MSTER INTERUNIVERSITARIO EN INGENIERA AMBIENTAL

ESPECIALIDAD EN DIRECCION DE ESTACIONES DEPURADORAS DE AGUAS RESIDUALES

TRABAJO FINAL DE MSTER MSTER: STER:

Realizado por:
CARLOS VICENTE GARCA
GRUPO AGUAS DE VALENCIA EDAR QUARTQUART-BENAGER BENAGER

Directores:
DANIEL AGUADO GARCA JOAQUN SERRALTA SEVILLA

Valencia, 2011

DATOS Autor: Carlos Vicente Garca Direccin: Ronda del Parque n 14 5E CP 44002 TERUEL e-mail: carlosvigar@hotmail.com Telfono: 600317795 Empresa: Grupo Aguas de Valencia, Gran Va Marqus del Turia, 19 CP46005 Valencia Valencia

Resumen

RESUMEN
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Resumen

Resumen

RESUMEN El problema de la eutrofizacin causa deterioros de los ecosistemas acuticos. La solucin a este problema pasa por la minimizacin de los vertidos y del exceso de nutrientes, principalmente nitrgeno y fsforo, en las aguas vertidas a cauces naturales (ros, lagos, mares). Las estaciones de tratamiento de aguas residuales son las encargadas de eliminar gran cantidad de estos nutrientes, reduciendo considerablemente su volumen en los vertidos a los ecosistemas acuticos. La implantacin de esquemas de tratamiento para la eliminacin biolgica de nitrgeno, es necesaria para abordar la minimizacin del problema de la eutrofizacin. Sin embargo, el diseo de muchas estaciones depuradoras de aguas residuales (EDAR), realizadas cuando la legislacin no exiga la eliminacin de nutrientes, no permite la eliminacin biolgica de nitrgeno mediante el proceso nitrificacin/desnitrificacin. Actualmente, la normativa vigente obliga a muchas de estas EDAR a buscar soluciones con el fin de cumplir los requisitos de vertido. Las soluciones pasan por la construccin de un nuevo reactor o la construccin de una cmara anxica, y la instalacin de una corriente de recirculacin interna, soluciones todas ellas que suponen una elevada inversin econmica, adems de un largo tiempo de ejecucin. El objetivo principal de este trabajo es estudiar la eliminacin biolgica de nitrgeno en plantas que no hayan sido diseadas para ello (sin zona anxica y/o sin recirculacin interna). Para ello se ha realizado un estudio en planta piloto en el que se pretende mediante aireacin intermitente alcanzar concentraciones de nitrgeno admisibles por la legislacin con un consumo energtico mnimo, es decir, trabajando con un tiempo de retencin celular (TRC) aerobio bajo y concentraciones de oxgeno disuelto bajas. En este estudio se muestra la utilidad de integrar diversas tcnicas, como son las tcnicas microscpicas moleculares (hibridacin in situ FISH), tcnicas respiromtricas, y tcnicas microscpicas simples (contraste de fases, tinciones) a los sistemas de eliminacin biolgica de nitrgeno, mostrando la utilidad de dichas tcnicas para el seguimiento y control de los procesos biolgicos. Complementado adems con resultados analticos y operacionales demostrando con todo ello que la aireacin intermitente es un sistema perfectamente vlido para la eliminacin biolgica de nitrgeno y la optimizacin energtica. Adems, se utilizar el software DESASS para la simulacin de la planta piloto, ajustando los parmetros cinticos para reproducir los resultados experimentales obtenidos mediante las tcnicas mencionadas anteriormente.

Resumen

El trabajo desarrollado en el presente estudio supone un conocimiento ms profundo de los sistemas de eliminacin de nitrgeno, adems de dar solucin a otro de los principales problemas que actualmente tiene lugar en las estaciones depuradoras de agua residual como es la optimizacin energtica y ahorro econmico.

ndice

NDICE
__________________________________________________________________________________________________________

ndice

ndice

NDICE

1- INTRODUCCIN ................................................................................. 3
1.11.21.31.41.51.6La eutrofizacin ................................................................................................ 3 El nitrgeno en sistemas acuticos ................................................................... 5 El nitrgeno en las aguas residuales ................................................................. 6 El fsforo en las aguas residuales ..................................................................... 8 Legislacin ......................................................................................................... 8 Eliminacin biolgica de nitrgeno en aguas residuales .............................. 10
Nitrificacin y sus factores................................................................................. 10 Metabolismo implicado en el proceso de nitrificacin..................................... 11 Proceso de desnitrificacin ................................................................................ 12 Metabolismo implicado en el proceso de desnitrificacin ............................... 13 Esquemas del proceso de eliminacin biolgica de nitrgeno ......................... 14 Esquemas de eliminacin biolgica conjunta de nitrgeno y fsforo. ........... 15

1.6.11.6.21.6.31.6.41.6.51.6.6-

1.7-

Eliminacin fsico-qumica de nitrgeno en aguas residuales...................... 18

1.8- Control del proceso nitrificacin/desnitrificacin mediante aireacin intermitente. .............................................................................................................. 19 1.91.10Tcnicas microscpicas ................................................................................... 20 Hibridacin in situ (FISH) .......................................................................... 22

1.10.1Organismos responsables de la nitrificacin y sondas FISH utilizadas para su identificacin. .................................................................................................................... 23 1.10.2Organismos responsables de la desnitrificacin y sondas FISH utilizadas para su identificacin. ....................................................................................................... 25

1.111.12-

Respirometra .............................................................................................. 26
Anlisis de los diferentes tipos de respirmetros. ......................................... 26

1.11.1-

Software de simulacin de EDAR: DESASS .............................................. 28

Caractersticas del software ........................................................................... 28 Modelos utilizados.......................................................................................... 29 Aplicaciones.................................................................................................... 29

1.12.11.12.21.12.3-

2- OBJETIVO ........................................................................................... 33 3- MATERIALES Y MTODOS ............................................................. 37

3.13.2Descripcin de la planta piloto....................................................................... 37 Antecedentes: Prediseo, montaje y puesta en marcha de la planta piloto. 39

ndice

3.33.43.5-

Condiciones de operacin .............................................................................. 41 Fases del estudio .............................................................................................. 42 Mtodo de identificacin y cuantificacin de las poblaciones bacterianas . 43
Condiciones de hibridacin ............................................................................... 43 Hibridacin de las muestras ............................................................................... 44 Cuantificacin de las poblaciones bacterianas .................................................. 46

3.5.13.5.23.5.3-

3.6-

Tinciones para la deteccin de bacterias PAO .............................................. 47

Tincin de poli-fosfatos (Azul de metileno) ..................................................... 47 Tincin de PHB (Sudan Black) .......................................................................... 48

3.6.13.6.2-

3.7-

Caracterizacin qumica ................................................................................. 49

Determinacin de la concentracin de slidos en suspensin, SST y SSV. ..... 49 Determinacin de la Demanda Qumica de Oxgeno, DQO ............................ 49 Determinacin de Nitrgeno Total, NT. ............................................................ 49 Determinacin de nitrato, NO3-......................................................................... 49 Determinacin de nitrito, NO2-. ........................................................................ 50 Determinacin de amonio, NH4+. ...................................................................... 50 Determinacin de fsforo total, PT. ................................................................... 50

3.7.13.7.23.7.33.7.43.7.53.7.63.7.7-

3.8-

Respirometra .................................................................................................. 51
Respirmetro BM-T ........................................................................................... 51 Modos de ensayo del respirmetro BM-T ......................................................... 53 Parmetros respiromtricos determinados........................................................ 54

3.8.13.8.23.8.3-

4- RESULTADOS ..................................................................................... 60
4.1Resultados analticos y de operacin ............................................................. 60 4.2- Resultados de la identificacin y cuantificacin de bacterias nitrificantes mediante la tcnica FISH. ......................................................................................... 65
4.2.14.2.2Bacterias amonioxidantes (AOB) ....................................................................... 65 Bacterias nitritoxidantes (NOB) ........................................................................ 67

4.3-

Visualizacin al microscopio ptico .............................................................. 69

Bioindicacin del fango activo........................................................................... 69 Tincin de poli-fosfatos (Azul de metileno) ..................................................... 71 Tincin de polihidroxibutiratos, PHB (Sudan Black) ....................................... 72

4.3.14.3.24.3.3-

4.4-

Determinacin de parmetros cinticos mediante tcnicas respiromtricas73

Ensayos respiromtricos biomasa auttrofa. ..................................................... 73
Determinacin de YA .................................................................................................. 73 4.4.1.1-

4.4.1-

ndice

4.4.1.2- Determinacin de la tasa mxima de respiracin de las auttrofas (Rsmx auto) y tasa mxima de respiracin por slido suspendido voltil (Rspmx auto) ................................... 75 4.4.1.34.4.1.44.4.1.54.4.1.64.4.1.74.4.1.84.4.1.9Determinacin de la tasa mxima de consumo de amonio (RN). .............................. 75 Determinacin de la tasa especfica global de consumo de amonio (AUR). ........... 76 Determinacin de la biomasa auttrofa (XA) ............................................................. 76 Determinacin de la tasa especfica de nitrificacin mxima (qN) ........................... 77 Determinacin de la tasa mxima de crecimiento de la biomasa auttrofa (a,max) . 77 Determinacin de la tasa de crecimiento especfico de la biomasa auttrofa (a) ... 77 Determinacin del tiempo de retencin mnimo para la nitrificacin (TRCnitrificacin) 78

4.4.2-

Ensayos respiromtricos biomasa hetertrofa. ................................................. 78

Determinacin de YH.................................................................................................. 78

4.4.2.1-

4.4.2.1- Determinacin de la tasa mxima de respiracin de las hetertrofas (Rsmx hetero) y tasa mxima de respiracin por slido suspendido voltil (Rspmx hetero) ............................ 80

4.4.3-

Anlisis e interpretacin de los resultados de respirometra ........................... 81

4.5-

Diseo y simulacin de la planta piloto mediante el software DESASS. ..... 82

Simulacin de la planta piloto con nitrificacin en una etapa. ........................ 84 Simulacin de la planta piloto con nitrificacin en dos etapas. ....................... 89

4.5.14.5.2-

5- CONCLUSIONES ................................................................................ 98 6- BIBLIOGRAFA ................................................................................ 102

ndice de Figuras

ndice de Figuras

INDICE DE FIGURAS
Figura 1- Origen de los vertidos causantes de la eutrofizacin..................................... 4 Figura 2- Ciclo del nitrgeno en la naturaleza. ............................................................. 5 Figura 3- Fracciones del nitrgeno en el agua residual ................................................. 7 Figura 4- Fracciones del fsforo en el agua residual ...................................................... 8 Figura 5- Esquema del proceso Ludzack-Ettinger modificado ................................... 14 Figura 6- Esquema BARDENPHO ................................................................................ 14 Figura 7- Esquema A2/O ............................................................................................... 15 Figura 8- Esquema UCT ................................................................................................ 16 Figura 9- Esquema UCT modificado............................................................................. 16 Figura 10- Esquema JHB ............................................................................................... 17 Figura 11- Esquema ISAH ............................................................................................. 17 Figura 12- Foto Planta Piloto ........................................................................................ 38 Figura 13- Foto equipo de bombeo planta piloto ........................................................ 40 Figura 14- Respirmetro BM-T .................................................................................... 51 Figura 15- Esquema respirmetro ................................................................................ 52 Figura 16- Elementos vaso reactor del respirmetro ................................................... 53 Figura 17- Grfica de determinaciones de amonio, nitrato y nitrito durante el periodo de estudio ......................................................................................................... 61 Figura 18- Porcentaje de eliminacin de DQO, NT y PT de la planta piloto ........... 62 Figura 19- Evolucin del pH y la concentracin de oxgeno en varios ciclos de operacin de la planta piloto. ........................................................................................ 63 Figura 20- Evolucin de los slidos suspendidos voltiles del reactor biolgico ....... 64 Figura 21- Fotos con las sondas Nso1225 amonioxidantes de la clase -proteobacteria 600x (Figura 21A) y EUBmix 338 (Figura 21B) ........................................................... 65 Figura 22- Fotos con las sondas Nso1225 amonioxidantes de la clase -proteobacteria 600x (Figura 22A) y EUBmix 338 (Figura 22B) ........................................................... 66 Figura 23- Porcentaje Hibridacin AOB ...................................................................... 66 Figura 24- Fotos con la sonda Ntspa662, nitritoxidantes flecha blanca 600x (Figura 24A) y Eubacterias flecha blanca 600x (Figura 24B) sondas EUBmix 338, 600x ..... 67 Figura 25- Fotos con la sonda Ntspa662, nitritoxidantes flecha blanca 600x (Figura 25A) y Eubacterias flecha blanca 600x (Figura 25B) sondas EUBmix 338, 600x ..... 67 Figura 26- Porcentaje Hibridacin NOB ...................................................................... 68 Figura 27- Foto del flculo de una muestra tomada el 09/09/11 de la planta piloto. Objetivo 10x ................................................................................................................... 69 Figura 28- Foto de Rotaria sp. de una muestra tomada el 30/08/11 de la planta piloto. Objetivo 10x ................................................................................................................... 70 Figura 29- Foto del flculo de una muestra tomada el 27/09/11 de la planta piloto. Objetivo 10x ................................................................................................................... 70 Figura 30- Fotos tincin poli-fosfatos objetivo 100x .................................................. 72 Figura 31- Foto tincin Sudan Black objetivo 100x.................................................... 72 Figura 32- Grfica obtencin de YA mediante respirometra ...................................... 73

ndice de Figuras

Figura 33- Obtencin de la pendiente de YA .............................................................. 74 Figura 34- Grfica de obtencin de la Rsmx de las bacterias auttrofas ................... 75 Figura 35- Grfica de obtencin de YH mediante respirometra ................................. 78 Figura 36- Obtencin de la pendiente YH .................................................................. 79 Figura 37- Grfica de obtencin de la Rsmx de las bacterias hetertrofas ............... 80 Figura 38- Esquema planta piloto para la simulacin en DESASS ............................. 82 Figura 39- Caudales y cargas de entrada a la planta piloto......................................... 83 Figura 40- Cintica de la biomasa hetertrofa en la simulacin de la nitrificacin en una etapa. ....................................................................................................................... 85 Figura 41- Cintica de la biomasa auttrofa en la simulacin de la nitrificacin en una etapa. ....................................................................................................................... 85 Figura 42- Cintica de la biomasa PAO en la simulacin de la nitrificacin en una etapa. .............................................................................................................................. 86 Figura 43- Resultados del efluente en la simulacin de la nitrificacin en una etapa. ........................................................................................................................................ 87 Figura 44- Resultados del fraccionamiento del nitrgeno en el efluente del reactor en la simulacin de la nitrificacin en una etapa. ....................................................... 88 Figura 45- Resultados del fosfato y biomasa PAO en el efluente del reactor en la simulacin de la nitrificacin en una etapa. ................................................................ 88 Figura 46- Resultados de la salida del reactor en la simulacin de la nitrificacin en una etapa. ....................................................................................................................... 89 Figura 47- Cintica de la biomasa hetertrofa en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas. ...................................................................................................................... 90 Figura 48- Cintica de la biomasa auttrofa en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas. ...................................................................................................................... 91 Figura 49- Cintica de la biomasa PAO en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas. ............................................................................................................................. 91 Figura 50- Resultados del efluente en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas. ........................................................................................................................................ 92 Figura 51- Resultados del fraccionamiento del nitrgeno en el efluente del reactor en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas........................................................ 93 Figura 52- Resultados del fosfato y biomasa PAO en el efluente del reactor en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas. ................................................................ 93 Figura 53- Resultados de la salida del reactor en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas. ...................................................................................................................... 94

ndice de Tablas

INDICE DE TABLAS
Tabla 1- Grado de eutrofia en sistemas lnticos OCDE, 1982....................................... 4 Tabla 2- Requisitos de vertido de EDAR (Directiva 91/271/CEE) .............................. 10 Tabla 3- Requisitos de vertido de EDAR en zonas sensibles (Directiva 91/271/CEE) 10 Tabla 4- Sondas FISH bacterias nitrificantes ............................................................... 24 Tabla 5- Sondas FISH bacterias desnitrificantes .......................................................... 25 Tabla 6- Composicin agua residual sinttica .............................................................. 37 Tabla 7- Parmetros de diseo iniciales ....................................................................... 39 Tabla 8- Condiciones de operacin de la planta piloto ............................................... 42 Tabla 9- Volmenes de reactivos en funcin del porcentaje de formamida para la preparacin de la solucin tampn de hibridacin en la tcnica FISH ...................... 45 Tabla 10- Volmenes de reactivos en funcin del porcentaje de formamida para la preparacin de la solucin tampn de lavado en la tcnica FISH .............................. 45 Tabla 11- Sondas FISH de bacterias nitrificantes utilizadas para la identificacin y cuantificacin................................................................................................................. 45 Tabla 12- Parmetros de la biomasa auttrofa y hetertrofa obtenidos mediante respirometra .................................................................................................................. 55 Tabla 13- Frmulas y fuentes bibliogrficas de la biomasa auttrofa ......................... 56 Tabla 14- Tabla resumen caracterizaciones fsico-qumicas de la planta piloto ....... 64 Tabla 15- Valores para el clculo del rendimiento biomasa auttrofa ....................... 73 Tabla 16- Valores para el clculo del rendimiento biomasa hetertrofa .................... 79 Tabla 17- Tabla resumen parmetros respiromtrico .................................................. 81

ndice de Tablas

Introduccin

1- INTRODUCCIN

Introduccin

Introduccin

1- INTRODUCCIN
1.11.1- La eutrofizacin
El origen de las aguas residuales hace referencia a toda combinacin de lquidos o aguas que transportan residuos y que producen una contaminacin al agua de carcter fsico, qumico o biolgico. As pues, la produccin de aguas residuales se ha visto incrementada de forma exponencial en las ltimas dcadas, de igual forma que la industrializacin y explotacin de los recursos en nuestra sociedad. El agua residual puede llegar eventualmente a formar parte del agua subterrnea, superficial o pluvial, con la consiguiente contaminacin de estos flujos hidrolgicos. Gracias al tratamiento de las aguas residuales en Estaciones Depuradoras de Aguas Residuales (EDAR), la incorporacin de agua residual al medio se ha visto reducida. Si bien es cierto, que el tratamiento de las aguas residuales tiene aos de historia, es en la actualidad, cuando la concienciacin y principalmente la legislacin de los estados, ha provocado un aumento en los porcentajes de agua residual tratada, as como en la calidad del agua efluente de las EDAR. A pesar de ello, los vertidos de aguas residuales urbanas constituyen, por su importancia, la segunda fuente de contaminacin de medios acuticos en forma de eutrofizacin (Comisin Europea 1998). La eutrofizacin consiste en un desarrollo excesivo de algas en una masa de agua superficial estancada, que origina una alteracin de sus caractersticas fsico-qumicas iniciales. Los responsables de este fenmeno son principalmente los nutrientes que reciben los organismos vegetales y que ven incrementada continuamente su concentracin en las aguas continentales como consecuencia de los vertidos de aguas residuales (Villaseor 2001) (Figura 1). La eutrofizacin es un proceso natural, sin embargo puede verse acelerada debido a la contaminacin del agua por agricultura, vertidos de aguas residuales, etc. (Figura 1). La proliferacin exagerada de algas da lugar a problemas como aumento de turbidez, incremento de pH, descomposicin de las algas muertas agotando el oxgeno, generacin de sustancias txicas por parte de algunos microorganismos. La solucin de los problemas de eutrofizacin pasa, principalmente, por la limitacin de la entrada de nutrientes (nitrgeno y fsforo) y la eliminacin de los presentes en el sedimento.

Introduccin

Figura 1- Origen de los vertidos causantes de la eutrofizacin

La clasificacin de eutrofia de sistemas lticos es complicada por lo que la mayora de clasificaciones eutrficas aparecen en sistemas lnticos, as pues encontramos tres tipos de clasificacin: TSI Trophic State Index determinado a partir del disco de Secchi, concentracin de clorofila y de fsforo (Carlson 1977), modelo basado en los aportes de nutrientes esperados y las condiciones hidrolgicas (Vollenweider 1976), o bien en base a los niveles de clorofila, transparencia y fsforo propuesto por la (OCDE 1982). Esta ltima clasificacin es la que se muestra en la Tabla 1.
Tabla 1- Grado de eutrofia en sistemas lnticos OCDE, 1982.

Introduccin

1.21.2- El nitrgeno en sistemas acuticos

El nitrgeno es esencial para todos los organismos, es parte fundamental de molculas como protenas y cidos nucleicos y es un nutriente indispensable en el crecimiento de organismos fotosintticos. En la qumica del agua, los compuestos del nitrgeno, NH4+, NO2-, NO3- y nitrgeno orgnico, representan un papel muy importante puesto que son ellos los verdaderamente responsables del crecimiento de los organismos animales y vegetales en el medio acutico (Figura 2). En condiciones normales, los compuestos nitrogenados del agua provienen fundamentalmente de la degradacin de la materia orgnica muerta.

Figura 2- Ciclo del nitrgeno en la naturaleza.

En condiciones del medio alteradas, los aportes adicionales de nitrgeno proceden mayoritariamente de los vertidos urbanos y de ciertas instalaciones industriales, as como del uso creciente de fertilizantes y pesticidas en la agricultura. En este sentido, los vertidos de compuestos nitrogenados deben reducirse paulatinamente, tanto en industrias como en la agricultura y ganadera. En la naturaleza, y en presencia de oxgeno, el nitrgeno amoniacal se transforma en nitrito y ste, rpidamente, en nitratos, que es la forma ms oxidada que se encuentra el nitrgeno en el agua.

Introduccin

Para conocer la calidad de un agua potable, los mejores indicadores son el contenido en amoniaco, en materia orgnica, en nitritos y en bacterias. La reglamentacin espaola considera al amoniaco como un componente no deseado en el agua potable y establece como valor orientativo de calidad 0'05 mg/l y como valor limite tolerable 0'5 mg/l. En cuanto a nitratos, la Directiva Comunitaria de 15/7/80 fija un nivel gua de 25 mg/l y una concentracin mxima admisible de 50 mg/l. Los nitritos no son aceptables en las aguas potables. Proceden de la oxidacin incompleta del amoniaco y de la reduccin bacteriana incompleta de los nitratos. Un agua que contenga nitritos puede considerarse un agua contaminada por materias fecales. La reglamentacin espaola establece como valor orientador de calidad la ausencia de nitritos en un agua de consumo, y como valor mximo tolerable hasta 0'1 mg/l. Todas los valores superiores a estos determinan la contaminacin del agua. Los nitratos se pueden transformar en nitritos en funcin de reacciones qumicas y biolgicas del aparato digestivo. Los nitritos pasan rpidamente a la sangre y se fijan a la hemoglobina impidiendo la oxigenacin de los tejidos. Esta enfermedad, metahemoglobinemia perjudica principalmente a nios. Los iones nitrito pueden formar compuestos nitrogenados en el organismo, que, en un porcentaje elevado, hay indicios de que sean cancergenos. Por otra parte, el nitrgeno puede ser txico para los peces. La Directiva Europea de 18/7/78, fija la concentracin mxima en nitrito en el agua apta para la vida pisccola en 0,03 mg/l. En forma de nitritos, el nitrgeno es perjudicial para los mamferos. El anlisis de todos los compuestos nitrogenados citados es imprescindible para la determinacin de la calidad de las aguas, tanto destinadas a consumo humano como procedentes de procesos de depuracin, siendo necesario el adoptar medidas de tratamiento para su eliminacin o reduccin de concentracin.

1.31.3- El nitrgeno en las aguas residuales

Siendo ms especficos y desde el enfoque de las aguas residuales son tres las formas en las que se presenta el nitrgeno (Figura 3). As podemos distinguir: -Nitrgeno orgnico: Se encuentra constituido fundamentalmente por urea y protenas. La descomposicin bacteriana y la hidrlisis pueden favorecer la conversin de este nitrgeno orgnico en nitrgeno amoniacal antes de que el agua residual llegue a la EDAR estando ligada esta conversin al tiempo de residencia que el agua residual permanece en los colectores de la red de alcantarillado.

Introduccin

Presenta concentraciones en las aguas residuales urbanas entre los 10 y 20 mg/l. -Nitrgeno amoniacal (NH4+, NH3): El nitrgeno amoniacal se puede presentar en forma de amonio (NH4+) o en forma de amoniaco (NH3), en funcin del valor de pH del agua residual. Se encuentra presente en aguas residuales urbanas en concentraciones entre 30 y 65 mg/l. Esta forma de nitrgeno es oxidada a nitrato en los reactores biolgicos en el proceso de nitrificacin, siendo vital el funcionamiento de esta etapa para una posterior eliminacin biolgica de nitrgeno. -Nitrgeno ntrico (NO2-, NO3-): El nitrgeno ntrico puede presentarse en forma de nitrito (NO2-) o de nitrato (NO3-). El nitrito es inestable y fcilmente oxidable a nitrato, por lo que su presencia en aguas residuales suele ser despreciable. La presencia de nitratos puede deberse a la contribucin de las aguas subterrneas donde sus niveles pueden ser notables, o a la oxidacin del amonio en presencia de oxgeno. Esta ltima va es poco probable en la entrada a la EDAR, ya que el oxgeno presente en los sistemas de recogida de aguas residuales es muy bajo debido a la gran demanda, adems la cantidad de nitrato presente en el influente suele ser baja o nula, debido a que puede usarse como aceptor de electrones en ausencia de oxgeno, situacin habitual en los sistemas de alcantarillado. Esta propiedad de aceptor de electrones hace que el nitrato sea un elemento importante para el proceso de desnitrificacin en la eliminacin biolgica de nitrgeno en el tratamiento secundario de las EDAR.

Figura 3- Fracciones del nitrgeno en el agua residual

La contribucin de cada una de estas fracciones puede cambiar sustancialmente en funcin del sistema a analizar: agua residual influente, licor mezcla, agua decantada, agua efluente, fango digerido, etc.

Introduccin

1.41.4- El fsforo en las aguas residuales

En las aguas residuales es posible encontrar el fsforo en distintas formas (Figura 4): - Ortofosfatos (PO43-, HPO42-, H2PO4-, H3PO4): Suelen encontrarse en aguas residuales en unas concentraciones tpicas entre 3 y 7 mg/l. En esta forma, el fsforo es fcilmente asimilable por la biomasa. Los ortofosfatos pertenecen a la fraccin inorgnica del fsforo presente en las aguas residuales. - Poli-fosfatos (PO33-)n: Son polmeros formados por monmeros de fosfato. Son almacenados intracelularmente, y degradados a ortofosfatos. No suelen encontrarse en aguas residuales, pero si en los reactores de fangos activos de las estaciones depuradoras de aguas residuales. - Fsforo precipitado (me-P): Fraccin de ortofosfatos que forma precipitados con metales. Esta fraccin suele ser importante en el reactor de fangos activos. - Fsforo orgnico: Es la fraccin del fsforo asociada a la materia orgnica. Su concentracin tpica est en torno a 3 mg/l. Dentro del fsforo orgnico se encuentran especies como los cidos nucleicos, los fosfolpidos y el ATP.

Figura 4- Fracciones del fsforo en el agua residual

1.51.5- Legislacin
La legislacin referente a la proteccin de las aguas ha tenido una evolucin del derecho de aguas en aras de la proteccin ambiental, teniendo una consideracin progresiva del agua como recurso natural. As ya la ley de aguas de 1985 otorga a la calidad de las aguas un valor sin precedentes, es decir, compatibilizar la gestin del agua con la proteccin ambiental. Ms tarde hay una reforma de la ley de aguas de 1999. Finalmente como legislacin ms genrica cabe destacar la transposicin de la directiva marco 2000, a travs del texto refundido de la ley de aguas (TRLA) que se corresponde con el Real Decreto legislativo 1/2001, la cual es una norma de contenido esencialmente ambiental.

Introduccin

Centrando la normativa de proteccin de aguas en el mbito de las aguas residuales, encontramos en primer lugar la normativa a nivel europeo. La normativa aplicable es la Directiva 91/271/CEE de saneamiento y depuracin de aguas residuales. Esta Directiva tiene como objetivos la construccin de infraestructuras de saneamiento y depuracin, as como lograr determinados niveles de emisin de las aguas una vez depuradas. La Directiva 98/15/CE, por la que se modifica la Directiva 91/271/CEE en relacin con determinados requisitos establecidos en su anexo I y la Directiva 2000/60/CE ms conocida como directiva marco del agua. A su vez esta Directiva 91/271 marca una serie de obligaciones consistentes en que las aglomeraciones urbanas deben en determinados plazos, dotarse de sistemas de colectores que recojan las aguas residuales, y adems, someter esas aguas residuales a tratamientos de depuracin adecuados, exigiendo como regla general en poblaciones de ms de 5000 habitantes, plantas de tratamiento secundario. La normativa vigente en materia de aguas residuales a nivel estatal queda marcada por el Real decreto-ley 11/1995 de tratamiento de aguas residuales, que a su vez queda desarrollado por el Real Decreto 509/1996. Tambin de rgimen estatal es el Real Decreto 1620/2007 de rgimen jurdico de la reutilizacin de las aguas depuradas. As como la Orden de 12 de noviembre de 1987, sobre normas de emisin, objetivos de calidad y mtodos de medicin de referencia relativos a determinadas sustancias nocivas o peligrosas contenidas en los vertidos de aguas residuales. Ms focalizado en la legislacin autonmica valenciana, encontramos como normativa vigente la Ley 2/1992 reguladora de la evaluacin, tratamiento y reutilizacin de las aguas residuales y el Decreto 266/1994, regulador del canon de saneamiento. As pues los aspectos competenciales en materia de aguas residuales han sido tradicionalmente de carcter local, aunque hay un progresivo desplazamiento a instancias territoriales superiores (inters supramunicipal, normativa autonmica). La autorizacin de vertido es una competencia local (art 101 TRLA), los valores de emisin vienen fijados en la legislacin estatal y autonmica. En la Directiva 91/271, como en el Real Decreto ley 11/1995, se desarrolla la aplicacin de tratamientos a las aguas residuales antes de su vertido a las aguas continentales o martimas. Tambin esta normativa define el concepto de zona sensible, por lo que los vertidos procedentes de una EDAR debern cumplir las limitaciones expuestas en la Directiva 91/271/CEE (ver Tablas 2 y 3), en base a la catalogacin de la situacin local, limitando la concentracin o porcentaje de reduccin de nutrientes (nitrgeno y fsforo), en caso de tratarse de una zona sensible. 9

Introduccin

Tabla 2- Requisitos de vertido de EDAR (Directiva 91/271/CEE)

Tabla 3- Requisitos de vertido de EDAR en zonas sensibles (Directiva 91/271/CEE)

1.61.6- Eliminacin biolgica de nitrgeno en aguas residuales

La eliminacin biolgica de nitrgeno en las aguas residuales necesita que se lleven a cabo dos procesos: la nitrificacin, transformacin del nitrgeno amoniacal en nitratos, y la desnitrificacin, transformacin de nitratos en nitrgeno gas. 1.6.11.6.1Nitrificacin y sus factores

El nitrgeno presente en un agua residual se encuentra mayoritariamente en forma amoniacal. El vertido de un agua residual con alto contenido en amonio a un medio acutico puede producir un agotamiento de los recursos de oxgeno de las aguas receptoras al producirse la oxidacin del amonaco a nitrato. Una forma de evitar este agotamiento de oxgeno en el medio receptor consiste en oxidar el nitrgeno antes de su descarga en una estacin depuradora de aguas residuales. El proceso de nitrificacin en EDAR se ve limitado principalmente por tres factores: Temperatura: El crecimiento de las bacterias nitrificantes vara con la temperatura, situndose el valor ptimo en el rango 26-30 C. El valor de la temperatura afecta a los valores de las constantes de equilibrio, cido/base, gas/lquido, a la solubilidad de las sustancias, a los coeficientes de difusin y a la actividad enzimtica. La influencia de la temperatura en las diferentes constantes biolgicas o fsicas se expresa habitualmente mediante una expresin modificada de la ecuacin de Arrhenius, aplicable a todos los procesos biolgicos.

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Introduccin

KT y K20 = Valor del parmetro a las temperaturas T y 20C respectivamente. = Coeficiente que depende del proceso. T = Temperatura en C. Limitaciones en la transferencia y difusin de oxgeno: En el caso de los cultivos en suspensin, la transferencia de materia entre fases puede limitar el crecimiento, es decir, el oxgeno se suministra en fase gas y tiene que llegar a la fase lquida para ser consumido. pH: El pH ptimo de las bacterias est entre 7.5 y 8.5, aunque la nitrificacin biolgica se puede llevar a cabo en un rango ms amplio (entre 6-10). En la limitacin del crecimiento de las bacterias nitrificantes debido al pH se diferencian dos causas. La primera es que el pH afecta a la actividad enzimtica. La segunda es que la concentracin de protones afecta a los equilibrios cido/base.

1.6.21.6.2-

Metabolismo implicado en el proceso de nitrificacin

Los compuestos nitrogenados inorgnicos ms comunes usados como donadores de electrones son el amonaco (NH3) y el nitrito (NO2-) que se oxidan aerbicamente por las bacterias nitrificantes. Un grupo de organismos oxida el amoniaco a nitrito y otro oxida el nitrito a nitrato, la oxidacin completa implica la prdida de ocho electrones (8e-). Los electrones de los compuestos nitrogenados entran en una cadena de transporte de electrones, y el flujo de electrones establece un potencial de membrana y una fuerza protn-motriz que est ligada a la sntesis de ATP. Sin embargo, debido al potencial de reduccin de sus donadores de electrones, las bacterias nitrificantes se enfrentan con problemas bioenergticos, debido al alto poder de reduccin de sus pares NH2OH/NH3 (0V) y NO3-/NO2- (+0,43V). De esta forma las bacterias nitrificantes deben ceder los electrones a sus cadenas de transporte de electrones a nivel de los ltimos pasos, lo que limita la produccin de ATP por parte de cada par de electrones introducidos. Hay varias enzimas importantes relacionadas con la oxidacin de compuestos nitrogenados reducidos. En las bacterias oxidadoras de amoniaco, el NH3 se oxida por la amoniaco monooxigenasa que produce NH2OH y H2O. Luego la hidroxalamina oxidoreductasa oxida NH2OH a NO2-, extrayndose cuatro electrones en el proceso. La amoniaco monooxigenasa es una protena integral de la membrana, mientras que la hidroxilamina oxidoreductasa es periplsmica. En la reaccin llevada a cabo por la amoniaco oxigenasa, se requiere el suministro exgeno de dos electrones para reducir un tomo de oxgeno a agua.

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Introduccin

NH3 + O2 + 2H+ + 2e-

NH2OH + H2O

As por cada cuatro electrones generados en la oxidacin de NH3 a NO2-, slo dos llegan a la oxidasa terminal. Las bacterias oxidadoras de nitritos emplean la enzima nitrito oxidasa para oxidar nitrito a nitrato, a travs de una cadena de electrones corta, debido al alto potencial del par NO3-/NO2- hasta la oxidasa terminal. Se obtienen pequeas cantidades de energa por lo que el crecimiento neto de las bacterias nitrificantes es relativamente bajo. Las aguas residuales o los fangos suplementados con nitrato para estimular la desnitrificacin, pueden oxidar el amoniaco a nitrgeno gas (N2). 5 NH4+ + 3NO34 N2 + 9 H2O + H2+

Esta reaccin de oxidacin anxica de amoniaco dependiente del nitrato es muy exotrmica, liberando una gran cantidad de energa que se supone ligada a la conservacin de la energa en el microorganismo responsable. Esta reaccin no es conocida en metabolismos de bacterias nitrificantes conocidas.

1.6.31.6.3-

Proceso de desnitrificacin

Normalmente este proceso se lleva a cabo con la finalidad de eliminar nitrgeno del agua residual. Una vez que se ha oxidado el amonio a nitrato, este ltimo puede ser reducido a nitrgeno gas mediante la desnitrificacin biolgica. El proceso de desnitrificacin se puede ver afectado principalmente por tres factores: Concentracin de oxgeno: El oxgeno inhibe el proceso de desnitrificacin ya que es utilizado por los microorganismos como aceptor de electrones antes que el nitrato, por tanto son necesarias condiciones de anoxia en el sistema. En sistemas con elevados tiempos de retencin celular y concentraciones bajas de oxgeno disuelto, se puede llevar a cabo la nitrificacin y desnitrificacin simultneas, ya que pueden aparecer condiciones de anoxia en una parte del reactor o dentro de los flculos. Relacin C/N: Es importante considerar la concentracin de sustrato asimilable para tener un proceso desnitrificante eficiente, ya que la materia carbonosa es el dador de electrones en el proceso de desnitrificacin.

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Introduccin

Relaciones C/N bajas pueden dar lugar a desnitrificaciones incompletas, mientras que relaciones altas dan lugar a desnitrificaciones completas y materia orgnica residual. pH: El intervalo de pH ptimo est entre 7 y 9 aproximadamente situndose la condicin ptima alrededor de 7.5. Valores por debajo de 7 pueden provocar un aumento de xidos nitrosos, especialmente de N2O como productos finales de la desnitrificacin. En el proceso de desnitrificacin se consumen protones (H+), por lo que la acidez disminuye y puede dar lugar a un aumento del pH.

1.6.41.6.4-

Metabolismo implicado en el proceso de desnitrificacin

Los compuestos nitrogenados inorgnicos son muy comunes como aceptores de electrones en la respiracin anaerobia. Uno de los aceptores de electrones alternativos ms comn es el nitrato NO3-, que se convierte a formas ms reducidas de nitrgeno, N2O, NO y N2. Como estos productos de la reduccin del nitrato son todos gaseosos se pierden con facilidad del medio, y por ello este proceso se llama desnitrificacin. Dos vas son las existentes para la reduccin del nitrato: la reduccin asimilatoria del nitrato, donde el nitrato se reduce al nivel de oxidacin del amoniaco para su uso como fuente de nitrgeno en el crecimiento o la va que nos es de inters, y la reduccin desasimilatoria del nitrato, por la que el nitrato se usa como un aceptor de electrones alternativo en la generacin de energa. El producto final de la reduccin desasimilatoria es N2 o N2O. La desnitrificacin es beneficiosa en el tratamiento de aguas residuales porque convierte NO3- en N2, decreciendo significativamente la cantidad de nitrgeno disponible. La enzima responsable del primer paso en la reduccin del nitrato, la nitrato reductasa desasimilatoria, es una protena unida a membrana y que slo se sintetiza en condiciones anxicas. En consecuencia, el proceso de desnitrificacin es anxico y la reduccin desasimilatoria se restringe a procariotas. El primer producto de la reduccin de nitratos es el nitrito, NO2-, y otra enzima, la nitrito reductasa es responsable del siguiente paso. En el proceso desasimilatorio son posibles dos vas, una a amoniaco y otra a N2. La va a amoniaco no tiene lugar en la prctica del tratamiento de aguas aunque la realizan muchas bacterias. La va a nitrgeno gas comprende dos formas gaseosas nitrogenadas intermediarias, el xido ntrico (NO), y el xido nitroso (N2O).

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Introduccin

1.6.51.6.5-

Esquemas del proceso de eliminacin eliminacin biolgica de nitrgeno

La instalacin tpica para la eliminacin biolgica de nitrgeno consiste en dos tanques en serie, proceso Ludzack-Ettinger modificado (Figura 5). El primer tanque recibe el agua influente a tratar, la recirculacin de fangos y el caudal de recirculacin interna procedente del segundo tanque, en el cual la mayor parte del nitrgeno se encuentra en forma de nitratos. Aqu se realiza parte de la degradacin de la materia orgnica, utilizando para ello los nitratos como aceptores de electrones, que se reducen a nitrgeno gaseoso. Este tanque se mantiene en condiciones anxicas. En el segundo tanque que se mantiene en condiciones aerobias, se produce simultneamente la degradacin de la materia orgnica y la oxidacin del nitrgeno amoniacal a nitrato. Desde este mismo tanque se recircula un importante caudal al tanque anxico. El agua que sale de este tanque, tras su decantacin, es el resultado final del tratamiento biolgico. Los fangos decantados son recirculados al tanque anxico.
Recirculacin de nitratos

Anxico

Aerobio

Recirculacin de fangos

Figura 5- Esquema del proceso LudzackLudzack-Ettinger modificado

Existen diversas variantes sobre este esquema. Uno de los primeros esquemas utilizados fue el BARDENPHO (Figura 6). Estos sistemas son resistentes a problemas de bulking y presentan una buena eliminacin de nitrgeno cuando la recirculacin de nitratos es la adecuada.
Recirculacin de nitratos

Anxico

Aerobio

Anxico

Aerobio

Recirculacin de fangos

Figura 6- Esquema BARDENPHO

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Introduccin

1.6.61.6.6-

Esquemas de eliminacin eliminacin biolgica conjunta de nitrgeno y fsforo.

La eliminacin biolgica de fsforo requiere la alternancia de una fase anaerobia y una aerobia, llevndose a cabo simultneamente la eliminacin de fsforo y de materia orgnica. La eliminacin biolgica de fsforo tambin puede combinarse con los procesos de nitrificacin-desnitrificacin. La eliminacin conjunta de nitrgeno y fsforo necesita de tres reactores: anaerobio, anxico y aerobio, situados por este orden. En el reactor anaerobio es muy importante evitar la presencia de nitratos, ya que inhiben la liberacin de fsforo, permitiendo a las bacterias hetertrofas desnitrificantes asimilar los cidos grasos voltiles (AGV), e impidiendo el consumo por parte de las PAO, y por tanto, en la zona aerobia las PAO no podrn ni crecer ni acumular poli-fosfatos, puesto que no disponen de sustrato. El A2/O (Figura 7), es el esquema ms sencillo para la eliminacin conjunta de nitrgeno y fsforo. En el tanque anaerobio tiene lugar la entrada del agua influente, las bacterias captan los cidos grasos voltiles (AGV) y sueltan fsforo almacenado intracelularmente. En el tanque anxico las bacterias reducen los nitratos a nitrgeno gas. Posteriormente, en el reactor aerobio, el fsforo es almacenado intracelularmente en forma de poli-fosfatos, consiguiendo la eliminacin neta del fsforo.

Recirculacin de nitratos

Anaerobio

Anxico

Aerobio

Recirculacin de fangos

Figura 7- Esquema A2 A2/O

En el esquema anterior el fango recirculado se introduce en el tanque anaerobio. El esquema UCT (Universidad de Ciudad del Cabo) (Figura 8), introduce el fango recirculado en el tanque anxico, evitando la entrada de nitratos en el tanque anaerobio a travs de la corriente de recirculacin de fangos.

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Introduccin

Recirculacin de nitratos

Anaerobio

Anxico

Aerobio

Recirculacin de fangos

Figura 8- Esquema UCT

En el esquema UCT modificado (Figura 9), se trata de separar las recirculaciones ricas en nitratos, de forma que se asegure la menor concentracin posible de nitratos en el reactor anaerobio. Una compartimentacin del tanque anxico permite tratar separadamente la desnitrificacin de los fangos recirculados y del licor mezcla procedente del tanque aerobio.

Anaerobio

Anxico

Anxico

Aerobio

Recirculacin de fangos

Figura 9- Esquema UCT modificado

El esquema JHB (Johanesbourg) (Figura 10), introduce otro reactor anxico previo al reactor anaerobio, de forma que se trata separadamente los nitratos del licor mezcla y del fango recirculado. Este esquema es interesante cuando las relaciones DBO5/NKT y DBO5/P-PO4 del influente son desfavorables. De esta forma, la materia orgnica del influente puede ser utilizada por las PAO y el fango recirculado es desnitrificado sin mezclar con el influente, para ello el fango debe tener una elevada concentracin permitiendo la desnitrificacin por respiracin endgena.

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Introduccin

Recirculacin de nitratos

Anxico

Anaerobio

Anxico

Aerobio

Recirculacin de fangos

Figura 1010- Esquema JHB

Por ltimo, el esquema ISAH (Institut fr Sieldlungswasserwirtschaft und Abfalltechnikder Univeritat Hannover) (Figura 11), se utiliza cuando es necesario adicionar sustrato en el tanque donde se desnitrifica el fango recirculado, de forma que se aporta parte del efluente del tanque anaerobio.

Recirculacin de nitratos

Anaerobio

Anxico

Aerobio

Anxico

Recirculacin de fangos

Figura 1111- Esquema ISAH

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Introduccin

1.71.7- Eliminacin fsicofsico-qumica de nitrgeno en aguas residuales

Aunque en la mayora de los casos el tratamiento biolgico es la tecnologa ms adecuada para la eliminacin de nitrgeno en las aguas residuales, los procesos fsico qumicos pueden ser tcnica y econmicamente factibles en ciertas ocasiones. Los principales procesos fsico-qumicos son: Cloracin al break-point: El proceso consiste en la adicin de cloro al agua residual para oxidar el amonio a nitrgeno gas. La dosificacin de cloro debe ser la correcta. Es necesario tener en cuenta que antes de la oxidacin del amonio a nitrgeno gas, se oxida la materia orgnica y otros componentes. Adems, el cloro residual debe ser eliminado del efluente mediante el uso de SO2 o carbn activado. El utilizar carbn activado supondr un alto coste econmico. Otro inconveniente de este proceso es la necesidad de un minucioso control del pH para evitar la formacin de tricloruro de nitrgeno. Adems, en la cloracin al break-point se han identificado una serie de compuestos clorados perjudiciales para la salud llamados trihalometanos. Estos compuestos se forman fundamentalmente por la presencia de cidos flvicos provenientes de la degradacin de las sustancias qumicas naturales que actan como precursores y por la presencia de compuestos acetilnicos de bajo peso molecular. Air stripping: Este mtodo utiliza el equilibrio NH4+/NH3 para eliminar el nitrgeno de las aguas residuales: NH3 + H2O NH4+ + OHEl proceso consiste en basificar el agua provocando que el equilibrio se desplace hacia la formacin de NH3 como gas disuelto. El siguiente paso consiste en airear la disolucin para desplazar el NH3 a la atmsfera. Los problemas asociados con este tratamiento son la baja eficacia del proceso, la formacin de carbonato clcico si se emplea para basificar el Ca(OH)2 y la posible contaminacin atmosfrica por la produccin de amoniaco. Intercambio inico: El proceso se basa en hacer pasar el efluente del tratamiento secundario de la planta depuradora por un intercambiador inico con una alta selectividad por el in amonio. La resina ms utilizada es la zeolita natural clinoptilolita. Existen otras resinas que poseen una mayor selectividad por el in amonio pero nunca se han utilizado en el tratamiento de las aguas residuales. Los inconvenientes de este tratamiento son la necesidad de la regeneracin del intercambiador y de la filtracin previa del agua a tratar para prevenir una rpida colmatacin.

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Introduccin

1.81.8- Control del proceso aireacin intermitente. intermitente.

nitrificacin/desnitrificacin

mediante

La construccin de las EDAR aos atrs, en un contexto en el que las exigencias legislativas eran ms permisivas en cuanto a la eliminacin de nitrgeno y fsforo que en la actualidad, supuso en el diseo de muchas de ellas la ausencia de sistemas para la eliminacin biolgica de dichos nutrientes. En la actualidad esta deficiencia supone un serio problema ya que muchas EDAR deben adaptar sus sistemas de eliminacin para cumplir la legislacin vigente. Actualmente una de las principales necesidades de muchas de estas EDAR es la de conseguir una zona anxica que permita la desnitrificacin. Las soluciones a esa necesidad pasan por la construccin de un nuevo reactor o la construccin de una cmara anxica y la instalacin de una corriente de recirculacin interna, soluciones todas ellas que suponen una elevada inversin econmica, adems de un largo tiempo de ejecucin. Otra solucin alternativa, que se va estudiar e intentar optimizar en este proyecto, consiste en llevar a cabo los procesos de nitrificacin/desnitrificacin en el mismo reactor mediante la implantacin de un sistema de aireacin intermitente. De esta manera el reactor aerobio, sigue siendo aerobio en los ciclos de aireacin llevando a cabo la nitrificacin, y una vez comienza el ciclo de parada el reactor pasa a ser un reactor anxico con la finalidad de reducir los nitratos del efluente mediante la desnitrificacin. La intermitencia de estos ciclos bien regulados por tiempo consigue reducir los valores de nitrgeno total en las EDAR entre un 30-50 % (EPSAR, 2010). La alternancia de las etapas puede ser controlada por ciclos de tiempo o a partir de las mediciones de sondas de nutrientes o sondas de potencial red-ox. Adems la desnitrificacin permite ahorrar 2,86 gr O2/gr N-NO3- eliminado, lo que energticamente supone un ahorro de entre un 8-10 % (EPSAR, 2010). Este sistema tambin mejora el funcionamiento de los decantadores secundarios, teniendo lugar menos problemas de levantamiento de fango debidos al proceso de desnitrificacin, adems de una considerable disminucin del manto de fangos en los mismos. Ello a su vez conlleva la disminucin de la turbidez en el efluente de la EDAR. La presencia de condiciones anaerobias, y su alternancia con condiciones aerobias, da lugar a que los organismos acumuladores de poli-fosfatos (PAO) que son capaces de almacenar fsforo intracelularmente en forma de grnulos de polifosfatos, lleven a cabo la eliminacin biolgica de fsforo. Consiguiendo as un

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Introduccin

significante ahorro en la dosificacin de coagulante para la eliminacin por va qumica. El ahorro de reactivo puede alcanzar entre un 15-20 % (EPSAR, 2010)

1.91.9- Tcnicas microscpicas

Las tcnicas microscpicas ms utilizadas en el tratamiento de aguas residuales son el campo claro y el contraste de fases. Estas dos tcnicas son con las que suele contar un microscopio ptico del laboratorio de una EDAR. Adems de estas tcnicas, existen otras tcnicas ms extendidas en el campo de investigacin, como la microscopa de fluorescencia utilizada en este proyecto y que se desarrolla ms adelante. El campo claro: Es la iluminacin normal. Los componentes de la muestra se visualizan gracias a las diferencias de contraste que existen entre ellos y el medio que los rodea. Las diferencias de contraste se producen porque las clulas o elementos ms grandes, como los flculos del fango activo, absorben o dispersan la luz en diferentes grados. Por esta razn, esta iluminacin se emplea con tinciones o muestras en las que los microorganismos son pigmentados, ya que el contraste se incrementar debido al color. El contraste de la preparacin tambin puede controlarse en campo claro con el diafragma del condensador (diafragma de apertura). El contraste de fases: Es una tcnica que se utiliza para estudiar preparaciones de densidades homogneas, en las que la baja la capacidad de absorcin de luz de sus elementos (las clulas y el medio), hace que la imagen obtenida no presente diferencias de luminosidad entre ellos. El contraste de fases permite la visualizacin de clulas sin necesidad de tincin. Este tipo de ptica se basa en el hecho de que las clulas poseen ndices de refraccin distintos al medio y por lo tanto producen un desvo en los rayos de luz que las atraviesan, que son retardados. Este efecto es amplificado por un anillo especial que posee el objetivo de los microscopios de contraste de fases, lo que da lugar a la formacin de una imagen oscura con un fondo brillante. Campo oscuro: Es un tipo de microscopio ptico, en el que se ha modificado el sistema de iluminacin, de manera tal que la luz incide sobre la muestra slo desde los lados. La nica luz que es capaz de entrar en el objetivo es la que, al ser dispersada por la muestra, incide sobre el objetivo; de ah que los microorganismos se observen brillantes sobre un fondo oscuro, y pueden observarse con ellos objetos de difcil visualizacin en campo claro o contraste de fases. Se utiliza para preparaciones con muy poco contraste, en las que la muestra se ver como un negativo fotogrfico sobre un fondo oscuro.

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Introduccin

Contraste de polarizacin: En estos microscopios la luz es polarizada y aunque no necesita objetivos especiales, s de un polarizador situado entre la fuente de luz y el condensador, y de un analizador entre el objetivo y el ocular. Se utilizan para la observacin de materiales birrefringentes, tal es el caso de algunas disciplinas como la Mineraloga o la Petrografa. Contraste interferencial de Normarski: En esta tcnica se combina la luz polarizada con un principio similar al del contraste de fases, dando como resultado una imagen similar a la aportada por un contraste de fases de gran resolucin pero con un marcado efecto de relieve y a color. Este tipo de ptica, aunque de resultados muy satisfactorios, requiere un equipamiento caro, constituido por accesorios como un condensador especial y prismas de polarizacin, que hacen que su uso sea muy restringido. Microscopa de fluorescencia: La microscopa de fluorescencia se utiliza para visualizar muestras capaces de emitir fluorescencia, es decir, capaces de emitir una determinada longitud de onda cuando previamente ha incidido sobre ellas una luz de menor longitud de onda. La fluorescencia puede ser debida a las caractersticas que presentan algunos microorganismos debido a ciertos componentes celulares (autofluorescencia) o mediante la adicin de sustancias capaces de teir la preparacin (fluorocromos). En este segundo caso, la muestra estar marcada con colorantes fluorescentes, o bien la fijacin del colorante se realiza con un anticuerpo marcado (inmunofluorescencia). En cualquier caso, la fluorescencia se define como la propiedad que poseen algunas sustancias denominadas fluorescentes, las cuales bajo la accin de radiaciones de onda corta (luz ultravioleta), pueden emitir otras radiaciones de longitud de onda ms largas denominadas de fluorescencia (radiacin visible). Para que la emisin sea selectiva, los filtros de fluorescencia habrn de ser adecuados. Normalmente, se emplea un filtro que delimita la banda de excitacin y un segundo filtro o filtro de barrera que slo deja pasar la fluorescencia y elimina los restos de luz de excitacin. Las tcnicas basadas en la microscopa de epifluorescencia estn adquiriendo cada vez mayor auge gracias al desarrollo, entre otras, de las tcnicas de estimacin de la biomasa viva y de determinacin de la actividad biolgica, de gran utilidad en el campo de los procesos de depuracin de aguas residuales.

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Introduccin

1.101.10- Hibridacin in situ situ (FISH)

La hibridacin in situ con sondas u oligonucletidos 16S rDNA/23S rDNA marcadas con fluorocromos (FISH) es una tcnica que permite identificar microorganismos pertenecientes a un grupo taxonmico especfico. Uno de los sistemas estudiados con esta tcnica FISH en el campo de la ingeniera ambiental, es la depuracin de aguas residuales y ms concretamente los tratamientos biolgicos, en la que la finalidad es la de tener una mejor identificacin, comprensin y entendimiento del estado del licor mezcla. Esta tcnica se basa en la hibridacin directa de la bacteria diana con una sonda complementaria de una regin del gen 16S rRNA o 23S rRNA. El elevado nmero de molculas de rRNA (103-105) es una ventaja en la aplicacin de la tcnica de hibridacin al aumentar su sensibilidad. Una secuencia de DNA (sonda) puede unirse con la secuencia de ARN complementaria (16S rRNA o 23S rRNA) y se produce un hbrido DNA:RNA. La sonda est marcada de tal forma que los hbridos formados se pueden detectar fcilmente con un microscopio de epifluorescencia. La especificidad de las sondas puede ser ajustada a diferentes niveles taxonmicos, como son dominio, phylum, clase, gnero, especie para la identificacin de bacterias en sus diferentes comunidades naturales. La parte ms crtica de la tcnica FISH es el diseo de sondas, que deben ser lo suficientemente especficas para unirse nicamente a la bacteria que se quiere identificar en presencia de otras bacterias, en muchos casos con molculas de rRNA muy homlogas. El tamao de las sondas oscila entre 15 y 30 nucletidos. Para asegurar la especificidad de las sondas, los dos parmetros determinantes van a ser la temperatura y la concentracin de formamida en el tampn de hibridacin. En la mayora de protocolos la temperatura de hibridacin se mantiene constante y es la concentracin de formamida la que favorecer las condiciones de especificidad de la sonda. La formamida hace que disminuya la temperatura de unin de las sondas mediante el debilitamiento de los puentes de hidrgeno. Este compuesto disminuye la temperatura de fusin de los hbridos DNA:RNA en 0,72 C por cada 1% de formamida utilizada, y permite realizar la hibridacin entre 30 y 50 C. El primer paso necesario para llevar a cabo esta tcnica es la fijacin de las bacterias. De esta forma se conserva su morfologa y se favorece el acceso de las sondas. Para permeabilizar las clulas se utilizan detergentes como el SDS (sodio dodecil sulfato). En funcin de la pared celular de la bacteria (Gram+ o Gram-) se utiliza un reactivo para la fijacin. Para las bacterias Gram-negativas se emplea el paraformaldehido (PFA) y el etanol para las Gram+positivas. La sonda que se utiliza en la tcnica FISH est formada por una pequea secuencia de nucletidos de cadena sencilla, en cuyo extremo, normalmente el 5, se marca con un fluorocromo. 22

Introduccin

Una vez que se ha realizado la hibridacin y se han marcado las bacterias que interesa identificar, se procede al lavado de la muestra para eliminar el exceso de sonda que no ha hibridado. Despus de la hibridacin se puede realizar una tincin con un fluorocromo especfico del DNA, DAPI, que permitir teir todas las clulas presentes en las muestras hibridadas y no hibridadas. Para observar la muestra hibridada se emplea el microscopio de epifluorescencia.

1.10.1Organismos responsables de la nitrificacin y sondas FISH utilizadas 1.10.1para su identificacin. La nitrificacin est catalizada por procariotas aerobios quimilitotrfos: bacterias oxidadoras de amonio del dominio Bacteria (AOB), bacterias oxidadoras del amonio del dominio Archaea (AOA) y bacterias oxidadoras de nitrito (NOB). La tcnica ms adecuada para la identificacin de AOB, AOA y NOB es la hibridacin in situ con sondas ADN:RNA marcadas con fluorocromos (FISH). Las bacterias oxidadoras del amonio a nitrito (AOB) de la subclase beta-proteobacteria, comprende los gneros Nitrosomonas y Nitrosospira. En la mayora de EDAR el amonio es oxidado por bacterias del gnero Nitrosomonas (incluido Nitrosococcus mobilis). Las especies ms comunes de AOB estn relacionadas con N. europaea, N. eutropha, N. mobilis y N. oligotropha. Existe otro grupo de oxidadoras de amonio a nitrito que no se detectan con esta sonda, que pertenecen a la subclase alfaproteobacteria, que incluye el gnero Nitrosococcus excepto N. mobilis, que pertenece al grupo de beta-proteobacteria oxidadoras de amonio. Las bacterias oxidadoras de nitrito a nitrato (NOB) pertenecen a 4 grupo filogenticos diferentes: Nitrococcus, Nitrospira, Nitrospina y Nitrobacter. Las alfa-proteobacterias oxidadoras de amonio a nitrito y las oxidadoras de nitrito a nitrato de los gneros Nitrococcus y Nitrospina son bacterias halfilas y, por tanto, no se espera que sean dominantes en sistemas de tratamiento de aguas residuales domsticas. Bacterias oxidantes del amonio (AOB): Las diferencias locales en las concentraciones de sustratos (micronichos) dentro de los flculos pueden afectar a la distribucin y actividad de las AOB en las EDAR. Bacterias relacionadas con Nitrosococcus mobilis parecen estar presentes en reactores que tratan elevadas concentraciones de amonio y con concentraciones de sales elevadas. En los flculos de los fangos activos las AOB relacionadas con el gnero Nitrosomonas forman, en general, agregados celulares compactos de forma esfrica. Clulas individuales dentro de stos agregados se pueden visualizar slo con aumentos de 600x y 1000x. El dimetro de la mayora de estos agregados es de 10-50 m. Tambin pueden existir agregados menos compactos con ms espacios dentro de ellos. Clulas aisladas de AOB tambin pueden ser visualizadas ocasionalmente en flculos, pero pueden ser obviadas cuando existen agregados celulares densos de AOB. 23

Introduccin

Bacterias oxidantes del nitrito (NOB): Las clulas de Nitrobacter estn presentes en muchos reactores y pueden ser aisladas por cultivo, pero normalmente sus densidades no son altas en EDAR. En reactores que temporalmente contienen elevadas concentraciones de nitritos, por ejemplo SBR, las concentraciones de Nitrobacter pueden ser elevadas, probablemente porque estas NOB estn mejor adaptadas a concentraciones altas de nitritos, mientras que Nitrospira est adaptada a concentraciones bajas de nitritos y de oxgeno. Nitrobacter pueden formar tambin agregados celulares densos. En los flculos de los fangos activos, las NOB a menudo se encuentran relacionadas espacialmente con las AOB, lo que refleja la relacin simbitica mutualista de estos dos grupos funcionales. Las sondas ms utilizadas para la identificacin de bacterias encargadas de la nitrificacin son las siguientes:

Tabla 4- Sondas FISH bacterias nitrificantes

Sonda

Secuencia (5(5-3)

Especificidad

Referencia

Sondas utilizadas para identificar Dominio Archaeabacteria ARCH917 GTGCTCCCCCGCCAATTC Loy et al. (2002) Eucaryota EUK516 ACCAGACTTGCCCTCC Amann et al (1990) Sondas utilizadas para identificar phyllum y clases del Dominio Bacteria Bacteria EUB 338 I GCTGCCTCCCGTAGGAGT Amann (1990) Planctomycetes EUB 338 II GCAGCCACCCGTAGGTGT Daims et al. (1999) Verrumicrobiales EUB338 III GCTGCCACCCGTAGGTGT Daims et al. (1999) Control EUB338 NONEUB ACTCTACGGGAGGCAGC Wallner et al (1993) Ntspa712 CGCCTTCGCCACCGGCCTTCC Phylum Nitrospira Daims et al. (2001) Sondas utilizadas para identificar subclases de la clase Proteobacteria -Proteobacteria ALF1b CGTTCGYTCTGAGCCAG Manz et al (1992) -Proteobacteria BET42a GCCTTCCCACTTCGTTT Manz et al (1992) -Proteobacteria GAM42a GCCTTCCCACATCGTTT Manz et al (1992) -Proteobacteria NSO1225 CGCGATTGTATTACGTGTGA Mobarry et al (1996) -Proteobacteria NSO1225* CGCCATTGTATTACGTGTGA Alonso et al (2009) -Proteobacteria NSO190 CGATCCCCTGCTTTTCTCC Mobarry et al (1996)

Sondas utilizadas para identificar gneros de -Proteobacteria

Nitrobacter sp NIT3 CCTGTGCTCCATGCTCCG Wagner et al (1996) Competidora CNIT3 CCTGTGCTCCAGGCTCCG Wagner et al. (1996) Sondas utilizadas para identificar gneros de -Proteobacteria amoniooxidantes Nitrosomonas spp NSM156 TATTAGCACATCTTTCGAT Mobarry et al (1996) Nitrosomonas NEU CCCCTCTGCTGCACTCTA Wagner et al. (1995) Nitrosospira spp NSV443 CCTGTGCTCCATGCTCCG Mobarry et al (1996)

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Introduccin

Sondas utilizadas para identificar gneros del phylum Nitrospira Nitrospira spp Ntspa662 GGAATTCCGCGCTCCTCT Competidora CNtspa662 GGAATTCCGCTCTCCTCT Nitrospira spp NSR1156 CCCGTTCTCCTGGGCAGT Sondas utilizadas para identificar especies del gnero Nitrosomonas N. europaea NSE1472 ACCCCAGTCATGACCCC N. halfilos NEU23a CCCCTCTGCTGCACTCTA N. mobilis NmV TCCTCAGAGACTACGCGG

Daims et al. (2001) Daims et al. (2001) Schramm et al (1998 Juretschko (1998) Wagner et al (1996) Demaneche (2008)

1.10.2Organismos responsables de la desnitrificacin y sondas FISH 1.10.2utilizadas para su identificacin. identificacin. La mayora de las bacterias capaces de reducir el nitrato utilizndolo como aceptor de electrones son hetertrofas facultativas. Tambin existen algunas bacterias auttrofas capaces de realizar la desnitrificacin. Los gneros ms comunes capaces de realizar el proceso de desnitrificacin son: Pseudomonas, Bacillus,

Spirillum, Hyhomicrobium, Acinetobacter, Propionobacterium, Corynebacterium, Cytophaga, Thiobacillus y Alcaligenes.

Los gneros ms abundantes son Pseudomonas (P.fluorescens, P. aeruginosa, P.denitrificans) y Alcaligenes siendo frecuentemente encontrados en aguas residuales (Bitton, 1999). Las sondas ms utilizadas para la identificacin de las bacterias responsables de la desnitrificacin son las siguientes:
Tabla 5- Sondas FISH bacterias desnitrificantes

Sonda

Secuencia (5(5-3)

Especificidad
Rhodobacter, Rhodovulum, Roseobacter, Paracoccus

Referencia
Kim et al (2004)

Sondas utilizadas para identificar Desnitrificantes RRP1088 GACTTGCATGCCTAATCC

25

Introduccin

1.111.11- Respirometra
La respirometra es una herramienta ampliamente utilizada caracterizacin del proceso de degradacin aerbica de un agua residual. para la

La respirometra es la medicin e interpretacin de la velocidad de consumo de oxgeno por parte de los microorganismos (biomasa) en estudio bajo condiciones definidas y controladas. Las medidas respiromtricas estn basadas en la determinacin de los cambios que se producen en la velocidad de respiracin de los microorganismos presentes cuando son expuestos a un pulso de sustrato. La velocidad total de respiracin de los microorganismos, puede ser dividida en una velocidad de respiracin endgena y una exgena. Cuando no hay ningn tipo de sustrato oxidable, los microorganismos oxidan su propia biomasa con el objeto de generar energa para las funciones de mantenimiento celular. Al agregar un sustrato determinado, los microorganismos lo oxidan observndose un aumento en la velocidad de consumo de oxgeno. Debido a que la respirometra es una tcnica rpida y poco costosa, ha sido aplicada en diferentes campos como por ejemplo, en la determinacin de parmetros cinticos y estequiomtricos que caracterizan la biodegradacin aerbica de los compuestos de carbono, nitrgeno y en el estudio de la toxicidad de aguas residuales (Vanrolleghem et al. 1994).

1.11.11.11.1-

Anlisis de los diferentes tipos de respirmetros.

Un respirmetro se define como un reactor biolgico destinado a la medida de velocidades de consumo de oxgeno. El parmetro ms usado para cuantificar esta velocidad es la OUR (Oxygen Uptake Rate), que se define como la cantidad de oxgeno consumida por litro de reactor y por unidad de tiempo. Existen muchos tipos de respirmetros de complejidad y funcionamiento muy diverso. Los respirmetros ms utilizados se describen a continuacin: Respirmetro Continuo En un respirmetro continuo el aire circula de manera continua en el recipiente donde se lleva a cabo la determinacin. Se mide el caudal y concentracin de oxgeno en el aire de entrada y a la salida de forma permanente, para as poder determinar por diferencia el consumo instantneo de oxgeno. A partir de la curva de consumos instantneos de oxgeno frente al tiempo se podrn obtener por derivacin las velocidades instantneas de consumo de oxgeno.

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Introduccin

Respirmetro Discontinuo (Batch) En un respirmetro discontinuo el aporte de oxgeno depende de dos valores de consigna, un mximo y un mnimo de concentracin de oxgeno dentro del recipiente donde se lleva a cabo la respirometra. Se inyecta aire hasta alcanzar el valor mximo de concentracin de oxgeno establecido. Una vez alcanzado se deja de inyectar oxgeno y se espera a que los microorganismos lo consuman, hasta llegar a la consigna mnima. Se mide el tiempo que emplean los microorganismos en consumir el oxgeno, con el que se obtiene la velocidad instantnea de consumo de oxgeno. Respirmetro manomtrico o de Warburg En un respirmetro manomtrico el oxgeno utilizado se mide con respecto al tiempo, anotando la disminucin de presin en el recipiente donde se est realizando la respirometra, que tiene volumen constante, es hermtico y se ha de mantener a una temperatura constante. En el recipiente se introduce la muestra a analizar dejando una cmara de aire y, adems, se ha de colocar un vaso con una solucin de hidrxido potsico para que absorba el anhdrido carbnico producido, de tal forma que la disminucin de la presin sea una medida de la concentracin de oxgeno consumido. Respirmetro Volumtrico De forma anloga al respirmetro de Warburg, el oxgeno consumido se mide en funcin de la disminucin del volumen que se produzca en el recipiente adecuado que mantenga la presin y la temperatura constantes. Respirmetro electroltico El respirmetro electroltico est formado por un recipiente dotado en su interior de un absorbedor de CO2 (recipiente con sosa), una clula electroltica y un manmetro. A medida que los microorganismos consumen el oxgeno para la oxidacin de la materia orgnica, se produce una disminucin de presin en el sistema, que es registrada por el manmetro. ste, a su vez, a travs de un sistema de control, activar la clula electroltica en funcin de dicha disminucin de presin, tratando as de mantener la presin constante. La cantidad de oxgeno liberado en la electrolisis es proporcional a la cantidad de energa elctrica que ha sido necesaria suministrar. Registrando esta energa se puede inferir directamente el consumo de oxgeno.

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Introduccin

1.121.12- Software de simulacin de EDAR: DESASS

DESASS (Design and Simulation of Activated Sludge Systems) es un software especfico de simulacin y diseo de EDAR que tiene implementado una ampliacin del modelo de eliminacin biolgica de nutrientes n 1 (Biological Nutrient Removal Model, N 1, BNRM1. Seco et al., 2004). Se trata de un simulador de estaciones depuradoras configurado bajo windows, diseado y optimizado para la investigacin de procesos de tratamiento de aguas residuales y la evaluacin de sistemas de tratamiento existentes. Es un programa que permite evaluar esquemas completos de tratamiento de aguas residuales, tanto en la lnea de agua como en la de fangos. Incluye adems la posibilidad de considerar los procesos biolgicos que tienen lugar en los decantadores y espesadores junto con los procesos de sedimentacin y compresin del fango. Adems, este software posee muchas herramientas que permiten realizar simulaciones utilizando muchas condiciones de operacin, y controlar el impacto de las diferentes condiciones en el proceso de depuracin. As como, la comparacin de diferentes alternativas como se ver ms adelante.

1.12.11.12.1-

Caractersticas del software

Entre sus principales caractersticas se puede destacar su capacidad para simular una gran variedad de configuraciones de plantas permitiendo fijar los volmenes, los caudales y las diferentes cargas contaminantes. Asimismo, permite la simulacin dinmica de variaciones de cargas diarias y estacionales, y permite la introduccin de las condiciones iniciales de los elementos en rgimen transitorio. Permite comparar de manera sencilla los resultados para condiciones de verano e invierno, en rgimen estacionario. Por otro lado, permite simular los procesos de sedimentacin en los decantadores y espesadores, adems de los procesos biolgicos que se pueden producir en ellos. Adems, permite disear los sistemas de aireacin, mediante la introduccin de tres tipos de maquinarias: difusores, turbinas y venturi. Incluyendo un programa auxiliar para la actualizacin de la base de datos de la maquinaria utilizada en dicho sistema. Para una fcil interpretacin de los resultados obtenidos, permite representar grficamente tanto en rgimen estacionario como en rgimen transitorio, as como la evolucin de las variables del modelo en cada elemento.

28

Introduccin

1.12.21.12.2-

Modelos utilizados

El modelo biolgico utilizado considera componentes y procesos que incluyen los procesos biolgicos de eliminacin de materia orgnica, nitrgeno y fsforo del agua residual, junto con los procesos de hidrlisis, fermentacin y digestin de los fangos. El modelo tambin incluye los procesos de precipitacin y de intercambio de gases con la atmsfera. El programa permite representar las situaciones de pH extremas que se suelen producir en los fermentadores y digestores aerobios, utilizando una metodologa sistemtica para el clculo del pH en los distintos elementos de un esquema de tratamiento. Adems tiene implementado un modelo de sedimentacin con el objeto de representar los procesos de sedimentacin y espesado del fango que tiene en cuenta el proceso de compactacin que se produce en el fondo de los decantadores y espesadores. El modelo del decantador incluye las zonas de clarificacin, sedimentacin y compresin del fango, de forma que se pueden obtener no slo las concentraciones de slidos en el efluente y en la recirculacin de fangos, sino tambin el perfil de concentraciones, mediante la divisin del decantador en capas horizontales. De esta manera, es posible conocer la posicin del manto de fangos en cada momento y la capacidad de almacenamiento de fangos del decantador. La inclusin de este modelo en DESASS permite la simulacin de los procesos de desnitrificacin que con frecuencia tienen lugar en los decantadores secundarios. 1.12.31.12.3Aplicaciones

El programa DESASS se ha desarrollado de modo que se permite el clculo tanto de las condiciones estacionarias, es decir, el diseo, como de condiciones transitorias, es decir la simulacin. Por lo que respecta al diseo, DESASS permite el clculo del estado estacionario para las condiciones de invierno y de verano simultneamente, ofreciendo as una fcil comparacin entre cada una de las estaciones. En rgimen estacionario el programa desarrolla una solucin basndose en las condiciones medias establecidas en planta, tales como la calidad del agua de entrada, los caudales de recirculacin interna y de lodos, y las dimensiones de la planta. En cuanto a la simulacin, el programa es capaz de simular la evolucin de la planta teniendo en cuenta la variacin diaria en la entrada. Tambin se puede realizar una simulacin con entrada constante para ver cmo evoluciona el sistema frente a alguna modificacin en las condiciones de operacin. Adems, se puede simular la variacin temporal de los caudales de recirculacin y de purga del fango de los decantadores. 29

Introduccin

Algunas posibilidades de optimizacin en sistemas de fangos activados en funcionamiento son la disminucin de la concentracin de oxgeno en el reactor biolgico y de la recirculacin interna en periodos de baja carga para evitar una excesiva concentracin de nitratos en el tanque anxico. As como, el establecimiento de los valores de purga y de recirculacin adecuados para mantener la concentracin deseada de slidos suspendidos en el reactor biolgico.

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Objetivo

2- OBJETIVO

Objetivo

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Objetivo

2- OBJETIVO
La mayor exigencia en el tratamiento de aguas residuales tanto urbanas como industriales, junto con el ahorro energtico, suponen dos de los retos ms importantes que actualmente tienen lugar en las EDAR, es por ello que la investigacin se ha dirigido en estos ltimos aos a nuevos procesos de tratamiento que aumenten la capacidad de los sistemas de fangos activos sin olvidar la optimizacin energtica. El presente proyecto se sita en el problema de la eliminacin biolgica de nitrgeno, y de cmo esta puede llevarse a cabo en plantas que no hayan sido diseadas para ello (sin zona anxica y/o sin recirculacin interna). En este proyecto se pretende operar una planta piloto a escala de laboratorio mediante aireacin intermitente para alcanzar concentraciones de nitrgeno admisibles por la legislacin con un consumo energtico mnimo, es decir, trabajando con un tiempo de retencin celular (TRC) aerobio bajo y concentraciones de oxgeno disuelto bajas. Para llevar a cabo dicho objetivo se ha operado la planta piloto con ciclos de aireacin intermitente controlados por tiempo, y consigna de oxgeno comandada por un controlador. La utilizacin de tcnicas microscpicas como la hibridacin de fluorescencia in situ (FISH) va a suponer una herramienta muy potente a la hora de realizar un estudio ms exhaustivo de este proceso y por tanto tener un conocimiento ms amplio sobre el comportamiento de estos sistemas, mediante la identificacin y cuantificacin de bacterias nitrificantes en el sistema. La simulacin del proceso con la ayuda del software DESASS, en base a la composicin del agua influente y los resultados analticos del efluente permitir obtener los valores de los parmetros de las bacterias con vistas a una posible optimizacin del proceso. As pues con el fin de llevar a cabo el estudio y desarrollo del objetivo principal de este proyecto, se plantean una serie de objetivos especficos: - Puesta a punto de la planta piloto. - Caracterizacin del agua influente, efluente y licor mezcla de la planta piloto. - Identificacin de poblaciones bacterianas del licor mezcla responsables de la eliminacin biolgica de nitrgeno, mediante la tcnica de hibridacin in situ (FISH)

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Objetivo

- Simulacin de la planta piloto en DESASS, ajustando los parmetros del modelo para reproducir los resultados analticos obtenidos en laboratorio. - Utilizacin de tcnicas respiromtricas como herramienta complementaria, para apoyar los resultados analticos y microscpicos, haciendo especial hincapi en los parmetros referidos a la biomasa auttrofa. - Realizacin de un anlisis exhaustivo de los resultados que permita extraer las conclusiones pertinentes en este proceso y as profundizar en el conocimiento de los sistemas de eliminacin biolgica de nitrgeno.

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Materiales y Mtodos

3- MATERIALES Y MTODOS

Materiales y Mtodos

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Materiales y Mtodos

3- MATERIALES Y MTODOS
3.13.1- Descripcin de la planta piloto
La planta piloto consiste en un sistema de fangos activados, en el que diferenciamos las siguientes partes (Figura 12): Depsito de agua de entrada Equipo planta piloto de bombas peristlticas Reactor biolgico Agitador mecnico Controlador y sondas de medida Decantador secundario Depsito de agua de salida

Depsito de agua de entrada: Se trata de un tanque de alimentacin de agua influente con una capacidad para 50 litros. El agua residual utilizada es sinttica porque facilita el control del proceso, ya que no tienen lugar variaciones inesperadas en la composicin y concentracin, y evita otros posibles problemas como inhibiciones. El depsito se encuentra aislado de la luz solar para evitar la proliferacin de algas. La composicin del agua residual sinttica de entrada (Tabla 6) se prepara tres veces por semana.
Tabla 6- Composicin agua residual sinttica

AGUA RESIDUAL SINTTICA Compuesto Concentracin (mg/l) mg/l) CH3COONa 250 NH4Cl 150 Na2HPO412H2O 37,5 K2PO4 12,5 KCl 8,74 CaCl22H2O 8,74 MgSO47H2O 7,3 FeSO47H2O 1,26 ZnCl2 0,2 CoCl2 0,2 Equipo planta piloto bombas peristlticas: Se trata del equipo piloto Bio Kontroll mark 2 (Figura 13), el cual consta de dos bombas peristlticas con posibilidad de funcionar en continuo, o bien, alternando ciclos de operacin y espera regulables en diez velocidades cada uno de ellos.

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Materiales y Mtodos

Este equipo bombea con la bomba A, desde el depsito de agua de entrada hasta el reactor biolgico, y con la bomba B, la recirculacin de fangos externa del decantador secundario al reactor biolgico.

Figura 1212- Foto Planta Piloto

Reactor biolgico: El reactor biolgico es un tanque de metacrilato de 40 litros de capacidad el cual, tiene dos entradas de agua por la parte inferior, para la introduccin del agua influente y la recirculacin, y cuatro salidas a diferentes alturas correspondiendo con 18 litros de volumen la salida utilizada y utilizando el resto de salidas superiores como reboses de seguridad. La aireacin del reactor es llevada a cabo por cuatro difusores de pecera, formando ngulos entre s de 90 en el fondo del reactor. El bombeo de aire se lleva a cabo a travs de un aireador de pecera. Agitador mecnico: El reactor biolgico posee tambin una agitacin mecnica a travs de una pala que gira a travs de un taladro mecnico con velocidades regulables. Controlador y sondas de medida: La instrumentacin utilizada parte de un controlador SC200 (Hach Lange) que controla las dos sondas instaladas en el reactor biolgico, una de pH y otra de oxgeno. Esta ltima se encuentra conectada por rel al aireador de pecera para controlar la consigna de oxgeno fijada. El registro de datos de pH, temperatura y oxgeno se almacena cada minuto, obteniendo el valor medio alcanzado en dicho tiempo de cada medida.

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Materiales y Mtodos

Adems el aireador y la agitacin mecnica se encuentran conectados a un reloj temporizador que marca los ciclos de aireacin intermitente. Decantador secundario: El agua de salida del reactor fluye por gravedad al decantador secundario de metacrilato con una capacidad de volumen de 5 litros. Dicho decantador tiene forma troncocnica y es esttico. Posee dos salidas una inferior para la recirculacin de fangos al reactor biolgico, a travs de la bomba B y otra superior para el agua efluente a travs de un deflector. Depsito de agua de salida: Recoge el efluente del decantador secundario que fluye por gravedad a este depsito. Se trata de un tanque de almacenamiento de agua con una capacidad para 50 litros, que permite tener una muestra de salida integrada.

3.23.2- Antecedentes: Prediseo, montaje y puesta en marcha de la planta piloto.

En un primer momento antes de comenzar la realizacin del proyecto, se llev a cabo un prediseo del reactor biolgico y sus parmetros operacionales mediante una plantilla Excel, con el objetivo de obtener los parmetros cinticos resultantes, as como la calidad del agua de salida. Los parmetros de diseo empleados fueron los siguientes:
Tabla 7- Parmetros de diseo iniciales

Q entrada Volumen reactor TRC SS DQO entrada DQO salida

40 l/d 25 l 9 das 2500 mg/l 300 mg/l 25 mg/l

Tambin estos parmetros sirvieron para el diseo del reactor biolgico de metacrilato, el cual, todava estaba pendiente de construir. As pues, se dise el reactor de metacrilato en funcin de los volmenes y caudales previstos, de forma que este volumen coincidiera con una de las salidas, disponiendo tambin de otras salidas a distintos volmenes de trabajo, tanto superiores como inferiores por si fuera necesaria su utilizacin.

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Materiales y Mtodos

Se trabaj con el equipo piloto de bombas peristlticas Bio Kontroll mark 2 para llevar a cabo la calibracin de los caudales de ambas bombas, ya que el funcionamiento semicontinuo de este equipo presenta 10 posiciones de operacin y 10 posiciones de espera, por lo que cada bomba cuenta con 100 posibles caudales. Se calibraron un 40% de los caudales de cada bomba, para tener un amplio margen de posibilidades en los caudales de entrada y recirculacin (Figura 13).

Figura 1313- Foto equipo de bombeo planta piloto

Una vez construida y probada la planta piloto, la puesta en marcha se llev a cabo utilizando como influente agua decantada de la EDAR Quart-Benger y llenando el reactor biolgico con licor mezcla de dicha EDAR. Posteriormente se cambi el agua influente de la planta piloto por un agua residual sinttica para evitar problemas de choques de carga, inhibiciones y, para tener una entrada de agua homognea. En un principio la aireacin se mantuvo continua sin ninguna consigna de oxgeno, para favorecer el crecimiento de las bacterias auttrofas. Para ir adaptando el fango activo a la aireacin intermitente se introdujeron paulatinamente los ciclos de marcha y paro. Comenzando por 15 min/15 min, hasta llegar progresivamente al ciclo de oxigenacin intermitente elegido para este estudio que fue de 15 min marcha/75 min paro. Uno de los problemas observados durante la puesta en marcha de la planta piloto fue el levantamiento y estancamiento del fango en el decantador secundario. La planta piloto operaba con aireacin continua, por lo que en el reactor se llevaba cabo la nitrificacin y el licor mezcla rico en nitratos llegaba al decantador secundario, en este, tena lugar el proceso de desnitrificacin causando el levantamiento del fango. Adems el decantador secundario es esttico y tiene un deflector para el paso del efluente produciendo un estancamiento del fango. Este problema se solucion con la implantacin de los ciclos de marcha y paro, que redujeron la concentracin de nitratos considerablemente, con lo que se evitaron problemas de levantamiento del fango por desnitrificacin en el decantador secundario.

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Materiales y Mtodos

3.33.3- Condiciones de operacin

En el transcurso de la puesta en marcha de la planta piloto, se fijaron los parmetros con los que se iba a trabajar a lo largo del estudio. La temperatura de la planta se mantuvo en 25C, gracias a la climatizacin del laboratorio. El caudal de entrada se fij en 20 l/d con agua residual sinttica (cuya composicin se muestra en la Tabla 6), con lo que el tiempo de retencin hidrulico (TRH) es: TRH = Volumen reactor / Caudal entrada = 18 l / 20 l/d = 0,9 d-1 Al disponer de un nico reactor biolgico, como sucede en muchas plantas de tratamiento, resulta potencialmente interesante la implantacin de ciclos de aireacin intermitente con el objetivo de poder llevar a cabo la eliminacin de nitrgeno mediante el sistema nitrificacin/desnitrificacin. Para ello el reactor biolgico aerobio tiene que trabajar con ciclos de aireacin intermitente convirtindose en los ciclos de parada en un reactor anxico. La aireacin intermitente se regul por tiempo con ciclos alternados de 15 minutos de aireacin y 75 minutos de paro. Adems durante el periodo de marcha se dispone de agitacin mediante pala mecnica a una velocidad de 20 giros/minuto. Durante el periodo anxico se detuvo la agitacin simulando el funcionamiento de una planta industrial durante la parada de las soplantes. El tiempo de retencin (TRC) se fij en 18 das, por lo que el tiempo de retencin aerobio (TRCaerobio) con el que se ha operado es de 3 das. Para mantener este TRC se purgaba diariamente 1l de licor mezcla del reactor. TRCaerobio = 15 min/90 min * 18 d = 3 das Junto a este tiempo de retencin celular tan bajo, se llev a cabo el control de oxgeno con una consigna de 1 ppm comandada por el controlador SC200 para conseguir unas condiciones de trabajo lmites para llevar a cabo la eliminacin biolgica de nitrgeno y que permitan a su vez un significante ahorro energtico. Adems mediante estas condiciones lmite se pretenda estudiar la posibilidad de llevar a cabo la eliminacin biolgica de nitrgeno va nitrito, dando lugar a un lavado de las bacterias nitritoxidantes. Por ltimo se muestra un cuadro resumen con las condiciones de operacin de la planta piloto (Tabla 8).

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Materiales y Mtodos

Tabla 8- Condiciones de operacin de la planta piloto

PARMETROS OPERACIONALES Q entrada Q salida Q recirculacin Temperatura TRH TRC Q purga Consigna de oxgeno Ciclos de aireacin y agitacin mecnica

Valores y Unidades 20 l/d 20 l/d 64 l/d 25 C 0,9 d-1 18 das 1 l/d 1 0,2 mg/l 15 min marcha / 75min paro

3.43.4- Fases del estudio

Fase de crecimiento de la biomasa auttrofa En el inicio de la puesta en marcha de la planta piloto la aireacin se mantuvo continua sin ninguna consigna de oxgeno, para favorecer el crecimiento de las bacterias auttrofas. Fase de adaptacin a la aireacin intermitente Para ir adaptando el licor mezcla a la aireacin intermitente se introdujeron paulatinamente los ciclos de marcha y paro, as como la consigna de oxgeno. Comenzando por 15 min/15min, hasta llegar progresivamente al ciclo de oxigenacin intermitente utilizado durante este estudio que fue de 15min marcha/75 min paro, ya que despus de probar varias combinaciones de intermitencia, estas condiciones de trabajo permitan llevar a cabo simultneamente la eliminacin biolgica de nitrgeno en valores admisibles, y un significante ahorro energtico. Para esta fase fue importante el control y monitorizacin del pH y oxgeno mediante las sondas presentes en el reactor, as como los resultados analticos obtenidos para elegir correctamente el ciclo de intermitencia ideal. Fase de desarrollo del estudio: Aireacin Intermitente Durante esta fase se realizan ensayos fsico-qumicos (DQO, NH4+, NO3-, NO2-, NT, PO43-, PT, SS, SSV) para obtener resultados del estado de eliminacin biolgica de nitrgeno, fosfro y materia orgnica, y conocer si el sistema se encuentra en buenas condiciones. A su vez se identifican y cuantifican las bacterias amonioxidantes (AOB) y nitritoxidantes (NOB) mediante tcnicas microscpicas moleculares, para ver si existe una poblacin nitrificante en el sistema que permita llevar a cabo la eliminacin bilogica de nitrgeno.

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Materiales y Mtodos

Se realizan observaciones microscpicas del licor mezcla para realizar una bioindicacin del fango activo y tinciones simples para la identificacin de organismos acumuladores de polifosfatos. Se determinan parmetros cinticos de la biomasa auttrofa y hetertrofa, para ver el estado de la biomasa mediante ensayos respiromtricos. Durante esta fase tambin tiene lugar la simulacin de la planta piloto, ajustando los parmetros cinticos para reproducir los resultados experimentales obtenidos. Fase de anlisis de datos Esta fase est presente durante las tres fases anteriores del proyecto, para ir adaptando y analizando los resultados del proceso. Finalmente se estudian todos los resultados obtenidos y simulados, con el objetivo de obtener las conclusiones pertinentes.

3.53.5- Mtodo de identificacin y cuantificacin de las poblaciones bacterianas

3.5.13.5.1Condiciones de hibridacin

Las condiciones de hibridacin son un factor muy importante a tener en cuenta a la hora de realizar la hibridacin. El efecto de la temperatura, as como el medio inico en el que se encuentra el ADN o el ARN, permite la separacin de las cadenas o regiones bicatenarias, en el caso del ADN, o en una sola cadena monocatenaria en el caso del ARN. Las condiciones de fusin y la renaturalizacin de los cidos nucleicos se ven influenciadas bsicamente por cuatro factores: - Temperatura: En condiciones normales, la temperatura de fusin del ADN es bastante alta, superior a 70 C, dependiendo de la secuencia primaria del ADN. Sin embargo, la tcnica FISH requiere temperaturas de hibridacin menores para evitar el estrs trmico y mantener as la integridad de las clulas. - pH: Para realizar las pruebas de hibridacin se suele emplear un pH prximo a la neutralidad, sin embargo se puede utilizar un pH elevado para obtener condiciones de elevada restriccin. Este ltimo trmino se refiere a la homologa que existe entre el oligonucletido o sonda que se utiliza en la tcnica FISH y la secuencia de ARN a la cual va dirigida esa sonda. Cuanto mayor sea el grado de restriccin mayor ser la homologa entre la sonda y la secuencia diana, y por lo tanto mayor grado de unin entre el hbrido ADN-ARN.

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Materiales y Mtodos

- Concentracin de los cationes del medio: Estos cationes interactan electrostticamente con los cidos nucleicos, de forma que cuanta ms alta es la concentracin, ms estable es el hbrido. En la tcnica FISH se utiliza el EDTA para complejar los cationes divalentes como el Ca2+. - Presencia de solventes orgnicos: La desnaturalizacin de los cidos nucleicos se produce entre los 80 y los 100 C. A esta temperatura de hibridacin las muestras biolgicas se deterioraran. Los disolventes orgnicos reducen la estabilidad trmica de los cidos nucleicos de doble cadena, pudindose llevar a cabo la hibridacin a temperaturas ms bajas. Normalmente se emplea formamida. 3.5.23.5.2Hibridacin de las muestras

Los pasos a seguir son los siguientes: - Aplicacin de las muestras a los portaobjetos FISH 1- Poner un volumen de 3 l de muestra fijada en el portaobjetos. 2- Secar al aire. 3- Deshidratar en EtOH al 50% durante 3min (por inmersin). 4- Deshidratar en EtOH al 80% durante 3min (por inmersin). 5- Deshidratar en EtOH al 98% durante 3min (por inmersin). - Hibridacin in situ 1- Preparar la solucin de hibridacin con formamida (Tabla 9) en un eppendorf de 2ml. 2- De la solucin de hibridacin con formamida, reservar en un eppendorf 6 x (10n) l, siendo n el volumen de sonda utilizada en cada pocillo. 3- Aadir al eppendorf reservado 6 l de sonda (6 pocillos por porta = 6 l de sonda) 4- Poner un trozo de papel de celulosa dentro de un tubo Sarstedt de 50ml y echar sobre el papel la solucin de hibridacin sin sonda. 5- Poner 9 l de la solucin de hibridacin ms 1 l de sonda en cada pocillo y repartir homogneamente por todo el campo. 6- Introducir el porta dentro del tubo Sarstedt, manteniendo siempre la posicin horizontal. 7- Incubar a 46 C durante hora y media. 8- Preparar 50 ml de la solucin de lavado (Tabla 10), y atemperar a 48 C. 9- Sacar del horno y rpidamente lavar los portas e introducirlos dentro del tubo con la solucin de lavado. 10- Incubar en un bao a 48 C durante 15 20min. 11- Lavar con agua destilada. 12- Secar al aire en la oscuridad. 13- Si no se observa al microscopio inmediatamente, guardar el porta a 20 C dentro de un tubo Sarstedt de 50 ml. 44

Materiales y Mtodos

Tabla 9- Volmenes de reactivos en funcin del porcentaje de formamida para la preparacin preparacin de la solucin tampn de hibridacin en la tcnica tcnica FISH

Tabla 1010- Volmenes de reactivos en funcin del porcentaje de formamida para la preparacin de la solucin tampn de lavado en la tcnica FISH

Las sondas utilizadas en este trabajo son las que se muestran en la Tabla 11, donde se incluye el nombre de la sonda, la secuencia de nucletidos y la referencia donde ha sido descrita la sonda.

Tabla 1111- Sondas FISH de bacterias nitrificantes utilizadas para la identificacin y cuantificacin

Sonda

Secuencia (5(5-3)

Especificidad

Referencia

Sondas utilizadas para identificar phyllum y clases del Dominio Bacteria Bacteria EUB 338 I GCTGCCTCCCGTAGGAGT Amann (1990) Planctomycetes EUB 338 II GCAGCCACCCGTAGGTGT Daims et al. (1999) Verrumicrobiales EUB 338 III GCTGCCACCCGTAGGTGT Daims et al. (1999) Sondas utilizadas para identificar subclases de la clase Proteobacteria -Proteobacteria NSO1225 (*) CGCCATTGTATTACGTGTGA Alonso et al (2009) Sondas utilizadas para identificar gneros de -Proteobacteria Nitrobacter spp NIT3 CCTGTGCTCCATGCTCCG Wagner et al (1996) Competidora CNIT3 CCTGTGCTCCAGGCTCCG Wagner et al. (1996) Sondas utilizadas para identificar gneros del phylum Nitrospira Nitrospira spp Ntspa662 GGAATTCCGCGCTCCTCT Daims et al. (2001)

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Materiales y Mtodos

3.5.33.5.3-

Cuantificacin de las poblaciones bacterianas

La tcnica FISH adems de ser empleada para la identificacin de los grupos de bacterias, tambin permite obtener datos cuantitativos de las poblaciones microbianas presentes en el fango mediante un software desarrollado en la Tesis Doctoral de Borras (2008). Los pasos a seguir a partir de la hibridacin de las muestras con las sondas pertinentes son los siguientes: - Observacin en el microscopio y toma de imgenes: Una vez realizada la hibridacin, los portaobjetos deben ser examinados bajo un microscopio de epifluorescencia o un microscopio con focal lser, con los filtros adecuados segn los fluorocromos utilizados. Mediante una cmara digital acoplada al microscopio se toman imgenes de entre 20 y 40 campos representativos de la muestra hibridada. Las imgenes son captadas en color debido al uso de los fluorocromos de la tcnica FISH, y por lo general la intensidad no es muy alta. As que es importante tomar las imgenes con un tiempo de exposicin elevado de manera que la intensidad de las mismas sea lo ms alta posible, sin llegar a saturar las reas de inters de la imagen, lo que provocara la prdida de la informacin de intensidad de la seal. - Cuantificacin de los datos mediante software: El procesado y anlisis de las imgenes tomadas se realiza con un software desarrollado en MATLAB, que permite el tratamiento de las imgenes no slo basndose en la apariencia de las imgenes, sino en la informacin numrica que en ella contiene: la informacin de cada pxel individual. Las imgenes son introducidas en este software de cuantificacin, y el resultado es un informe detallado de los porcentajes de reas ocupadas por las bacterias presentes en la muestra hibridada. - Anlisis de los resultados: El informe debe ser revisado cuidadosamente con el fin de detectar posibles resultados errneos o estadsticamente incoherentes. El resultado final es un nmero que representa el porcentaje en rea de una especie bacteriana en la muestra, acompaado de su desviacin estndar.

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Materiales y Mtodos

3.63.6- Tinciones para la deteccin de bacterias PAO

3.6.13.6.1Tincin de polipoli-fosfatos (Azul de metileno)

La tincin con Azul de Metileno para la visualizacin de poli-fosfatos se llev a cabo mediante el mtodo descrito por Seviour y Blackall (1999). Reactivos A. Solucin 1 (solucin de Loeffler): - 0,3 g de azul de metileno - 100 ml de etanol 60% B. Solucin 2 - 10 mg hidrxido potsico - 100ml de agua destilada Mezclar las soluciones 1 y 2 en partes iguales. Procedimiento Poner unos 20 l de muestra (1 gota aproximadamente) en un porta, y extenderla sobre una superficie aproximada a la del cubre. Se deja secar al aire el mnimo tiempo posible. Aplicar la mezcla de las soluciones 1 y 2 durante 10-30 segundos. Lavar con abundante agua destilada. Secar el porta y examinar con aceite de inmersin, en campo claro y a 1000x aumentos.

Resultados Inclusiones de poli-fosfatos: Puntos color Rosa brillante-Violeta. Citoplasma: ligeramente azulado.

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Materiales y Mtodos

3.6.23.6.2-

Tincin de PHB (Sudan Black)

La tincin con Sudan Black se utiliza para la visualizacin de lpidos en la muestra, entre ellos el PHA (Gerhardt, 1981). Reactivos A. Solucin 1 - 0,3 g de Sudan Black B (IV) - 100 ml de etanol al 60% B. Solucin 2 - 0,5 g de safranina O - 100 ml de agua destilada Procedimiento Poner unos 20 l de muestra (1 gota aproximadamente) en un porta, y extenderla sobre una superficie aproximada a la del cubre. Se deja secar al aire durante aproximadamente 30 minutos. Aplicar la solucin 1 durante 10 minutos y aadir ms solucin si se seca el porta. Lavar durante 1 segundo con agua. Aplicar durante 10 segundos la solucin 2. Lavar con abundante agua. Secar el porta y examinar con aceite de inmersin, en campo claro y a 1000x aumentos.

Resultados Grnulos de PHB: puntos intracelulares de color Negro-Azul oscuro. Citoplasma: Rosa claro-sin teir.

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3.73.7- Caracterizacin qumica

3.7.13.7.1SSV. Determinacin de la concentracin de slidos en suspensin, SS SST y

La concentracin de slidos suspendidos totales (SST) se determina a partir de la filtracin y eliminacin de la humedad en estufa a 105C durante al menos una hora. El incremento en el peso del filtro representar a los slidos suspendidos totales. La concentracin de los slidos suspendidos no voltiles (SSNV) se obtiene mediante la calcinacin a 550C en mufla durante al menos 15 minutos de los slidos suspendidos totales. As los slidos suspendidos voltiles (SSV) se obtienen por diferencia entre los slidos suspendidos totales, y los slidos suspendidos no voltiles. 3.7.23.7.2Determinacin de la Demanda Qumica de Oxgeno, DQO

Para la determinacin de la demanda qumica de oxgeno (DQO) se han utilizado kits comerciales Hach-Lange, cuyo principio de determinacin se basa en que las sustancias oxidables reaccionan con la solucin de cido sulfrico y dicromato de potasio en presencia del sulfato de plata como catalizador. El cloruro se enmascara con sulfato de mercurio. Es un mtodo colorimtrico que evala la coloracin verde del Cr3+. Los rangos utilizados pertenecen a los kits LCK314 (Rango 15-150 mg DQO/l), LCK 414 (Rango 5-60 mg DQO/l) y LCK514 (Rango 100-2000 mg DQO/l). 3.7.33.7.3Determinacin Determinacin de Nitrgeno Total, NT.

Para la determinacin de nitrgeno total (NT) se han utilizado los kits comerciales Hach-Lange, cuyo principio est basado en que el nitrgeno ligado inorgnica y orgnicamente se oxida a nitrato mediante digestin con peroxidisulfato. Los iones nitrato reaccionan en una solucin de cido sulfrico y fosfrico con 2,6-dimetilfenol formando un nitrofenol. Los rangos utilizados pertenecen a los kits LCK138 (Rango 1-16 mg N/l), LCK238 (Rango 5-40 mg N/l) y LCK338 (Rango 20-100 mg N/l). 3.7.43.7.4Determinacin de nitrato, NO3-.

Para la determinacin de nitrato (NO3-) se han utilizado los kits comerciales Hach-Lange, cuyo principio se basa en soluciones que contienen cido sulfrico y fosfrico en los que los iones nitrato reaccionan con 2,6-dimetilfenol formando 4nitro-2,6-dimetilfenol. El rango utilizado pertenece al kit LCK339 (Rango 0,23-13,50 mg NO3-N/l). 49

Materiales y Mtodos

3.7.53.7.5-

Determinacin de nitrito, NO2-.

Para la determinacin del nitrito (NO2-) se han utilizado los kits comerciales Hach-Lange cuyo principio se basa en que en solucin cida los nitritos reaccionan con aminas aromticas primarias formando sales de diazonio. Estas forman compuestos aromticos que contienen un grupo amino o un grupo hidroxilo, colorantes azoicos intensamente coloreados. El rango utilizado pertenece al kit LCK341 (Rango 0,015-0,6 NO2-N/l). 3.7.63.7.6Determinacin de amonio, NH4+.

Para la determinacin de amonio (NH4+) se han utilizado los kits comerciales Hach-Lange cuyo principio se basa en que los iones amonio reaccionan, a un pH 12,6, con iones hipoclorito e iones salicilato, en presencia de nitroprusiato sdico como catalizador, formando azul de indofenol. El rango utilizado pertenece a los kits LCK304 (Rango 0,015-2 mg NH4-N), LCK305 (Rango 1-12 mg NH4-N), LCK303 (Rango 2-47 mg NH4-N).

3.7.73.7.7-

Determinacin de fsforo total, PT.

Para la determinacin de fsforo total (PT) se han utilizado los kits comerciales Hach-Lange cuyo principio se basa en que los iones fosfato reaccionan en solucin cida con iones molibdato y antimonio formando un complejo antimonilfosfomolibdato que, mediante cido ascrbico, se reduce a azul de fosfomolibdeno. El rango utilizado pertenece a los kits LCK 349 (Rango 0,05-1,5 mg PO4-P/l), LCK348 (Rango 0,5-5 mg PO4-P/l), LCK350 (Rango 2-20 mg PO4-P/l).

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Materiales y Mtodos

3.83.8- Respirometra
3.8.13.8.1Respirmetro BMBM-T

La respirometra es una tcnica que mide el consumo de oxgeno de las bacterias contenidas en un fango activo por si mismas (endgena) o en su fase de degradacin de un sustrato orgnico (exgena). Este consumo de oxgeno se mide principalmente bajo dos variantes: - Velocidad de consumo de oxgeno (tasa de respiracin) - Oxgeno total o parcial consumido en la degradacin de un sustrato. La tecnologa BM-T combina la respirometra tradicional con una tcnica diseada por Surcis, la cual permite la medida y clculo de parmetros de control y proceso de depuracin por fangos activos, si bien no permite calcular todos los parmetros necesarios para llevar a cabo el diseo de un reactor biolgico.

Figura 1414- Respirmetro BMBM-T

El analizador BM-T (Figura 14) consta de un vaso reactor en el que se introduce fango del reactor biolgico a estudio, para llevar a cabo los ensayos respiromtricos del proceso de depuracin. Se trata de un sistema batch provisto de recirculacin, en donde existen tres modos de ensayo (Esttico OUR, Cclico OUR y Dinmico R). La bomba de recirculacin est provista de tres velocidades y una posicin de paro. En el modo esttico y cclico OUR, la recirculacin no ejerce influencia en la medida final (batch). En el modo dinmico R la recirculacin funciona ininterrumpidamente y por ello el sistema de medida debe calibrarse (batch modificado).

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Materiales y Mtodos

Figura 1515- Esquema respirmetro

En el recinto superior del vaso reactor (Figura 16) se sita el difusor de aire proporcionando el nivel de oxgeno adecuado que se transfiere al recinto de medida. Por medio de una placa divisoria, el recinto de medida est protegido de la influencia de posibles burbujas que pudieran producir interferencias en el cabezal del sensor, as como de la aspiracin de aire desde la atmsfera por el efecto centrfugo del sistema de agitacin. En este recinto, el sensor de oxgeno realiza las medidas instantneas de oxgeno disuelto resultante de la respiracin de los microorganismos a lo largo de los ciclos de medida de cada uno de los modos de ensayo. El vaso reactor adems est dotado de una cmara de termostatizacin que a modo de camisa rodea sus recintos. Por esta cmara circula agua termostatizada procedente de la unidad termosttica (Figura 15). El sistema de aireacin est dotado de un regulador en porcentaje que permite programar un nivel de oxgeno acorde con el objetivo de la aplicacin de respirometra. Hay que tener en cuenta, sin embargo, que el modo dinmico R debe calibrarse para cada nivel de caudal de oxgeno.

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Materiales y Mtodos

Figura 1616- Elementos vaso reactor del respirmetro

El oxmetro manda las seales de las medidas de oxgeno en curso al ordenador en donde, por medio de un programa especfico se procesan para llevar a cabo la generacin automtica de respirogramas y el clculo de tasas de respiracin, consumo de oxgeno y fraccin biodegradable de la DQO. As mismo, por medio del programa se auto-generan archivos exportables con sus correspondientes respirogramas.

3.8.23.8.2-

Modos de ensayo del respirmetro BMBM-T

Como ya se ha mencionado el BM-T est dotado de tres modos distintos de ensayo: - Modo OUR Esttico - Modo OUR Cclico - Modo R Dinmico El modo utilizado para llevar a cabo los ensayos de este estudio fue el modo R dinmico que se explica a continuacin.

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Materiales y Mtodos

Modo R Dinmico En lneas generales, el sistema de medida puede considerarse como un sistema batch con reactor de mezcla completa en donde la aireacin y recirculacin se mantienen activas durante todo el ensayo. De este modo, en el recinto inferior se crea un oxgeno resultante de las caractersticas del conjunto global que el sensor de oxgeno est midiendo de forma continuada. Para el ensayo R se necesita fango activo sin carga orgnica ni amnica (a ser posible fango en fase endgena) y una cantidad determinada de muestra. El ciclo del ensayo R transcurre en dos etapas: 1- En la primera etapa se utiliza solamente fango activo libre de carga. En esta etapa se fija y almacena en la memoria el oxgeno de referencia o lnea base cb. 2- Una vez determinada la lnea base cb, el programa nos da la orden para que se aada la muestra a analizar. De este modo el fluido que en un principio era solo fango ahora pasa a estar constituido por fango ms muestra (F + M). Tan pronto empieza a reaccionar la muestra aadida con el fango activo el oxgeno inicial empezar a descender cs como seal de que se est llevando a cabo una oxidacin biolgica (salvo que no exista materia biodegradable) y automticamente empezar a generarse un respirograma con los valores de la tasa de respiracin por oxidacin del sustrato (Rs: respiracin exgena). As mismo, automticamente se calcula el oxgeno consumido (OC) a lo largo del tiempo y la fraccin biodegradable de la DQO (en caso de que est calibrado para ello). La ventaja que adquiere el modo R dinmico es que, una vez calibrado, los ensayos pueden llevarse de forma muy rpida con la utilizacin de pequeas cantidades de muestra. Para ello, el programa est dotado de un algoritmo de correccin y extrapolacin.

3.8.33.8.3-

Parmetros respiromtricos determinados

Los ensayos respiromtricos mediante el modo dinmico R nos van a permitir obtener los parmetros tanto de la biomasa auttrofa, como hetertrofa que se muestran en la Tabla 12. Los ensayos R en modo dinmico se van a realizar para obtener dos parmetros principales tanto en biomasa auttrofa, como en biomasa hetertrofa. En primer lugar la obtencin del rendimiento (Y).

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Materiales y Mtodos

Para determinar el rendimiento (Y) se realizan ensayos con un litro de licor mezcla endgeno al que se aaden diferentes concentraciones de sustrato, cloruro de amonio en el caso de la biomasa auttrofa y acetato de sodio en el caso de la biomasa hetertrofa, ya que es el sustrato que estn recibiendo en el agua residual influente. En el ensayo se mide el oxgeno consumido (OC) para degradar las concentraciones de sustrato aportadas (DQODEG) y mediante la frmula del rendimiento obtenemos el valor de dicho parmetro. Y = 1 (OC/ DQODEG) En segundo lugar, se va a obtener la tasa mxima de respiracin tanto de biomasa auttrofa como hetertrofa. En este ensayo dinmico se introduce tambin un litro de licor mezcla endgeno y en esta ocasin, se introduce una concentracin de sustrato suficiente para conseguir que en ningn momento del ensayo sea el sustrato el factor limitante para conseguir la tasa mxima, el sustrato a aadir es cloruro de amonio en el caso de las biomasa auttrofa y acetato de sodio en el caso de la biomasa hetertrofa, ya que es el sustrato que estn recibiendo en el agua residual influente. De esta forma se obtiene la tasa mxima de respiracin de cada uno de los tipos de biomasa, que queda determinada por el punto ms alto de consumo de oxgeno por parte de la biomasa en el respirograma.
Tabla 1212- Parmetros de la biomasa auttrofa y hetertrofa obtenidos mediante respirometra AUTTROFAS Tasa mxima de respiracin de nitrificantes Tasa mxima de respiracin de nitrificantes por SSV Tasa mxima de consumo de amonio Tasa global especfica de consumo de amonio Fraccin de nitrificantes Concentracin de la biomasa auttrofa Rendimiento de la biomasa auttrofa Tasa mxima especfica de nitrificacin Tasa mxima de crecimiento de la biomasa auttrofa Tasa especfica de crecimiento de la biomasa auttrofa Tiempo de retencin mnimo para la nitrificacin HETERTROFAS Tasa mxima de respiracin de hetertrofas Tasa mxima de respiracin de hetertrofas Concentracin de la biomasa hetertrofa Rsmx het Rspmx het XH mg O2/lh mg O2/g SSV h mg DQO/mg DQO Rsmx auto Rspmx auto RN AUR FN XA YA qN a,max a TRCnitrificacin mg SSVXA /l mg DQO/mg DQO mg NH4/g SSV d d-1 d-1 d-1 mg O2/lh mg O2/g SSVh mg NH4/lh mg NH4/g SSVh

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Materiales y Mtodos

El resto de parmetros se obtienen a partir de estos parmetros mediante frmulas bibliogrficas (Tabla 13), salvo la fraccin de nitrificantes (FN) que se obtiene gracias a la cuantificacin realizada de la biomasa nitrificante mediante la tcnica FISH.
Tabla 1313- Frmulas y fuentes bibliogrficas de la biomasa auttrofa

AUTTROFAS Respirometra Rspmx auto = Rsmx auto/ SSV RN = Rsmx auto/ 4,57 AUR = RN/ SSV FISH XA = FN * SSV Respirometra qN = (RN * 24 )/ XA a,max = YA * qN a = a,max . [SN /(KN + SN)].[DO / (KDO + DO)] TRCnitrificacin = 1/ a Rsmx auto Rspmx auto RN AUR FN XA YA qN a,max a TRCnitrificacin mg SSVXA/l mg DQO/mg DQO mg NH4/g SSV d d-1 d-1 d-1 mg O2/lh mg O2/g SSV h mg NH4/lh mg NH4/g SSVh

Fuente bibliogrfica x x Henze et al. - 2000 Surcis x W.W. Eckenfelder, J.L. Musterman. 1995 x Adrianus van Haandel et Jeroen van der Lubbe. 2007 Adrianus van Haandel et Jeroen van der Lubbe. 2007 EPA office. 2000 EPA office. 2000

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Materiales y Mtodos

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4- RESULTADOS RESULTADOS

Resultados

59

Resultados

4- RESULTADOS
4.14.1- Resultados analticos y de operacin
La operacin de la planta piloto se llev a cabo desde el 12 de Junio de 2011 hasta el 30 de Septiembre de 2011. Las analticas ms repetidas a lo largo del estudio fueron las correspondientes a la concentracin de amonio, nitrato y nitrito en el efluente de la planta piloto, parmetros importantes para el control de la eliminacin de nitrgeno. En la figura 17 se muestran los valores analticos obtenidos de amonio, nitrato y nitrito a lo largo de la experimentacin. Como se puede observar en la figura, la grfica aparece dividida en dos partes bien diferenciadas por una lnea vertical. El tiempo previo a esta lnea se corresponde con la puesta en marcha y adecuacin de la planta piloto. Durante este tiempo la planta fue operada con aireacin continua por lo que el efluente mostr amonio en concentraciones prximas a cero, y nitratos con una alta concentracin. A partir de este estado hay una adaptacin progresiva a la aireacin intermitente hasta los valores fijados, 15 minutos de aireacin y 75 de paro, que qued implementada a partir del da 7 de Julio de 2011. Los valores de amonio y nitrato obtenidos analticamente en el efluente una vez establecidos los ciclos de marcha paro definitivos oscilan entre 4-6 mg/l. Al final de un ciclo de aireacin (en el cual tiene lugar la nitrificacin), el amonio tiene baja concentracin mientras que el nitrato presenta una concentracin alta en el rango de valores mencionado. Lo contrario ocurre justo tras finalizar un ciclo de parada (antes del comienzo del siguiente ciclo de aireacin): la concentracin de amonio en el reactor se incrementa y la concentracin de nitrato disminuye debido al proceso de desnitrificacin que ha tenido lugar durante la etapa de anoxia. Las concentraciones reflejadas en la figura 17 se corresponden con muestras integradas durante un da, por lo que las fluctuaciones mencionadas de concentracin de amonio y nitrato debidas a los ciclos de aireacin intermitente se ven amortiguadas. As las muestras integradas presentan valores de amonio, nitrato y nitrito ms o menos constantes como refleja la figura 17. Tambin cabe destacar que durante todo el estudio el nitrito mantuvo en valores inferiores a 1 mg N-NO2/l, por lo que se deduce que casi todo el nitrito era nitrificado a nitrato por las bacterias nitritoxidantes.

60

Resultados

NH4 sal

Valores de Amonio, Nitrato y Nitrito Efluente

35.00 30.00 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00 14/06/2011 04/07/2011 24/07/2011 13/08/2011 02/09/2011 22/09/2011

NO3sal NO2 sal

Concentracin (mg/l)

Fecha (dd/mm/aaaa) Figura 1717- Grfica de determinaciones de amonio, nitrato y nitrito durante el periodo de estudio

La demanda qumica de oxgeno (DQO), nitrgeno total (NT) y fsforo total (PT) se encuentran regulados por legislacin (Directiva 91/271/CEE), la cual fija unos requisitos de vertido para estos parmetros que se han de cumplir en el efluente de una EDAR. DQO: El lmite admisible en DQO se fija en 125 mg/l o un 70% de eliminacin. Los valores del efluente de la planta piloto presentan concentraciones muy por debajo del lmite admisible (Tabla 14) y presentan porcentajes de eliminacin de DQO superiores al 90% (Figura 18). Los valores demuestran la existencia de una poblacin de bacterias hetertrofas bien desarrollada capaz de eliminar la materia orgnica. Nitrgeno Total: El nitrgeno total es el parmetro ms importante a tener en cuenta en este estudio ya que el objetivo de este estudio es conseguir la eliminacin biolgica de nitrgeno mediante aireacin intermitente. El lmite admisible por la legislacin es de 15 mg/l o un porcentaje de eliminacin de 70-80%. As pues, pese a las condiciones lmite de trabajo debidas al bajo TRC aerobio y a la relativamente baja consigna de oxgeno (1ppm) la concentracin de nitrgeno total a la salida se encuentra en torno a los 10 mg/l (Tabla 14), lo que nos indica que se est cumpliendo con el objetivo de eliminar nitrgeno ligado a un consumo energtico mnimo. 61

Resultados

%elim DQO

% de Eliminacin DQO, NT y PT
100 90 80 70

%elim NT %elim PT

% Eliminacin

60 50 40 30 20 10 0 28/08/2011 04/09/2011 11/09/2011 18/09/2011 25/09/2011

Fecha (dd/mm/aaaa)
Figura 1818- Porcentaje de eliminacin de DQO, NT y PT de la planta piloto

Fsforo total: En un principio la planta piloto haba sido diseada para la eliminacin biolgica de materia orgnica y nitrgeno, por lo que la determinacin de fsforo se realiz para comprobar que ste, no era un factor limitante en el proceso. Al analizar los resultados del fsforo total y de fosfato, aparece una eliminacin de fsforo superior a la esperada, ya que los rendimientos de eliminacin se sitan en torno al 40 % (Figura 18). Estos resultados hacen sospechar que no slo est actuando la toma de nutrientes por parte de las bacterias hetertrofas y auttrofas para su metabolismo sino que puede existir una poblacin de organismos acumuladores de poli-fosfatos (PAO). La proliferacin de bacterias PAO en la planta piloto es posible por la alternancia de condiciones aerobias y anaerobias que favorecen la eliminacin de fsforo. La presencia de estos organismos acumuladores de poli-fosfatos se confirm a travs de la observacin microscpica mediante tinciones (como se explicar posteriormente en el apartado 4.3.2).

62

Resultados

Nitrificacin

Desnitrificacin

Figura 1919- Evolucin del pH y la concentracin de oxgeno en varios ciclos de operacin de la planta piloto.

Uno de los resultados interesantes obtenidos es la relacin acin de los ciclos de marcha y paro de la oxigenacin con el pH. La a nitrificacin consume alcalinidad, lo que podemos observar a travs de la cada del pH en los momentos en los que la aireacin air se encuentra funcionando. Tras estos periodos, s, cuando ya no se airea y el oxgeno se ha consumido, el licor mezcla se encuentra en anoxia, anoxia, teniendo lugar el proceso de desnitrificacin, recuperando la alcalinidad perdida perdida y mostrando una subida de pH. (Figura 19) Trabajando con TRC de 18 das, los slidos suspendidos voltiles (SSV) se han mantenido alrededor de 1000 mg/l (Figura 20). El porcentaje de volatilidad se encuentra en valores de 73-78 73 78 % si bien el licor mezcla se esperaba que tuviera una volatilidad mayor al recibir un influente sinttico sinttico con menor cantidad de slidos no voltiles. Sin embargo, se ha mantenido siempre alrededor de los valores mencionados lo cual podra ser debido a: la formacin de sales inorgnicas y precipitados, a la existencia de polifosfatos almacenados intracelularmente intracelularmente por las bacterias PAO y en menor medida por la posible mineralizacin del fango causada por el elevado tiempo de retencin celular.

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Resultados

Slidos Suspendidos Voltiles

1400

SS

%V
80

75

SS (mg/l)

1200 70

1000 65

800 31/07/2011 10/08/2011 20/08/2011 30/08/2011 09/09/2011 19/09/2011

60 29/09/2011 Fecha

Figura 2020- Evolucin de los slidos suspendidos voltiles del reactor biolgico

Los parmetros fsico-qumicos determinados durante el tiempo de experimentacin nos dan informacin del estado real de la planta piloto, de su rendimiento de eliminacin y de su evolucin a lo largo del tiempo. En la Tabla 14 quedan recogidos los resultados analticos de las caracterizaciones completas realizadas en la planta piloto. Del resto de parmetros determinados no mencionados anteriormente cabe destacar la baja turbidez del efluente marcada por la ausencia de flculos en suspensin y una buena calidad del clarificado, as como valores de pH superiores a 7,5.
Tabla 1414- Tabla resumen resumen caracterizaciones fsicofsico-qumicas de la planta piloto 30/08/11 pH Conductividad (S/cm) Turbidez (NTU) DQOENT (mg DQO/l) DQO/l) DQOSAL (mg DQO/l) DQO/l) %elim DQO NTENT (mg N/l) NTSAL (mg N/l) %elim NT NH
4+SAL

09/09/11 7.74 1160 1.21 225 12.00 94.67 37.50 11.30 69.87 5,58 4,30 0,624 7.50 4.41 41.20 4,22

16/09/11 7.92 1160 1.90 225 14.10 93.73 37.50 11.00 70.67 4,98 3,66 0,664 7.50 4.15 44.67 3,83

23/09/11 7.66 1170 2.13 225 16.80 92.53 37.50 10.13 72.99 4.43 4.23 0.272 7.50 4.68 37.60 4.35

27/09/11 7.71 1160 2.16 225 11.60 94.84 37.50 10.40 72.27 4,52 4,26 0,584 7.50 4.67 37.73 4,57

7,73 1190 1,56 225 12.40 94.49 37.50 14.00 62.67

4+

(mg NN-NH /l)

3,90 8,10 0,648 7.50 4.90 34.67

NO3-SAL (mg N-NO3-/l) NO2-SAL (mg N-NO2-/l) PTENT (mg P/l) PTSAL (mg P/l) %elim PT PO
34 SAL

(mg P-PO /l)

34

4,65

64

%Voltil

Resultados

4.24.2- Resultados de la identificacin y cuantificacin de bacterias nitrificantes mediante la tcnica FISH.

Los resultados con la sonda EUBmix 338 han resultado positivos al hibridar un porcentaje muy alto de las clulas del flculo y filamentosas (Figura 21B, 22B, 24B y 25B). Esto indic que el rea teida con la sonda EUBmix 338 perteneciente al dominio Eubacteria representa un porcentaje muy alto sobre el total de bacterias presentes en la muestra.

4.2.14.2.1-

Bacterias amonioxidantes (AOB)

Con la tcnica de hibridacin in situ con sondas marcadas con fluorocromos (FISH) se han identificado comunidades bacterianas oxidantes de amonio a nitrito (amonioxidantes) muy desarrolladas, con las tpicas formaciones de agregados celulares densos con forma esfrica (Figura 21A y 22A). Sonda Nso1225: Amonioxidantes de la clase -proteobacteria (Nitrosomonas)

En las figuras 21A y 22A se visualiz la hibridacin de bacterias amonioxidantes de la clase -proteobacteria del gnero Nitrosomonas (color rojo) mediante la sonda de hibridacin Nso1225, mientras que las figuras 21B y 22B muestran una imagen del mismo campo en la que se utiliz la sonda EUBmix 338 para detectar bacterias pertenecientes al dominio Eubacteria (color verde).

Figura 2121- Fotos con las sondas Nso1225 amonioxidantes de la clase -proteobacteria 600x (Figura 21A) y EUBmix 338 (Figura 21B) 21B)

65

Resultados

Figura 2222- Fotos con las sondas Nso1225 amonioxidantes de la clase -proteobacteria 600x (Figura 22A) y EUBmix 338 (Figura 22B) 22B)

Los resultados del anlisis de imagen con las sondas Nso1225 (color rojo) y EUBmix 338 (color verde) muestran un porcentaje de hibridacin de 4%0.6 de bacterias amonioxidantes de la clase -proteobacteria (Figura 23).
10 9 8 7 6 % HYB 5 4 3 2 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Campo
% HYB Media

Figura 2323- Porcentaje Hibridacin AOB

66

Resultados

4.2.24.2.2-

Bacterias nitritoxidan nitritoxidantes xidantes (NOB)

Con la tcnica de Hibridacin in situ con sondas marcadas con fluorocromos (FISH) se han identificado comunidades bacterianas oxidantes de nitrito a nitrato (nitritoxidantes) del gnero Nitrospira, con las tpicas formaciones de agregados celulares densos con forma esfrica (Figuras 24A y 25A, color rojo). No se han detectado agregados celulares del gnero Nitrobacter. - Sonda Ntspa662 + competidora: Gnero Nitrospira (Sublinaje 1-IV) - Sonda NIT3 + competidora: Nitrobacter sp. En las figuras 24A y 25A se visualiz la hibridacin de bacterias nitritoxidantes del gnero Nitrospira (color rojo) mediante la sonda de hibridacin Ntspa662, mientras que en las figuras 24B y 24B muestran una imagen del mismo campo en la que se utiliz la sonda EUBmix 338 para detectar bacterias pertenecientes al dominio Eubacteria (color verde).

Figura 2424- Fotos con la sonda Ntspa662, nitritoxidantes flecha blanca 600x (Figura 24A) y Eubacterias flecha blanca 600x (Figura 24B) 24B) sondas EUBmix 338, 338, 600x

Figura 2525- Fotos con la sonda Ntspa662, nitritoxidantes flecha blanca 600x (Figura 25A) y Eubacterias flecha blanca 600x (Figura 25B) sondas EUBmix 338, 338, 600x

67

Resultados

Los resultados del anlisis de imagen con las sondas Ntspa662 (color rojo) y EUBmix 338 (color verde) muestran un porcentaje de hibridacin de 3%1,0 de bacterias nitritoxidantes del phylum Nitrospira.
14
% HYB

12 10 % HYB 8 6 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Media

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Campo

Figura 2626- Porcentaje Hibridacin NOB

Teniendo en cuenta los resultados obtenidos de los porcentajes de hibridacin, se puede afirmar que existe una comunidad bacteriana de amonioxidantes (AOB) bien desarrollada con un porcentaje 4%0.6 respecto del total de la comunidad de bacterias viables del fango activo. Se ha detectado la presencia de una comunidad bacteriana de nitritoxidantes del gnero Nitrospira, con un porcentaje del 3%0,7, respecto del total de la comunidad de bacterias viables del fango activo.

68

Resultados

4.34.3- Visualizacin al microscopio ptico

4.3.14.3.1Bioindicacin del fango activo.

En base a los parmetros fsico-qumicos obtenidos y la observacin de la decantabilidad del fango en el reactor biolgico, se observa una situacin de buena depuracin, con un buen clarificado presentando una turbidez baja y ausencia de flculos en suspensin. La observacin tiene lugar con el microscopio ptico de contraste de fases con el objetivo 10x, el cual es el normalmente utilizado para las observaciones del flculo. Se presentan los macroflculos de un tamao medio, con una buena macroestructura del mismo y con un buen equilibrio entre bacterias formadoras de flculo y bacterias filamentosas (Figura 27).

Figura 2727- Foto del flculo de una muestra tomada el 09/09/11 de la planta piloto. piloto. Objetivo 10x

En cuanto a la microscopa del flculo presenta formas irregulares, tamao grande (> 500 m) la mayor parte de ellos. Se trata de un fango maduro multinucleado, que presenta ncleos con pequeas zonas anaerobias, el resto del flculo aparece como grandes zonas aerobias, por lo que se observa que la oxigenacin es buena, no hay deficiencia de oxgeno. Buenos ejemplos de la microscopa del flculo son las Figuras 27 y 29, que cumplen estas caractersticas. En el espacio interflocular se observa tambin un crecimiento de bacterias dispersas de pequeo tamao y morfologa cocobacilar.

69

Resultados

En cuanto a la microbiota, en el examen microscpico se observan arcelas, indicadoras de una buena nitrificacin. Rotaria sp, bioindicadoras de una buena aireacin y una buena calidad del efluente. La Figura 28 muestra un rotfero del gnero Rotaria, este organismo se alimenta a base de detritus y los parmetros bioindicadores asociados son una elevada edad del fango y una buena calidad del agua tratada.

Figura 2828- Foto de Rotaria sp. de una muestra tomada el 30/08/11 de la planta piloto. Objetivo 10x

En el examen microscpico se observa una poblacin de bacterias filamentosas entre los que cabe destacar tipo 1851, tipo 1853, tipo 021N y Nostocoida. La Figura 29 muestra un flculo maduro, multinucleado, con la presencia de filamentos del tipo 1851 y en el que podemos observar la estabilidad en cuanto a tamao y caractersticas del flculo a lo largo de la experimentacin.

Figura Figura 2929- Foto del flculo de una muestra tomada el 27/09/11 de la planta piloto. Objetivo 10x

70

Resultados

Adems se observan abundantes bacterias cocobacilares de tamao medio candidatas al phyllum -proteobacteria. En base a las visualizaciones realizadas con el microscopio ptico de contraste de fases se puede afirmar que el licor mezcla muestra una buena calidad con un fango maduro, con la presencia de una buena macroestructura a nivel de flculo que le confiere una buena sedimentabilidad dando lugar a un clarificado con una turbidez baja y presentando, por tanto, sntomas de una buena depuracin. Adems, no existe una proliferacin excesiva de ningn morfotipo de bacterias filamentosas, lo que se traduce en una inexistencia de problemas asociados a estas como bulking o foaming. Adems se presenta en la microbiota organismos asociados a una buena nitrificacin (arcelas). Tambin la presencia de otro tipo de microfauna (Rotaria sp.) son indicativos de un fango maduro y con buenas condiciones de aireacin.

4.3.24.3.2-

Tincin de polipoli-fosfatos (Azul de metileno)

Analizando los resultados analticos correspondientes al fsforo (Tabla 14), se evidenci un porcentaje de eliminacin del mismo superior al correspondiente por la toma por parte de las bacterias para llevar a cabo su crecimiento, lo que hizo sospechar de la presencia de organismos acumuladores de poli-fosfatos (PAO). Para detectar la presencia de estos organismos se llev a cabo la tincin de polifosfatos (Azul de metileno). Esta tincin es la ms especfica para la identificacin de grnulos de poli-fosfatos. La tincin nicamente utiliza un colorante (Azul de metileno), por lo que no existe un contraste de coloracin muy definido en cuanto a resultados positivos (color violeta) y negativos (color azul). A pesar de ello, produce un buen resultado de la tincin de poli-fosfatos, y permite su observacin de forma sencilla y rpida. La figura 30 muestra flculos de bacterias que han resultado positivos a la tincin de Azul de Metileno. Dada la forma de agruparse de las bacterias, el tamao y forma de las mismas, adems de su respuesta ante la tincin, se trata de una agrupacin de bacterias con fenotipo PAO.

71

Resultados

Figura 3030- Fotos tincin polipoli-fosfatos objetivo 100x

4.3.34.3.3-

Tincin de polihidroxibutiratos, PHB (Sudan Black)

La tincin de polihidroxibutiratos (PHB) nos sirvi para confirmar los resultados de la presencia de PAO en el licor mezcla de la planta piloto que da como resultado la eliminacin biolgica de fsforo en los valores ya sealados en la Figura 17. Los colorantes del grupo Sudan se utilizan para la tincin de lpidos. Este colorante es ms soluble en los lpidos que en la solucin colorante, por eso se introduce en los lpidos. En particular, Sudan Black se utiliza para detectar la presencia de PHB, aunque hay que tener en cuenta que tie todos los lpidos presentes en la muestra y no slo el PHB. La Figura 31 muestra flculos de bacterias con inclusiones de PHB, identificado por el color negro tras la tincin con Sudan Black. La muestra fue obtenida de la fase anxica/anaerobia de ah la abundancia de inclusiones de PHB.

Figura 3131- Foto tincin Sudan Black objetivo 100x

72

Resultados

4.4Determinacin cin de parmetros cinticos mediante tcnicas 4.4- Determina respiromtricas

4.4.14.4.1Ensayos respiromtricos biomasa auttrofa.

4.4.1.14.4.1.1- Determinacin de YA Para determinacin de la YA realizamos tres ensayos respiromtricos dinmicos con diferentes concentraciones de cloruro de amonio para contrastar que el resultado obtenido es adecuado en un amplio rango de concentraciones. As los resultados grficos obtenidos se muestran en la Figura 32.

YA
40 35 Rsp (mg O/gSSVh) 30 25 20 15 10 5 0 0:00:00 0:07:12 0:14:24 Tiempo (min) Figura 3232- Grfica obtencin de YA mediante respirometra 0:21:36 YA C1 YA C2 YA C3

En este caso YAC1, YAC2, YAC3 se corresponden con tres concentraciones diferentes de cloruro de amonio. Dichos ensayos dan lugar a los siguientes resultados:
Tabla 1515- Valores para el clculo del rendimiento biomasa auttrofa NH4+
(mg N-NH4+/l)

YA C1 YA C2 YA C3

22 33 44

OC (mg O2/l) 89,41 135,67 176,13

YA
(mg DQO/mg N)

YA
(mg DQO/mgDQO)

0,024 0,021 0,026

0,11 0,10 0,12

73

Resultados

Para obtener los valores de YA (Rendimiento de las auttrofas) utilizamos la siguiente frmula: YA = 1
,

Finalmente agrupamos estos valores en una grfica a la que agregamos la lnea de tendencia, con el valor de R cuadrado (Figura 33). Obteniendo el valor del rendimiento global de las auttrofas como: YA = 1 pendiente = 1- 0,8625 = 0,1375 mg DQO/mg DQO Las unidades de YA se transforman a unidades habituales (mg DQO/ mg N-NH4+). YA = 0,1357

4,57

0,63 mg DQOmg N

AUTTROFAS YA Pendiente
200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 0 50 100

y = 0.862x + 3.666 R = 0.998

OC (mg O/l)

150 NH4+ (mg DQO/l)

200

250

Figura 3333- Obtencin de la pendiente de YA

El valor de la YA se encuentra por encima de los valores esperados, ya que el rango de valores tpicos obtenidos en otras investigaciones son superiores al obtenido, as el ASM2d propone valores para la YA de 0,24 mg DQO/mg N a 20C, muy por debajo del valor obtenido. Este resultado es debido al posible consumo de amonio por parte de la biomasa tanto auttrofa como hetertrofa para llevar a cabo el crecimiento, sin que este amonio sea nitrificado y por tanto, el consumo de oxgeno no sea de 4,57 mg O2, sino de 1mg O2 dando lugar a un consumo de oxgeno durante el ensayo menor al resultado descrito.

74

Resultados

4.4.1.24.4.1.2- Determinacin de la tasa mxima de respiracin de las auttrofas (Rsmx auto) y tasa mxima de respiracin por slido suspendido voltil (Rspmx auto) Para determinar la tasa mxima de respiracin se realiza un ensayo respiromtrico dinmico en el que se aade una solucin de cloruro de amonio concentrada para conseguir que este sustrato no sea el factor limitante en el ensayo. Los resultados grficos obtenidos son los siguientes (Figura 34):

Rsmx autotrfas
40 35 30 Rs (mg O2/lh) 25 20 15 10 5 0 0:00:00 0:07:12 0:14:24 Tiempo (hh:mm:ss)

Rsmx autotrfas

0:21:36

Figura 3434- Grfica de obtencin de la Rsmx de las bacterias auttrofas

Tasa mxima de respiracin de nitrificantes (Rsmx auto) = 35,705 mg O2/lh Tasa mxima de respiracin de nitrificantes por SSV (Rspmx auto): Rspmx auto =

, / , /

= 28,225 mg Og SSV h

Las tasas mximas de respiracin nos dan informacin acerca de la presencia de actividad nitrificante, la cual como vemos existe.

4.4.1.34.4.1.3- Determinacin de la tasa mxima de consumo de amonio (RN). La tasa mxima de consumo de amonio (RN) es la mxima velocidad con la que la biomasa nitrificante es capaz de llevar a cabo la eliminacin de amonio en funcin del volumen y el tiempo, para ello es necesario que en la tasa de respiracin mxima el amonio no sea el factor limitante para tener la mxima actividad.

75

Resultados

RN =

, / ,

= 7,813 mg N NH4lh

La cantidad de oxgeno que se consume para pasar de 1 mg de amonio a 1 mg de nitrato es de 4,57 mg O/mg N-NH4. El rango de valores tpicos oscila entre 1,5-6 mg N-NH4/lh (Manual aplicaciones V23, Surcis 2010), por tanto la tasa de consumo de amonio mxima es muy alta, por encima de los rangos habituales, esto puede ser debido a la relacin DBO5/NKT, ya que la proporcin de nitrgeno es ms alta de lo habitual en plantas de tratamiento.

4.4.1.44.4.1.4- Determinacin de la tasa especfica global de consumo de amonio (AUR). La tasa especfica global de consumo de amonio (AUR) es la velocidad a la cual se consume el amonio por unidad de biomasa, teniendo en cuenta para ello los slidos suspendidos voltiles, es decir, nos informa acerca de la cantidad de amonio consumida por gramo de SSV. AUR =

, ,

= 6,176 mg N NH4g SSV h

El rango de valores tpicos oscila entre 2-8 mg N-NH4/g SSV h (Manual aplicaciones V23, Surcis 2010), por lo que la tasa global especfica de consumo de amonio se encuentra entre los valores habituales, teniendo dentro de estos un valor elevado, lo que muestra una buena tasa de consumo de amonio por parte de la biomasa auttrofa que nos va a permitir llevar a cabo una buena nitrificacin. Esto puede ser debido a la baja relacin existente DBO/N. 4.4.1.54.4.1.5- Determinacin de la biomasa auttrofa (XA) La determinacin de la biomasa auttrofa se lleva a cabo gracias a la cuantificacin de bacterias nitrificantes (FN) llevada a cabo mediante la tcnica FISH, y al conocimiento de los SSV de la muestra. XA = FN SSV = 0,07 * 1265 mg SSV 88,55 mg SSV

Este resultado muestra la cantidad de biomasa auttrofa por litro. Esta biomasa va a ser la encargada de realizar el consumo de amonio, es decir, llevar a cabo la nitrificacin. Adems, los resultados obtenidos con la tcnica FISH confirmaron que se trata de una poblacin bien desarrollada. 76

Resultados

4.4.1.64.4.1.6- Determinacin de la tasa especfica de nitrificacin mxima (qN) La tasa especfica de nitrificacin mxima muestra la cantidad de amonio que la biomasa auttrofa con la que contamos va a ser capaz de consumir mediante la nitrificacin durante un da. qN =

= 2,1176 4

4.4.1.74.4.1.7- Determinacin de la tasa mxima de crecimiento de la biomasa auttrofa ( (a,max) La tasa de crecimiento mximo de la biomasa auttrofa muestra la tasa de crecimiento que las bacterias nitrificantes tendran en caso de tener las condiciones ptimas de crecimiento, sin ningn factor limitante.
mg DQO mg N NH4 4,57 mg DQO , YA q 0,1357 mg DQO 2,1176 1 mg N NH4 mg SSV d 1mg SSV 1,42 mg DQO 0,937 d

El valor obtenido para la a,max se encuentra en los valores tpicos recogidos en la bibliografa as este valor oscila entre 0,35 y 1 d-1(ASM2d), aunque cabe recordar que este valor es para una temperatura de 20C, mientras que el reactor de la planta piloto se encuentra a 25C, temperatura a la que se realizan los experimentos. 4.4.1.84.4.1.8- Determinacin de la tasa de crecimiento especfico de la biomasa auttrofa ( ( a ) La tasa de crecimiento especfica de la biomasa auttrofa muestra la tasa de crecimiento real de las bacterias nitrificantes que se ve afectada por condiciones limitantes como la concentracin de oxgeno disuelto.
DO 1 mg O/l 0,937 d 0,624 d K DO 0,5 1 mg O/l

DO: Concentracin de oxgeno disuelto KDO: Coeficiente de semisaturacin de oxgeno = 0,5 mg O/l a 20C (ASM2d) El valor como vemos se reduce prcticamente a la mitad de la mxima, ello es debido a que la consigna de oxgeno, con la que se trabaja es el factor limitante en este caso.

77

Resultados

4.4.1.94.4.1.9- Determinacin del tiempo de retencin mnimo para la nitrificacin (TRCnitrificacin) Es el tiempo de retencin celular mnimo que va a necesitar la biomasa auttrofa para llevar a cabo la nitrificacin. TRCnitrificacin = 1/ a = 1 / 0,624 d-1 = 1,60 d El tiempo de retencin celular aerobio que se tiene en la planta piloto es de 3 das, por lo que es tiempo suficiente para que se lleve a cabo la nitrificacin como se corrobora con los resultados analticos.

4.4.24.4.2-

Ensayos respiromtricos biomasa hetertrofa.

4.4.2.14.4.2.1- Determinacin de YH Para la determinacin de la YH se realizan tres ensayos respiromtricos dinmicos con diferentes concentraciones de acetato de sodio para contrastar que el resultado obtenido es adecuado en un amplio rango de concentraciones. Los resultados grficos obtenidos se muestran en la Figura 35.

YH
30 25 Rsp (mg O/gSSVh) 20 15 10 5 0 0:00:00 0:03:45 0:07:29 0:11:14 0:14:59 0:18:43 0:22:28

YH C1 YH C2 YH C3

Tiempo (min) Figura 3535- Grfica de obtencin de YH mediante respirometra

78

Resultados

En este caso YHC1, YHC2, YHC3 se corresponden con tres concentraciones diferentes de acetato de sodio. Dichos ensayos dan lugar a los siguientes resultados:
Tabla 1616- Valores para el clculo del rendimiento biomasa hetertrofa DQO (mg/l) 108 162 216 OC (mg/l) 41,7 63,23 83,35 YH
(mg DQO/mgDQO)

YH C1 YH C2 YH C3

0,61 0,61 0,61

Para obtener los valores de YH (Rendimiento de las hetertrofas) utilizamos la siguiente frmula: YH = 1 (OC/ DQODEG) Finalmente agrupamos estos valores en una grfica a la que agregamos la lnea de tendencia, con el valor de R cuadrado (Figura 36). Obteniendo el valor del rendimiento global de las hetertrofas como: YH = 1 pendiente = 1- 0,3857 = 0,614 mg DQO/mg DQO
HETERTROFAS YH Pendiente y = 0.385x + 0.280 R = 0.999 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 50 100 150 200 250 DQO (mg/l)

OC (mg O/l)

Figura 3636- Obtencin de la pendiente YH

Este valor de YH se encuentra dentro del rango de valores tpicos de rendimiento de la biomasa hetertrofa. Segn bibliografa este parmetro oscila en torno a los 0,625 mg DQO/mg DQO a 20C (ASM2d).

79

Resultados

4.4.2.14.4.2.1- Determinacin de la tasa mxima de respiracin de las hetertrofas (Rsmx hetero) y tasa mxima de respiracin por slido slido suspendido voltil (Rspmx hetero) Para determinar la tasa mxima de respiracin se realiza un ensayo respiromtrico dinmico en el que se aade una solucin de acetato de sodio concentrada para conseguir que este sustrato no sea el factor limitante en el ensayo. Los resultados grficos obtenidos son los siguientes (Figura 37):

Rsmx hetertrofas
50 45 40 35 Rs (mg O2/lh) 30 25 20 15 10 5 0

Rsmx hetero

0:00:00 0:01:26 0:02:53 0:04:19 0:05:46 0:07:12 0:08:38 0:10:05 0:11:31 Tiempo (hh:mm:ss) Figura 3737- Grfica de obtencin de la Rsmx de las bacterias hetertrofas

Tasa mxima de respiracin de hetertrofas (Rsmx hetero) = 44,554 mg O2/lh Tasa mxima de respiracin de hetertrofas por SSV: Rspmx hetero =

, / , /

= 35,221 mg Og SSV h

Estos valores nos indican la presencia de actividad hetertrofa para llevar a cabo la eliminacin de materia orgnica.

80

Resultados

4.4.34.4.3-

Anlisis e interpretacin de los resultados de respirometra

A continuacin se muestra una tabla resumen de los parmetros obtenidos de la biomasa auttrofa y hetertrofa.
Tabla 1717- Tabla resumen parmetros respiromtrico AUTTROFAS SS SSV %V Rsmx auto Rspmx RN AUR DBO5/NKT FN XA YA qN a,max a TRCnitrificacin HETERTROFAS Rsmx hetero Rspmx YH Valor 44.554 35.221 0.613 Valor 1,67 1,27 75,75 35,705 28,225 7,813 6,176 5,867 0,0700 88,55 0,138 0,63 2,1176 0,937 0,624 1,60 mg SSV/l mg DQO/mg DQO mg DQO/mg N mg NH4/g SSV d d-1 d-1 d-1 Unidades mg O2/lh mg O2/g SSV h mg DQO/mgDQO mg O2/lh mg O2/g SSV h mg NH4/lh mg NH4/g SSVh Unidades g SS/l g SSV/l

Los resultados de los ensayos respiromtricos nos dan informacin acerca del estado del reactor biolgico de la planta piloto. La biomasa auttrofa (XA) (Tabla 17) presenta en primer lugar una buena poblacin de las mismas en el reactor biolgico, conclusin ya obtenida mediante la tcnica FISH (apartado 4.2). La presencia de actividad nitrificante queda corroborada mediante los ensayos de las tasas de respiracin, ya que Rsmx auto y Rspmx auto presentan buena actividad (Tabla 17). Adems presenta valores en las tasas de consumo de amonio, dentro de los valores tpicos establecidos bibliogrficamente e incluso algo superior lo que muestra la buena capacidad de nitrificacin presente en la planta tanto por unidad de volumen como por unidad de biomasa, siendo AUR 6,176 mg N-NH4/g SSVh dentro del rango de valores habituales (2-8, Manual V.23 Surcis) y RN 7,813 mg N-NH4/lh superior al rango establecido (1.5-6, Manual V.23 Surcis). Estos valores pueden deberse a la baja relacin DBO/N. 81

Resultados

El rendimiento de la biomasa auttrofa presenta un valor muy elevado, debido al posible consumo de amonio por parte de la biomasa auttrofa y hetertrofa para llevar a cabo el crecimiento, sin que este amonio sea nitrificado y por tanto, el consumo de oxgeno no sea de 4,57 mg O2, sino de 1mg O2 dando lugar a un consumo de oxgeno durante el ensayo menor al resultado descrito. El tiempo de retencin mnimo para que comience a llevarse a cabo la nitrificacin queda fijado en 1,6 das (Tabla 17), por lo que el tiempo de retencin celular aerobio con el que se trabaja es adecuado para conseguir una buena eliminacin de nitrgeno. La biomasa hetertrofa presenta una buena actividad de eliminacin de materia orgnica, como se ve a travs de las tasas de respiracin Rsmx hetero y Rspmx hetero (Tabla 17). Adems el valor del rendimiento de la biomasa (YH) se encuentra dentro de los valores tpicos de este parmetro al tener un valor de 0,613 mg DQO/mg DQO.

4.54.5- Diseo y simulacin de la planta piloto mediante el software DESASS.

Se ha llevado a cabo la simulacin de la planta piloto mediante el software DESASS sobre dos escenarios. Un primer escenario, considerando la nitrificacin como un proceso de una nica etapa, y un segundo escenario considerando la nitrificacin en dos etapas. El esquema utilizado para el diseo y simulacin de la planta piloto es comn a ambos, se trata de un reactor aerobio tpico de fangos activos y un decantador secundario con recirculacin externa al reactor biolgico y purga (Figura 38).

Figura 3838- Esquema planta piloto para la simulacin en DESASS

De igual forma la dotacin de caudales y cargas van a ser comunes a ambos escenarios (Figura 39). Una consideracin llevada a cabo fue la de sustituir el caudal de entrada de la planta piloto de 20 l/d a 20 m3/d, para evitar trabajar con nmeros muy pequeos y que no tengan lugar posibles problemas de redondeo.

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Resultados

El caudal y la composicin del agua residual influente se corresponde con la entrada real del agua residual sinttica a la planta piloto. En la Figura 39 se muestran nicamente los valores de la fraccin soluble, ya que la fraccin particulada es inexistente.

Figura 3939- Caudales y cargas de entrada a la planta piloto

Se introducen tambin las dimensiones y condiciones de operacin del reactor biolgico, es decir, oxgeno disuelto de 1 mg/l, temperatura del reactor 25C, volumen reactor 18 metros cbicos y tiempo de retencin celular de 18 das. De igual forma se introducen los datos de partida en el decantador secundario, desactivando el clculo con parmetros de sedimentabilidad y fijando los slidos suspendidos que salen en 7 mg/l y los recirculados en 2400 mg/l. A continuacin se tratar por un lado la nitrificacin completa y por otro la nitrificacin en dos etapas, cada una de ellas con sus cinticas, sus consideraciones y resultados.

83

Resultados

4.5.14.5.1-

Simulacin de la planta piloto con nitrificacin en una etapa.

En primer lugar se trabaja con el software en modo diseo, puesto que se pretende al llegar al estado estacionario cuadrar el caudal de recirculacin, e ir ajustando las cinticas para aproximarnos a los resultados analticos. Es decir, tener una situacin prxima a la real antes de comenzar con la simulacin. En este caso los clculos de diseo nos permiten aproximarnos al caudal de recirculacin, valores de DQO, pero no permiten aproximarse en las fracciones del nitrgeno, ya que en el diseo la aireacin es continua, por lo que solamente tiene lugar la etapa de nitrificacin, mostrando valores muy bajos de amonio (<1 mg/l) y muy altos de nitrato (>30 mg/l). Una vez tenemos las condiciones estacionarias a partir del diseo, se lleva a cabo la simulacin. Para ello en el reactor biolgico se introducen las concentraciones de oxgeno de los ciclos de aireacin intermitente utilizados en la planta piloto, 15 minutos de marcha y 75 de paro. En el apartado de cinticas se han llevado a cabo modificaciones tanto en las constantes de la biomasa hetertrofa, auttrofa y PAO. Una consideracin general a todas ellas ha sido la reduccin de la tasa de muerte (bx), ya que en condiciones anxicas/anaerobias esta tasa de muerte se reduce aproximadamente en un 80% respecto de tasa de muerte en condiciones aerobias (segn investigacines realizadas por el grupo de investigacin Calagua), por lo que teniendo en cuenta los ciclos de aireacin intermitente la tasa de muerte debe reducirse a la tercera parte. 1 0,2 5 2 6 6 3 Otra consideracin a tener en cuenta es que para conseguir que la concentracin de nitratos en el efluente simulada fuera similar a la experimental ha sido necesaria la disminucin del factor de reduccin por desnitrificacin a partir de nitrato (no3) llevada a cabo por las bacterias hetertrofas y PAO, ya que durante la etapa anxica/anaerobia el licor mezcla no se encuentra agitado, sino que acaba sedimentando en el fondo del reactor, mientras que el programa considera el licor mezcla agitado y por tanto una mayor desnitrificacin. En la cintica de las bacterias hetertrofas tambin se ha utilizado el rendimiento (YH) obtenido mediante las tcnicas respiromtricas en el apartado 4.4.2.1. Por lo que la cintica utilizada para la biomasa hetertrofa es la mostrada en la Figura 40:

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Resultados

Figura 4040- Cintica de la biomasa hetertrofa en la simulacin de la nitrificacin en una etapa.

En la cintica de la biomasa auttrofa, se ha utilizado la tasa de crecimiento mximo (a,max) obtenida mediante las tcnicas respiromtricas en el apartado 4.4.1.7. Sin embargo, no se ha utilizado el rendimiento de la biomasa auttrofa (YA) obtenido mediante respirometra, ya que el valor obtenido es anormalmente bajo y se ha utilizado un valor de 0,26 mg DQO/mg N. Las cinticas de la biomasa auttrofa son las mostradas en la Figura 41:

Figura 4141- Cintica de la biomasa auttrofa en la simulacin de la nitrificacin en una etapa.

En las bacterias PAO hay que hacer una nueva consideracin, las bacterias PAO por si solas no crecen al simular, por lo que hay que introducir al comienzo de la simulacin XPAO, XPP y XPHA, esta aproximacin es real, ya que en la puesta en marcha de la planta piloto se introdujo licor mezcla de la EDAR Quart-Benager que contena estas bacterias. Los rendimientos de la YPO4 y YPHA, se han ajustado para reproducir los resultados experimentales. Las constantes cinticas de las bacterias PAO son las recogidas en la Figura 42:

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Resultados

Figura 4242- Cintica de la biomasa PAO en la la simulacin de la nitrificacin en una etapa.

En la simulacin se pretende ajustar los parmetros del modelo para reproducir los resultados analticos obtenidos en laboratorio. Tras llevar a cabo la simulacin de la planta piloto durante semanas, con las condiciones descritas se han obtenido resultados muy similares en DQO, nitrgeno y fsforo as como en sus fracciones, a los obtenidos en las caracterizaciones realizadas en el laboratorio (Figura 43).

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Resultados

Figura 4343- Resultados del del efluente en la simulacin de la nitrificacin en una etapa.

A la salida del reactor, el nitrgeno total soluble se ha mantenido oscilante en valores de 9,5 a 10,5 mg N/l (Figura 44), similar al obtenido en la planta (NT 10,5 Tabla 14). Mientras que el amonio oscilaba entre 4,5 y 6,25 mg N/l y el nitrato entre 4 y 5 mg N/l (Figura 44), siendo valores tambin similares a los resultados analticos obtenidos en el laboratorio (NH4+4,0-5,5 y NO3-4,3; Tabla 14). La figura 44 muestra los resultados de las simulaciones, en las que se pueden observar las variaciones comentadas en las concentraciones de amonio y nitrato debidas a la alternancia de las etapas aerobias y anxicas.

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Resultados

Figura 4444- Resultados del fraccionamiento del nitrgeno en el efluente del reactor en la simulacin de la nitrificacin en una etapa.

En cuanto a la fraccin soluble del fsforo, el fosfato, tambin alcanza valores similares a los resultados analticos (4,5 mg P/l Tabla 14), ya que como vemos oscila entre valores de 4 a 5 mg P/l, la oscilacin se debe a la alternancia de las etapas aerobias y anxicas/anaerobias. (Figura 45)

Figura 4545- Resultados del fosfato y biomasa PAO en el efluente del reactor en la simulacin de la nitrificacin en una etapa.

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Resultados

Finalmente podemos observar un grfico conjunto en el que se muestran las fracciones particuladas y solubles de los componentes de mayor inters del estudio y en el que observamos como todos ellos se encuentran en valores prcticamente constantes con el paso del tiempo (Figura 46). Los slidos suspendidos se encuentran sobre 1100-1200 mg SS/l prximos a los resultados analticos

Figura 4646- Resultados de la salida del reactor en la simulacin de la nitrificacin en una etapa.

4.5.24.5.2-

Simulacin de la planta piloto con nitrificacin en dos etapas.

En este caso el diseo y simulacin se va a llevar a cabo con la nitrificacin en dos etapas, es decir, con la presencia de biomasa amonioxidante y nitritoxidante. Igualmente a la simulacin de la nitrificacin en una etapa, se va a llevar a cabo el diseo, con el mismo objetivo y resultados, as como la introduccin del oxgeno variable (vase 4.5.1) En el apartado de cinticas se han llevado a cabo modificaciones tanto en las constantes de la biomasa hetertrofa, amonioxidante, nitritoxidante y PAO. Una consideracin general a todas ellas ha sido la reduccin de la tasa de muerte (bx), ya que tal y como se explic anteriormente en condiciones anxicas/anaerobias esta tasa de muerte se reduce aproximadamente un 80%, por lo que teniendo en cuenta los ciclos de aireacin intermitente la tasa de muerte debe reducirse a la tercera parte.

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Resultados

1 0,2 5 2 6 3 6 Otra consideracin a tener en cuenta es la disminucin del factor de reduccin por desnitrificacin a partir de nitrato (no3) y nitrito (no2) (Figuras 47 y 49) llevada a cabo por las bacterias hetertrofas y PAO, ya que durante la etapa anxica/anaerobia el licor mezcla no se encuentra agitado, sino sedimentado en el fondo del reactor, mientras que el programa considera el licor mezcla agitado y por tanto una mayor desnitrificacin, por lo que se ajustaron estos parmetros para permitir reproducir los resultados experimentales. En la cintica de las bacterias hetertrofas tambin se ha utilizado el rendimiento (YH) obtenido mediante las tcnicas respiromtricas en el apartado 4.4.2.1. Por lo que la cintica utilizada para la biomasa hetertrofa ha sido la mostrada en la Figura 47:

Figura 4747- Cintica de la biomasa hetertrofa en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas.

En las cinticas de las bacterias amonioxidantes y nitritoxidantes se ha subido el valor del rendimiento frente a los de referencia para conseguir una poblacin similar a la obtenida mediante la tcnica FISH (apartado 4.2). Las constantes de la biomasa amonioxidante y nitritoxidante son las mostradas en la Figura 48:

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Resultados

Figura 4848- Cintica de la biomasa auttrofa en la simulacin simulacin de la nitrificacin en dos etapas etapas.

En las bacterias PAO hay que hacer una nueva consideracin, las bacterias PAO por si solas no crecen al simular, por lo que hay que introducir al comienzo de la simulacin XPAO, XPP y XPHA, esta aproximacin es real, ya que en la puesta en marcha de la planta piloto se introdujo licor mezcla de la EDAR Quart-Benager que contena estas bacterias. Los rendimientos de la YPO4 y YPHA, se han ajustado para conseguir reproducir los resultados experimentales. Las constantes cinticas de las bacterias PAO son las recogidas en la Figura 49:

Figura 4949- Cintica de la biomasa PAO en la simulacin de la nitrificacin nitrificacin en dos etapas.

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Resultados

En la simulacin se pretende ajustar los parmetros del modelo para reproducir los resultados analticos obtenidos en laboratorio. Tras llevar a cabo la simulacin de la planta piloto, durante semanas con las condiciones descritas se han obtenido resultados muy similares en DQO, nitrgeno y fsforo as como en sus fracciones, a los obtenidos en las caracterizaciones realizadas en el laboratorio (Figura 50).

Figura 5050- Resultados del efluente en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas.

A la salida del reactor, el nitrgeno total soluble se ha mantenido oscilante en valores de 9 a 10 mg N/l. Mientras que el amonio oscilaba entre 3 y 5 mg N/l, el nitrato entre 4 y 5 mg N/l, y el nitrito entre 1 y 2 (Figura 51). Estos resultados son similares a los obtenidos en laboratorio (NT 10,5; NH4+4,0-5,5; NO3-4,3; NO2-0,61; Tabla 14, Figura 17), pero cabe destacar que debido a la reduccin del factor de desnitrificacin va nitrito y va nitrato, la oscilacin del nitrato es menor a la que tiene lugar en la realidad. Por otro lado, la biomasa amonioxidante si se encuentra prxima a los porcentajes cuantificados por FISH (4%0.6 apartado 4.2), ya que se obtuvo una poblacin amonioxidante en torno a un 3%. Mientras que la biomasa nitritoxidante simulada en torno a 1,5% se encuentra por debajo del valor obtenido mediante la tcnica FISH (3%1,0 apartado 4.2).

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Resultados

La figura 51 muestra los resultados de las simulaciones, en las que se pueden observar las variaciones comentadas en las concentraciones de amonio, nitrato y nitrito debidas a la alternancia de las etapas aerobias y anxicas.

Figura 5151- Resultados del fraccionamiento del nitrgeno en el efluente efluente del reactor en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas.

En cuanto a la fraccin soluble del fsforo, el fosfato, tambin alcanza valores similares a los resultados analticos (4,5 mg P/l), ya que como vemos oscila entre valores de 3 a 5 mg P/l debido a la alternancia de las condiciones aerobias y anxicas/anaerobias (Figura 52).

Figura 5252- Resultados del fosfato y biomasa PAO en el efluente del reactor en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas.

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Resultados

Finalmente podemos observar un grfico conjunto en el que se muestran las fracciones particuladas y solubles de los componentes de mayor inters del estudio y en que observamos como todos ellos se encuentran en los valores obtenidos analticamente (Figura 53). Los slidos suspendidos en este caso estn un poco ms elevados que en la nitrificacin en una etapa situndose en valores prximos a 1250 mg SS/l, siendo similares a los obtenidos analticamente.

Figura 5353- Resultados de la salida del reactor en la simulacin de la nitrificacin en dos etapas.

De los resultados de ambas simulaciones podemos destacar la similitud en la mayor parte de los parmetros obtenidos analticamente o mediante otras tcnicas, si bien, algunos parmetros cinticos como el de desnitrificacin a partir de nitrato (no3) y nitrito (no2) se han tenido que reducir ms de lo habitual debido a la sedimentacin durante el ciclo de parada. Tambin hubiera sido interesante contrastar otros parmetros como es el caso de XPAO, XPP y XPHA, en caso de haberse realizado la identificacin y cuantificacin de las mismas mediante FISH, ya que el nico valor con el que se contaba para contrastar la simulacin por parte del fsforo es la analtica de fsforo y fsforo total.

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Resultados

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Conclusiones

5- CONCLUSIONES

Conclusiones

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Conclusiones

5- CONCLUSIONES
Las conclusiones que se han obtenido en el presente trabajo son: La implantacin de un sistema de aireacin intermitente es una buena alternativa para llevar a cabo la eliminacin biolgica de nitrgeno mediante los procesos de nitrificacin/desnitrificacin en EDAR que no hayan sido diseadas para ello (sin zona anxica y/o sin recirculacin interna). Se puede llevar a cabo el proceso de nitrificacin con un tiempo de retencin celular aerobio bajo (3 das) y concentraciones de oxgeno disuelto bajas (1mg O2/l), que dan lugar a un considerable ahorro energtico, y por tanto econmico. Aun en estas condiciones se observa la proliferacin de las bacterias amonioxidantes y nitritoxidantes. La monitorizacin de la concentracin de oxgeno y pH en el reactor biolgico, permite hacer un seguimiento de los procesos de nitrificacin y desnitrificacin, adems de poder detectar problemas como exceso de oxigenacin, falta de oxigenacin o acidificacin del reactor. Los decantadores secundarios de EDAR que no desnitrifican (por no haber sido diseadas para ello) mejoran el funcionamiento y tienen menos problemas de levantamiento de fangos con la implantacin de sistemas de aireacin intermitente, reducindose la turbidez en el efluente. La aireacin intermitente da lugar a la alternancia de condiciones aerobias y condiciones anxicas/anaerobias por lo que si la duracin de las etapas en las que no se airea es suficientemente larga (y hay cidos grasos voltiles en el reactor) puede tener lugar la eliminacin biolgica de fsforo, con el consecuente ahorro de reactivo para su eliminacin por va qumica. En este estudio en torno a un 40% del fsforo influente fue eliminado por va biolgica. Aunque conviene tener en cuenta que el reactor estaba alimentado con actico. La eliminacin de materia orgnica (DQO) no se ve afectada por los ciclos de aireacin intermitente, ya que los rendimientos de eliminacin se encuentran por encima del 90%. La tcnica de hibridacin in situ (FISH) es de gran utilidad para la identificacin y cuantificacin de bacterias de grupos especficos (amonioxidantes, nitritoxidantes,etc.). En este estudio se detect la existencia de una comunidad de bacterias amonioxidantes (AOB) bien desarrollada con un porcentaje 4%0.6, y de una comunidad bacteriana de nitritoxidantes

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Conclusiones

(NOB) del gnero Nitrospira, con un porcentaje del 3%0,7, respecto del total de la comunidad de bacterias viables del fango activo. Cabe destacar la presencia de bacterias nitritoxidantes a pesar del bajo tiempo de retencin celular aerobio y de la baja concentracin de oxgeno. La tincin de poli-fosfatos y Sudan Black puede ser utilizada para la identificacin de bacterias con fenotipo PAO presentes en el proceso. En este estudio, se observ la respuesta positiva a estas tinciones con la consecuente identificacin de organismos acumuladores de poli-fosfatos presentes en los flculos del fango activo de la planta piloto. La bioindicacin de los fangos activos es una herramienta muy til, la observacin microscpica del flculo, los filamentos y su microbiota nos da mucha informacin acerca del estado del proceso. Las tcnicas respiromtricas sirven para ver el estado del proceso, detectar la actividad de las poblaciones bacterianas y obtener algunos parmetros cinticos. Sin embargo, estos deben complementarse con otras tcnicas como FISH, para la obtencin de parmetros como la XA, o con la simulacin de procesos, para corroborar dichos resultados ya que parmetros como el rendimiento de la biomasa auttrofa (YA) en el que intervienen tantos factores son muy difciles de obtener. En este estudio se obtuvieron resultados reproducibles de parmetros como el rendimiento de las bacterias hetertrofas (YH=0,61 mgDQO/mgDQO) o la tasa mxima de crecimiento de las bacterias auttrofas (A=0,93 d-1). Adems de elevadas tasas de consumo de amonio (AUR=6,176 mg N-NH4/g SSVh) y RN 7,813 mg N-NH4/lh. La simulacin mediante el software DESASS permite representar los procesos que tienen lugar de una planta a lo largo del tiempo y mediante el ajuste de sus parmetros cinticos es posible reproducir los resultados analticos. En este estudio para representar adecuadamente el comportamiento de la planta piloto, fue necesario tener en cuenta que la velocidad de muerte de las bacterias es significativamente menor en condiciones anxicas que en condiciones aerobias reducindose un 80% (bAaer=0,15 d-1; bAanx=0,03 d-1 por lo que bA= 0,05 d-1). Se modific el rendimiento de auttrofas, amonioxidantes y nitritoxidantes para mantener la poblacin nitrificante (YAUT= 0,26 mg DQO/mg N; YAMM= 0,20 mg DQO/mg N; YNIT=0,12 mg DQO/mg N), as como otros cambios para reproducir los resultados analticos.

El trabajo desarrollado en el presente estudio supone un conocimiento ms profundo de los sistemas de eliminacin de nitrgeno, adems de dar solucin a otro de los principales problemas que actualmente tiene lugar en las estaciones depuradoras de agua residual como es la optimizacin energtica y ahorro econmico. 99

Bibliografa

6- BIBLIOGRAFA

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