Liberao de Benzoato de Clcio de Filmes de Alginato de Sdio Reticulados com ons Clcio

Franciele R. B. Turbiani, Theo G. Kieckbusch Departamento de Termofluidodinmica, UNICAMP Marcelino L. Gimenes Departamento de Engenharia Qumica, UEM
Resumo: Biofilmes confeccionados base de alginato de sdio foram reticulados com ons Ca++ provenientes de duas fontes, cloreto e benzoato de clcio, e continham glicerol como plastificante. Inicialmente, devido ao alto poder gelificante do Ca++, um filme de baixo grau de reticulao foi confeccionado por casting (1 estgio). Esse filme sofreu uma reticulao complementar por imerso em uma soluo contendo de 3 a 7% de CaCl2.2H2O, alm de glicerol (2 estgio). A liberao de benzoato de clcio foi avaliada em diferentes concentraes de agente ativo no filme e dois nveis de reticulao do alginato. O mecanismo envolvido no processo de difuso foi investigado usando o modelo da Lei de Potncia. Os resultados indicaram que a difuso de benzoato de clcio em filmes de alginato apresenta caractersticas de comportamentos Fickiano e no-Fickiano. Os coeficientes de difuso efetivos obtidos usando a soluo em srie derivada da 2 Lei de Fick so prximos aos valores obtidos pela soluo em tempos curtos, com valores de difusividade efetiva do benzoato variando de 3 a 5.107 cm2/s. Os valores de difusividade diminuram com o aumento da intensidade de reticulao e aumentaram com a concentrao de benzoato no filme. Palavras-chave: Alginato, biofilmes, benzoato de clcio, coeficiente de difuso, reticulao, liberao.

ARTIGO TCNICO

Release of Calcium Benzoate from Films of Sodium Alginate Crosslinked with Calcium Ions
Abstract: Alginate-based biofilms were reticulated with Ca++ supplied by two sources, calcium chloride and benzoate, and using glycerol as plasticizer. The strong gelling power of the Ca++ ions hindered smooth casting procedures, so that films with low degree of reticulation were initially manufactured (1st stage). These films were further crosslinked with an excess of Ca++ by immersion in a solution of 3 to 7% of CaCl2.2H2O (2nd stage). The release of sorbate was evaluated considering different active agent concentrations in the film and two levels of alginate crosslinking. The mechanism involved in the diffusional process was investigated using the Power Law Model. The results indicated that potassium sorbate diffusion in alginate films has characteristics of Fickian and non-Fickian behavior. Effective diffusion coefficients obtained using the solution in series derived from Ficks Second Law are close to values obtained with the short-time solution, with effective diffusivities varying from 3 to 5 107 cm2/s. The diffusivity values decreased with the degree of reticulation and increase with benzoate concentration in the film. Keywords: Alginate, biofilms, calcium benzoate, diffusion coefficient, crosslinking, release.

Introduo
Os alimentos, de forma geral, so altamente perecveis. Deste modo, inmeros so os problemas relacionados conservao dos mesmos, seja na forma in natura ou como produtos processados. Geralmente uma combinao de mtodos so utilizados, sendo indispensvel a proteo fsica do alimento, na forma de embalagens adequadas[1]. A produo e aplicao de biofilmes com atividade antimicrobiana podem ser classificadas como uma tecnologia de liberao controlada. Este procedimento utilizado para liberar substncias ativas, como medicamentos, pesticidas, conservantes e fragrncias em doses controladas, melhorando a eficcia, segurana e convenincia de sua utilizao. Nos ltimos anos, sistemas de liberao controlada tornaram parte de uma ampla categoria de novos conceitos de embalagem de alimentos conhecidos como materiais de embalagem ativa. Promissores sistemas de embalagens ativas so baseadas na incorporao de substncias antimicrobianas na estrutura da embalagem de alimentos, a fim de controlar o crescimento de microorganismos indesejvel na superfcie dos alimentcios[2-6]. Uma vez que a eficincia antimicrobiana dos filmes baseada na migrao de substncias ativas, o conhecimento da difusividade desses compostos no interior do filme um fator determinante no desenvolvimento de sistemas antimicrobianos de embalagem de alimentos. A difusividade pode ser afetada pelo tamanho e forma das molculas de substncia ativa, a estrutura do polmero (tamanho dos poros, flexibilidade da cadeia polimrica e densidade) e condies ambientais (pH, atividade de gua e temperatura). Os parmetros de composio do filme, tais como, concentrao de polmero, tipo e concentrao de plastificante e a presena de componentes como lipdios e agentes ativos podem influenciar o processo de difuso. Alginatos so de grande interesse como potencial componente estrutural de filmes e coberturas por causa de suas propriedades coloidais nicas[7,8]. um carboidrato coloidal hidroflico extrado com lcali diludo de vrias espcies de algas marrons. o nico polissacardeo que contm, naturalmente, grupos carboxlicos em cada constituinte residual, e possui vrias habilidades funcionais[9]. A propriedade mais usada e nica em alginatos sua habilidade de reagir com ctions polivalentes, especialmente ons clcio, para produzir gis fortes ou polmeros insolveis[10,11].

CIENTFICO

Autor para correspondncia: Franciele R. B. Turbiani, Departamento de Termofluidodinmica, Faculdade de Engenharia Qumica, Universidade Estadual de Campinas, Cidade Universitria Zeferino Vaz, Av. Albert Einstein, 500, CEP 13083-852, Campinas, SP , Brasil. E-mail: barbosafranciele@hotmail.com

Polmeros, vol. 21, n 3, p. 175-181, 2011 175

Turbiani, F. R. B. et al. - Liberao de benzoato de clcio de filmes de alginato de sdio reticulados com ons clcio

Dependendo do grau de reticulao, o intumescimento da estrutura tridimensional do alginato na presena de solventes significativamente reduzido, resultando em uma diminuio na permeabilidade para diferentes solutos. Como consequncia, a liberao do agente incorporado lenta, permitindo que estes sistemas sejam utilizados na liberao controlada de substncias. A produo de filmes de alginato de clcio uma operao complexa e depende do tipo de alginato utilizado, do grau de converso entre o alginato e o clcio, da fonte de ons de clcio (cloreto, fosfato, lactato, etc) e do mtodo de preparao[12]. O principal objetivo deste estudo foi avaliar a liberao de benzoato a partir de filmes de alginato, influenciados pela concentrao do agente ativo e pelo grau de reticulao do filme.

Caracterizao fsica dos filmes

Espessura

A espessura, , foi determinada utilizando um micrmetro digital (MITUTOYO, modelo MDC-25S, Japo, com resoluo de 0,001mm), realizando no mnimo 10 medidas em cada filme.
Contedo de umidade

Materiais e Mtodos
Materiais
Para a confeco dos filmes, foi utilizado alginato de sdio de mdia viscosidade extrado de alga Macroscystis Pyrifera (Synth P.A., Brasil). Cloreto de clcio dihidratado (Merck ACS, USA) foi utilizado como agente reticulante, glicerol (Synth P.A., Brasil) como agente plastificante e benzoato de clcio trihidratado (Avocado, USA) como agente ativo e auxiliar na reticulao.

A umidade foi determinada em triplicata para cada formulao de filme, de acordo com Rhim etal.[14]. A massa inicial de discos cortados dos filmes, de 2,5 cm de dimetro foi quantificada e as amostras submetidas secagem a 105 C por 24 horas em estufa a vcuo (Lab-Line, Squaroid, EUA) e a massa seca quantificada novamente. O contedo de umidade foi expresso como frao da massa inicial do filme, , ou em % da massa (base mida).
Massa solubilizada em gua

Preparao dos filmes de alginato

Os filmes de alginato foram obtidos segundo a tcnica de casting que consiste na preparao da soluo filmognica e aplicao da mesma em um suporte. Inicialmente, foi produzido um filme de baixo grau de reticulao com Ca++, cuja soluo filme-formadora continha alginato, plastificante e cloreto e/ou benzoato de clcio. Essa etapa inicial foi denominada de 1 estgio. Primeiramente, solubilizou-se o glicerol (0,6 g glicerol/g alginato) em 400 mL de gua destilada a 70 C e, em seguida, adicionou-se o alginato de sdio (1,5%). Na sequncia, adicionou-se lentamente 30 mL da soluo prreticuladora contendo Ca++, mantendo a temperatura em 70 C, sob intensa agitao. Alquotas de 70 g dessa soluo foram transferidas para placas de polipropileno (dimetro = 14 cm) e levadas a uma estufa com circulao de ar, a 40 C, por 16 horas, para uma gelificao incipiente e formao de um filme por evaporao. Esse filme foi submetido a uma reticulao complementar por imerso em um banho a temperatura ambiente contendo 50 mL de uma soluo de CaCl2.2H2O e/ou benzoato de clcio, alm do plastificante (5% v/v). Pesquisas preliminares com tempos de imerso variando de 5 a 60 minutos indicaram que 30 minutos de contato produz filmes de maior resistncia mecnica e de menor solubilidade em gua, e esse tempo foi adotado em todas as formulaes. Aps a reticulao do 2 estgio, os filmes foram retirados do banho e mantidos sobre uma base plana por trs horas a temperatura ambiente para uma uniformizao de sua concentrao interna. Para o acabamento final, esses filmes foram submetidos secagem em estufa (30 C / 20 horas). Uma descrio mais detalhada deste processo pode ser encontrada em trabalho previamente publicado[13]. Antes de sua caracterizao, os filmes foram armazenados por 72 horas em dessecadores a uma umidade relativa de 52% (soluo saturada de nitrato de magnsio) e temperatura de 25 1 C para uniformizar seu contedo de umidade. Apenas filmes com boa aparncia, avaliados subjetivamente levando em considerao parmetros como homogeneidade (ausncia de partculas insolveis e colorao uniforme), continuidade (ausncia de rupturas ou fissuras aps a secagem), flexibilidade, facilidade de desprendimento do suporte e facilidade de manuseio foram submetidos caracterizao fsica.

A massa solubilizada em gua, MS, foi determinada em triplicata, de acordo com Gontard etal.[15]. A massa total de amostras do filme foi quantificada (mo) e o material imerso em excesso de gua destilada sob agitao branda a 25 1 C por 24 horas, utilizando-se um Shaker Bath Orbit (Lab-Line, EUA). A massa seca final (mf) foi determinada submetendo-se esta amostra secagem (105 C / 24 horas). A massa solubilizada foi expressa em funo da massa seca inicial, conforme Equao 1:
MS = mo (1 ) m f mo (1 ) .100 (1)

Grau de intumescimento (swelling)

A massa total inicial de uma amostra cortada do filme, de 2,52,5cm, foi quantificada (mo) e o material imerso em gua destilada sob leve agitao, a 25 C. Em determinados perodos de tempo, a amostra foi retirada da gua, o excesso de umidade superficial das amostras foi removido, colocando o filme entre duas folhas de papel de filtro, sua massa total (mu) determinada e a amostra retornava gua. O grau de intumescimento (GI) foi calculado pela relao (mu - mo)/(mo)[16]. Essas determinaes foram realizadas em triplicata para cada formulao de filme.
Propriedades mecnicas

As propriedades mecnicas dos filmes foram obtidas segundo o mtodo D882[17], utilizando um texturmetro TA.XT2 (Stable Microsystems, Inglaterra), em ambiente dotado de ar condicionado temperatura de 25 1 C e umidade relativa de 55 3%. Amostras de dimenses de 25,4 por 100 mm foram ajustadas s garras do equipamento. A separao inicial foi de 50 mm e a velocidade de trao foi de 0,8 mm/s. A tenso na ruptura (fora mxima no momento da ruptura/rea de seo transversal inicial do filme) e o alongamento na ruptura (porcentagem em relao ao comprimento inicial) foram determinados diretamente usando o software Texture Expert V.1.15 da Stable Microsystems.
Permeabilidade ao vapor de gua

A permeabilidade ao vapor de gua (PVA) foi determinada gravimetricamente, de acordo com o mtodo E96-95[18], utilizando pequenas clulas de alumnio a 25 1 C. Amostras circulares de filmes, 8 cm dimetro, foram hermeticamente fixadas na borda da clula com parafina, e a clula permaneceu no interior de um dessecador com umidade relativa constante de 75%, obtida com uma soluo saturada de cloreto de sdio. A rea da superfcie livre exposta dos filmes para permeao de vapor foi 44 cm2. Cloreto de clcio granulado preencheu o fundo da clula, mantendo um micro-ambiente a 0% de UR. As clulas foram pesadas diariamente com uma balana

176

Polmeros, vol. 21, n 3, p. 175-181, 2011

Turbiani, F. R. B. et al. - Liberao de benzoato de clcio de filmes de alginato de sdio reticulados com ons clcio

analtica durante sete dias. O valor da PVA foi calculado atravs da Equao 2. Todas as determinaes foram feitas em triplicata.
PVA = G. (2) Ae .PH2O
o o

Matrizes polimricas, no entanto, esto propensas a sofrer relaxamento na estrutura sob a influncia solventes penetrantes ou molculas de soluto e mecanismos de transporte anmalo prevalece para as situaes em que Mt/M < 0.6[20]. Esta migrao no-Fickiana de solutos pode ser modelada pela conhecida Lei da Potncia[19]:
Mt = kt n (5) M

onde: PVA a permeabilidade ao vapor de gua [(g.mm)/(m2.dia.kPa)]; a espessura inicial do filme [mm]; G a taxa constante de ganho de massa [g/dia]; Ae a rea de permeao do filme; DPH2O a diferena de presso parcial do vapor de gua no ambiente prximo s duas faces do filme na temperatura do ensaio [kPa].
Cintica da liberao do benzoato

Os ensaios de liberao foram realizados utilizando-se amostras de filmes ativos de dimenses 4 4 cm (massa media igual a 0,15g). Como sorvedouro para a liberao, foram utilizados volumes de 25mL de gua destilada a temperatura de 25 0,5 C. Os bqueres contendo a gua foram dispostos em um shaker e mantidos sob agitao durante o ensaio, a fim de diminuir uma possvel resistncia por conveco de massa. No tempo zero, a amostra de filme era mergulhada no primeiro copo e, aps um intervalo de tempo prdeterminado, era rapidamente transferida para o segundo copo, e assim por diante, de maneira que a massa acumulada de benzoato na soluo de cada bquer corresponde a um ponto da curva de liberao. Com a utilizao de quantidades renovadas de gua, garante-se que a concentrao de benzoato nas interfaces do filme seja zero, alm de se obter amostras bem definidas de soluto liberado nos intervalos de tempo. Para a determinao da concentrao de benzoato de clcio em soluo aquosa, foi utilizado um espectrofotmetro (HP, modelo 8453, EUA) equipado com controlador de temperatura HP 89090A e software UV-Visible ChemStation. A concentrao de benzoato era lida em curva de calibrao. O primeiro minuto desse ensaio crtico, pois testes preliminares indicaram a necessidade de fazer a transposio do filme nos copos a cada 5 segundos (at 35 segundos) e ento a cada 10 segundos. Nesse perodo, a amostra de filme era mantida presa a uma pina. Aps essa etapa inicial, os intervalos eram maiores sendo mais fcil controlar a retirada e transferncia do filme para o copo seguinte. A massa acumulada de benzoato de clcio liberada no tempo t (Mt) e os valores de frao de benzoato liberado (Mt/M) foram calculados e locados em grfico em funo do tempo. A quantidade de benzoato que poderia ser liberada em um tempo infinito (M) foi considerada como a massa total dessorvida a partir da qual no se constatou variao de concentrao. A espessura mdia do filme foi determinada antes e no final de cada ensaio.
Parmetros da Difuso

onde k uma constante que caracteriza o sistema macromolecular e n o expoente de difuso caracterstico do mecanismo de liberao. Valores de n normalmente se situam entre 0,5 e 1,0. O limite de n=0,5 corresponde ao processo de difuso Fickiana e as Equaes3ou 4 devem ser usadas.

Planejamento dos ensaios

A pesquisa considerou diferentes concentraes relativas de benzoato e cloreto de clcio, tanto no 1 como no 2 estgio[13]. O presente trabalho contempla apenas as caractersticas fsico-qumicas de 10 formulaes de filmes que apresentaram boa aparncia e funcionalidade, e dentre estas, foram selecionados 4 filmes que continham quantidades apreciveis de benzoato que foram submetidos a ensaios de liberao. A denominao destes filmes em relao fonte e a quantidade de clcio incorporada no 1 estgio (F1 a F%) est apresentada na Tabela1. Cada uma destas formulaes bsicas foi submetida a duas intensidades de reticulao no 2 estgio por imerso em solues de 3% ou de 7% de CaCl2.2H2O, recebendo ento o ndice 3 ou 7, respectivamente.

Anlise estatstica dos resultados

A avaliao estatstica dos resultados obtidos foi realizada, por meio do programa STATISTICS, verso 5 - 97, empregando-se Teste de Tukey para comparao das mdias das propriedades a um nvel de 95% de confiana.

Resultados e Discusso
Filmes de alginato produzidos em dois estgios de reticulao eram homogneos, transparentes e visualmente atrativos. O uso de uma quantidade limite de agente reticulante (1 estgio) antes da consolidao total da estrutura do filme foi necessrio para se conseguir uma adequada manuseabilidade dos filmes. Estes filmes de baixo grau de reticulao eram muitos flexveis e completamente solveis em gua. Zactiti e Kieckbusch[21] tambm obtiveram filmes de alginato totalmente solveis em gua, quando manufaturados sem o estgio de reticulao final. Filmes de alginato completamente solveis tambm foram obtidos por Pavlath etal.[22] pela adio de 0,18 g CaCl2.2H2O/g alginato em um nico estgio de procedimento. Formulaes semelhantes as do presente trabalho contendo alginato de sdio foram apresentadas por Rajsharad e Kamble[23] para aplicao como filmes, coberturas, liberao controlada de frmacos, dentre outros.
Tabela1. Concentrao de Ca++ em filmes de alginato (1 Estgio) confeccionados com cloreto e/ou benzoato de clcio.
Filme mg Ca++/g alginato mg Ca++/g alginato (fonte: cloreto) F1 F2 F3 F4 F5 0,36 0,36 (fonte: benzoato) 0,70 0,78 0,83 0,24 0,30 Ca++ total mg Ca++/g alginato 0,70 0,78 0,83 0,60 0,66

A 2 Lei de Fick da difuso foi usada para modelar a liberao de benzato de clcio de filmes de alginato. De acordo com as condies experimentais e assumindo a espessura do filme constante, , a seguinte equao para uma placa plana pode ser adaptada de Crank[19] para a frao de benzoato de clcio liberada em funo do tempo:
2 Mt 8 1 2 Def exp ( 2n + 1) = 1 2 2 M 22 n = 0 ( 2n + 1)

t (3)

onde Def a difusividade efetiva mdia do benzoato de clcio, assumida constante. Uma soluo simplificada da 2 Lei de Fick, a soluo para tempos curtos, pode ser utilizada para o ajuste dos pontos experimentais iniciais, quando menos de 60% da massa de soluto liberada[19]:
16 Def t Mt (4) = M 2

Polmeros, vol. 21, n 3, p. 175-181, 2011 177

Turbiani, F. R. B. et al. - Liberao de benzoato de clcio de filmes de alginato de sdio reticulados com ons clcio

Para a definio da formulao mais adequada dos filmes pesquisados, levou-se em considerao a quantidade de Ca ++ adicionada, valores intermedirios de solubilidade dos filmes em gua (em torno de 17%) e contedo no nulo de benzoato de clcio nas formulaes. Uma descrio mais detalhada deste processo por ser encontrada em trabalho previamente publicado[13]. A definio da quantidade de clcio a ser utilizada na otimizao da concentrao da soluo filmognica teve como objetivo principal a incorporao da mxima quantidade de benzoato de clcio aceita pela estrutura do filme. O cloreto de clcio mostrou ser um agente reticulante muito potente e em concentraes superiores a 0,5 mg Ca++/g alginato os filmes apresentavam heterogeneidades, decorrentes de gelificao local durante a mistura dos componentes. Quando o benzoato era usado como fonte nica de clcio no 1 estgio, essa concentrao limite, em termos de Ca++ podia ser ampliada, sem interferir na aparncia do filme. O valor mximo encontrado para a adio do antimictico soluo base foi o equivalente a 0,83 mg Ca++/g alginato, pois contedos superiores tendiam a incorporar bolhas durante a intensa agitao necessria no 1 estgio (em torno de 2000 rpm). Por outro lado, ensaios feitos durante a confeco de filmes contendo Ca++ adicionado na forma de benzoato e cloreto mostraram que, solues filmognicas contendo at um total de 0,66mg Ca++/g alginato produziam filmes de boa aparncia e nenhuma gelificao incipiente durante o preparo no 1 estgio. No foi possvel a adio de benzoato de clcio no 2 estgio de reticulao devido a sua baixa solubilidade, que induzia a recristalizao do mesmo sobre o filme. Alem disso composies contendo benzoato de clcio apenas no 1 estgio produziam filmes mais compactos e de melhor aspecto. Desta maneira, os Filmes F1 e F3, reticulados no segundo estgio com solues contendo 3 ecom 7% de CaCl2.H2O foram selecionados para serem submetidos a ensaios de liberao de benzoato.

Caracterizao fsica dos filmes

Filmes reticulados com Ca2+ apresentaram uma espessura mdia de 0,087 0,005 mm e excelente funcionalidade. Os filmes foram facilmente removidos do suporte, apresentaram boa flexibilidade, eram transparentes e lisos. As caractersticas fsicas dos filmes obtidos com benzoato de clcio so apresentadas na Tabela2. Um aumento na concentrao de Ca2+ no 2 estgio resulta em um aumento no grau de reticulao[13], e, como consequncia, a solubilidade em gua diminuiu, a resistncia trao aumentou e o alongamento diminui.

Uma baixa solubilidade de filmes biodegradveis um dos requisitos mais importantes para aplicao em alimentos e frmacos. No entanto, a maioria dos estudos publicados com biopolmeros aborda essencialmente as caractersticas mecnicas e propriedades de barreira dos filmes[24,25]. Observa-se um aumento da frao de material solvel com o aumento no teor de cloreto na soluo de tratamento do 2 estgio. Esse aumento consistente pode ser justificado pela possvel formao de uma reticulao compacta na superfcie dos mesmos, devido ao contato com excesso de Ca2+, conforme j verificado por Al-Musa etal.[26]. Essa camada dificulta a difuso de mais clcio para o interior da matriz filmognica. Os valores de grau de intumescimento obtidos para os filmes so muito baixos se comparados a dados de outros biopolmeros. O efeito do aumento da concentrao de Ca++ na soluo reticuladora sobre a diminuio do GI considervel. Zactiti e Kieckbusch[27] usando uma formulao com 3% CaCl2.2H2O e 0,7% de glicerol, que era pulverizado sobre as faces do filme, no 2 estgio, obtiveram GI da ordem de 0,70. A comparao entre esses valores indica que o processo por imerso alm de ser mais simples, mais eficiente em termos de controle do intumescimento. O aumento da concentrao de clcio na formulao melhorou significativamente a tenso de ruptura do filme, reflexo de uma reticulao mais eficiente, provavelmente na regio da superfcie. Esse aumento da tenso na ruptura aps o tratamento com clcio pode ser explicado pela consolidao da reticulao entre os grupos carboxlicos presentes na molcula de alginato e os ons Ca++[22]. Rhim[25] tambm observou um aumento na tenso na ruptura depois do tratamento com CaCl2. Os valores de tenso de ruptura encontrados so ligeiramente inferiores aos reportados por Zactiti e Kieckbusch[21], que usaram, entretanto, apenas 0,7% de glicerol na soluo do 2estgio, isto , uma quantidade muito menor de plastificante. Os valores de alongamento so baixos comparados aos de outros biofilmes, em todas as condies avaliadas. Em nvel molecular, a presena do on Ca2+ considerada como um obstculo rotao (movimento) das cadeias de alginato, diminuindo a mobilidade das mesmas e consequentemente a capacidade do filme em alongar-se[28]. Resmuan-Lpez e Bodmeier[29] verificaram que a porcentagem de alongamento diminui aps reticulao dos filmes de alginato com clcio, tendo utilizado concentraes entre 1 e 15% Ca2+. Alm disso, eles constataram que a partir de 20% de clcio na soluo, os filmes apresentaram maior alongamento quando comparados aos filmes reticulados com menores concentraes de clcio. Embora os autores

Tabela2. Efeito da concentrao clcio na soluo de tratamento do 2 Estgio, nas propriedades fsicas de filmes de alginato.
Filme F13 F17 F23 F27 F33 F37 F43 F47 F53 F57 Umidade (g/100 gfilme) 13,7 0,33 a 16,5 0,73 b,c,d 13,7 0,31 17,2 0,36
a d

Solubilidade (%) 19,5 0,55 a,b 28,1 0,17 d 19,5 0,88 22,7 1,04
a,b b,c

GI 0,50 0,027 b 0,38 0,039 a 0,52 0,037 0,37 0,021

b a

Tenso na ruptura (MPa) 71,2 2,0 a 86,2 5,1 a,b 95,2 3,8 110,0 9,9
b c

Alongamento (%) 0,71 0,12 a 1,57 0,33 a,b 2,09 0,27 b,c,d 3,10 0,27 d 2,03 0,33 b,c,d 3,12 0,25 d 1,58 0,32 a,c 3,30 0,45 d 2,66 0,37 d 2,70 0,32 d

15,6 0,83 b,c 17,3 0,15 d 16,8 0,36 17,2 0,27 15,4 0,18
c,d d b

16,9 2,62 a 21,4 0,37 a,b,c 18,4 1,58 24,4 3,82 16,8 0,04
a,b c,d a

0,51 0,023 b 0,39 0,017 a 0,49 0,042 0,37 0,029 0,48 0,032
b a b

102,5 6,3 b,c 113,6 4,2 c 95,1 2,3 109,2 8,9 110,7 3,7
b c c

17,5 0,18 d

21,2 0,49 a,b,c

0,32 0,018 a

97,1 8,8 b

Mdia desvio padro (3 repeties). Nota: letras diferentes, na mesma coluna, representam diferenas significativas (p > 0,05) entre as mdias obtidas atravs do Teste de Tukey.

178

Polmeros, vol. 21, n 3, p. 175-181, 2011

Turbiani, F. R. B. et al. - Liberao de benzoato de clcio de filmes de alginato de sdio reticulados com ons clcio

Tabela3. Permeabilidade ao vapor de gua (PVA) de Filmes F1 e F5.

Filme F13 F17 F33 F37 F53 F57 Espessura (mm) 0,057 0,004 a 0,061 0,004 0,064 0,005 0,062 0,003 0,062 0,002
a a a

PVA [g.mm/(m2.dia.kPa)] 4,28 0,43 a 4,79 0,28 a,b 4,15 0,16 a 4,63 0,14 a 4,42 0,16 a 5,34 0,23 b

0,063 0,004 a
a

Mdia desvio padro (3 repeties). Nota: letras diferentes, na mesma coluna, representam diferenas significativas (p > 0,05) entre as mdias obtidas atravs do teste de Tukey.

tenham utilizado filmes de maior espessura e uma metodologia de reticulao diferente, a tendncia foi a mesma encontrada neste trabalho. Na Tabela3, so apresentados os valores da espessura e do coeficiente de permeabilidade ao vapor de gua obtidos para filmes representativos. Os resultados indicam que a reticulao com 7% de CaCl2.2H2O no 2 estgio aumenta ligeiramente a permeabilidade ao vapor de gua. De acordo com a classificao estabelecida por Krochta e De Mulder-Johnston[30], o coeficiente de permeabilidade ao vapor de gua obtido pode ser considerado como moderado, comparado a filmes sintticos. Os valores de PVA encontrados so da mesma ordem de grandeza dos encontrados em filmes obtidos com outros biopolmeros. Zactiti e Kieckbusch[21] encontraram valores ligeiramente maiores de permeabilidade. Carvalho e Grosso[31] constataram que filmes de gelatina (0,10 g de gelatina/mL de soluo) apresentam permeabilidade ao vapor de gua de aproximadamente 4,9 0,17 g.mm/m2.dia.kPa, utilizando umidade relativa igual a 50%, em filmes com espessura de 0,08 0,004 mm. Filmes base de pectina (0,04 g de pectina/mL de soluo) com espessura igual a 0,07mm na temperatura de 25 C e umidade relativa a 75% apresentaram uma PVA igual a 6,80 0,12 g.mm/m2.dia.kPa[32].

Figura1. Frao de benzoato liberada de filmes reticulados com soluo de 3% CaCl2.2H2O: F13 e F33. Tabela 4. Coeficiente de difuso efetivo do benzoato de clcio (Def calculado pela Equao 3) em filmes com diferentes concentraes iniciais de benzoato de clcio e reticulados com 3 ou 7% CaCl2.2H2O.
Filme F13 F17 F33 F37 f ( mm) 0.094 0.074 0.117 0.108 R2 0.9991 0.9995 0.9996 0.9996 Def 107(cm2/s) 4.23 3.21 5.93 5.01

Cintica de liberao do benzoato de clcio

A curva de liberao de benzoato de clcio de filmes reticulados com 3% de soluo de cloreto de clcio mostrada na Figura1. A curva de liberao segue uma cintica de 1 ordem, apresentando uma taxa inicial extremamente alta. Analisando os resultados obtidos, verifica-se que 95% da massa transferida nos primeiros 4 minutos, isto , ainda durante o perodo de intumescimento, podendo concluir, portanto, que o filme produzido tem baixo controle de liberao. As condies do ensaio, entretanto, foram extremamente adversas. Ao atuar como embalagem de alimentos, a difuso ocorre apenas por uma das faces (a liberao 4 vezes mais lenta), pode haver uma resistncia de contato entre o filme e o alimento e a concentrao de benzoato na superfcie no ser zero, mas depender da capacidade de absoro por parte do alimento, e o filme, a no ser que esteja em contato com um alimento muito mido, no estar intumescido pelo contato com gua pura. Todos os dados experimentais foram ajustados a Equao 3 com 21 termos no somatrio e a difusividade efetiva mdia global foi calculada usando a espessura final do filme (equilbrio). Esses valores, bem como os coeficientes de correlao encontrados para cada situao estudada esto apresentados na Tabela4. As linhas traadas na Figura1 correspondem soluo da 2 Lei de Fick. Os resultados indicam um aumento da difusividade efetiva com o aumento da concentrao de benzoato no filme. Zactiti e Kieckbusch[21] encontraram comportamento semelhante estudando

a difuso de sorbato de potssio em filmes de alginato. A ordem de magnitude das difusividades encontradas est de acordo com os valores relatados na literatura para filmes de protenas[20]. As difusividades de benzoato de clcio em filmes de alginato so uma ordem de grandeza maior do que as difusividades encontradas em filmes de polietileno por Han e Floros[33]. Os expoentes de difuso para o modelo da Lei da Potncia (Equao 5) foram obtidos plotando ln (Mt/M) contra ln (t). A linearizao das duas situaes estudadas com filmes reticulados com 3% CaCl2 podem ser vistas na Figura2, e os coeficientes de correlao obtidos foram excelentes (R2 > 0,999). O expoente difusional (n) foi calculado a partir da inclinao destas linhas, enquanto que a constante de difuso (k) foi obtida a partir da interceptao. Como mostrado na Tabela5, os valores do expoente difusional variaram entre 0.5e 1.0, sugerindo que o processo de transporte tinha caractersticas noFickianas (anmalo) e uma taxa de difuso do solvente da mesma ordem de grandeza que o relaxamento do polmero. O desvio do comportamento Fickiano indica que o fenmeno de relaxamento da estrutura do polmero notrio e pode afetar a liberao de benzoato de clcio durante o perodo inicial do processo de difuso. Devido ao visvel grau de intumescimento, conseqncia da natureza hidroflica da matriz investigada, as macromolculas do polmero foram rearranjadas em uma nova conformao. Este pode ser o processo principal responsvel pelo desvio do comportamento ideal da difuso Fickiana[34]. O comportamento de difuso durante os experimentos de liberao at o equilbrio pode ser comparado com a difuso de benzoato de clcio durante o intenso perodo de intumescimento. Isto pode ser feito comparando os parmetros de soluo de tempos curtos com as difusividades efetivas globais j calculados e apresentados na Tabela4. Os dados experimentais obtidos durante os primeiros 30 segundos de contato foram ajustados ao modelo de difuso para tempos curtos, atravs de um grfico linear de Mt/M vs. t . A linearizao das duas situaes estudadas pode ser vista na Figura3 e os parmetros de ajuste so apresentados na Tabela6.

Polmeros, vol. 21, n 3, p. 175-181, 2011 179

Turbiani, F. R. B. et al. - Liberao de benzoato de clcio de filmes de alginato de sdio reticulados com ons clcio

Tabela7. Difusividade efetiva (Def) de benzoato, calculado pela soluo de tempos curtos. Espessura inicial (i), espessura final (f) e espessura mdia (m). Filmes reticulados com 3 ou 7% CaCl2.2H2O.
Filme F13 F17 F33 F37 i ( mm) 0.059 0.053 0.064 0.064 f (mm) 0.094 0.074 0.117 0.108 m ( mm) 0.077 0.064 0.091 0.086 Def 107 (cm2/s) 4.69 3.51 6.32 5.33

Figura2. Modelo da Lei da Potncia aplicado para a frao de benzoato liberada em filmes reticulados com soluo de 3% CaCl2.2H2O: F13 e F33. Tabela5. Expoente difusional (n), constante difusional (k) e coeficiente de correlao (R2) de liberao de benzoato, modelado pela equao da Lei da Potncia. Filmes reticulados com 3 ou 7% CaCl2.2H2O.
Filme F13 F17 F33 F37 n 0.8148 0.9042 0.9504 0.8900 k 102 (segundos) 2.8659 3.0361 3.3459 3.1414 R2 0.9981 0.9975 0.9998 0.0072

Figura4. Frao de benzoato liberada do filme F1 reticulado com soluo de 3 ou 7% CaCl2.H2O: F13 e F17.

Figura3. Ajuste dos dados de liberao do benzoato a soluo de tempos curtos (reta contnua) para filmes reticulados com soluo de 3% CaCl2.2H2O: F13 e F33. Tabela6. Coeficiente angular (a), coeficiente linear (b) e coeficiente de correlao (R2) obtidos a partir de um grfico linear de Mt/M t . Filmes reticulados com 3 ou 7% CaCl2.2H2O.
Filme F13 F17 F33 F37 a 0.2008 0.2090 0.1971 0.1916 b 0.2508 0.2639 0.2908 0.2539 R2 0.9893 0.9999 0.9938 0.9996

Figura5. Frao de benzoato liberada do filme F3 reticulado com soluo de 3 ou 7% de CaCl2.H2O: F33 e F37.

De acordo com a Equao 4, a interceptao da abscissa deve ser zero. Os valores encontrados correspondem a uma diferena inferior a 2 segundos, o que aceitvel e pode corresponder a uma extrao contnuada de benzoato durante a transferncia sequencial das amostras de um copo para outro, j que uma pequena pelcula de umidade permanecia na superfcie do filme. A difusividade do benzoato no filme foi calculada usando o coeficiente linear e a espessura mdia dos filmes. Os resultados

esto apresentados na Tabela7. Uma comparao entre os valores da Tabela7 (difusividade inicial) e na Tabela4 (difusividade mdia global) mostra que eles so suficientemente prximos, permitindo concluir que o processo de absoro de gua tem uma influncia perceptvel, mas pequena em difusividade. importante observar, no entanto, que esses valores so fortemente influenciados pela preciso da determinao de espessura e um modelo mais realista deve incluir a variao do tempo em na integrao da 2a Lei de Fick. Resultados semelhantes foram obtidos por Ozdemir e Floros[20], que investigaram a difuso de sorbato de potssio em filmes de protenas. Eles encontraram que o comportamento no-Fickiano foi o mecanismo predominante no incio do processo de liberao do soluto e desenvolveram um modelo matemtico, derivado da 2a Lei de Fick, combinando as duas difuses em contracorrente, a entrada da gua e a sada de benzoato. Bodea e Leucuta[35] estudaram um processo semelhante de liberao de filmes polimricos ativos, sintetizados com uma mistura de dois polmeros hidroflicos: hidroxipropilmetilcelulose e carboximetilcelulose de sdio. Os resultados confirmaram difuso

180

Polmeros, vol. 21, n 3, p. 175-181, 2011

Turbiani, F. R. B. et al. - Liberao de benzoato de clcio de filmes de alginato de sdio reticulados com ons clcio

Fickiana, mas uma frao importante da substncia ativa foi liberada devido ao relaxamento do polmero (difuso anmala). Quando os filmes contendo benzoato de clcio foram reticulados em contato com soluo de cloreto de clcio, com concentrao mais elevada (7%), uma cintica de liberao de primeira ordem similar a da Figura1 foi observada e os resultados esto apresentados nas Figuras 4 e 5. Excelentes ajustes do modelo da Lei da Potncia foram novamente obtidos, e o expoente difusional e a contante difusional calculados esto apresentados na Tabela5. A diminuio do expoente de difuso sugere que, com um aumento no grau de reticulao o mecanismo de transporte tende a aproximar das condies Fickianas. Os valores obtidos para a difusividade efetiva mdia global e para a difusividade efetiva calculada para o perodo inicial de liberao (Tabela7) tendem a diminuir com o aumento da concentrao de Ca2+, indicando que a mobilidade do benzoato foi afetada pelo aumento do grau de reticulao.

9. Ikeda, A., Takemura, A. & Ono, H. Carbohyd. Polym., 42, p.421 (2000). 10. Grant, G. T.; Morris, E. R.; Rees, D. A.; Smith, P. J. C. & Thom, D. Febs Lett., 32, p.195 (1973). 11. King, A. & Brown H. - Food Hydrocoll., 2, p.115 (1983). 12. Mancini, M.; Moresi, M. & Rancini, R. J. Food Eng., 39, p.369 (1999). 13. Turbiani, F. R. B. Desenvolvimento e caracterizao de filmes ativos de alginato de sdio reticulados com benzoato de clcio, Dissertao em Engenharia Qumica, Faculdade de Engenharia Qumica, Universidade Estadual de Campinas, Campinas (2007). 14. Rhim, J. W.; Gennadios, A.; Weller, C. L. & Hanna, M. A. Indust. Crops Prod., 15, p.199 (2002). 15. Gontard, N.; Guilbert, S. & Cuq, J. L. J. Food Sci., 58, p.206 (1993). 16. Bigi, A.; Panzavolta, S. & Rubini, K. - Biomaterials, 25, p.5675 (2004). 17. ASTM International D 82: Tensile properties of thin plastic sheeting, Philadelpia (1995). 18. ASTM International E 96: Standard test methods of water vapor transmission of materials, Philadelphia (1995). 19. Crank, J. The mathematics of diffusion, 2nd ed., Clarendon Press, Oxford (1975). 20. Ozdemir, M. & Floros, J. D. Analysis and modeling of potassium sorbate diffusion through edible whey protein films. J. Food Eng., 47, p.149-155 (2001). 21. Zactiti, E. M. & Kieckbusch, T. G. J. Food Eng., 77, p.462 (2006). 22. Pavlath, A. E.; Grossett, C.; Camirand, W. & Robertson, G. H. J. Food Sci., 64, p.61 (1999). 23. Rajsharad, C. & Kamble, S. Aqueous film coating containing sodium alginate and preparation thereof, Patent - IPC8 Class: AA61K4736FI, USPC Class: 514779-12/(2008). 24. Kim, K. W.; Ko, C. J. & Park, H. J. J. Food Sci., 67, p.218 (2002). 25. Rhim, J. W. - Lebensm. Wiss. Technol., 37, p.323 (2004). 26. Al-Musa, S.; Abu Fara, D. & Badwan, A. A. J. Control. Release, 57, p.223 (1999). 27. Zactiti, E. M. & Kieckbusch, T. G. Packag. Technol. Sci., 22, p.349 (2009). 28. Smidsrd, O. - Faraday Discuss. Chem. Soc., 57, p.263 (1974). 29. Resmuan-Lpez, C. & Bodmeier, R. J. Controll. Release, 44, p.215 (1997). 30. Krochta, J. M. & Mulder-Johnston, C. D. - Food Technol., 51, p.61 (1997). 31. Carvalho, R. A. & Grosso, C. R. F. J. Chem. Eng., 23, p.45 (2006). 32. Batista, J. A.; Tanada-Palmu, P. S. & Grosso, C. R. F. Cien. Tecnol. Aliment., 25, p.781 (2005). 33. Han, J. H. & Floros, J. D. J. Food Sci., 63, p.435 (1998). 34. Flores, S.; Conte, A.; Campos, C.; Gerschenson, L. & Del Nobile, M. J. Food Eng., 81, p.580 (2007). 35. Bodea, A. & Leucuta, S. E. Inter. J. Pharm., 153, p.247 (1997).t Enviado: 02/10/09 Reenviado: 18/08/10 Aceito: 25/10/10
DOI: 10.1590/S0104-14282011005000034

Concluses
O transporte de benzoato de clcio em filmes de alginato segue comportamento Fickiano e no-Fickiano. A correlao obtida com o ajuste ao modelo de tempos curtos indica que uma aproximao Fickiana aceitvel. Os valores de difusividade efetiva global obtidos usando o modelo derivado da 2a Lei de Fick so prximos aos valores obtidos para a liberao inicial, inferindo que o processo de intumescimento tenha uma influncia limitada sobre o processo de difuso do benzoato, provavelmente devido aos efeitos compensadores: a resistncia devido ao escoamento de gua em contracorrente foi minimizada pela relaxao da estrutura polimrica. Os valores de difusividade encontrados so uma ordem de grandeza menor que a difusividade em alimentos com umidade intermediria, indicando um uso potencial para filmes de alginato como sistemas de liberao de substncias ativas.

Agradecimentos
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) pela concesso da bolsa de mestrado e a FAPESP pelo auxlio pesquisa (Proc. 2005/55499-3).

Referncias Bibliogrficas
1. Scott, G. Polym. Degrad. Stab., 68, p.1 (2000). 2. Buonocore, G. G.; Conte, A.; Corbo, M. R.; Sinigaglia, M. & Del Nobile, M. A. Innov. Food Sci. Emerg. Technol., 6, p.459 (2005). 3. Cherian, G.; Gennadios, A.; Weller, C. & Chinachoti, P. Cereal Chemist., 72, p.1 (1995). 4. Han, J. H. - Food Technol., 54, p.56 (2000). 5. Quattara, B.; Simard, R.; Piette, G.; Begin, A. & Holley, R. J. Food Sci., 65, p.768 (2000). 6. Coma, V.; Sebti, I.; Pichavant, F.; Pardon, P. & Deschamps, A. J. Food Protec., 64, p.470 (2001). 7. King, A. & Brown, H. - Food Hydrocoll., 2, p.115 (1983). 8. Moe, S. T.; Draget, K. I.; Skjak-Braek, G. & Smidsrd, O. Alginates, in: Food polysaccharides and their applications, A. M. Stephen (Ed.), Marcel Dekker, New York (1995).

Polmeros, vol. 21, n 3, p. 175-181, 2011 181