PRODUCCIN, UTILIZACIN Y ALGUNOS ASPECTOS TECNICOS DE LOS BIOFERMENTOS. Por: Ing. Agro. Fabin Pacheco R.

1 INTRODUCCIN Los biofermentos son el producto de un proceso de fermentacin de materiales orgnicos. Dicho proceso se origina a partir de la intensa actividad de microorganismos que se encuentran en la naturaleza de manera libre. Muchos microorganismos de los que se pueden encontrar en los biofermentos juegan un papel importante en la agricultura as como tambin en la produccin de algunos alimentos. Tal es el caso, de los microorganismos responsables de producir yogurt, chicha, vino, entre otros. Los biofermentos son un excelente sustituto de los fertilizantes qumicos altamente solubles de la industria. Estos representan una alternativa para los agricultores dependientes de insumos agrcolas sintticos. La elaboracin es sumamente sencilla y los materiales son de alta disponibilidad. Los biofermentos son abonos lquidos ricos en energa y en equilibrio mineral. Estn compuestos bsicamente de boiga fresca disuelta en agua, melaza, suero de leche o leche, sales minerales, harinas de roca molida, entre otros componentes. El proceso de hacer biofermentos es un proceso anaerbico en donde diversos microorganismos son responsables de que se genere del proceso de fermentacin. (Restrepo 2002) El presente documento contiene una serie electos tcnicos y metodolgicos que permitirn al lector comprender el proceso para elaborar y utilizar biofermentos de buena calidad. Dicho proceso, es netamente bioqumico. Por lo tanto en este documento se presentarn, analizarn y aplicaran muchos conceptos propios de la biotecnologa en produccin de alimentos as como tambin principios bsicos de la microbiologa ambiental.

Fotografa 1: Planta de biofermentos en Finca Integrada Orgnica. Universidad EARTH

2 REVISIN DE LITERATURA 2.1 FERMENTACIN

Cameron (SF) Indica: El Origen de la palabra fermentacin se debe a la liberacin de anhdrido carbnico al actuar la levadura sobre el azcar, lo cual genera una efervescencia parecida a la ebullicin (del latn fervimentum: ebullicin). Pasteur demostr que la fermentacin era originada por micro-organismos vivos. Butchner en 1897 agreg que este proceso bioqumico de fermentacin se deba a sustancias que segregaban los microorganismos, especficamente las levaduras. A estas sustancias, tcnicamente se les puede denominar como biocatalizadores o como enzimas, Cameron (SF). Sin embargo, actualmente se conocen ms de 1000 enzimas diferentes y cada una de ellas puede catalizar una reaccin qumica especfica. Las enzimas provienen de la sntesis bioqumica que realizan diversos organismos. (Alberl y Lehninger 1975). Bruchmann (1980) indica que las fermentaciones son procesos anaerbicos que liberan energa. En las fermentaciones, un sustrato orgnico -producto de la degradacin de hidratos de carbono la mayora de las veces- cede equivalentes de reduccin, o sea, electrones o hidrgeno ligados a coenzimas que son captados por un aceptor orgnico. Smith y Wood (1998) indican que la fermentacin se puede entender como una estrategia catablica para utilizar una fuente de energa en ausencia de un aceptor externo de electrones. Este aceptor externo sera el oxgeno, pero como la fermentacin se desarrolla en medios anaerbicos, la fuente de energa seran la glucosa para el caso de los biofermentos. En trminos ms generales, Ward (1989) indica que la fermentacin implica el uso de microorganismos para transformar la materia orgnica mediante procesos de catlisis generados por enzimas. La elaboracin de biofermentos es un proceso bioqumico y el xito en la elaboracin de stos depende, en gran parte, del entendimiento y potenciacin de los procesos que se gestan en las fermentaciones. Bruchmann (1980) indica que la fermentacin puede resumirse de la siguiente forma: Se trata de la degradacin de un azcar hasta la obtencin del producto intermediario central llamado cido pirvico, del cual se originan los diferentes productos de la fermentacin. Dentro de los productos obtenidos se encuentran: etanol, butanol, acetona, isopropanol, acetoina, cido frmico, cido actico, cido lctico, cido propinico, cido propinico, cido butrico, cido succinico, dixido de carbono, hidrgeno y metanol. 2.2 SUSTRATOS PARA LA FERMENTACIN

Los microorganismos en la mayora de los casos se desarrollan sobre el propio sustrato fermentable. Este sustrato, por consiguiente, es apropiado como medio de cultivo porque posee todos los requerimientos nutricionales. Las excepciones a esta norma se presentan cuando el hombre prepara el sustrato idneo para un tipo de microbiologa especfica, que posteriormente es inoculada y de esta forma se obtiene un producto final

especfico. El yogurt u otros alimentos fermentados son un buen ejemplo de lo anterior. Sin embargo, en la inmensa mayora de las fermentaciones, la microbiologa a establecerse y l producto final son influenciados, al fin y al cabo, por el tipo de sustrato que se utilice. (Bruchmann 1980) Las materias primas para la fermentacin provienen de las plantas en su inmensa mayora. Las materias primas que facilitan el proceso de fermentacin contienen hidratos de carbono, compuestos nitrogenados y otros compuestos nutritivos. Este tipo de compuestos estn presentes en productos ricos en azcares como por ejemplo las melazas, lejas, sueros, lactosa, entre otros. Adems, estos nutrientes se pueden encontrar en materiales ricos en almidn como es el caso de las diferentes harinas de cereales o de races. (Bruchmann 1980) Los nutrientes tienen tres funciones: proveer la materia prima requerida para que se desarrolle una sntesis protoplasmtica, suplir la energa necesaria para que se d el crecimiento celular y las reacciones biosintticas correspondientes. Finalmente los nutrientes deben servir como aceptores de los electrones liberados en la reaccin que brinda energa a los organismos. En los organismos aerbicos, el O 2 juega el papel de aceptor y en los organismos anaerbicos estrictos o facultativos, algn producto orgnico del metabolismo o alguna sustancia inorgnica remplaza al O2. (Martn| 1980) Dentro de las fuentes de energa ms usadas por los microorganismos hetertrofos del suelo se encuentran: celulosa, hemicelulosa, lignina, almidn, sustancias pcticas, inulina, quitina, hidrocarburos, azcares, protenas, aminocidos y cidos orgnicos (Martn, 1980). Analizando lo expuesto por Frazier y Westhoff (1991), no solo es importante el tipo de alimento energtico, sino su concentracin, sta incide directamente en aspectos como agua disponible y algunos efectos osmticos sobre la microbiologa. Para un porcentaje de azcar dado, la presin osmtica vara dependiendo del peso molecular del azcar. Ejemplo de sto es que una solucin de glucosa al 10 % tendra el doble de presin osmtica que una solucin de maltosa o sacarosa a la misma dilucin, o bien, presentara el doble de retencin de humedad. A manera de ejemplo, se puede sealar que las levaduras crecen bien en concentraciones de azcar bastante altas, caso contrario son las bacterias que se desarrollan mejor en condiciones bajas. Sin embargo, siempre existen excepciones a la regla y algunas bacterias no presentan problemas al desarrollarse en concentraciones de azcar ms elevadas. Aplicando algunos conceptos microbiolgicos de la industria vincola, es importante destacar que los grados Brix finales de un biofermento no deben de sobrepasar de 24, sto fundamentado en que por cada 2 grados Brix se produce un uno por ciento de alcohol. Porcentajes mayores al 12 % de alcohol inhiben el desarrollo microbiolgico en un proceso de fermentacin. Segn Borrad (1988) el etanol es 4 o 5 veces ms inhibidor que el azcar, por lo que se puede considerar que la elaboracin de un biofermento es un proceso muy similar a la elaboracin de un vino, se deberan de aplicar los conceptos anteriormente mencionados para asegurar el xito del proceso. 2.3 BIOLOGA DE LA FERMENTACIN ANAERBICA.

Considerando que el proceso bioqumico para obtener los biofermentos, es un proceso anaerbico de fermentacin, es importante destacar y discutir aspectos microbiolgicos del proceso. De esta forma, se podrn ampliar los criterios necesarios

para interpretar acertadamente los diferentes resultados obtenidos en los anlisis microbiolgicos. De todos los micro-organismos vivos que existen en el planeta, solo unos cuantos son estrictamente anaerbicos. Generalmente este tipo de micro-organismos viven en ambientes que carecen de oxgeno o que la presencia de ste elemento es mnimo, por ejemplo, en suelos o aguas profundas o en lodos marinos. Aunque existen pocos organismos anaerbicos, stos realizan procesos bioqumicos de singular importancia para el hombre. Por ejemplo, son capaces de extraer energa de la glucosa y otras molculas nutrientes en ausencia de oxgeno, dando como resultado del proceso diversos productos de singular importancia, como seran muchas de las sustancias contenidas en los biofermentos (Alberl y Lehninger 1975). Segn Frazier y Westhoff (1991) es importante sealar que algunos micro organismos considerados aerobicos pueden proliferar de forma precaria en condiciones anaerbicas. Esto permite inferir que el biofermento, a pesar de haber sido producido bajo condiciones anaerbicas, es un producto que a la hora de ser aplicado en campo tambin es responsable de inocular microorganismos aerbicos. Se debe indicar que existen una gran cantidad de microorganismos que se pueden adaptar tanto a condiciones aerbicas como anaerbicas. A este tipo de microorganismos se les denomina facultativos. Se caracterizan por poder tomar energa de la glucosa en condiciones anaerbicas, mediante el mismo tipo de mecanismo bioqumico que utiliza microorganismos estrictamente anaerbicos. Este proceso es conocido como fermentacin anaerbica. Sin embargo, en presencia de oxgeno, stos organismos prefieren oxidar sus alimentos mediante dicho elemento y de esta forma tomar su energa. (Alberl y Lehninger 1975) Por otro lado, se debe de sealar que los distintos microorganismos difieren unos de otros en los productos finales que originan a partir de la glucosa. Ejemplo de stos es el alcohol etlico y el CO2 obtenidos por un proceso de fermentacin con levaduras o la acetona o el cido actico producto de la fermentacin de algunas bacterias. En fin, los productos finales de la fermentacin de la glucosa permiten identificar diferentes microorganismos. (Alberl y Lehninger 1975). La composicin elemental de los microorganismos es muy similar. Entre los diferentes tipos de bacterias, hongos, actinomicetos, algas y protozoarios se presentan los mismos elementos: Nitrgeno, fsforo, potasio, magnesio, azufre, hierro, calcio, magnesio, zinc, cobre, cobalto y molibdeno son parte integral de la estructura protoplsmica. Finalmente se debe de indicar que la clula microbiana est constituida de estos nutrientes esenciales adems de carbono, hidrgeno y oxgeno. (Martn 1980) 2.4 MICROORGANISMOS: IRREMPLAZABLES CATALIZADORES.

Bruchmann, (1980) indica: En la tcnica pueden llevarse a cabo innumerables reacciones hidrolticas y muchas reacciones redox enzimticas libres de clulas, pero las reacciones enzimticas complejas que llevan hasta el producto deseado mediante el trasporte de energa necesitan, en la mayora de los casos, el empleo de microorganismos vivos como productores de enzimas y de preparados enzimticos. Los microorganismos

ms importantes para realizar procesos de fermentacin se encuentran principalmente entre las bacterias (Schizomycetes) y hongos (Fungi), aunque tambin las algas juegan cierto papel. Entre los representantes de las bacterias con mayor importancia tcnica, se pueden mencionar a las eubacterias y a los actinomicetos. A manera de ejemplo, dentro del grupo de las eubacterias se encuentran: Streptococus lactis (Fermentacin de verduras y productos lcteos as como tambin los ensilajes), Bacterias lcticas o Lactobacteriaceae (Productos lcticos, cido lctico), Escherichia coli (contaminacin del agua, flora intestinal). Adems, dentro de ste grupo se encuentran algunos grupos de Pseudomonas y otros de Bacillus de singular importancia. Entre los actinomicetos de importancia tcnica se pueden destacar los Actinomicetes (responsables del olor a tierra y responsables de la sntesis de colorantes y de vitamina B12). (Bruchmann 1980) En lo que concierne a los hongos, principalmente los relacionados con procesos de biofermentos y concentrados microbiales como el MM (ver anexo 1 para mas informacin sobre el MM), cabe destacar que de acuerdo a los estructuras de sus hifas, los hongos altamente organizados se dividen en eumicetos y ficomicetos. Entre los eumicetos se deben de resaltar a las levaduras como hongos de importancia en la agricultura orgnica. En especial las diversas cepas de Saccharomyces cereviciaea (levaduras de panadera, cerveza, vinos, etc). Adems, estn las especies de Merulius, Boletus y Polyborus, quienes tienen habilidades especiales para degradar celulosa y lignina. Finalmente, en la categora de Fungi imperfecti, se encuentran todos aquellos eumicetos que no tienen estructuras sexuales. Representantes importantes en la elaboracin de fermentos de este grupo son diversos organismos del gnero Fussarium sp (fermentacin alcohlica de pentosas). (Bruchmann. 1980) 2.5 CARACTERSTICAS DE LOS BIOFERMENTOS

Los biofermentos se originan a partir de la fermentacin de materiales orgnicos, como por ejemplo los estircoles de animales, plantas verdes y frutos. El proceso de fermentacin es desarrollado gracias a la accin de diversos microorganismos capaces de transformar el estircol, el suero, las mieles y otros materiales que integran el biofermento en vitaminas, minerales y cidos orgnicos. Dichas sustancias son esenciales para el buen desarrollo de las plantas. (Restrepo. 2001) Dentro de las sustancias ms comunes que se pueden encontrar en los biofermentos, segn Restrepo (2001) se encuentran: La tiamina (Vitamina B1): Participa en el metabolismo de los carbohidratos y la funcin respiratoria, juega un rol importante en la trofobiosis al aumentar la inmunidad adquirida en los vegetales Pirodoxina o piridoxol (vitamina B6): Es biosintetizada principalmente levaduras y es estable a la luz y al calor. por

cido nicotnico (vitamina B3): Tambin conocida como niacina, es precursor de enzimas esenciales al ciclo de la respiracin y al metabolismo de los carbohidratos.

cido pantotnico (vitamina B3): Se encuentra en todas las clulas vivas. Es producido por microorganismos e insectos y es esencial para la sntesis de coenzimas, principalmente la A. Riboflavina (vitamina B2): Promueve el crecimiento mediante la accin de oxireduxin. Producida por bacterias y unida al cido fosfrico, forma coenzimas como la FAD o FMN, tambin conocidas como fermentos respiratorios amarillos, los cuales tienen atributos importantes sobre el metabolismo de las protenas y los carbohidratos. Se degrada con la luz solar, pero s es termo resistente. Ward (1989) indica que existen diferentes microorganismos a nivel industrial que se han utilizado para la obtencin de riboflavina, ejemplo de ellos son: Emerothecium ashbyii, Ashdya gossypii, Bacillus subtilis, as como algunos Ascomycetes. Cianobalamina (vitamina B12): la producen bacterias como Streptomices, Bacillus y Pseudomonas. Tambin la producen los actinomicetos. Qumicamente, es un complejo de varias sustancias similarmente activas. Ward (1989) indica que la sntesis qumica de la vitamina B12 es sumamente complicada y por lo tanto, la nica forma de obtenerla comercialmente es a travs de procesos de fermentacin con Pseudomonas sp. cido ascrbico (vitamina C): Cuando Bacillus y Asperjillus fermentan glucosa se forma esta vitamina, es soluble en agua y en alcohol y se degrada a la luz solar. cido flico (miembro del complejo de vitamina B): producido por los microorganismos que estn presentes en la leche, por ejemplo Streptococus, Lactobacillus y Streptomyces. Ergosterol (vitamina E): Los biofermentos que se preparan utilizando leche o suero, producen cantidades significantes de estas sustancias cuando se encuentran presentes hongos como el Penicillium y el Asperjillus. Aminocidos: Las sustancias fermentadas tienen todos, o casi todos, los aminocidos posibles, producidos por los microorganismos. Estos aminocidos se encuentran en cantidades muy variables. Es por sto que se puede indicar que los biofermentos son fuentes muy ricas en aminocidos. Bruchmann, (1980) indica que los aminocidos constituyen la fuente de nitrgeno ms importante para los microorganismos de la fermentacin. Siendo ste el punto de partida para la formacin de compuestos secundarios en la fermentacin alcohlica, Smith y Wood (1998) indican que la conversin de ciertos aminocidos en hormonas especficas o neurotransmisores es absolutamente posible, sto evidencia que la riqueza de los biofermentos no solo debe de ser cuantificada por los macro y micro elementos disponibles a las plantas, sino que el biofermento debe de concedirse como un complejo bioqumico donde las hormonas juegan un papel muy importante. cidos orgnicos: Acontico, crlico, carolnico, flvico, fumrico, glico, gentstico, glucurnico, kjico, lctico, puberlico, entre otros. (Restrepo 2001) A manera de ejemplo, se puede mencionar que el Aspergillus niger ha sido utilizado en procesos industriales de fermentacin para la produccin de cido ctrico. Lactobacillus deldruckii ha sido utilizado desde 1981 en la produccin industrial de cido lctico. (Ward 1989). Segn Martn (1980) el mecanismo microbiolgico principal por el cual los compuestos insolubles de fsforo son movilizados es la produccin de cidos orgnicos.

2.6

INTERACCIONES EN LAS POBLACINES MICROBIANAS

De acuerdo con Allee et all, citado por Atlas y Bartha (2002), en una misma poblacin microbial se desarrollan interacciones positivas y negativas. Estas interacciones dependen absolutamente de la densidad de poblacin. Concretamente se debe de indicar que las interacciones positivas van en favor de un incremento en la poblacin, caso contrario en lo referente a las interacciones negativas. Asimismo, las interacciones positivas cooperacin- se presentan cuando la densidad es baja y las negativas -competencia- cuando la densidad es alta. Las relaciones anteriormente expuestas originan que se genere una densidad de poblacin ptima para una tasa de crecimiento mxima. 2.6.1 Interacciones positivas La cooperacin se presenta por extenso periodo de latencia o cuando se usa un inculo muy pequeo, lo cual causa un dficit de crecimiento. La cooperacin entre microorganismos se debe principalmente a que las membranas semipermeables de la pared celular de los microorganismos son imperfectas, dejando escapar metabolitos indispensables para importantes procesos de biosntesis y de crecimiento. Una elevada poblacin de microorganismos logra contrarrestar el efecto, debido a que dan origen a altas concentraciones extracelulares de los metabolitos en cuestin y de sta forma se reabsorben, evitando que los microorganismos sean afectados. Cuando hay pocos microorganismos y las prdidas de metabolitos son mayores a la sntesis, se impide el crecimiento de la poblacin microbial. (Atlas y Bartha. 2002) Las interacciones cooperativas se desarrollan frecuentemente cuando las poblaciones microbianas utilizan sustratos insolubles como la lignina y la celulosa, los cuales son sustratos ampliamente usados en la elaboracin de diferentes productos de la agricultura orgnica. La produccin de enzimas extracelulares es responsable que dichos sustratos estn mucho ms accesibles para todos los microorganismos. Al presentarse densidades de poblacin bajas, los compuestos solubles liberados por las enzimas se pierden por dilucin con mayor facilidad, afectando as el desarrollo de la poblacin microbial. (Atlas y Bartha. 2002) 2.6.2 Interacciones negativas A ste tipo de interacciones se les denomina de competencia, debido a que los individuos de una misma poblacin utilizan los mismos sustratos y ocupan el mismo hbitat. Adems la presencia de fugas de algunos compuestos metablicos especficos a travs de las membranas celulares causa una retroalimentacin negativa que detiene el crecimiento de la poblacin. (Atlas, R y Bartha, R. 2002) 2.7 INTERACCIONES ENTRE POBLACIONES MICROBIANAS DIFERENTES En la naturaleza constantemente se presentan interacciones entre las diferentes poblaciones microbianas. Es importante comprender las interacciones en cuestin cuando se trabaja con inculos de microorganismos como el MM (ver anexo 1) para que el inculo a utilizar sea de buena calidad y potencie los procesos bioqumicos esperados. A

continuacin se describirn algunas de las interacciones, con la intencin de enriquecer el contenido de este documento. Las categoras que se usan para describir cada interaccin microbiana son de orden conceptual y muchas veces la complejidad de las interacciones en el medio ambiente sobre pasan los lmites de tales categoras. Las posibles interacciones entre poblaciones microbianas se clasifican como interacciones negativas -competencia y amensalismo-; interacciones positivas -comensalismo, sinergismo y mutualismo- o interacciones positivas para una poblacin y negativas para la otra -parasitismo y depredacin-. Cabe destacar que en poblaciones ya establecidas, las interacciones positivas entre poblaciones autctonas se desarrollaran con mayor frecuencia. Poblaciones invasoras o forneas enfrentaran una mayor taza de interacciones negativas con las poblaciones ya establecidas. Por lo tanto, se puede inferir que el concentrado microbial MM (ver anexo 1) aplicado en los biofermentos, es un tipo de inculo microbial que podra presentar mayor cantidad de interacciones positivas que negativas. sto debido a que la microbiologa utilizada para elaborar el inculo microbiano es extrada del bosque circundante a la regin de aplicacin. Por lo tanto, no se estn introduciendo poblaciones totalmente ajenas o forneas a la microbiologa ambiental de la regin. (Atlas, R y Bartha, R. 2002) 2.8 ANTECEDENTES EN INVESTIGACIN DE BIOFERMENTOS

En la Finca Integrada Orgnica de EARTH, en aos anteriores se realizaron dos proyectos de graduacin, que investigaron sobre la respuesta de los cultivos a diferentes dosis de biofermentos. Estos trabajos contienen insumos de vital importancia para establecer lineamientos tcnicos que permitan dar un uso adecuado de los biofermentos. En el primer trabajo realizado por Gonzlez y Valiente (2001), se evaluaron los efectos de 5 tratamientos de biofermento (0, 2, 4, 8 y 16%) sobre el cultivo de lechuga (Lactuca sativa). La frecuencia de aplicacin fue de tres veces por semana. Se pudo determinar que los tratamientos con dosis de 4, 8 y 16 % no presentaron diferencias significativas entre s, en lo que a peso fresco se refiere, pero presentaron diferencias significativas contra el testigo y el tratamiento al 2%. Adems, se pudo observar que el tratamiento al 8 % fue el tratamiento que present mayores respuestas, tanto en el desarrollo de peso fresco como en el de desarrollo de rea foliar. En lo referente a los pesos secos areos y radicales de las lechugas, se pudo determinar que el peso seco areo present diferencias significativas de los tratamientos de dilucin al 4, 8 y 16 % con respecto al testigo y el tratamiento al 2%, ocupando el peso ms alto el tratamiento al 16 %. Sin embargo, en lo referente a los pesos secos de las races, se present una disminucin estadsticamente significativa en el tratamiento al 16 %, colocando el peso de este tratamiento a la misma altura que el testigo. Dentro de las conclusiones presentadas en ese proyecto, se debe de destacar la validacin positiva del efecto de los biofermentos sobre el cultivo de lechuga, indicando que la variacin entre los tratamientos 4, 8 y 16 % no es significativa. El segundo proyecto de graduacin mencionado fue elaborado por Mazariegos y Colindres (2002). Se probaron cinco concentraciones de biofermentos (2%, 4%, 8 %,16 % y 32%) en el cultivo de chile (Capsicun frutesces). La frecuencia de aplicacin fue de

dos veces por semana. Dentro de los resultados ms importantes a considerar, se debe de indicar que dentro de los tratamientos de 4% y 16% se pudo evidenciar que a medida que se aumentaba la concentracin del biofermento, aumentaba la produccin de las plantas, sin embargo, al aumentar la dosis por encima del 16 %, los rendimientos se redujeron en un 33% (la P obtenida es menor a 0.05). Es posible que esta reduccin tenga que estar siendo causado por un proceso de osmosis, ya que la concentracin de solutos en dosis superiores al 16% pueden estar provocando la salida de agua a travs de las membranas celulares, y por consiguiente, teniendo impactos contraproducentes en el buen desarrollo del cultivo.

3 MATERIALES PERMANENTES PARA LA PRODUCCIN DE BIOFERMENTOS 3.1 BARRILES PLSTICOS PARA ELABORAR BIOFERMENTOS Se deben de utilizar barriles o toneles plsticos de 200 litros de capacidad. Dichos barriles deben tener un aro metlico en buenas condiciones para poder sellar hermticamente el bioferlizante. Si se presentan entradas de aire en el proceso de fermentacin el producto final podra no presentar la calidad deseada. Es importante asegurarse que la tapa del barril presente un sello de hule en buen estado en la parte interna del mismo.

Foto 2. Tapas y aro metlico para biofermento. Figura 1. Barril para biofermento

3.2 VLVULAS DE ESCAPE PARA GASES DE LA FERMENTACIN Considerando que en el proceso de fermentacin se producen gases. Es importante facilitar la salida de los mismos por medio de una vlvula de escape. Dicha vlvula debe evitar la entrada del aire al tanque de biofermento. A continuacin se presenta un modelo sencillo de vlvula para la cual se necesitan los siguientes materiales: Una manguera, una botella plstica, una arandela de aluminio, alambre, agua, un macho una hembra de PVC y una pieza de 10 cm de tubo PVC.

Figura 2. Vlvula de escape de gases

Foto 3. Vlvula de escape de gases

La vlvula de escape permite que los gases del biofermento escapen en forma de burbujas a travs del agua contenida en la botella. La salida de los gases se facilita debido a que la presin del gas en el interior del barril es ms fuerte que la presin creada por el sello de agua en la botella. Sin embargo el aire no puede ingresar al barril debido a que el sello de agua en la botella se lo impide. 3.3 OTROS MATERIALES Dos a tres cubetas plsticas de 10 a 20 litros de capacidad, un colador y un palo para mover la mezcla. 4 INGREDIENTES PARA HACER BIOFERMENTOS

Figura 3. Biofermento

4.1 INGREDIENTES REQUERIDOS PARA UN BIOFERMENTO SIMPLE: Las cantidades sugeridas a continuacin son las que se han establecido gracias a la experiencia y el anlisis en la Finca Integrada Orgnica de la Universidad EARTH. Sin embargo, la elaboracin de biofermentos debe de ser un proceso flexible y adaptable a la realidad de cada finca. Tmense las cantidades sugeridas a continuacin como punto de partida para desarrollar su propio abono y no como una receta inquebrantable. 4.1.1 Ingredientes principales y cantidades de los mismos: 50 Kg. de boiga muy fresca de animales rumiantes (vaca o bfalo por ejemplo). 2 litros de leche o 4 litros de suero (como mnimo). 5 kilogramos de ceniza de lea. 180 litros de agua sin clorar y libre de contaminantes o antibiticos. 6 litros de melaza o 30 litros de jugo de caa.

4.1.2 Ingredientes Opcionales: A continuacin se presenta (cuadro 1) una lista de sales minerales y algunas harinas de roca que pueden ser usadas para enriquecer nutricionalmente los biofermentos. Las sales minerales pueden ser usadas a razn de 1 kilogramo por cada barril, pero esto no debe de ser inquebrantable. Por ejemplo, la harina de roca fosfrica se puede adicionar en volmenes de hasta 10 kilos. La escogencia de las determinadas fuentes minerales de elementos, se recomienda hacerla considerando los requerimientos del cultivo en cada etapa de desarrollo. El uso de las fuentes minerales propuestas a continuacin est permitido en la agricultura orgnica. Otro ingrediente opcional es un concentrado microbial denominado como microorganismos de montaa (MM). Este es un inculo microbiolgico de alta efectividad (Anexo 1). Tambin para inocular levaduras se puede utilizar un bloque de 500 gramos de levadura de panadera, esto acelera el inicio del proceso de fermentacin. Cuadro 1: Algunas sales minerales y harinas de roca que pueden usarse para enriquecer un biofermento.
Fuente Mineral Sulfato de potasio Roca fosfatada Carbonato de calcio Sulfato de zinc Sulfato de magnesio Molibdato de sodio Sulfato de manganeso Molibdato de boro Sulfato de hierro Elemento K P Ca Zn Mg Mo Mn Br Fe

5 PREPARACIN

Figura 3. Mezclando ingredientes

Paso 1. Mientras se agita constantemente con el palo, se mezcla la boiga con unos 100 litros de agua en el tanque de 200 litros. Paso 2. Se diluye muy bien la melaza en una cubeta de 20 litros. Cuando la melaza se diluye por completo, se agrega lentamente al barril de 200 litros mientras se contina agitando constantemente la mezcla.

Paso 3. Se diluye muy bien la ceniza de lea (o la sal mineral) en una cubeta de 20 litros. Cuando la ceniza se diluye por completo, se agrega lentamente al barril de 200 litros mientras se agita constantemente. Paso 4. Se aade lentamente la leche o el suero de leche mientras se contina agitando Paso 5. Llenar el barril hasta un volumen total de 180 litros y dar una agitacin final. No se debe llenar totalmente el barril de lquido. Esto con el objetivo de dejar un espacio libre para la generacin de gases. Paso 6. Tapar el barril hermticamente y colocar la vlvula de escape de gases para que d inicio la fermentacin anaerbica. Paso 7. Dejar reposar la mezcla en el barril bajo sombra a temperatura ambiente. El tiempo de reposo oscila entre los 20 y 30 das (en lugares muy fros puede durar hasta 90 das). Una seal de que el biofermento est listo es cuando deja de producir gases. Se debe de destacar que cuando se aade levadura para pan, el tiempo de fermentacin se acelera considerablemente. Incluso un biofermento inoculado con levadura podr ser usado hasta 10 das despus de haber sido elaborado. Paso 8. Verificar la calidad del biofermento. El color es un indicador muy importante. Colores violetas y azules no son deseados e indican que el biofermento est daado. El color deseado es un verde mbar. El olor debe ser agradable, a fermento. Olores a putrefaccin son un indicador claro que algo fall en el proceso y el producto debe de ser descartado.

Foto 4. Agitando mezcla final.

Foto 5. Colocando la boiga en el barril

6 APLICACIN DE BIOFERMENTOS Los biofertilizantes pueden ser utilizados de muy diferentes formas, por ejemplo, pueden ser usados foliarmente, directamente en el suelo o bien pueden ser incorporados en las aboneras para enriquecerlas microbiolgica y nutricionalmente. A continuacin se detallarn algunas de las formas ms utilizadas. Se debe sealar que cuando el biofermento va a ser aplicado en sistemas de riego o en bombas, es importante filtrarlo. De esta forma se separan las fibras y las partculas grandes evitando que se bloqueen las boquillas del sistema de aplicacin (Foto 6 y Figura 4).

Foto 6. Filtrado de biofermento para aplicarlo va foliar

Figura 4. Preparacin de bomba de aspersin con biofermento.

6.1 APLICACIN FOLIAR. Generalmente los biofermentos se aplican con una bomba de aspersin de espalda sobre el follaje. Se aplica hasta que el follaje sea mojado por completo. A manera de ejemplo, se puede destacar que algunas bananeras han estado incorporando biofermentos en las aplicaciones realizadas por avioneta. La fertilizacin foliar tiene la completa capacidad de suplir todas las deficiencias de micronutrientes en una planta. Segn Singh (2003) quien es profesor en la Universidad EARTH: las mltiples y complejas molculas orgnicas presentes en un biofermento aumentan la permeabilidad de la cutcula en el follaje. Al aumentar dicha permeabilidad en el follaje, tambin aumenta la capacidad de absorber nutrientes va foliar. Se debe indicar que existen muchas plantas como las orqudeas o las plantas de la familia Bromeliceaes (pias y bromelias) que suplen hasta ms de un 90 % de sus necesidades nutricionales va foliar. La utilizacin de biofermentos en cultivos como los mencionados anteriormente presenta un gran potencial.

6.2 RIEGO DIRECTO A RACES. La implementacin de biofermentos va raz es una prctica que tambin presenta bastantes ventajas. Lo anterior porque se facilita mucho la aplicacin de los mismos. Esta prctica se puede realizar artesanalmente, usando baldes y regaderas. La aplicacin de los mismos se puede tecnificar incorporando el biofermento a los sistemas de riego por aspersin o por goteo. 6.3 DOSIS Y FRECUENCIA Se debe de indicar que hay dos aspectos que juegan un papel fundamental en la aplicacin de biofermentos. El primero es la dosis de aplicacin, la cual se refiere al volumen de biofermento que ser mezclado con determinado volumen de agua. El segundo aspecto importante es la frecuencia de aplicacin. La cual es determinada por el nmero de aplicaciones que se hacen en un determinado tiempo, por ejemplo el nmero de aplicaciones por semana. En lo referente a la dosis de aplicacin. Se recomiendan dosis de aplicacin que oscilen entre el 5% y el 17%, o sea, se aplican de 5 a 17 litros de biofermento hasta llegar a un volumen de 100 litros de agua. La escogencia de la dosis adecuada depende en gran medida del estado de desarrollo fenolgico de la planta. Por ejemplo, bandejas de plntulas jvenes deben de ser aplicadas con dosis mucho menores que las utilizadas para nutrir plantas adultas, arbustos o rboles frutales.

7 ALGUNOS ANTECEDENTES EN INVESTIGACIN DE BIOFERMENTOS 7.1 ANALISIS DE CALIDAD REALIZADOS EN LOS BIOFERMENTOS DE UNIVERSIDAD EARTH A continuacin se presentan algunos resultados tanto de anlisis qumicos como microbiolgicos que fueron realizados a la planta de biofermentos de la Universidad EARTH (Anexos 3 y 4). Dichos anlisis apenas son el comienzo de un proceso de investigacin que la Finca Integrada Orgnica de la Universidad a decidido iniciar. Generar informacin tcnica sobre los biofermentos es importante para poder determinar parmetros de calidad de los mismos. Se debe de indicar que dichos anlisis no deben caer en el error de solo analizar el contenido de macro y micro nutrientes de los biofermentos. Como se present en el punto 2.5 de la revisin de literatura del presente trabajo; los biofermentos aportan una gran cantidad de vitaminas, aminocidos, cidos orgnicos entre otros compuestos orgnicos complejos, que de una u otra forma cumplen un papel importante en el desarrollo de las plantas.

Cuadro 2. Resultados de anlisis microbiolgico de la planta de biofermentos de FIO. (Anlisis elaborado por el CIA, 2003)
Biofermentos enriquecidos k P Ca Zn Mg Mo Br Mn Mezcla total Bacterias UFC/ml 10160000 9005000 5596000 7075000 190000 210000 13000000 21000000 8000000 Lactobacillus UFC/ml 1400000 150000 90 2000000 18000000 3000000 1000000 8000000 102000000 Bacillus UFC/ml 140000 150000 6000000 17000000 4000000 10000000 150000 2000000 30000000 Levaduras UFC/ml <1 <1 <1 <1 4000 6000 <1 <1 <1

UFC/ml: Unidades formadoras de colonias por mililitro de muestra. El cuadro 2 presenta el anlisis microbiolgico de ocho biofermentos diferentes, cada uno de stos enriquecido con una fuente mineral distinta. El ltimo punto del cuadro -mezcla total- se refiere a la mezcla homognea de cada uno de los ocho biofermentos enriquecidos expuestos en el cuadro. Dicha mezcla es la que se utiliza generalmente en la EARTH para aplicar los cultivos. El cuadro 2 deja en evidencia que el biofermento no solo es un producto que debe ser analizado desde parmetros estrictamente qumicos. Puede observarse con claridad la inmensa riqueza microbiolgica que este producto presenta y lo importante que es evaluarla. Al conocer la microbiologa que acta en este tipo de fermento, se puede inferir en cuales sern algunos de los productos bioqumicos a obtener despus que se haya completado el proceso de fermentacin. Es curioso ver que la poblacin de levaduras es baja si se compara con las poblaciones correspondientes a bacterias, sto considerando que en condiciones cidas, las levaduras que se encuentran en poblaciones heterogneas de microorganismos terminan desplazando a las bacterias. (Comisin Internacional de Microbiologa de Alimentos. 1980). Asimismo Frazier y Westhof (1991) indican que es aconsejable conocer el tipo de cido responsable del pH, ya que algunos en especial, como los cidos orgnicos tienen mayor poder de inhibicin sobre algunos microorganismos en especial. Segn la Comisin Internacional de Microbiologa de Alimentos (1980), el pH es uno de los factores ms importantes que determinan la supervivencia y el crecimiento de los microorganismos. Ejemplo de sto es que los aniones de algunos cidos dbiles (Actico o Lctico) son metabolizados dentro de clulas bacterianas, liberando H+ que acidifica el interior de la clula hasta alcanzar niveles inhibitorios. Sin embargo, muchos organismos pueden adaptarse a rangos bastante amplios de pH. En general las levaduras y los hongos pueden crecer a pH mucho ms bajos que las bacterias, sin embargo los valores mximos en que se puede dar el crecimiento son similares para hongos levaduras y bacterias. Los lmites de crecimiento difieren mucho entre los microorganismos, dentro del rango de pH de 1 y 11. Sin embargo un buen desarrollo puede darse entre un pH de 5 a 8 (Comisin Internacional de Microbiologa de Alimentos. 1980)

Cuadro 3: Anlisis microbiolgico para determinar problemas de inocuidad en los Biofermentos. (Anlisis elaborado por el CIA, 2003)
Coliformes totales Coliformes fecales NMP/100 ml Escherichia coli NMP/100 ml

Biofermentos K Mezcla

NMP/100 ml

9 2

<2 <2

<2 <2

NMP/100 ml. Nmero Ms Probable en 100 ml de muestra.

Para interpretar correctamente los resultados presentados en el cuadro 3, se procedi a realizar una visita al Laboratorio de Microbiologa Alimentos y Aguas de la Universidad de Costa Rica. En ese lugar se entrevist a la Doctora Arias. Dentro de las observaciones que la Doctora dio con respecto a los resultados, se debe de destacar que stos reflejan la inocuidad de los biofermentos y evidencian que este tipo de abono foliar no representa riesgos significativos para la salud del consumidor. Adems, considerando lo expuesto anteriormente en la revisin de literatura (ver punto 2,6), en relacin a las interacciones entre poblaciones de microorganismos, el principio de cooperacin muy difcilmente se podra cumplir en las densidades de poblacin tan bajas obtenidas. Por lo tanto, la fuga de metabolitos sera mayor a la sntesis y por consiguiente se impedira el crecimiento de la poblacin de los microorganismos en cuestin. Adems, Atlas y Bartha (2002) indican que: Normalmente se necesitan miles de patgenos para causar una enfermedad, puesto que un nico individuo raramente puede superar las defensas del hospedador. Cuadro 4. Anlisis qumico de la planta de biofermentos de FIO en EARTH. (Laboratorio de Suelos, Universidad EARTH)
Identificacin K K Mg Mg Mn Mn Fe Fe Zn Zn Ca Ca suero suero K 3530 3435 1653 1728 1788 1788 1308 1550 1518 1565 1438 1600 1845 1853 Ca 560 433 689 775 722 463 592 508 1064 564 986 1128 426 451 Mg 185 170 1405 1508 300 275 152.5 185 157.5 170 170 190 130 125 Fe ppm 1.5 4 15 14.7 76.5 68.8 261 362 2.8 0.6 4.4 5.8 nd nd Cu nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd Zn 1.6 0.5 1.3 1.6 3.1 2.8 0.8 1.5 110.2 111.3 2 18.9 3.1 1.6 Mn 10 7 10 11 331 350 15.9 14.5 8.6 7.7 7.7 8.6 nd nd

El cuadro 4, presenta un anlisis qumico con repeticin. Se analizaron diferentes biofermentos enriquecidos con una fuente mineral del elemento indicado. El biofermento identificado como suero es diferente a los dems ya que en este no se us boiga en su mezcla y el mayor porcentaje de lquido correspondi a suero de leche de vaca.

El objetivo de los anlisis presentados en el cuadro 4 fue evidenciar la solubilizacin de las fuentes minerales utilizadas. Por ejemplo, se puede apreciar que el biofermento enriquecido con sulfato de potasio, es el que presenta una concentracin mayor del mismo elemento. Adems dicho anlisis permite ver el aporte nutricional de los biofermentos desde una reducida ptica qumica elemental, mostrando algunos de los macro y micro nutrientes ms importantes. Cuadro 5. Cantidades obtenidas de nutrientes, pH y grados Brix a travs del proceso de fermentacin en un biofermento.
Muestra 1 2 3 4 5 6 Ca ppm 365 461 344 480 494 498 Mg ppm 160 201 160 225 190 208 K ppm 1511 1479 1227 1545 1328 1508 Zn ppm 0.008 0.2 0.17 0.55 0.56 0.9 Fe ppm 8.82 4 17 53 33 26 PO4 ppm 0.25 0.75 0.72 0.42 0.36 ND pH 5.32 4.5 4.5 4.46 4.48 4.41 Brix 5 3.3 4 3.1 3.6 3.15

El cuadro 5 presenta una serie de anlisis qumicos y mediciones a travs del proceso de fermentacin. En este experimento se elabor un biofermento enriquecido con sulfato de Fe. Se tomaron dos muestras por semana, hasta que el proceso de catlisis de glucosa se hubiera gestado casi en su totalidad y la mezcla llegara a cierta estabilidad bioqumica. El tiempo de muestreo fue de tres semanas. La primera muestra se tom el da cero, da en que se realiz la mezcla de los componentes del biofermento. El objetivo principal fue evaluar los cambios qumicos a travs del proceso de fermentacin. Sin embargo, se debe de resaltar que este tipo de anlisis qumicos no pretenden exponer en su totalidad la riqueza nutricional de los biofermentos. Los materiales que se utilizaron para hacer el biofermento presentado en el cuadro 5 fueron los siguientes: 20 Kilos de boiga fresca de bfalo, 10.5 kilos de melaza, 500 gramos de levadura, 25 litros de suero de leche de vaca, 6 litros de concentrado microbial MM activado (ver anexo 1), un kilo de sulfato de hierro, y agua hasta alcanzar un volmenes el tanque de 180 litros. 8 CONCLUSIONES Los biofermentos son una eficaz herramienta para independizar a los agricultores de los fertilizantes qumicos y de otros insumos externos. Si bien, todava hay mucho que investigar sobre este tipo de fertilizantes, no se puede pasar por alto que los biofermentos funcionan, permitiendo a los agricultores obtener buenas cosechas y plantas sanas. Los biofermentos son una forma de tecnologas muy sencilla, lo cual facilita la implementacin de los mismos en cualquier finca, sin importar que tan difciles sean las condiciones de campo. Los biofermentos no slo son una forma de incentivar la autogestin en el agro, tambin son una forma de impulsar la creatividad y la imaginacin de los productores.

9 LITERATURA CITADA Alberl, L y Lehninger J. 1975. Bioenergtica, la base molecular de las trasformaciones biolgicas de energa. DF, Mxico. Fondo Educativo Interamericano. 242 p. Atlas, R y Bartha, R. 2002. Ecologa microbiana y microbiologa ambiental. Cuarta Edicin. Madrid, Espaa. Pearson Educacin S.A. 677 p. Borrad, R. 1988. Introduccin a la microbiologa moderna de alimentos. Zaragoza, Espaa. ACRIBIA.271 p. Bruchmann, E. 1980. Bioqumica Tcnica, qumica alimentaria de las fermentaciones y agrcola. Zaragoza, Espaa. ACRIBIA. 233 p. Cameron, A. S.F. Manual de bioqumica. Segunda edicin. DF, Mxico. Editorial Nacional S. A. 431 p. Comisin Internacional de Microbiologa de Alimentos. 1980. Ecologa Microbiana de los Alimentos 3. Zaragoza, Espaa ACRIBIA. 332 p. Frazier, W y Westhof, D. 1991. Microbiologa de los alimentos. Zaragoza, Espaa. ACRIBA. 522 p. Gonzles, P y Valiente, F. 2001. Evaluacin y validacin del efecto de un abono orgnico lquido fermentado sobre el crecimiento de lechuga (lactuca sativa cv. emperador) en Finca Integrada Orgnica de EARTH, Costa Rica. Trabajo de graduacin para obtener grado de licenciatura en agronoma. Gucimo, CR, Universidad EARTH. 31 p. Martn, A. 1980. Introduccin a la microbiologa del suelo. AGT Editor SA. DF, Mxico. 491p. Mazariegos, S y Colindres, C. Produccin de chile picante (Capsicum frutences L,) con y sin presencia de arvenses y bajo cinco concentraciones de abono lquido orgnico fermentado, en las Mercedes de Gucimo, Costa Rica. Trabajo de graduacin para obtener grado de licenciatura en agronoma. Gucimo, CR, Universidad EARTH. 44 p. Restrepo, J. 2001. Elaboracin de abonos orgnicos fermentados y biofertilizantes foliares. Experiencias con agricultores en Mesoamrica y Brasil. San Jos, Costa Rica. IICA. 155 p. Restrepo, J. 2002. Biofertilizantes. Preparados y Fermentados a base de mierda de vaca. A Preguntas directas, respuestas prcticas. Santiago de Cali, Colombia. Fundacin Juquira Candiru. 105 p. Smith, C y Word, E. 1998. Energa en los sistemas biolgicos. Addison Wesley Iberoamericana. Estados Unidos. 171 p. Ward, O. 1989. Biotecnologa de la fermentacin, principios procesos y productos. Traducido por Calvo, M. Editorial ACRIBIA, SA. Zaragoza, Espaa. 274 p.

10 ANEXO ANEXO 1. ELABORACIN DE INCULOS MICROBIOLGICO MM PARA ENRIQUECER LOS BIOFERMENTOS Existen diversas formas en las que se pueden usar microorganismos para hacer concentrados o inculos microbiales. En la Finca Integrada Orgnica de la Universidad EARTH, se produce un inculo microbiolgico de alta eficiencia, denominado como Microorganismos de Montaa (MM). La elaboracin de este tipo de inculo es sencilla y se divide en dos procesos que sern expuestos a continuacin: El primer paso es ir a un ecosistema natural cercano (bosques de preferencia) y recolectar un saco de mantillos de bosque (Hojas, ramas, urr, etc). Esta materia orgnica es una fuente rica en microorganismos. Seguidamente se prepara un sustrato que tenga ptimas caractersticas fsicas y nutricionales para que se desarrollen los microorganismos colectados en el mantillo de bosque. Dentro de los materiales a utilizar para crear el sustrato se encuentran: 4 L de melaza, 2 litros de leche o 4 de suero, sacos de semolina de arroz, saco de salvado de trigo, 1/3 saco de carbn vegetal molido, 1 sacos de granza de arroz o aserrn blanco y agua hasta alcanzar un 60 % de humedad. Seguidamente se deben mezclar todos estos componentes dejando por ltimo el saco de mantillos de bosque. Finalmente se coloca la mezcla en un tanque plstico sellado de 200 litros que presente una vlvula de escape anaerbica coma la presentada en el punto 3.2. Es importante que no entre oxgeno en el sistema ya que se busca estimular la fermentacin anaerbica. La segunda etapa del proceso de produccin del MM es denominada como activacin o MM lquido. Esta inicia una vez que el MM slido ha dejado de emitir gas, lo cual ocurre despus de la tercera semana en climas tropicales. Lo anterior indica que la actividad microbiolgica ha disminuido iniciando un proceso de latencia y que el sustrato est bioqumicamente estable. Se deben colectar unos 10 kilogramos del MM slido ya estabilizado y colocarlos en otro tanque igual al primero. Este otro tanque debe de contener una solucin de agua con melaza al 10 %. Seguidamente se debe agitar y dejar reposar unos tres das. Finalmente obtenemos el MM lquido que es un producto con cientos de miles de microorganismos listos para degradar de forma efectiva los desechos orgnicos y colonizar nuevos sustratos. La forma de utilizar ste producto es muy simple, basta con diluir el MM lquido en agua al 50 % y despus aplicarlo sobre el sustrato de inters, por ejemplo los biofermetos. La inocular biofermentos con MM se acelera el proceso de fermentacin y se asegura que el producto final presenta las caractersticas bioqumicas deseadas. El MM activado sirve para inocular cualquier tipo de abono orgnico, adems facilita la eliminacin de los malos olores cuando se aplica en porquerizas o lecheras. El MM activado facilita los procesos de descomposicin de la materia orgnica en cualquier tipo de sistema de manejo de desechos. Por ejemplo se pueden atomizar los desechos orgnicos caseros y de esta forma se eliminan problemas con moscas y malos olores.

ANEXO 2, ANLISIS DE MM. Anlisis microbiolgico del MM lquido y slido.

Bacteria 60000000 5241000 Actinomicetes <1 <1 Lactobacillus Levaduras 3000000 100000 21000000 86000

MM slido MM Lquido

Anlisis qumico del MM activado de FIO.

Identificacin MM MM K 0 0 Ca 0 0 Mg 0 0 nd nd Fe ppm nd nd Cu Zn 1.7 1 Mn 0.02 0.05

ANEXO 3. FOTOS

Foto 7. MM slido

Foto 8. Barriles de MM activado

Foto 9. Planta de Biofermentos Universidad EARTH

Foto 10. MM activado

ANEXO 4. ESQUEMA DEL FLUJO DE FUNCIONAMIENTO DE LA PLANTA DE BIOFERMENTOS DE FIO, EARTH.

Fe

Fe

Suer o

Suer o

Mn

Mn

Mo

Mo

MM

MM Biomezcla

Ca

Ca

MM activado

rea de filtrado y mezclado para llenado de bomba de aplicacin

Zn

Zn

MM activado
B B

Lnea de reserva

Lnea en uso

Barriles de biofermentos enriquecidos Concentrado microbial MM slido