Leveduras da fermentao alcolica:

Avanos e perspectivas

Profa. Dra. Sandra Regina Ceccato Antonini DTAiSER D SE / CCA / UFSCar UFS ar Campus ampus de Araras raras

SULFITO

+ +

BACTRIAS TEMPERATURA

+
PRESSO OSMTICA ETANOL

+
ACIDEZ

Leveduras da panificao: -Inculo puro de Saccharomyces cerevisiae -Facilidade de obteno em grandes quantidades

Baixa persistncia no processo devido aos reciclos celulares Cerca de 2020-30 dias aps o incio da safra a levedura de panificao era safra, substituda por leveduras selvagens

CARIOTIPAGEM

Eletroforese em campo pulsado

Separao eletrofortica dos cromossomos das leveduras p eletrofortico de leveduras difere O caritipo quanto ao nmero, tamanho e intensidade de bandas, permitindo assim a identificao de cada cepa por seu padro cromossmico. O padro cromossmico de cada linhagem fornece um padro nico, como se fosse uma impresso digital .

Linhagens de S. cerevisiae

BASSO, L. C.; OLIVEIRA, A. J.; ORELLI, V. F. D. M.; CAMPOS, A. A.; GALLO, C. R.; AMORIM, H. V. Dominncia das leveduras contaminantes sobre as linhagens industriais avaliada pela tcnica de cariotipagem p g . In: V CONGRESSO DA STAB, , guas g de Lindia, , p.246-250, p , 1993. STECKELBERG, C.; ROSSI, R. A.; ANDRIETTA, M. G. S.; ANDRIETTA, S. R. O uso da cariotipagem como tcnica de identificao e diferenciao de cepas de levedura de fermentao alcolica. In: XVI SINAFERM, Curitiba, 2007.

+ CATCAT-1

Responsveis por 60% do etanol produzido no Brasil

Linhagens previamente isoladas do ambiente industrial mostravam longa persistncia, mantendo-se p p por at 180-190 dias de reciclo.
Copersucar Fermentec
BASSO, L. C.; AMORIM, H. V.; OLIVEIRA, A. J.; LOPES, M. L. Yeast selection for fuel ethanol production in Brazil. FEMS Yeast Research, v.8, p.1155-1163, 2008.

Parmetros fisiolgicos e tecnolgicos da linhagem selecionada PE-02 e da levedura da panificao durante os ciclos f fermentativos t ti utilizando tili d caldo ld d de cana e melao l como substratos a 33oC e com 9,1% (vol/vol) de etanol produzido

Linhagens Parmetro fermentativo Rendimento etanol (%)* Glicerol (%)* G h de Ganho d bi biomassa (%)** Viabilidade (%)*** Trealose (%)**** (%) Glicognio (%)**** Lev. Panificao 88,1 5,40 58 5,8 48 40 4,0 9,0 PE-02 92,0 3,38 82 8,2 94 95 9,5 16,0

Os dados se referem a 5 ciclos fermentativos (em mdia), em triplicata. *F Frao d de acar convertido tid em etanol t l ou glicerol. li l ** Ganho de biomassa por ciclo fermentativo *** Viabilidade celular ao final do ltimo ciclo fermentativo **** Carboidrato de reserva ao final do ltimo ciclo fermentativo

BASSO, L. C.; AMORIM, H. V.; OLIVEIRA, A. J.; LOPES, M. L. Yeast selection for fuel ethanol production in Brazil. FEMS Yeast Research, v.8, p.1155-1163, 2008.

A pequena diferena no rendimento em etanol (%) entre a PE PE-02 e a levedura da panificao significa um aumento de

2,1 milhes de litros de etanol por

safra em uma destilaria de mdia capacidade.

 Trealose
age como um protetor de estresse e, e junto com o glicognio, pode ajudar a levedura a superar as condies fisiolgicas adversas
nveis de trealose abaixo de 0,2% 0, %a afetam eta a viabilidade ab dade celular Manuteno de altos nveis de trealose durante o reciclo celular contribui para a maior tolerncia ao estresse

Glicerol Gli l
formado em resposta aos fatores de estresse (especialmente osmtico)

Baixa taxa de viabilidade Alta concentrao de glicerol Nveis inferiores de trealose e glicognio intracelulares

A levedura de panificao no consegue sobreviver nas condies da fermentao, o que poderia explicar o tempo curto de permanncia nas dornas.

PEPE -02
Anlise gentica e molecular de um diplide derivativo da PE-02 (JAY270) e da sequncia genmica completa de um derivativo haplide (JAY291)

O genoma do diplide altamente heterozigoto e tem muitos polimorfismos estruturais entre cromossomos homlogos Os rearranjos cromossmicos esto confinados s regies perifricas dos cromossomos e no afetam a meiose (no atingem regies que contem genes essenciais)

A estrutura altamente plstica do genoma nas regies perifricas dos cromossomos p permitem a rpida p resposta p de S. cerevisiae ao ambiente modificado.

ARGUESO, J.L. et al. Genome structure of a Saccharomyces cerevisiae strain widely used in bioethanol production. Genome Research, v.19, p.2258-2270, 2009

Homlogos H l d de t tamanhos h diferentes para Cr6 e Cr11

Vitaminas leveduras industriais

Determinao das variaes no nmero de cpias de genes comuns cinco leveduras industriais no Brasil (PE-02, CAT-1, SA-1, VR-1, BG-1) Linhagens industriais apresentaram amplificaes significativas dos genes telomricos SNO e SNZ, envolvidos na biossntese de vitaminas B1 (tiamina) e B6 (piridoxina) (piridoxina). O nmero aumentado de cpias desses genes confere habilidade de crescer mais eficientemente sob as condies repressoras p da tiamina, , especialmente p em meios sem piridoxina e com altas concentraes de acar.

Estas mudanas genticas parecem ser adaptativas e selecionadas para o ambiente industrial, e so necessrias para a eficiente utilizao dos acares.
STAMBUK, B.U. et al. Industrial fuel ethanol yeasts contain adaptive copy number changes in genes involved in vitamin B1 and B6 biosynthesis. Genome Research, v.19, p.2271-2278, 2009.

Vermelho= genes amplificados Preto= locus polimrfico Verde= genes em falta

200 g/l glicose

Sem piridoxina e tiamina

Com tiamina

Sem piridoxina e com tiamina - Competio -

Vermelho= CAT-1 Preto= S288C

Sequenciamento CAT CAT-1

A CAT-1 foi a primeira levedura para a produo de etanol a ter o genoma sequenciado, num trabalho conjunto entre a Universidade Federal de Santa Catarina, ESALQ/USP, Fermentec e Universidade de Stanford (EUA). O sequenciamento seq enciamento constit constitui i um m primeiro passo q que e permitir conhecer melhor a fisiologia da levedura e as adaptaes necessrias para melhorar o rendimento f fermentativo, t ti mesmo nas condies di estressantes t t do d ambiente industrial. , o genoma g poder p ser disponibilizado p a toda Alm disso, a comunidade cientfica, o que permitir desenvolver estratgias visando o melhoramento gentico das leveduras industriais

Floculao
Desenvolvimento de leveduras floculantes condicionais para uso na fermentao alcolica Construo de linhagem de laboratrio e industrial visando a sedimentao das clulas no meio de cultura aps exausto do acar acar, sem decrscimo da produo de etanol clulas transformadas da linhagem de laboratrio tornaram-se resistentes canavanina e demonstraram floculao condicional condicional. Eliminar o uso de centrfugas A levedura industrial (fermento de panificao) transformada apresentou decrscimo significativo da produo de etanol etanol, quando comparada com a linhagem no-transformada.

Primeiro estudo de desenvolvimento de linhagens industriais de leveduras capazes de flocular em associao com o consumo de acar Tecnologia promissora para a substituio da centrifugao no reciclo de clulas. clulas
CUNHA, A.F.; MISSAWA, S.K.; GOMES, L.H.; REIS, S.F.; PEREIRA, G.A.G. Control of sugar of Saccharomyces cerevisiae flocculation for industrial ethanol production. FEMS Yeast Res., v.6, p.280-287, 2006.

YEp-352-FLO5 p Com glicose Sem glicose

YEp-352MOX-BB-FLO5

Fermentao de sacarose - transportadores

Anlise da contribuio para a fermentao da sacarose de uma via pouco caracterizada em S. cerevisiae o transporte ativo de acar atravs da membrana plasmtica e sua hidrlise intracelular

Deleo e eo de t transportador a spo tado de saca sacarose ose de a alta ta a afinidade dade cod codificado cado pe pelo o ge gene e AGT1 do genoma de S. cerevisiae

A caracterizao molecular do transporte ativo da sacarose e fermentao por S. cerevisiae abre novas oportunidades de otimizar as leveduras para processos industriais d a base de d cana-de-acar d O uso da levedura modificada em culturas em batelada simples pode ser uma opo vivel comparando-se com as culturas em batelada alimentada para processos direcionados produo de biomassa de S.

cerevisiae

Uma linhagem de levedura que carece dos principais transportadores de hexose (hxt1-hxt7 e gal2) incapaz de crescer ou fermentar glicose ou frutose, mas capaz de fermentar sacarose devido ao transporte direto do acar para dentro das clulas

Diminui a disponibilidade de acares simples para outras leveduras e bactrias contaminantes

BATISTA, S A.S.; S MILETTI, L.C.; C S STAMBUK, B.U. S Sucrose f fermentation by Saccharomyces S cerevisiae Lacking hexose transport. J. Mol. Microbiol. Biotechnol., v.8, n.1, p.26-33, 2004.

O consumo de sacarose pela levedura engenheirada foi mais lento que o da linhagem q g p parental, mas as clulas cresceram eficientemente em sacarose devido ao aumento da respirao da fonte de carbono.

A levedura engenheirada produziu menos etanol e 1,5 -2 vezes mais biomassa quando cultivada em batelada simples usando 20 g/litro / de sacarose como fonte de carbono

BADOTTI, F.; DARIO, M.G.; ALVES JR, S.A.; CORDIOLI, M.L.A.; MILETTI, L.C.; ARAUJO, P.S.; STAMBUK, B.U. Switching the mode of sucrose utilization by Saccharomyces cerevisiae. Microbial Cell Fact., v.7, 2008, doi 10.1186/1475-2859-7-4.

FIM
Ob i d ! Obrigada

antonini@cca.ufscar.br