UNIVERSIDAD REGIONAL AUTNOMA DE LOS ANDES UNIANDES FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

CARRERA: BIOQUMICA Y FARMACIA

Docente: Ing. Erika Snchez Estudiante:Evelin Guerrero Alexandra Pico

Fecha:25-04-2013 Asignatura: Microbiologa

Semestre: Cuarto Parcial: I

INFORME DE MICROBIOLOGIA 1. FUNDAMENTACIN:

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condicin necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Puesto que la diversidad metablica de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es tambin muy grande. La mayora de los medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar. La preparacin de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio y redisolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolbiles se esterilizan por filtracin y se aaden al resto de los componentes previamente esterilizados en el autoclave. Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son: 1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se obtiene de ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo. 2. Azcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los ms empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa. 3. Extractos. Son preparados de ciertos rganos o tejidos animales o vegetales obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de levadura, de malta, etc. 4. Peptonas. Son protenas hidrolizadas, se obtienen por digestin qumica o enzimtica de protenas animales o vegetales. 5. Fluidos corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguneo son aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos microorganismos patgenos. 6. Sistemas amortiguadores. Son sales que se aaden al medio para mantener el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Ej.: fosfatos bisdicos o bipotsicos.

7. Indicadores de pH. Son indicadores cido-base que se aaden para detectar cambios de pH en el medio. 8. Agentes reductores. Sustancias que se aaden al medio para crear las condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos o anaerobios. Ej.: cistena y tioglicolato. 9. Agentes selectivos. Sustancias como el cristal violeta, las sales biliares etc. que a determinadas concentraciones en el medio actan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos. Tipos de medios de cultivo Por su consistencia: a) Slidos. Son aquellos que contienen un agente solidificante entre sus componentes, normalmente agar. Se preparan en placas de Petri o en tubos en slant (tubos con la superficie del medio inclinada). b) Lquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos o erlenmeyers. Por su composicin: a) Medios generales. Permiten el desarrollo de una gran variedad de

microorganismos. b) Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un determinado grupo de microorganismos, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto. c) Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los dems. d) Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve alguna propiedad que un determinado tipo de microorganismos posee. Siembra de microorganismos En trminos microbiolgicos se entiende por SIEMBRA el proceso mediante el cual se lleva una porcin de una poblacin de microorganismos (inculo) de un cultivo bacteriano a un medio nutritivo para su crecimiento. REALIZACIN DE LA SIEMBRA SON NECESARIAS CIERTAS CONDICIONES: 1) Que se lleve a cabo con instrumentos estriles sobre medios de cultivo estriles. Para estudiar una bacteria determinada, es necesario destruir todos aquellos microorganismos que pudieran encontrarse en el medio y en los instrumentos de trabajo. Esto se consigue con la ESTERILIZACION, proceso

que consiste en conseguir que todos los microorganismos presentes mueran desde el punto de vista microbiolgico. La esterilizacin Se utilizan dos tipos principales de esterilizacin: POR MTODOS FSICOS (calor, filtracin, radiaciones). POR MTODOS QUMICOS (empleo de soluciones qumicas). Los medios de cultivo se esterilizan en el AUTOCLAVE, el cual hace uso del calor hmedo. El autoclave es un aparato que permite elevar la presin y la temperatura con lo que se consigue un aumento en la temperatura de ebullicin del agua. Normalmente, se lleva la presin a 1 atmsfera (por encima de la ambiental) lo que corresponde a una temperatura interior de 126C, mantenindolo en estas condiciones durante 20 minutos. Todo el material de vidrio (pipetas, tubos, varillas.etc..) se esteriliza con calor seco, siendo el "horno Pasteur" el aparato ms empleado (se somete a temperaturas de 140-180 C durante 2h-3h). En el caso de objetos metlicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en el momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta que se pongan al rojo, teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso. 2) Que el inculo no se contamine, modifique o destruya: normalmente se emplea el calor directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces, pipeta, etc. antes y despus de su utilizacin, a pesar de estar esterilizados previamente. 3) Que las condiciones ambientales durante el proceso sean lo ms prximas a la esterilidad para evitar contaminaciones durante el manejo del instrumental y de los medios de cultivo. Esto se resuelve con el uso de cabinas estriles (con flujo de aire y luz ultravioleta). Cuando no se dispone de ellas, se utiliza un mechero Bunsen que, debido a que fuerza la circulacin del aire en sentido vertical y hacia arriba, es capaz de crear un ambiente semiestril en la zona inmediata alrededor y debajo de la llama, de forma que los riesgos de contaminacin disminuyen considerablemente.

2. OBJETIVOS:

OBJETIVO GENERAL: Preparacin de un medio de cultivo agar sangre, agar dextrosa y la siembra de bacterias en este medio de cultivo y esterilizacin. OBJETIVOS ESPECIFICOS: Aprender las tcnicas de preparacin de diferentes medios de cultivo. Familiarizarse con las tcnicas empleadas en Microbiologa para el cultivo y la manipulacin de microorganismos en condiciones de esterilidad.

3. MATERIALES:
Mechero bunsen o similar Agua destilada Varrila de agitacin Matraz de 50 ml Asa de siembra Cultivos bacterianos crecidos: Enterobacter , Moraxella cataralis. 2 Matraz con los medios lquidos estriles. Placas con agar sangre y agar dextrosa Agar sangre y agar dextrosa Sangre Autoclave Estufa Malla Balanza Esptula Algodn Gasa

4. EQUIPOS:
Autoclave

5. METODOLOGA:

PREPARACIN DE MEDIOS 1. Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos casos se parte de un preparado comercial con todos los componentes deshidratados. Siguiendo las instrucciones del fabricante o del profesor, aadir la cantidad de agua adecuada para conseguir la concentracin deseada de los mismos. Si el medio contiene un agente solidificante (agar-agar) hay que calentar el preparado hasta la ebullicin del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una completa disolucin del agar (medios slidos y semislidos) y adjuntar la sangre en el caso del agar sangre en el agar dextrosa no es necesario; para medios lquidos no es necesario calentar, nicamente se agita la mezcla hasta la completa disolucin de la misma. 2. Esterilizar la disolucin.- Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya a utilizarse el medio, el procedimiento ser diferente: a) Medios slidos en placa.- Tapar el matraz con tapn de algodn y cubrir con papel de aluminio. Llevar a esterilizar al autoclave (1210C) durante 15-20 minutos. Una vez estril repartir en placas de Petri estriles y dejar en reposo para que solidifique. b) Medios lquidos.- Una vez disueltos los componentes, tapar con tapn de aluminio y llevar a esterilizar en autoclave. REALIZACIN DE LA SIEMBRA Primeramente colocamos nuestro medio lquido en cada una de las cajas siempre teniendo en cuenta que hay que esterilizar la punta del baln y luego colocar en las cajas dejarlas enfriar. Una vez enfriado el medio lquido en caja se introduce el asa de siembra en el cultivo crecido y se toma un inculo que se extiende sobre el agar inclinado deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag o se puede realizar un doble estriado dependiendo de las exigencias de la prctica. INCUBACIN de los medios sembrados a 37 C hasta que haya habido crecimiento bacteriano.

RESULTADOS:
En primer lugar, observarmos a simple vista diversas caractersticas como el color y el borde de las colonias crecidas en el agar sangre y agar dextrosa as como el

olor y la turbidez del medio ya que en algunos casos suelen ser tpicos de un determinado tipo de microorganismo y pueden servir de ayuda a la hora de su identificacin. Tambin se prepar el medio en un matraz de acuerdo a las instrucciones del envase y se dejo enfriar hasta que nosotros lo podamos soportar con las manos y luego vaciamos en las cajas de petri; despus se dej hasta que enfre y gelifque. En la presente prctica se prepararon exitosamente los medios de cultivo tanto de agar sangre tanto para estriado simple como para estriado doble en este caso

Moraxella cataralis, Enterobacter, como el de agar dextrosa de igual manera

para estriado simple y estriado doble, en este caso utilizamos para la siembra el de las disoluciones con la tierra 1/1000. CALCULOS:

6. CONCLUSIONES:
Aprendimos que el medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa depender de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varan considerablemente. exigentes que crecen bien en Hay microorganismos muy poco de laboratorio normales y medios

microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer. Conocimos que el agar sangre, es un medio enriquecido, diferencial, usado para aislar microorganismos fastidiosos y detectar actividad hemoltica. La hemolisis, se manifiesta como una lisis y digestin completa de los eritrocitos que rodean la colonia, por ejemplo algunas bacterias del genero Streptococcus. La -hemolisis, aparece solo como lisis parcial (los eritrocitos, no son lisados completamente o la digestin no fue completa), por tanto la hemoglobina aparece como una halo verdoso alrededor de la colonia.

7. RECOMENDACIONES:
Consistencia adecuada del medio Esterilidad del medio: Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados en dichos medios. Conservacin de los medios preparados Conservacin de los medios preparados, listos para su uso.

BIBLIOGRAFIA:
Mtodos de Anlisis Microbiolgicos. Corrie Allaert Vandevenne, Marta Escol Ribes .Pgina 177 Diagnostico Microbiologico. Betty A. Forbes Pgina 98-120. Manual de prcticas de Microbiologa bsica y Microbiologa. Luis Roberto Alarcn. Pginas 19-25.