin andica, cuando el volumen sea menor de dos tercios de la capacidad del tubo. C) Aquellas en las que se sospeche de contaminacin debido al manejo inadecuado evidente. D) Muestras coaguladas. 2. Limpieza del material utilizado para el anlisis de las muestras Todo el material de vidrio, plstico u otro utilizado para el anlisis de muestras para la determinacin de plomo en sangre, que se use ms de una vez, debe someterse a tcnicas especficas de limpieza qumica con el fin de evitar alguna contaminacin por plomo y polvo proveniente del medio ambiente. 2.1 Equipos, Materiales y Reactivos 2.1.1 Instrumental de vidrio, plstico u otros materiales (pipetas, matraces, vasos de precipitado, probetas, tapones, tubos de ensaye, botes de polipropileno y recipientes diversos). 2.1.2 Jabn o solucin limpiadora catinica al 2.0%. 2.1.3 Solucin de cido ntrico (HNO3) al 10% grado analtico. -1 2.1.4 Agua tipo I; 10.0 M cm . 2.1.5 Estufa para secado de material, ajustada a una temperatura de 70C.
111
2.1.6 Recipientes de vidrio o plstico cuyas dimensiones permitan la limpieza segura del instrumental. 2.1.7 Bolsas de plstico. 2.1.8 Agua corriente. 2.1.9 Guantes resistentes al cido ntrico al 10%.
2.2 Procedimiento para el lavado 2.2.1 Lavar con agua corriente los implementos e instrumental de vidrio, plstico u otros. 2.2.2 Sumergirlos en una solucin de detergente catinico al 2.0%, al menos durante 2 horas. 2.2.3 Enjuagarlos con agua corriente. 2.2.4 Sumergirlos en una solucin que contenga cido ntrico al 10%, se dejan reposar al menos 12 horas. -1 2.2.5 Enjuagarlo abundantemente con agua tipo I; 10.0 M cm . 2.2.6 Secarlos perfectamente dejndolos escurrir o en la estufa a una temperat ura de 70C por un tiempo de 2 a 3 horas, a excepcin del instrumental calibrado. 2.2.7 Dejarlos enfriar sobre una superficie tenindolos cubiertos para evitar que se contaminen por fuentes externas. 2.2.8 Guardarlos en bolsas de plstico para evitar la contaminacin de cualquier agente externo.
3. Mtodo de prueba
112
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA CON HORNO DE GRAFITO, CORRECTOR DE FONDO, MUESTREADOR AUTOMATICO, MODIFICADOR DE MATRIZ, PLATAFORMA DE LVOV. Mtodo para la determinacin de plomo en sangre por espectrofotometra de absorcin atmica con horno de grafito, corrector de fondo y muestreador automtico, usando modificador de matriz y plataforma de Lvov. Este mtodo es adecuado para evaluar el plomo en sangre que tenga concentraciones de este metal hasta 80 g/dl. Sin embargo, pueden determinarse niveles mayores de plomo cuando se aplican diluciones a la muestra original. 3.1 Principio del mtodo. A partir de muestras de sangre y estndares de concentracin conocida, se obtienen tomos de plomo en estado elemental; se hace pasar a travs de stos un haz de luz de 283.3 nm y se mide la cantidad de luz absorbida, que es proporcional al nmero de tomos presentes; para ello: a) se acondicionan las muestras de sangre y los estndares con modificador de matriz. b) se colocan en forma individual y automatizada en una plataforma de Lvov de temperatura estable, instalada en un tubo de grafito piroltico. c) se someten a un tratamiento trmico inducido por resistencia elctrica. d) se hace pasar a travs de la nube atmica obtenida, un haz de luz generado por lmparas especficas de ctodo hueco o de descarga sin electrodo. e) se obtiene la respuesta instrumental de absorbancia integrada, usando un corrector de fondo. f) se compara la absorbancia integrada de muestras y estndares para obtener la concentracin de plomo en la sangre estudiada.
113
3.2 Reactivos Todas las sustancias qumicas deben cumplir con los requerimientos de pureza: A) Agua tipo I: >10.0 M cm-1 B) Acido ntrico (HNO3) ultrapuro. C) Fosfato dibsico de amonio ultrapuro (NH4)2 HPO4. D) Octil-fenoxi-polietoxietanol (Tritn X-100). E) Estndar de plomo [1000 g/ml] con certificado de anlisis. F) Control de plomo en sangre con certificado de anlisis, emitido por un organismo internacional reconocido.
3.3 Material y equipo 3.3.1 Espectrofotmetro de absorcin atmica equipado con horno de grafito, corrector de fondo y muestreador automtico. 3.3.2 Lmpara de plomo de ctodo hueco o de descarga sin electrodo. 3.3.3 Utilizar argn o nitrgeno como gas de purga, de grado Alta Pureza. 3.3.4 Tubos de grafito piroltico. 3.3.5 Plataformas de Lvov. 3.3.6 Pipeta volumtrica o probetas de 10 ml. 3.3.7 Micropipetas con capacidad de: 20 l volumen fijo; y de 100 l y 1000 l volumen variable. 3.3.8 Puntas de plstico para micropipetas.
114
3.3.9 Matraces volumtricos clase A de: 10, 100 y 1000 ml. 3.3.10 Copas de muestreo. 3.3.11 Guantes para trabajo en el laboratorio. 3.3.12 Balanza con capacidad de resolucin 0.001 gr. 3.3.13 Refrigerador (4 a 8C). 3.4 Preparacin de la muestra y estndares Nota: Usar siempre agua tipo I: 10.0 M cm-1. a) Solucin modificadora de matriz: En un matraz aforado de 100 ml aadir 0.2 g. de fosfato dibsico de amonio y la cantidad mnima de agua para obtener su disolucin; adicionar 0.5 ml de Tritn X-100 y 0.2 ml de cido ntrico ultrapuro. Mezclar y aforar con agua.
b) Solucin de lavado para el automuestreador: Colocar al menos 200 ml de agua en un recipiente de polipropileno de 2 litros previamente lavado. Agregar al recipiente de polipropileno 10 ml de Tritn X-100 medidos con una probeta o pipeta de 10 ml, agitar hasta disolucin. Lavar 3 veces pipeta volumtrica o la probeta con agua y agregar el agua de lavado al recipiente de polipropileno. Llenar con agua el recipiente de polipropileno hasta un 90% de su volumen total y agitar para mezclar la solucin. Adicionar el agua faltante segn lo permita el nivel de espuma formado (esta solucin se prepara segn se requiera por el equipo).
115
c) Preparacin de Estndares: c.1 Solucin patrn de plomo con certificado de anlisis [1000 g/ml] De acuerdo a las instrucciones de dilucin del fabricante obtener una solucin patrn de 1000 g/ml en cido ntrico ultrapuro al 5%. La vigencia de esta solucin es de un ao. c.2 Solucin intermedia de plomo [10 g/ml] En un matraz volumtrico de 100 ml poner 1 ml de solucin patrn de plomo [1000 g/ml]y 5 ml de cido ntrico y aforar con agua. La vigencia de esta solucin es de un mes. c.3 Soluciones de trabajo Preparar cada semana los estndares de trabajo de 50, 100, 250, 500 y 750 g/l (5, 10, 25, 50 y 75 g/dl) de la siguiente manera: De la solucin intermedia de plomo [10 g/ml] tomar las siguientes alcuotas, y colocarlas en matraces volumtricos de 10 ml. Solucin intermedia HNO3 de plomo [10 l/ml] 50 100 250 500 750 l 500 500 500 500 500 Aforo con agua Concentracin de las
soluciones de trabajo 50 g/l o 5 g/dl 100 g/l o 10 g/dl 250 g/l o 25 g/dl 500 g/l o 50 g/dl 750 g/l o 75 g/dl
116
d) Preparacin de estndares de calibracin y de las muestras: Preparar los estndares de calibracin en las copas de muestreo.
d.1 Con modificador de matriz. CUADRO No. 1

MODIF. MATRIZ (l) BLANCO REACTIVO ESTANDAR 5 g/dl ESTANDAR 10 g/dl ESTANDAR 25 g/dl ESTANDAR 50 g/dl ESTANDAR 75 g/dl MUESTRAS 900 100 900 1001 900 1001 900 1001 900 1001 900 1001 900 (l) 100 AGUA SOLUCIONES DE TRABAJO 50 [g/l] 100 [g/l] 250 [g/l] 500 [g/l] 750 [g/l] MUESTRAS l CC l
117
*CC
900
100
*CC (Control de plomo en sangre con certificado de anlisis
d.2 Con adicin de estndar Preparar los estndares de calibracin y las muestras como se describe en el cuadro nmero 2. Usar como sangre base una muestra previamente preparada y analizada segn el punto 3.5 y cuyo contenido de plomo sea < 10.0 g/dl. Homogeneizar la muestra de sangre con agitacin suave y adicionar la alcuota como se seala en el cuadro 2, enjuagar y mezclar mediante bombeo repetido con la micropipeta, utilizando la punta como agitador para eliminar de sta toda traza de sangre.
CUADRO No. 2
MODIF. MATRIZ (l) BLANCO REACTIVO ESTANDAR 5 g/dl ESTANDAR 10 g/dl 800 1001 100 800 1001 100 800 (l) 100 AGUA SOLUCIONES DE TRABAJO 50 [g/l] 100 [g/l] 250 [g/l] 500 [g/l] 750 [g/l] 100 SANGRE MUESTRAS CC BASE l l
118
ESTANDAR 25 g/dl ESTANDAR 50 g/dl ESTANDAR 75 g/dl MUESTRAS 900 *CC 900 100 100 800 1001 100 800 1001 100 800 1001 100 -
*CC (Control de plomo en sangre con certificado de anlisis
3.5 Procedimiento 3.5.1 El rea de preparacin y anlisis de las muestras debe ser aislada, estar limpia y libre de polvo. 3.5.2 Los parmetros instrumentales son los siguientes: Longitud de onda: 283.3 nm. Tipo de seal: absorbancia integrada. Medicin de la seal: rea del pico. Ancho de banda: de acuerdo a las especificaciones de cada instrumento. Los parmetros como las temperaturas y los tiempos de: secado, calcinado y atomizado del horno de grafito se establecen a partir de las especificaciones de operacin y se optimizan en cada laboratorio.
3.5.3 Curva de calibracin Elaborar una curva de absorbancia integrada vs concentracin con estndares acuosos de plomo o una curva de calibracin con adicin de estndar, debiendo obtener un coeficiente de correlacin r > 0.995.
119
Analizar los controles de plomo en sangre con certificado de anlisis, en caso de que algn valor est fuera del intervalo certificado volver a preparar la curva de calibracin.
3.5.4 Anlisis de la muestra Analizar las muestras, usando la longitud de onda de 283.3 nm y corrector de fondo. El anlisis se realiza por duplicado, tomando 20 l de muestra. 3.5.5 Control de calidad Analizar el control de plomo en sangre con certificado de anlisis cada 20 muestras ledas, para comprobar la calidad de los resultados. En caso de que la lectura del control de plomo en sangre est fuera del intervalo certificado, recalibrar y repetir las lecturas del ltimo lote de muestras. Cuando alguna muestra exceda el intervalo lineal definido con esta curva, se analizar nuevamente, realizando una dilucin 1:20 de la siguiente manera: 100 l de sangre ms 1900 l de modificador de matriz.
3.5.6 Expresin de los resultados Para calcular la concentracin de plomo de muestras, se interpola el valor de absorbancia integrada en la grfica de la curva de calibracin. Para muestras que se han diluido considerar el factor de dilucin. La concentracin de plomo en las muestras se reporta en g/dl, con una cifra decimal.
120
3.5.7 Lmite de deteccin Lmite de deteccin 1.5 g de plomo/dl de sangre.
3.5.8 Linearidad Desde el lmite de cuantificacin establecido para las condiciones especficas de operacin hasta 80.0 g de plomo/dl de sangre.
APENDICE B INFORME DE RESULTADOS El informe de resultados de laboratorio debe estar foliado y tener los siguientes datos: 1. Identificacin del laboratorio aprobado: Nombre o razn social Domicilio Nmero de aprobacin Firma del signatario 2. Identificacin del cliente: Nombre o razn social de la persona fsica o moral que solicita realizar las pruebas de laboratorio. Domicilio 3. Identificacin de la muestra: Tipo de prueba que se realiz Mtodo utilizado Fecha de toma
121
Fecha de recepcin Fecha de anlisis Fecha de emisin del informe de resultados Resultado de anlisis Unidades en g/dl Nmero de clave o cdigo asignado por el laboratorio Valores de referencia del estndar certificado para el control de calidad 4. Identificacin de la persona Nombre, Sexo y Edad.
122

Determinacion de PB en Sangre Usando Espectrofotometria de Absorcion Atomica

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Determinacion de PB en Sangre Usando Espectrofotometria de Absorcion Atomica

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S.E.P.

INSTITUTO TECNOLGICO DE AGUASCALIENTES

RESIDENTE: Mara Del Sol Velzquez Lpez

ASESOR INTERNO: Dr. Jorge Medina Valtierra

ASESOR EXTERNO: IBQ. Ma. Del Socorro Castaeda Ramrez

Aguascalientes, Ags. 2010

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

separacin del elemento analto) es el que proporciona mejores resultados.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

CARACTERIZACIN DEL REA.

Fig. 1 Laboratorio Estatal de Salud Pblica

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

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Fig. 2 Usos del plomo en Mxico

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

2.5.1. MECANISMO DE ACCIN.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

2.5.2. PLOMO Y SITIOS DE UNION A CALCIO.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

Fig. 3 Esferas de coordinacin del Ca+2 y Pb+2

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

Fig. 4 Ribete de Burton [1].

Fig. 5 La mano del pintor [1].

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

a) Edetato-Disdico-Clcico (EDTA Ca) a dosis de 30 - 50 mg/kg/da.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

PANORAMA DE LA PROBLEMATICA NACIONAL.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

LOS MTODOS ESPECTROSCPICOS.

2.7.1. ABSORCIN ATMICA

Fig. 6 Absorcin Atmica

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

En el estado estable el tomo absorbe energa

de una longitud de onda

Fig. 7 Espectro Electromagntico

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

2.7.2. INTERACCIN DE LA RADIACIN CON LA MATERIA

2.7.3. ABSORCIN DE LA RADIACIN

2.7.4. LEY DE BEER

se refieren a la energa de un haz de ha cruzado celdas que

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

A= bc donde tiene las unidades de L mol-1 cm-1

1) Espectrometra ptica 2) Espectrometra de masas 3) Espectrometra de rayos X

2.8.1. ESPECTROMETRA PTICA

2.8.2. ESPECTROMETRA DE MASAS

2.8.3. ESPECTROMETRA DE RAYOS X

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

ABSORCIN ATMICA [13].

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

2.10. MTODO ANALTICO

2.10.1. ESPECTROFOTOMETRA CON HORNO DE GRAFITO

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

2.10.2. ATOMIZACIN CON HORNO DE GRAFITO

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

DETERMINACIN DE Pb EN SANGRE USANDO ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON HORNO DE GRAFITO.

2.10.3. TEMPERATURA Y TIEMPO DE SECADO

2.10.4. SECADO EN LA PARED DEL TUBO