INTRODUCCIN Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamao de unos pocos micrmetros (entre 0,5 y 5 m, por

lo general) y diversas formas incluyendo esferas (cocos), barras (bacilos) y hlices (espirilos). Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de las clulas eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.), no tienen el ncleo definido ni presentan, en general, orgnulos membranosos internos. Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglicano. Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del estudio de las bacterias se encarga la bacteriologa, una rama de la microbiologa. Las bacterias son los organismos ms abundantes del planeta. Son ubicuas, se encuentran en todos los hbitats terrestres y acuticos; crecen hasta en los ms extremos como en los manantiales de aguas calientes y cidas, en desechos radioactivos, en las profundidades tanto del marcomo de la corteza terrestre. Algunas bacterias pueden incluso sobrevivir en las condiciones extremas del espacio exterior. Se estima que se pueden encontrar en torno a 40 millones de clulas bacterianas en un gramo de tierra y un milln de clulas bacterianas en un mililitro de agua dulce. En total, se calcula que hay aproximadamente 51030 bacterias en el mundo. El tamao de la mayora de las clulas procariotas es muy pequeo tanto que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple para aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes para teir las clulas en el desarrollo de esta gua utilizaremos el mtodo GRAM de tincin que consiste en utilizar colorantes como: solucin de cristal violeta, solucin lugol, alcohol etlico 96%. La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en Bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndoseBacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.

OBJETIVOS Generales Identificar y diferenciar algunas clulas procariotas, siguiendo los procedimientos que nos suministra la gua.

Especficos En muestras tomadas de yogurt, identificar algunas clulas procariotas. Segn la forma clasificar las bacterias observadas en el laboratorio. Segn la tincin de Gram, identificar y clasificar segn su coloracin. ilustrar por medio de fotografas las estructuras de cada muestra de clulas procariotas observadas y permitir as diferenciar lagunas de las diferentes formas que estas pueden tener. Desarrollar la gua de acuerdo a lo aprendido en la prctica.

MATERIALES Y REACTIVOS Materiales Reactivos. . solucin de cristal violeta. Fuccina. Solucin lugol. Glicerina. Alcohol etlico 96% Aceite de inmersin Yogurt. Microscopio Mechero Caja de Petri (con bacterias gram positivas y gram negativas). Asas bacteriolgicas. Rejilla para soportar portaobjetos. Portaobjetos. Laminillas. Gotero. Guantes quirrgicos desechables.

PROCEDIMIENTO

RESULTADOS Clasificacin de las bacterias segn su forma Las bacterias presentan una amplia variedad de tamaos y formas. La mayora presentan un tamao diez veces menor que el de las clulas eucariotas, es decir, entre 0,5 y 5 m. Sin embargo, algunas especies como Thiomargarita namibiensis y Epulopiscium fishelsoni llegan a alcanzar los 0,5 mm, lo cual las hace visibles al ojo desnudo. En el otro extremo se encuentran bacterias ms

pequeas conocidas, entre las que cabe destacar las pertenecientes al gnero Mycoplasma, las cuales llegan a medir solo 0,3 m, es decir, tan pequeas como los virus ms grandes. La forma de las bacterias es muy variada y, a menudo, una misma especie adopta distintos tipos morfolgicos, lo que se conoce como pleomorfismo. De todas formas, podemos distinguir tres tipos fundamentales de bacterias:

Coco (del griego kkkos, grano): de forma esfrica. Diplococo: cocos en grupos de dos. Tetracoco: cocos en grupos de cuatro. Estreptococo: cocos en cadenas. Estafilococo: cocos en agrupaciones irregulares o en racimo. Bacilo (del latn baculus, varilla): en forma de bastoncillo. Formas helicoidales: Vibrio: ligeramente curvados y en forma de coma, juda o cacahuete. Espirilo: en forma helicoidal rgida o en forma de tirabuzn. Espiroqueta: en forma de tirabuzn (helicoidal flexible). Algunas especies presentan incluso formas tetradricas o cbicas. Esta amplia variedad de formas es determinada en ltima instancia por la composicin de la pared celular y el citoesqueleto, siendo de vital importancia, ya que puede influir en la capacidad de la bacteria para adquirir nutrientes, unirse a superficies o moverse en presencia de estmulos. A continuacin se citan diferentes especies con diversos patrones de asociacin:

Neisseria gonorrhoeae en forma diploide (por pares). Streptococcus en forma de cadenas. Staphylococcus en forma de racimos. Actinobacteria en forma de filamentos. Dichos filamentos suelen rodearse de una vaina que contiene multitud de clulas individuales, pudiendo llegar a ramificarse, como el gnero Nocardia, adquiriendo as el aspecto del micelio de un hongo.

LA TINCIN DE GRAM Segn la coloracin de gram las bacterias pueden clasificarse en dos grupos, dependiendo de la coloracin que tomen despus de realizar el proceso de tincin de gram. si la bacteria toma un color azul pertenece al grupo de las gram positivas y si toma un color rojo se clasifica como gram negativa.

Imagen 1: pared celular de las bacterias. El colorante bsico cristal violeta penetra en la clula bacteriana tanto en microorganismos gram positivos como de gram negativos. Luego el lugol o yodo de gran entra en las clulas y constituye un complejo insoluble con la solucin acuosa de cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona tiene como funcin determinante la decoloracin ya que la misma es soluble al complejo que ya se a formado de cristal violeta yodo de gram. Las bacterias gran positivas no se decoloran mientras que las negativas se decoloran. Sin duda alguna esta caracterstica marca la gran diferencia entre estos dos tipos de clulas. Los microorganismos gram negativos tienen espacios en la estructura de su pared y el alcohol-acetona es un solvente lpidico que acta sobre la membrana exterior de la pared de la celula y afecta la membrana citoplasmtica donde se unen los pptidoglicano. Adems, la delgada capa de pptidoglicano mo tiene el complejo cristal violeta- yodo lo cual obliga a las clulas gram negativas a decolorarse. Sin embargo las clulas gram positivas debido a su gruesa capa de pptidoglicano y poco lpidos no son permeables al decolorador puesto que este deshidrata la pared celular y cierra los poros, alterando y afectando el pequeo espacio entre las molculas el complejo cristal violeta- yodo queda atrapado en la pered celular tiendo a las bacterias gram positivas de color azul.

Finalmente la safranina que es un tinte de contraste y puede o no utilizarse ya que en algunos casos se sustituye por carbn- fuscina, cuya funcin es poner de manifiesto las bacterias que estaban decoloradas es decir le da color a las bacterias gram negativas, tomando una tonalidad roja. Las observaciones realizadas en el laboratorio de cuatro tipos de bacterias se clasifican en el siguiente cuadro segn su forma y color al momento de la tincin de gram.

Tabla 1: bacterias observadas, forma y color. Muestra Resultados obtenidos Forma Caja petri 1(bacillius cereus ) Caja petri 2 (e-coli) Bacterias lcticas rhizobium Baston alargado Coloracin azul (gram positiva)

Baston baston Bacilo corto

Rojo (gram negativa) Azul (gram positiva) Rojo (Gram negativa)

COMPOSICIN QUMICA DE LA PARED BACTERIANA El pptidoglicano es la sustancia que le confiere la rigidez a la pared celular y le brinda todo el soporte que esta necesita. Las molculas de pptidoglicano est conformada principalmente por disacridos, constituidos por N-acetilglucosamina y N-cetilmuramico que se unen por enlaces (1>4) repitindose un numero plural de veces y un enlace de tetra-peptido unido a la N-acetilglucosamina. Este compuesto se alterna con los aminoasidos L y D de alanina, D-acido glutamico y lisina o acido diaminopimlico. Las cadenas de estas molculas se unen entre si constituyendo una ultra estructura de enlaces peptidicos con los aminocidos que conforman una estructura rgida y continua que es la pares clulas bacterian. La estructura de estos puentes peptidicos vara entre las especies de bacterias. Los microorganismo presentan marcadas diferencias estructurales en la pare celular que son la base para clasificar las bacterias en dos grupos gram positivas y gram negativas.

Las bacterias gram positivas tienen una pared celular gruesa conformada por varias interconectadas de pptidoglicano en niveles que van por el orden de 80 a 90% de la estructura total. Tambin, poseen otras sustancias como: el acido teitoico, que son polmeros de hasta 30 unidades de glicerol fosfato o ribitol fosfato unidas entre si por enlaces fosfodiesteres. Otro elemento importante que se encuentra en ciertas bacterias gram positivas es el acido teicuronico que se sintetiza como respuesta a la falta de acido teitoico por limitacin de fosforo. Por otro lado, las bacterias gram negativas tienen una fina capa de pptidoglicano que constituyen un 20% de la pared celular. Esta estructura se encuentra rodeada por una segunda membrana lpidica exterior que contiene lipopolisacaridos y lipoprotenas que son de varia complejidad. La membrana externa se encuentra unida a la capa de pptidoglicano por medio de lipoprotenas.

OBSERVACIONES EN EL LABORATORIO. Bacillius cereus Al realizar la observacin en el microscopio es necesario utilizar el objetivo de mayor aumento por el tamao de esta celula, se observa una bacteria de forma de baston alargado, es de color azul debido a que esta bacteria es del grupo de las gram positivas. Bacillus cereus es una bacteria ubicua formadora de esporas que ha sido vinculada con algunos aspectos beneficiosos y nocivos para la actividad econmica de la sociedad. Esta bacteria es frecuentemente encontrada como saprofita en el suelo, agua, vegetacin y aire, desde los cuales se transfiere muy fcilmente a los alimentos. La colonizacin de diferentes nichos ecolgicos es posible debido a su buena adaptabilidad y resistencia a variadas influencias. Las clulas son de 1,0-1,2 m en el dimetro x 3,0-5,0 m de largo Las bacterias cido-lcticas. El yogur es un producto popular entre los consumidores, que se obtiene de la fermentacin de la leche por microorganismos especficos (streptococcus thermophilus y lactobacillus bulgaricus). Las bacterias cido-lcticas constituyen un vasto conjunto de microorganismos benignos, dotados de propiedades similares, que fabrican cido lctico como producto final del proceso de fermentacin. A continuacin se hablara de las ms comunes.

streptococcus thermophilus.(Nombre official: streptococcus salivarius subsp. Thermophilus) es una bacteria Garm-positiva anaerobia facultativa. Organismo que es no motil, no forma esporas es homo-fermentativo adems es un alfahomolitico, su tamao oscila entre 0.7 y 0,9 micras de dimetro. La morfologa de este organismo se ve influenciada por el sustrato y la temperatura de crecimiento. En la leche 45C forma generalmente cadenas cortas, en tanto que a 30C muchas aparecen como diplococos. En medio slidos, las clulas ocurren de forma muy irregular (turgescentesy formas de bastn, ), las colonias en medio solido se caracterizan por ser pequeas y puntiformes. Es sensible frente a sustancias inhibidoras, particularmente antibiticos. Es inhibido por 0.01 U.I de penicilina o 5gmde estreptomicina/ml de leche. lactobacillus bulgaricus: Es un bacilo microaerfilo, Gram-positivo y catalasa negativo, estos organismos forman cido lctico como producto principal de la fermentacin de los azcares. Morfolgicamente, algunos bacilos son bastones delgados y largos cuyo tamao vara de entre 5mm y 2.5 mm; otros son algo parecido al colibacilo, pero, al contrario de este, todos son Gram-positivos. Casi todos son inmviles, pero se han sealado excepciones. Muchos cultivos muestran una forma diplobacilar caracterstica, a menudo reniforme. Frecuentemente los cultivos viejos muestran considerable pleomorfismo. cuyo tamao vara de entre 5mm y 2.5 mm Rhizobium: Es un gnero de bacterias gram-negativas de perfil de suelo que fijan nitrgeno atmosfrico. Pertenece a un grupo de bacterias fijadoras de nitrgeno que se denominan colectivamente rizobio. Viven en simbiosis con determinadas plantas (como por ejemplo las leguminosas) en su raz, despus de un proceso de infeccin inducido por la propia planta mediante la secrecin de lectina, a las que aportan el nitrgeno necesario para que la planta viva y esta a cambio le da cobijo. Ms especficamente, la condicin de simbiosis viene dada por la formacin de una molcula de transporte de oxgeno, equivalente a la hemoglobina, llamada Leghemoglobina. Slo se puede sintetizar cuando los dos organismos se encuentran en simbiosis. Escherichia coli: es quizs el organismo procariotams estudiado por el ser humano. Se trata de una enterobacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en lasaguas negras, pero se lo puede encontrar en todos lados, dado que es un organismo ubicuo. Fue descrita por primera vez

en 1885 por Theodore von Escherich, bacterilogo alemn, quien la denomin Bacterium coli. Posteriormente la taxonoma le adjudic el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor.

CONCLUSIONES: Con la utilizacin del mtodo de tincin gram aprendimos a teir algunas bacterias y observar una de sus muchas diferencias (grampositivas y gramnegativas). Mediante la tincin pudimos observar algunas de las bacterias patgenas que son de gran peligro para nuestra salud (E. Coli ) y algunas que son benficas como el caso de las bacterias presentes en los derivados lcteos como el yogurt, kumis, queso, etc. Gracias a la tincin tambin pudimos observar parte de la estructura de algunas bacterias (parte externa) ayuda indispensable para clasificarlas en los diferentes tipos que existen (diplococci, bacillus subtilis, spirilla, streptococci, etc.) La tincin de gram es una herramienta de gran utilidad y puede ser usada en el diagnstico presuntivo de diversos agentes infeccioso. La tincin de gram es un recurso barato y sencillo que bien utilizado nos puede brindar valiosa informacin las bacterias difieren mucho qumicamente esta diferencia qumica es los que permite distinguir las bacterias por Tincin, pues generalmente, el colorante reacciona con la clula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.

Bibliografa: http://es.wikipedia.org/wiki/Bacterias http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lecciones/cap01/01_ 03_05.htm http://es.wikipedia.org/wiki/E_coli

OBSERVACIONES Escherichia coli

Imagen 2: e-coli Aumento 1000x

Bacillus cereus

Imagen 3: bacteria bacillus cereus Aumento 1000x

Rhizobium

Imagen 4: bacterias de rhizobium Aumento 1000x

Imagen 5: bacterias lcticas Aumento 1000x