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MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio

PRACTICA Nm. 5 TINCION DE ENDOSPORAS POR LA TECNICA DE SCHAEFFER Y FULTON I. OBJETIVO Demostrar mediante tincin y observacin microscpica la presencia de esporas en las bacterias.

II. INTRODUCCION Existen diversos tipos de esporas microbianas, pero la espora bacteriana tiene especial importancia ya que son organelos de gran resistencia que se producen en el interior de la clula, por lo que reciben el nombre de endosporas. La endospora es una estructura compuesta, de dipicolinato de calcio en el centro, dentro de su compleja cubierta que consta de siete capas que contienen murena. Pocos gneros de bacterias son capaces de formar endosporas, siendo los principales: Bacillus y Clostridium. La esporulacin de una bacteria no es debida a condiciones desfavorables del medio, sino que se forman en cierto perodo del desarrollo de la clula. La funcin de las endosporas no es la reproduccin, ya que de un bacilo que forma una espora solo surge una bacteria por germinacin. Tanto el tamao, como la forma y posicin de la espora en la clula bacteriana son caracteres relativamente constantes de cada especie, ya que poseen cierto valor para distinguir entre s los diferentes tipos de bacterias esporuladas. La posicin de la espora en la clula puede ser central, sub-terminal o terminal y de forma redonda u ovalada. (Fig. 5.1) La espora puede tambin ser ms grande que el dimetro de la bacteria o menor que ste. Las endosporas bacterianas son muy resistentes y refractarias a la desecacin, a los agentes qumicos y sobre todo a temperaturas elevadas, ya que pueden sobrevivir expuestas a altas temperaturas durante largos perodos a diferencia de las bacterias vegetativas normales que mueren con breves exposiciones.

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III. MATERIAL Y SUBSTANCIAS Cultivo bacteriano. Portaobjetos. Asa bacteriolgica. Mechero Bunsen. Tripi. Soporte para efectuar tinciones. Cerillos encendedor. Papel absorbente. Hisopos. Lpiz graso. Portaobjetos. Gradilla. Microscopio. Aceite de inmersin. Verde de malaquita al 5% en agua destilada. Safranina al 0.5% en agua destilada.

IV. TECNICA 1. Preparar una extensin a partir del cultivo bacteriano. 2. Colocar la extensin sobre un soporte y agregar suficiente solucin de verde de malaquita al 5%. 3. Flamear la extensin pasando por debajo de sta el mechero Bunsen lmpara de alcohol hasta observar una ligera emisin de vapores por espacio de minuto y medio, evitando que se evapore totalmente el colorante. 4. Lavar enrgicamente al chorro del agua, hasta eliminar exceso de colorante. 5. Cubrir la preparacin con solucin de contraste, Safranina al 5%, y dejar actuar el colorante durante un minuto y medio. 6. Lavar al chorro del agua hasta eliminar el exceso de colorante. 7. Secar al aire o utilizando papel absorbente. 8. Observar al microscopio con objetivo de inmersin en aceite.

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INTERPRETACION : Las esporas debern estar teidas de color verde y los cuerpos bacilares en rojo.

9. Dibujar lo observado:

Objetivo de inmersin.

V. CUESTIONARIO 1. Mencionar otros mtodos de coloracin de esporas. 2. A qu se debe la resistencia trmica de la endospora? 3. Qu importancia tienen las endosporas? 4. Explicar cmo pueden ser destruidas las endosporas? 5. Mencionar las principales caractersticas de los gneros Bacillus y Clostridium.

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