Separao de pigmentos por cromatografia em papel Introduo

Clorofilas so pigmentos responsveis pela converso da radiao luminosa em energia, sob a forma de ATP e NADPH, por essa razo, so estreitamente relacionadas com a eficincia fotossinttica das plantas e, conseguintemente, ao seu crescimento e adaptabilidade a diferentes ambientes (Neves et al., 2005). Segundo Taiz e Zeiger (2004) nas plantas superiores so encontradas as clorofilas A e B (figura 1), os carotenos e as xantofilas. Estas clorofilas so os principais pigmentos relacionados com a fotossntese. Todas as clorofilas possuem uma estrutura em anel, quimicamente relacionada ao grupo das porfirinas, contendo um Mg2+ no centro. Em adio, uma longa cauda hidrofbica ancora a clorofila na poro hidrofbica do seu ambiente. J os carotenos e as xantofilas so tetra terpenos formados pela juno de unidades de isopreno. As clorofilas localizam-se nos cloroplastos, sendo esta organela o continente da fotossntese, isto , onde ocorrem as duas reaes importantes: a fotoqumica, nas membranas dos tilacides e a bioqumica, no estroma do cloroplasto. Tais organelas, alm das clorofilas, contm outros pigmentos chamados acessrios, como os carotenides (carotenos e xantofilas). As ligaes entre as molculas de clorofilas so muito frgeis (no-covalentes), rompendo-se com facilidade ao macerar o tecido em solventes orgnicos. O carter hidroflico/hidrofbico de uma substncia influi diretamente na escolha do melhor solvente para a sua extrao. Os solventes polares como a acetona, o metanol, o etanol, o acetato de etila, a piridina e a dimetilformamida so os mais eficazes para a extrao completa das clorofilas. Os solventes apolares como o hexano e o ter de petrleo so os menos eficazes. No caso das clorofilas a e b, o aumento da polaridade da clorofila b em relao clorofila a deve-se ao substtuinte aldedo (VON ELBE, 2000; SATIRO, 2009). A cromatografia uma tcnica extremamente simples e permite a separao destes pigmentos. Adequada para ilustrar os conceitos de interaes intermoleculares, polaridade e propriedades de funes orgnicas, com uma abordagem ilustrativa e relevante. Os mtodos cromatogrficos so utilizados para separar misturas contendo duas ou mais substncias ou ons (FONSECA E GONALVES, 2004).

O mtodo consiste no uso de tiras de papel-filtro como suporte de uma fase aquosa, no qual uma fase mvel orgnica se dirige para o pice. As substncias a serem separadas so colocadas prximas base da tira e se movem verticalmente, dependendo de sua afinidade por uma das fases. A separao , portanto, baseada na separao entre pigmentos da soluo.

Figura 1: Estrutura qumica da clorofila A e clorofila B. Fonte: Streit et al, 2005.

Objetivo
Extrair os pigmentos fotossintticos por partio em solventes com diferentes polaridades; separar clorofilas e carotenides atravs da tcnica de cromatografia em papel.

Material e mtodos

Caracterizao da rea de estudo

O estudo foi realizado na Universidade Federal do Mato Grosso, campus Sinop, que est localizada no estado de Mato Grosso a 500 km da capital Cuiab a uma latitude

115053 sul e a uma longitude 5538'57" oeste, com uma populao estimada em 114.051 e uma rea territorial de 3.206,86 Km. A vegetao de floresta tropical, do tipo Ombrfila ou Tropical. Predomina o clima Tropical Chuvoso, com precipitao mdia anual de 1.900 milmetros. Temperatura mxima anual de 33 C e mnima de 27 C. A altitude em relao do nvel do mar de 384 metros (IBGE Cidades, 2009; ATR).

Material experimental

Foram utilizados trs espcies de plantas: Plectranthus barbatus A. (Boldo), Tradescantia pallida e anacardium occidentale (caju). Cadinho e pistilo para macerao das folhas, 10 ml de lcool metlico para cada espcie utilizada, bquer de 100 ml para acondicionar as solues das amostras extradas atravs das maceraes com adio de lcool metlico. Papel filtro para realizao do processo de cromatografia, pipeta Pasteur e grampeador.

Avaliaes experimentais

O experimento foi realizado durante a aula prtica de Fisiologia Vegetal no laboratrio de sementes da Universidade Federal de Mato Grosso no dia 8 de julho de 2013. E teve por finalidade separar os pigmentos de trs espcies: Plectranthus barbatus A. (Boldo), Tradescantia pallida e anacardium occidentale (caju). Houver a macerao das trs espcies com auxilio de um cadinho e pistilo. Para cada espcie macerada, foram adicionados 10ml de lcool metlico dentro do cadinho e posteriormente foi transferido somente a parte liquida para um bquer de 100ml. Aps essa fase, um papel filtro retangular arranjado em formato cilndrico foi inserido dentro do bquer contendo a soluo da extrao por macerao, o mesmo procedimento foi realizados para todas as espcies.

Resultados

O experimento mostrou-se eficaz, sendo bem perceptvel a absoro dos pigmentos. Em todos os casos a absoro mxima do solvente ficou no mesmo nvel que a absoro que o pigmento antocianina. Quatro tipos de pigmentos foram identificados na separao por cromatografia em papel. A ordem de separao dos pigmentos, de baixo para cima, foi a seguinte: clorofila B, clorofila A, carotenoide e antocianina. O grfico da figura 2 mostra os nveis dos pigmentos obtidos no processo de cromatografia:

Altura em cm obtido pelos pigmtnos

4 Boldo 3 Tradescantia Caju 2

0 Clorofila B Clorofila A Carotenoite Antocianina Solvente

Figura 2: A altura obtido em centmetros no papel filtro, nas analises dos pigmentos. Dados

Discusso
Boldo apresentou os maiores nveis em clorofila a com 2,5 cm de altura e antocianina com 1,7 cm de altura; tradescantia apresentou o maior nvel em clorofila b com 3,0 cm de altura e os nveis de carotenoides foram os mesmos para as duas espcies, sendo 0,5 cm de altura. O cajueiro apresentou os menores nveis para todos os pigmentos.

O experimento funcionou pelo fato das molculas possurem uma propriedade chamada polaridade em comum e tenderem a se atrair mutuamente. A clorofila b apresentou uma cor verde clara, a clorofila a apresentou uma cor verde escuro, carotenoides colorao amarelada e antocianina colorao roxa. Foi observado que as clorofilas A e B apresentam maior fator de reteno, pois foram mais difceis de serem arrastadas j que apresentaram uma maior interao com o papel, indicando que as mesmas so substncias polares (Degani, 1998). O experimento foi concludo com sucesso, pois segundo Flix (2009) o solvente sobe por capilaridade no papel e arrasta os diferentes pigmentos ficando estes dispostos, da parte inferior para a parte superior, na seguinte ordem: clorofila b, clorofila a, xantofilas e carotenos.

Concluso
A separao dos principais pigmentos (clorofila a, clorofila b e antocianina) presentes no vegetal atravs de cromatografia em papel, mostrou-se eficiente, pois apresenta linhas de fcil visualizao com relao de um pigmento para o outro e de baixo custo. O experimento d margem a discusses sobre interaes intermoleculares, polaridade e funes orgnicas.

Bibliografia

DEGANI, A. L. G. Cromatografia um breve ensaio. Qumica Nova na Escola, n7, pag. 21-25, Maio 1998. FLIX, A. A. F. Extrao e separao de pigmentos fotossintticos. Terra Universo de Vida, ano1, 2 parte, Porto Editora, 2007. FONSECA, S.F. e GONALVES, C.C.S. Extrao de pigmentos do espinafre e separao em coluna de acar comercial. Qumica Nova na Escola, So Paulo, n. 20, p. 55-58, novembro, 2004.

NEVES, O. S. C.; CARVALHO, J. G.; MARTINS, F. A. D.; PDUA, T. R. P.; PINHO, T. R. P. Uso do SPAD-502 na avaliao dos teores foliares de clorofila, nitrognio, enxofre, ferro e mangans do algodoeiro herbceo, v.40, n.5, p.517-521, maio, 2005.

SATIRO, E. S. Texto acadmico: Separao de pigmentos por cromatografia. Minas Gerais. Universidade do estado de Minas Gerais, 2009.

STREIT, N. M.; CANTERLE, L. P.; CANTO, M. W.; HECKTHEUER, L. H. H. As clorofilas. Cienc. Rural v.35, n.3, Mai/Jun 2005.

TAIZ, L. & E. ZEIGER. Fisiologia Vegetal. Traduo: SANTARM, E. R., et al. 3 ed. Porto Alegre: Artmed, 2004.719p VON ELBE J.H. Colorantes. In: FENNEMA, O.W. Quimica dos alimentos. 2.ed. Zaragoza : Wisconsin - Madison, 2000. Cap.10, p.782-799.