Etileno: Sntesis, rol en la planta y fruto. Manejo en Post Cosecha.

Julio Retamales
Valent BioSciences; Universidad de Chile

Seminario Tcnico Etileno: Una visin actualizada para su control en cmaras de guarda. FDF-ASOEX. Curic, 11 de Enero de 2007.
J. Retamales, U. de Chile

Desarrollo y maduracin son eventos genticamente programados y sujetos a estricta regulacin

J. Retamales, U. de Chile

Peaks climatricos en etileno y respiracin durante maduracin de pera

C2 2H4 4

J. Retamales, U. de Chile

Etileno...

HCCH H H

...hormona gaseosa producida en muchos tejidos vegetales. autocataltico (estimula su propia produccin) en ciertos tejidos (frutos y flores climatricos). gas voltil. produccin estimulada durante maduracin y exposicin de plantas a condiciones de estrs, p.ej. inundacin, senescencia, dao mecnico, infeccin.
J. Retamales, U. de Chile

Aplicacin de Etileno - Usos Comerciales

aplicado como gas etileno o aspersiones de Ethephon (Ethrel) iniciacin floral (bromeliceas, pias) estimulacin de maduracin (bananas, tomates) desverdecimiento de ctricos induccin de abscisin previo a cosecha mecnica (nogales, guindas para procesamiento) incremento desarrollo de color en tomates cosechados de una vez para procesamiento
J. Retamales, U. de Chile

Inhibicin de Etileno - Usos Comerciales

removido por depuracin qumica o inhibicin de sntesis y accin almacenamiento prolongado con AC en manzanas, kiwis, bananas tratamiento de flores de corte con tiosulfato de plata. tomates transgnicos con maduracin retrasada (almacenamiento prolongado). No en tomates long-life (por genes RIN o NOR) tratamiento de frutas precosecha para inhibir cada y posterior maduracin con inhibidor de sntesis (AVG) almacenamiento de frutas, hortalizas, flores tratadas con inhibidor de accin de etileno (1-MCP)
J. Retamales, U. de Chile

Respuestas a Etileno en Plantas

J. Retamales, U. de Chile

Johnson y Ecker , 1998

Respuestas a Etileno en Plantas

J. Retamales, U. de Chile

Gentileza: Prof. S.F. Yang

Respuestas de las Plantas a Etileno

Estimuladas por etileno Sntesis de C2H4 en frutos climatricos Maduracin en frutos Germinacin de semillas Formacin de races adventicias Abscisin Senescencia

J. Retamales, U. de Chile

Respuestas de las Plantas a Etileno

Inhibidas por etileno Sntesis de C2H4 en tejidos vegetativos y frutos no climatricos Desarrollo de flores en la mayora de las plantas Transporte de auxinas Elongacin de brotes y races (crecimiento)

J. Retamales, U. de Chile

Regulacin de etileno a nivel celular: Biosntesis

J. Retamales, U. de Chile

Johnson y Ecker, 1998

Ms all de la existencia de numerosos elementos en (A) biosntesis y (B) signaling de etileno, slo algunos de ellos se consideran claves por capacidad de regulacin. Veremos (A) biosntesis

Pierik et al., 2006

J. Retamales, U. de Chile

Utilizacin de reguladores de crecimiento: Inhibicin de la biosntesis de etileno, mediante AVG, y de la accin de etileno, por medio de 1-MCP.

J. Retamales, U. de Chile

Lurie, 2005

Posibilidades de control de biosntesis de etileno Los precursores de etileno son AdoMet (SAM) y ACC Los pasos claves de la biosntesis de etileno son catalizados por enzimas ACC-sintasa (ACS) y ACC-oxidasa (ACO).

Schaller y Kieber, 2002

J. Retamales, U. de Chile

Posibilidades de control qumico de biosntesis de etileno: Uso de reguladores de crecimiento AVG = aminoetoxi-vinil glicina

J. Retamales, U. de Chile

Caractersticas de AVG
Producto natural de microrganismos del suelo, descubierto a inicios de aos 70. Bangerth determin efecto de inhibicin de cada de pre-cosecha manzanas en 1978. En los aos 90 se desarroll un metodo para produccin comercial de AVG para poder usarlo como regulador de crecimiento (ReTain) en los aos 90.

J. Retamales, U. de Chile

Produccin de etileno (concentracin de etileno interno) en manzanos Red Delicious aplicados con AVG 4 semanas antes de cosecha normal. Washington, EE.UU.
Ethylene Concentration (ppm )
1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0

Cosecha

04/09

Control 11/09

ReTain 18/09

25/09

J. Retamales, U. de Chile

Fte: Valent BioSciences

AVG constituye un importante regulador de crecimiento por su capacidad de inhibir biosntesis de etileno y, por ende, sus efectos

Inhibicin del proceso de abscisin de frutas (cada de precosecha) con aspersin de AVG a manzanos Red Delicious. Arriba: Con aplicacin de AVG (prod. comercial ReTain) Abajo: Testigo, sin aplicacin de AVG

J. Retamales, U. de Chile

Fte: Valent BioSciences

Inhibicin de maduracin e incidencia de desrdenes fisiolgicos. Corazn acuoso (water core) en manzana Fuji, con (der.) y sin aplicacin de AVG (izq.). Nelson, N. Zelanda.

J. Retamales, U. de Chile

Fte: Valent BioSciences

Otro ejemplo de inhibicin de etileno mediante AVG, adems de AOA (cido amino-oxi-actico). Vida de florero en claveles despus de 20 das.

J. Retamales, U. de Chile

Gentileza: Prof. S. F. Yang

En otras oportunidades los efectos de etileno son deseables

J. Retamales, U. de Chile

Gentileza: Prof. S. F. Yang

Sin embargo, el mismo hecho que etileno es un gas hace que su aplicacin sea complicada; por ejemplo, en condiciones de campo Cmo hacerlo?

Una posibilidad es mediante el uso de los llamados liberadores de etileno como Ethephon (Ethrel), lo que hace que etileno pueda usarse mediante aspersin como cualquier otro regulador de crecimiento o agroqumico
J. Retamales, U. de Chile

Un ejemplo

J. Retamales, U. de Chile

Gentileza: Prof. S.F. Yang

Determinacin de etileno por cromatografa de gases (FID). El etileno, por ser un gas, puede ser analizado fcilmente a partir de tejidos y rganos vegetales, como en frutos

J. Retamales, U. de Chile

Medicin de Etileno en Frutas (tasa de produccin)

J. Retamales, U. de Chile

Medicin de Etileno (etileno interno)

J. Retamales, U. de Chile

Equipo porttil GC (PID) `para medicin de etileno

J. Retamales, U. de Chile

Horno y columna de GC porttil

J. Retamales, U. de Chile

Determinacin continua de etileno con sistema foto-acstico

J. Retamales, U. de Chile

Cristescu et al., 2004

Sistema porttil foto-acstico para determinacin de etileno, University of Nijmegen, Holanda

J. Retamales, U. de Chile

Qu pasa si se modifica permanentemente la biosntesis de etileno? Por ejemplo, a travs de herramientas biotecnolgicas. Qu procesos se ven afectados?

Qu pasa con maduracin?

J. Retamales, U. de Chile

Estados de desarrollo y madurez en frutos

J. Retamales, U. de Chile

Bloqueo de biosntesis de etileno por ACS antisentido

J. Retamales, U. de Chile

Inhibicin de produccin de etileno mediante utilizacin de tecnologa antisense en tomates. Plantas de tomate fueron transformadas para inhibir actividad ACS. La fruta de estas plantas (al centro) presenta reducida produccin de etileno y capacidad de madurar.

J. Retamales, U. de Chile

Oeller et al., 1991

La produccin de etileno se inhibi en un 99,5% en los frutos de plantas antisense (homocigotos y heterocigotos), tanto en aire como aplicados con propileno

J. Retamales, U. de Chile

Los frutos antisense no mostraron el alza de respiracin climatrica. El tratamiento con etileno induce el aumento respiratorio y restablece el patrn climatrico

J. Retamales, U. de Chile

Produccin de etileno en tomates antisense ACS

La produccin de etileno es efectivamente bloqueada al reducirse actividad ACS responsable de su biosntesis

J. Retamales, U. de Chile

Oeller et al., 1991

Maduracin de frutos con modificacin antisense de ACS mediante aplicacin de anlogo de etileno (propileno) La capacidad de maduracin de los tomates antisense no ha sido afectada, ya que maduran normalmente si se aplica anlogo de etileno exgenamente
J. Retamales, U. de Chile

Oeller et al., 1991

Resumen: Bloqueo biosntesis de etileno e inhibicin de maduracin

J. Retamales, U. de Chile

Theologis et al., 1992; Oeller et al., 1991

Frutos antisense ACS con aplicacin de etileno Los tomates antisense ACS retienen la capacidad de reaccionar normalmente frente a etileno

J. Retamales, U. de Chile

Oeller et al., 1991

Comportamiento respiratorio en maduracin de frutos. Frutos climatricos y no climatricos: reaccin a etileno

J. Retamales, U. de Chile

Biale, 1964

Eliminacin (oxidacin) de etileno por permanganato de potasio versus efectos de etileno en frutas no climatricas

J. Retamales, U. de Chile

Fte.: H. Berger; Univ. de Chile

Efecto autocataltico de etileno (estimulacin de la propia sntesis) en frutos y flores climatricos

SAM ACS

ACC ACO

C2H4

Accin

J. Retamales, U. de Chile

En frutas climatricas el desarrollo de ripening capacity se relaciona con activacin de Sistema 2 de sntesis de etileno (autocataltico)

J. Retamales, U. de Chile

Alexander y Grierson, 2002

Esquema de intensidad de biosntesis de etileno en frutos climatricos

La produccin de etileno aumenta rpidamente por activacin de ACS y ACO (autocatlisis); luego disminuye por downregulation.

J. Retamales, U. de Chile

Buchanan et al., 2000

Produccin endgena de etileno en funcin de avance de maduracin en banano

J. Retamales, U. de Chile

Gentileza: Prof. S.F. Yang

Ms all de la existencia de numerosos elementos en (A) biosntesis y (B) signaling de etileno, slo algunos de ellos se consideran claves por capacidad de regulacin. Veremos (B) signaling

Pierik et al., 2006

J. Retamales, U. de Chile

Inhibicin de la biosntesis de etileno, mediante AVG, y de la accin de etileno por medio de 1-MCP

Lurie, 2005
J. Retamales, U. de Chile

J. Retamales, U. de Chile

MECANISMO DE ACCIN DE ETILENO

Sitio de acople
Membrana celular
C2H4

RECEPTOR Mensajero secundario

Nuevas enzimas

Ncleo

NUEVO RNA

Accin
J. Retamales, U. de Chile

MECANISMO DE ACCIN DE 1-MCP Sitio de acople

Membrana celular
MCP

RECEPTOR
Mensajero secundario

Nuevas enzimas

Ncleo

NUEVO RNA

Accin del Etileno

J. Retamales, U. de Chile

INHIBICIN DE SNTESIS Y BLOQUEO DE ACCIN DE ETILENO Etileno externo Etileno interno

ACCIN

PRODUCCIN

Accin segn etileno externo

AVG o AOA

Maduracin Senescencia

Etileno externo Etileno interno

ACCIN

X
PRODUCCIN J. Retamales, U. de Chile

Bloqueo de acople (accin) de etileno

1-MCP

Retardo de maduracin y senescencia

Manzanas Granny Smith con 1-MCP: 150 das a 0C + 5 das a 20C

CONTROL

75 ppb 1-MCP

150 ppb 1-MCP

300 ppb 1-MCP

J. Retamales, U. de Chile

600 ppb 1-MCP

Aplicacin de 1-MCP (1-metilciclopropeno) en peras Packhams Triumph. Apariencia de la fruta despus de 150 das de almacenamiento en atmsfera controlada 1-MCP inhibe la accin de etileno y por ello retarda maduracin y senescencia de frutos climatricos. La reversin de los efectos de etileno para asegurar madurez de consumo puede ser crtica
J. Retamales, U. de Chile

Retamales et al., 2002

Brasil: Banana; 7 das despus del tratamiento con 1-MCP

J. Retamales, U. de Chile

Presencia de etileno en almacenamiento puede inducir cambios en maduracin; p.ej. ablandamiento en kiwi

J. Retamales, U. de Chile

Retamales et al., 1997

Sntesis Sntesis y y accin accin de de etileno etileno

Metionina

S-adenosilmetionina (SAM)

cido aminociclopropanocarboxlico (ACC)

O2
C2H4 (Etileno)
Accin de etileno inhibida por CO2
J. Retamales, U. de Chile

Concepto de Atmsfera Modificada MAP (Modified Atmosphere Packaging)

1. Atmsfera Normal (21% O2 y 0,03% CO2, resto N2) 2. Atmsfera Modificada: con la propia respiracin

alto O2 O2
J. Retamales, U. de Chile

CO2

bajo CO2

Fuentes de etileno y contaminacin

J. Retamales, U. de Chile

Eliminacin de etileno en almacenamiento refrigerado de frutas

Convertidor cataltico

J. Retamales, U. de Chile

Eliminacin de etileno mediante oxidacin con permaganato de potasio (KMnO4) en almacenamiento refrigerado

J. Retamales, U. de Chile

Por otra parte, comercialmente puede ser deseable aplicar etileno (como gas) para favorecer maduracin

J. Retamales, U. de Chile

Esquema de tratamientos de maduracin en bananos con aplicacin de etileno

J. Retamales, U. de Chile

Integracin de factores de manejo en maduracin. Etileno es fundamental, pero no el nico..

50 ppm C2H4

KMnO4

2%O2 + 4%CO2

J. Retamales, U. de Chile

Inhibicin de sntesis y accin de etileno

1-MCP
ACCIN DE ETILENO

CH 3

RECEPTOR

J. Retamales, U. de Chile

Consideraciones generales sobre etileno

El etileno es una fitohormona gaseosa que participa en regulacin de diversos procesos en plantas. Las plantas pueden regular los niveles de etileno mayormente a travs de su biosntesis determinada por enzimas ACS y ACO. Etileno participa en la regulacin de maduracin en frutos, senescencia de flores, abscisin de flores y frutos y en la adaptacin a stresses ambientales, entre otras funciones. Etileno puede ser utilizado para promover maduracin y abscisin de frutos, mientras su inhibicin permite prolongar vida til de fruta, lo que lo hace un factor pertinente en postcosecha de frutas. El conocimiento de procesos bsicos de sntesis y accin de etileno permite su integracin como herramienta de manejo.
J. Retamales, U. de Chile