FACULTAD DE CIENCIAS Y FILOSOFIA DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA, BIOLOGIA MOLECULAR Y FARMACOLOGIA SECCION BIOQUMICA Y BIOLOGA MOLECULAR

PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

PRACTICA # 1 : BUFFERS TAMPONES O BUFFERS: a) Acidos y bases: La comprensin de los conceptos de cido y base son esenciales para el entendimiento de las propiedades biolgicas y comportamiento bioqumico de las molculas orgnicas. Las macromolculas poseen caractersticas fisicoqumicas que son muy importantes en la homeostasis; por ejemplo: las cargas elctricas son importantes en las catlisis enzimticas, as como en la estabilidad de las protenas y cidos nucleicos. En general, se define un cido como un donador de protones y una base como un aceptor de protones. b) Ionizacin del agua: Debido a que la masa del tomo de hidrgeno es muy pequea y a que su nico electrn est fuertemente atrado por el tomo de oxgeno, existe poca tendencia a que el ion hidrgeno se disocie del tomo de oxgeno de una molcula de agua y salte al oxgeno de una molcula de agua cercana, liberando iones hidrgeno e hidroxilo, resultando el equilibrio: H2O --------- H+ + OH(1)

A 25 C solo una de cada 10 millones de molculas en un litro de agua pura se encuentra ionizada. Aunque la concentracin de estos iones es muy baja, ellos tienen efectos biolgicos muy importantes. Es preciso entonces expresar la ionizacin del agua de modo cuantitativo. Podemos escribir la constante de equilibrio para la reaccin (1): [H+] [ OH-] Keq = --------------[H2O] (2)

Ahora podemos simplificar esta expresin ya que la concentracin de H 2O es relativamente muy alta (55,5 M) y por lo tanto se mantiene casi constante en relacin a la concentracin de H + y OH- (1,0 x 10 7). De esta manera, podemos sustituir 55,5 en la expresin de equilibrio: 55,5 K eq = [H+] [OH-] (3)

El valor de Keq ha sido cuidadosamente estimado a partir de mediciones de conductividad elctrica del agua (slo los iones que surgen de la ionizacin del agua pueden conducir corriente elctrica). Encontrndose que a 25 C es 1,8 x 10-16. Sustituyendo este valor en la ecuacin (3) tenemos: (55,5) (1,8 x 10-16) = [H+] [OH-] 1

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1,0 x 1014

[H+] [ OH-]

Si usamos Kw para designar al producto 55,5 Keq, tenemos: Kw=1,0x10-14= [H+] [OH-]. Kw es llamado el producto inico de agua y es la base para la escala de pH, un modo conveniente de expresar la concentracin de protones (y OH --) en cualquier solucin acuosa en el rango de acidez de 1,0 M H + y 1.0 M OH-. pH= -log [H+] A mayor valor de pH, menor ser la concentracin de iones H + y viceversa; la escala es logartmica, de modo que entre dos soluciones que difieran en pH por 1 unidad, habr una diferencia de concentracin entre ellas de 10 veces. c) Tampones: El buen funcionamiento de los sistemas biolgicos requiere de un control estricto del pH. Las enzimas son bastante sensibles a cambios de pH; tienen una actividad enzimtica mxima a un pH caracterstico llamado ptimo fuera del cual su actividad se ve afectada notablemente. Los organismos tienen un control muy estricto de pH; por ejemplo, la regulacin del pH del suero es necesaria para la supervivencia; el organismo mantiene el pH srico en el rango de 7,4 +/- 0,4. Valores de pH fuera de este rango pueden ser perjudiciales para el organismo. Un tampn es una solucin que ante la adicin de cantidades pequeas de H+ u OH- se resiste a cambios dramticos de pH. Los tampones comunes estn formados por dos sustancias: un cido y su base conjugada: HA- A- + H+ Calculando la constante de equilibrio: Keq = [H+] [A-] [HA]

Si tomamos logaritmos: log Keq= log [H+] + log [A-] - log [HA] De donde: pH= pkac + log [A-] / [HA]

Que en su forma general es: pH = pKac + log aceptor de protones donador de protones Esta ecuacin permite calcular la relacin molar entre una sal y un cido que forman parte de un tampn para un pH y pK determinados.

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PROBLEMAS: 1. Si el pKR del cido actico (CH 3-COO-) es 4.8, y el de la metil amina (CH 3NH3+) es 10.6, cmo explica que el pK 1 (COO-) de la glicina sea 2.34 y el pK 2 (NH3+) sea 9.60? 2. Cules son las concentraciones de cido actico y acetato en un tampn acetato 0,2M, pH 5,0? El Ka para el cido actico es 1,7 x 10 -5. 3. Suponga que prepara un tampn a partir de un cido dbil 0,10 M y una sal de sodio 0,10 M. Asuma que el pKa es 3,0. Cul es el pH del tampn? 4. El plasma sanguneo contiene carbonatos (fundamentalmente HCO 3- y CO2) en concentracin 2,52 x 10-2M. Cul es la relacin HCO3-/CO2 y la concentracin de cada uno a pH 7,40? Cul ser el pH si se aade un cido 10 -2M en condiciones en las cuales el incremento de Co2 no puede ser liberado? 5. Teniendo en cuenta los valores de pK del fosfato, cunto cambiar el pH de 50 ml de una solucin 0.02M fosfato, pH 7.5 si le agregamos 1 ml de 0.05N HCl? 6. A Ud le encargan preparar buffer fosfato 150 mM, pH 7.5 pero para hacerlo slo tiene NaH2PO4 0,1M y una solucin de NaOH 0,1N. Cul ser el volumen que requiere de ambas soluciones. 7. Teniendo en cuenta los valores de pK del fosfato, cunto cambiar el pH de esta solucin si le agregamos 1 ml de 0.05N HCl? 8. Cul ser el volumen que se requiere de 0.2M Na 2HPO4 y de HCl 0,05N para preparar 50 ml de 0.1M fosfato, pH 7.5. 9. Teniendo en cuenta los valores de pK del fosfato, cunto cambiar el pH de esta solucin si le agregamos 1 ml de 0.1N NaOH? 10.Si el pH del agua es 7.0, cul es el pH de 50 ml de agua luego de habrsele adicionado 1 ml de 0.05N HCl 11.Si el pH del agua es 7.0, Cul es el pH de 50 ml de agua luego de agregrsele 1 ml de 0.1N NaOH? 12. Cules son las diferentes especies inicas que tiene la Glicina a los siguientes pHs: pH 1.0, 2.34, 6.0; 9.60 y 12.0. 13. Cules son las diferentes especies inicas que tiene la Lisina a los siguientes pHs: 14.pH 1.0, 2.20, 8.95; 10.53 y 12.0. 15. Cules son las diferentes especies inicas que tiene el Acido asprtico a los siguientes pHs:
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pH 1.0; 1.9; 3.6; 7.0; 9.60 y 12.0.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. a. Preparar 50ml de una solucin 0.02M de tampn fosfato pH 7,5 a partir de una solucin Na2HPO4 0,1M + solucin NaH2PO4 0,05M. Medir el pH en el potencimetro. b. Agregar 1ml de 0,1N HCl al tampn (a). Medir nuevamente el pH. c. Medir el pH de 50ml de agua destilada. Agregar 1ml de HCl 0,1N al agua. Medir el pH. 2. a. Preparar 50ml de una solucin 1/50M de tampn fosfato pH 7,5 a partir de: solucin NaH2PO4 0,1M + solucin NaOH 0,1N. Medir el pH. b. Aadir 1ml de HCl 0,05N. Medir el pH. 3. a. Preparar 50ml de una solucin 0,02M de tampn fosfato pH 7,5 a partir de: solucin Na2HPO4 0,1M + solucin de HCl 0,1N. Medir el pH. b. Aadir 1ml de NaOH 0,1 a la solucin (a). Medir el pH. c. Aadir 1ml de NaOH 0,1N a 50ml de agua. Medir el pH. 4. a. Preparar 50ml de una solucin 0,10 M de tampn fosfato pH 7,5 a partir de: solucin Na2HPO4 0,2M + solucin de HCl 0,1N. Medir el pH. b. Aadir 1ml de NaOH 0,1 a la solucin (a). Medir el pH. 5. Medir el pH de una solucin NaH 2PO4 0,1M. Conociendo el pK de fosfato, cul ser la relacin cido base que existe en esta solucin para que tenga el pH que usted ha medido? 6. Tomar 100 ml de NaH2PO4 0,1M y agregar 1 ml de una solucin de NaOH 0.1N, mezlar y medir el pH. Repetir este procedimiento hasta haber agregado 10 ml de NaOH 7. Tomar 100 ml de Na2HPO4 0,1M y agregar 1 ml de una solucin de HCl 0.1N, mezlar y medir el pH. Repetir este procedimiento hasta haber agregado 10 ml de HCl Cuestionario e Informe 1) Indique las reacciones involucradas en cada experimento.

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2) Efecte los clculos para la determinacin de las cantidades a usarse de las diferentes soluciones. 3) Anote las lecturas obtenidas en el potencimetro. 4) Cmo reaccionaron las soluciones tampn al aadrseles cido o base? Cmo cambi el pH?. 5) Cambi el pH del agua al aadrsele HCl o NaOH?. 6) Fue la respuesta del tampn a la adicin de cido o base, igual a la respuesta del agua? 7) Grafique la respuesta del buffer ante la adicin de diferentes cantidades de cido o base (ejercicios 6 y 7) Ionizaciones del cido fosfrico H3PO4 + H2O H2PO4 + H2O HPO4-2 + H2O Acido fosfrico 1 ionizacin 2 ionizacin 3 ionizacin H2PO4 + H3O+ HPO4 2 + H3O+ PO4-3 + H3O+ Constante de ionizacin K1 = 1,1 x 10-2 K2 = 1,57 x 10-7 K3 = 3,6 x 10-13 1 ionizacin 2 ionizacin 3 ionizacin pKac 1,96 6,82 12,44

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