Recuento en placa de microorganismos que NO requieren confirmacin de colonias Obtencin y Expresin de Resultados A.

Introduccin Este ejercicio tiene como finalidad conocer la expresin de resultados de los anlisis de alimentos segn la Norma ISO7218 (1996): Microbiologa de Alimentos. Reglas generales para los exmenes microbiolgicos. Esta norma ISO define como debe hacerse el clculo y expresin de resultados: - cuando el mtodo de anlisis utilizado es un mtodo de recuento en placa en el que no se requiere confirmacin de colonias. Por ejemplo: Recuento de aerobios mesfilos totales, Recuento de hongos filamentosos y levaduras, etc. - cuando el mtodo de anlisis utilizado es un mtodo de recuento en placa en el que si se requiere confirmacin de colonias. Por ejemplo: Recuento de Enterobacteriaceae totales A continuacin tratamos el primer caso, es decir, clculo y expresin de resultados en los mtodos de recuento en placa en el que no se requiere confirmacin de colonias. B. Clculo y expresin de los resultados obtenidos en los mtodos de recuento en placa sin identificacin posterior. En este apartado se explica cmo deben hacerse los clculos en los mtodos de recuento en placa en los casos generales los que no debemos hacer identificacin/comprobacin de las colonias sospechosas. Clculo de resultados Seleccionar las placas de dos diluciones sucesivas donde al menos, una placa de las seleccionadas, contenga un mnimo de 15 colonias. Ejemplo: tenemos los siguientes resultados.

Seleccionaremos dos diluciones consecutivas, en este caso las diluciones 10-2 y 10-3 Contar las colonias de las placas seleccionadas.

Calcular el nmero de Unidades Formadoras de Colonias por gramo o mililitro, segn la siguiente expresin:

Donde:

Sumar todas las colonias contadas en todas las placas seleccionadas para el recuento:

En este ejemplo, se seleccion para el recuento las diluciones 10-2 y 10-3 El C, ser: 235 + 220 + 25 + 28 = 508 El volumen del inoculo aplicado a cada placa depende del mtodo de siembra utilizado: Siembra mediante homogenizacin en masa: 1mL Siembra mediante extensin en superficie: 0,1mL

El nmero de placas seleccionado, siguiendo con el ejemplo, ser n1 = 2 y n2 = 2, porque he seleccionado dos placas de cada dilucin. El nivel de dilucin depende de las diluciones que hayamos seleccionado para contar y ser: 2

d=1, cuando la dilucin menor seleccionada para el recuento se trata de muestra sin diluir (slo para productos lquidos) d=10-1, cuando la dilucin menor seleccionada para el recuento sea la primera dilucin, dilucin 1/10 10-1 d=10-2, cuando la dilucin menor seleccionada para el recuento sea la segunda dilucin, dilucin 1/100 10-2

Y as sucesivamente. Redondeo a dos cifras significativas Los resultados obtenidos mediante la frmula se han de redondear a dos cifras significativas: - Si la ltima cifra es inferior a 5, la cifra precedente no se modifica. - Si la ltima cifra es superior o igual a 5, la cifra precedente ser aumentada una unidad. Proceder de esta forma secuencialmente con todas las cifras del nmero obtenido hasta que se obtengan dos cifras significativas. Por ejemplo, si el nmero obtenido es: 123.756 Redondeo: 123.760 123.800 124.000 120.000 Expresin de resultados Expresar el nmero de Unidades Formadoras de Colonia (UFC) por mililitro (en productos lquidos) o por gramo (en el resto de productos), expresado como un nmero comprendido entre 1,0 y 9,9 multiplicado por la potencia de 10 adecuada, es decir un entero y un decimal multiplicado por la potencia de 10. Por ejemplo, si el redondeo obtenido es: 120.000 Expresin de resultados: 1,2 x 105 Recuento en placa de microorganismos que NO requieren confirmacin de colonias Obtencin y Expresin de Resultados Ejercicios de aplicacin 3

Ejercicio 1: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por homogenizacin en masa de microorganismos en una muestra de carne picada. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

Preguntas 1. En este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: a) Dilucin 10-2 y 10-3 b) Dilucin 10-3 y 10-4 2. Utilizando la siguiente expresin, el resultado obtenido es:

c) 18.636,3 UFC/g d) 190.000 UFC/g 3. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como: a) 1,9 x 104 UFC/g b) 1,9 x 105 UFC/g Ejercicio 2: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por extensin en superficie de microorganismos en una muestra de queso fresco. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

Preguntas 1. En este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: a) Dilucin 10-1 y 10-2 4

b) Dilucin 10-2 y 10-3 2. Utilizando la siguiente expresin, el resultado obtenido es:

a) 26.323 UFC/g b) 24.636 UFC/g 3. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como: a) 2,5 x 104 UFC/g b) 2,4 x 104 UFC/g

Ejercicio 3: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por homogenizacin en masa de microorganismos en una muestra de agua embotellada. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

Preguntas 1. En este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: a) Dilucin 10-1 y 10-2 b) Dilucin 10-2 y 10-3 2. Utilizando la siguiente expresin, el resultado obtenido es:

a) 1500 UFC/g b) 1427 UFC/g 3. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como:

a) 1,4 x 103 UFC/g b) 1,4 x 102 UFC/g Ejercicio 4: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por extensin en superficie de microorganismos en una muestra de agua embotellada. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

Preguntas 1. En este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: a) Muestra sin diluir y dilucin 10-1 b) Dilucin 10-2 y 10-3 2. Utilizando la siguiente expresin, el resultado obtenido es:

a) 445,4 UFC/g b) 445,8 UFC/g 3. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como: a) 4,5 x 102 UFC/g b) 5,5 x 102 UFC/g

Ejercicio 5: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por extensin en superficie de microorganismos en una muestra de queso fresco. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es: Pregunt as 1. En 6

este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: a) Dilucin 10-1 y 10-2 b) Dilucin 10-2 y 10-3 2. Utilizando el clculo adecuado, el resultado obtenido es: a) 4772,7 UFC/g b) 477,2 UFC/g 3. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como: a) 4,8 x 103 UFC/g b) 4,8 x 102 UFC/g Ejercicio 6: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por extensin en superficie de microorganismos en una muestra agua embotellada. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

Preguntas 4. En este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: a) Dilucin 10-1 y 10-2 b) Dilucin 10-2 y 10-3 5. Utilizando la siguiente expresin, el resultado obtenido es: a) 15.923 UFC/g b) 15.727 UFC/g 6. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como: a) 1,6 x 104 UFC/g b) 2 x 105 UFC/g

Recuentos en placa de microorganismos que requieren identificacin Obtencin y expresin de resultados A. Introduccin El presente ejercicio tiene como finalidad conocer la expresin de resultados de los anlisis de alimentos segn la Norma ISO7218 (1996): Microbiologa de Alimentos. Reglas generales para los exmenes microbiolgicos. El ejercicio est formado por unos ejemplos que muestran la manera de realizar la expresin de resultados, segn las Normas ISO, en los mtodos de recuento en placa en los que se requiere confirmacin/identificacin de colonias. Por ejemplo: Recuento de Staphylococcus coagulasa positiva, Listeria monocytogenes, etc. B. Clculo y expresin de los resultados obtenidos, en los mtodos de recuento en placa con identificacin. En este apartado se explica cmo deben hacerse los clculos en los mtodos de recuento en placa en los casos en los que debemos hacer identificacin/comprobacin de las colonias sospechosas. Clculo de resultados Seleccionar las placas de dos diluciones sucesivas donde al menos, una placa de las seleccionadas, contenga un mnimo de 15 colonias caractersticas o sospechosas. Ejemplo, tenemos los siguientes resultados:

Seleccionaremos dos diluciones consecutivas, en este caso las diluciones 10-2 y 10-3. Contar las colonias sospechosas de las placas seleccionadas. A partir de los resultados de la identificacin, calcular el nmero de colonias identificadas, segn la siguiente expresin:

Donde: b: nmero de colonias que responden a los criterios de identificacin. C: nmero total de colonias por placa (antes de identificacin). A: nmero de colonias caractersticas que se re siembran (en general A = 5 en mtodo de referencia y A = 3 en mtodo de rutina). El nmero de colonias caractersticas que se re siembran o se confirman, generalmente es 5 (A = 5). El nmero de colonias que responden a los criterios de identificacin es, por ejemplo: Si para confirmar las Enterobacterias deben realizarse la prueba de la oxidasa y el resultado caracterstico de este tipo de microorganismos es que son oxidasa negativo. El nmero de colonias que responden a los criterios de identificacin sern el nmero de colonias resembradas que dan como resultado oxidasa negativo. Sumar todas las colonias contadas en todas las placas seleccionadas para el recuento,

En este ejemplo, se seleccion para el recuento las diluciones 10-2 y 10-3 El C, ser: 235 + 220 + 25 + 28 = 508 Siguiendo con el ejemplo, Confirmo 5 colonias; A=5 Solamente 4 son oxidasa negativas; b=4 a = 508 Aplicando la expresin citada, El a= (4/5) x 508 = 406,4 El resultado de las colonias calculadas despus de la identificacin, a = 406,4

Calcular el nmero de Unidades Formadoras de Colonias por gramo o mililitro, segn la siguiente expresin:

Esta frmula es similar a la de la expresin de resultados del ejercicio anterior sustituyendo la suma de colonias contadas en todas las placas por la suma de colonias calculadas despus de la identificacin. Recordamos: El volumen del inoculo aplicado a cada placa depende del mtodo de siembra utilizado: Siembra mediante homogenizacin en masa: 1mL Siembra mediante extensin en superficie: 0,1mL

El nmero de placas seleccionado, siguiendo con el ejemplo, ser n1 = 2 y n2 = 2, porque he seleccionado dos placas de cada dilucin. El nivel de dilucin depende de las diluciones que hayamos seleccionado para contar y ser:

d=1, cuando la dilucin menor seleccionada para el recuento se trata de muestra sin diluir (slo para productos lquidos) d=10-1, cuando la dilucin menor seleccionada para el recuento sea la primera dilucin, dilucin 1/10 10-1 d=10-2, cuando la dilucin menor seleccionada para el recuento sea la segunda dilucin, dilucin 1/100 10-2

Y as sucesivamente. Redondeo a dos cifras significativas Los resultados obtenidos mediante la frmula se han de redondear a dos cifras significativas: - Si la ltima cifra es inferior a 5, la cifra precedente no se modifica. - Si la ltima cifra es superior o igual a 5, la cifra precedente ser aumentada una unidad. Proceder de esta forma secuencialmente con todas las cifras del nmero obtenido hasta que se obtengan dos cifras significativas.

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Por ejemplo, si el nmero obtenido es: 123.756 Redondeo: 123.760 123.800 124.000 120.000 Expresin de resultados Expresar el nmero de Unidades Formadoras de Colonia (UFC) por mililitro (en productos lquidos) o por gramo (en el resto de productos), expresado como un nmero comprendido entre 1,0 y 9,9 multiplicado por la potencia de 10 adecuada, es decir un entero y un decimal multiplicado por la potencia de 10. Por ejemplo, si el redondeo obtenido es: 120.000 Expresin de resultados: 1,2 x 105

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Recuentos en placa de microorganismos que requieren identificacin Obtencin y expresin de resultados Ejercicios de aplicacin Ejercicio 1: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por homogenizacin en masa de microorganismos en una muestra de carne picada, donde debemos confirmar si las colonias son glucosa positivas. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

1. En este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: a) Dilucin 10-2 y 10-3 b) Dilucin 10-3 y 10-4 2. La suma de todas las colonias contadas en todas las placas seleccionadas para el recuento es: a) 353 b) 34 3. Utilizando la siguiente expresin:

El resultado de las colonias calculadas despus de la identificacin, si resembramos 5 colonias y slo 3 son glucosa positivas es: a) 211,8 b) 588,3 4. Utilizando la expresin adecuada, El resultado de las UFC/g es: a) 9627,2 b) 2578,9 12

5. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como: a) 2,6 x 105 UFC/g b) 9,6 x 103 UFC/g Ejercicio 2: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por extensin en superficie de microorganismos en una muestra de queso fresco , donde debemos confirmar si las colonias sospechosas son catalasa positivas. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

Conteste las siguientes preguntas: 1. En este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: c) Dilucin 10-1 y 10-2 d) Dilucin 10-2 y 10-3 2. La suma de todas las colonias contadas en todas las placas seleccionadas para el recuento es: a) 98 b) 87 3. El resultado de las colonias calculadas despus de la identificacin, si resembramos 5 colonias y slo 2 son catalasa positivas: a) 39,2 b) 34,8 4. Utilizando la expresin adecuada, El resultado de las UFC/g es: a) 1781,8 UFC/g b) 1581,8 UFC/g 5. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como: a) 1,8 x 103 UFC/g b) 1,6 x 103 UFC/g 13

Ejercicio 3: Clculo y expresin de resultados en un recuento en placa mediante siembra por homogenizacin en masa de microorganismos en una muestra de agua embotellada , donde debemos confirmar si las colonias son lactosa positivas. El nmero de colonias contadas en cada una de las diluciones sembradas es:

Conteste las siguientes preguntas: 6. En este caso, qu diluciones utilizara para calcular el nmero de UFC/g: a) Dilucin 10-1 y 10-2 b) Dilucin 10-2 y 10-3 7. La suma de todas las colonias contadas en todas las placas seleccionadas para el recuento es: a) 112 b) 125 8. El resultado de las colonias calculadas despus de la identificacin, si resembramos 5 colonias y las 5 son catalasa positivas: a) 125 b) 120 9. Utilizando la expresin adecuada, El resultado de las UFC/g es: a) 568,1 UFC/g b) 509 UFC/g 10. Despus de redondear, expresaremos el nmero de UFC/g como: a) 5,7 x 102 UFC/g b) 5,1 x 103 UFC/g

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