PROPIEDADES INICAS DE LOS AMINOCIDOS

INTRODUCCIN Las protenas son macromolculas compuestas por unidades ms pequeas, conocidas como aminocidos. En las protenas se encuentran bsicamente veinte aminocidos diferentes, los cuales contienen un grupo carboxilo (-COOH, acido dbil) y un grupo amino (-+NH3, base dbil) unidos al mismo tomo de carbono (carbono , carbono quiral). Estos aminocidos difieren unos de otros nicamente por la naturaleza de sus cadenas laterales, o grupos R, que varan en estructura, tamao, carga elctrica y reactividad qumica (Gonzales et al, 2009; Moore & Langley, 2008). Todos los aminocidos presentan al menos un grupo cido (donador de protones) y un grupo bsico (aceptor de protones) que se ionizan cuando estn en solucin, por lo que los aminocidos pueden tener propiedades de acido y de base, es decir son anfotricos (Voet & Voet, 2004). Cada grupo tiene un pK, el cual corresponde al pH en el que se encuentra la misma cantidad de la forma no ionizada que de la ionizada (Gonzales et al, 2009; Houston, 2006):

Los aminocidos tienen al menos dos pK, por lo que tienen mayor capacidad amortiguadora, ya que presentan de tres a cuatro formas inicas diferentes. Cuando la forma inica tiene una carga neta de cero (zwitterion), se dice que se encuentra en su punto isoelctrico o pi. Al variar el pH, cambia la proporcin de las formas inicas y es posible ver la capacidad amortiguadora de los aminocidos. Cada aminocido tiene sus propios pK, puesto que presenta diferentes sustituyentes en sus cadenas laterales (Gonzales et al, 2009).
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OBJETIVO GENERAL Determinar en forma prctica los pK de un aminocido, mediante el mtodo titulacin por neutralizacin. OBJETIVOS PARTICULARES Determinar los pK de un aminocido mediante una titulacin. Comparar los valores de los pK del aminocido problema, obtenidos experimentalmente, con los valores tericos para su identificacin. Aprender el uso del potencimetro.

HIPTESIS Si se lleva a cabo la titulacin de un aminocido midiendo la variacin del pH al agregar cantidades mnimas de solucin bsica conocida, utilizando para ello el potencimetro, es posible obtener la curva de titulacin y en ella determinar los pK de ste aminocido. MATERIALES Y MTODOS Primero, en un vaso de precipitados de 100 ml, se coloc una alcuota de 30 ml de una solucin de un aminocido problema 0.06 M (en HCl 0.005 M, pH de 1). Posteriormente, se coloc el vaso sobre una base magntica y se introdujo el agitador magntico, evitando salpicaduras. Por otro lado, se calibro el potencimetro a una temperatura ambiente de 27 C con dos soluciones amortiguadoras; una a un pH 4 y otra a pH 7, en cada

medicin, al llegar a la cifra deseada, se lavo con agua destilada el electrodo y despus de tener las dos mediciones en este caso se consider calibrado el potencimetro. A continuacin, se midi el pH de la solucin de NaOH 0.3 N (previamente preparada) y despus se llen una bureta con la misma. Enseguida, se coloc el electrodo del potencimetro dentro del vaso que contena el aminocido. Se midi el pH inicial de la solucin de aminocido. Se inicio la titulacin, adicionando volmenes de 0.2 ml y midiendo el pH en cada adicin, hasta alcanzar el pH de la solucin de NaOH.
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RESULTADOS El pH de las soluciones del aminocido problema y el NaOH, al inicio de la titulacin, fueron de 2.52 y 12.85, respectivamente. De la adicin continua de 0.2 ml de la solucin de NaOH a la solucin del aminocido problema se obtuvo la siguiente tabla y su respectiva grafica:

Tabla 1: Titulacin del aminocido problema

ml NaOH adicionados 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8 2 2,2 2,4 2,6 2,8 3 3,2 3,4 3,6 3,8 4 4,2 4,4 4,6 pH 2,52 7,77 8,23 8,54 8,69 8,81 8,92 9,01 9,2 9,32 9,42 9,52 9,61 9,69 9,77 9,88 9,95 10,02 10,12 10,18 10,27 10,35 10,44 10,6 ml NaOH adicionados 4,8 5 5,2 5,4 5,6 5,8 6 6,2 6,4 6,6 6,8 7 7,2 7,4 7,6 7,8 8 8,2 8,4 8,6 8,8 9 9,2 pH 10,69 10,8 10,88 11,1 11,35 11,51 11,81 12,06 12,26 12,35 12,45 12,51 12,56 12,6 12,67 12,7 12,74 12,75 12,78 12,8 12,82 12,83 12,85

La adicin sucesiva de 0.2 ml de la solucin de NaOH modifica el pH de la solucin del aminocido problema.

Cuadro 1:

La curva de titulacin del aminocido problema muestra los rangos por donde pueden encontrarse los pK del aminocido, adems de su punto isoelctrico.

Se determinaron dos pK para el aminocido problema, tal como lo muestra la grafica anterior. Puede notarse que no se encontraron los pK exactos del aminocido, pero se establece un rango para estos y el punto isoelctrico. Comparando con la literatura, para la identificacin del aminocido problema, pueden descartarse los aminocidos que tienen ms de dos pK: tirosina, cistena, lisina, histidina, arginina, aspartato y glutamato (ver anexo 2). Por lo que el aminocido buscado est entre los que tienen los rangos de pK (2-3 y 9-10): todos los dems, menos prolina y asparagina.

DISCUSIN
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Los aminocidos con dos pK muestran valores muy similares, entonces la identificacin del aminocido problema se vuelve un tanto subjetiva, por lo que se elige a la glicina, el ms sencillo de todos, como el aminocido utilizado para la titulacin. Siendo as sus formas inicas y la curva de titulacin se muestran a continuacin:

CONCLUSIN
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Se realiz una curva de titulacin por neutralizacin de un aminocido problema, utilizando para ello sus propiedades acido-base frente al NaOH y las lecturas de pH con el potencimetro, en la cual se establecieron los rangos posibles donde pudieran encontrarse los pK de ste aminocido, el cual, comparado con la literatura, fue identificado como glicina.

BIBLIOGRAFA

Houston, M.E.; 2006. Biochemistry primer for exercise science. 3a ed. Gonzlez-Soto, E.; L. Bucio-Ortiz; P. Damin-Matzumura; F. Daz de LenSnchez; E. Corts-Barberena; L.J. Prez-Flores. (2009) Manual de bioqumica 1. 3 ed. Mxico.

Moore, J.; R. Langley. 2008. Biochemistry for dumies. Wiley Publishing, inc. Indianapolis, Indiana.

Voet, D.; J.G. Voet. 2004. Biochemistry. 3a ed. Wiley international edition. USA.

Nelson, D.L.; M.M. Cox; 2007.Lehninger Principles of Biochemistry. 4a ed.

ANEXO 1 (CUESTIONARIO) 1.- Cuales son los grupos funcionales del aminocido que se neutralizan en la titilacin de un aminocido? Todos los aminocidos constan mnimo de 2 y mximo de 3 grupos funcionales, estos poseen una carga a distintos valores de pH. El primero en neutralizarse es el cido carboxlico, despus el grupo R y al final el grupo amino, el orden se da en la mayora de los aminocidos. Ref.(1988.harper.bioquimica de harper).

2.- Que representa el PK de un grupo carboxilo o de un grupo amino?

Representa un valor de pH en el cual el aminocido presenta dos especies del mismo compuesto, lo cual genera una zona de amortiguamiento. Ref. (1989.conn. Bioqumica fundamental) 3.- partiendo de la especie totalmente protonada escriba las reacciones de disociacin que se presentan durante la titilacin, con una base fuerte, de los aminocidos tirosina y cido glutmico.

4.- indique si los aminocidos pueden usarse como amortiguadores y en qu casos.

Si pueden usarse como amortiguadores porque tienen propiedades anfotericas, es decir, pueden donar y aceptar protones de pendiendo la cantidad de titulante empleado. Ref. (1989.conn. Bioqumica fundamental) 5.- Cul es el fundamento del potencimetro?
Utiliza un electrodo combinado de vidrio, sirve para medir el pH, razn por la cual se le conoce usualmente como pHmetro. Debe poder medir el pH con una exactitud de 0,01 unidades de pH. Normalmente, los instrumentos modernos tienen un sistema de compensacin de temperatura y se calibran mediante un procedimiento automatizado en el que se utilizan dos soluciones patrn (soluciones tampn) de pH 4,01 y 6,86 a 25C. La calidad en la medida del pH depende fundamentalmente de la preparacin y conservacin de las soluciones patrn y del estado del electrodo. Las soluciones patrn de pH, Pueden prepararse en el laboratorio, aunque normalmente se utilizan soluciones comerciales. stas tienen una caducidad de hasta un ao, pero es recomendable no utilizar una solucin patrn dos o tres meses despus de abrir la botella. El electrodo combinado de vidrio consta realmente de dos electrodos, un electrodo indicador de membrana de vidrio y un electrodo de referencia. El potencimetro mide la diferencia de potencial que se crea entre estos dos electrodos, la cual depende del pH. La vida media de un electrodo de vidrio es de alrededor de un ao. La conservacin de la membrana del electrodo es crtica y por esta razn, cuando no se usa, debe estar siempre sumergida en una solucin. Ref.(http://www.enologo.com/tecnicos/eno41/eno41_3.html)

ANEXO 2

Nelson, D.L.; M.M. Cox; 2007.Lehninger Principles of Biochemistry. 4a ed.

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