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Antecedentes y generalidades
IRENE VASCONCELOS DUEAS
UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA - IZTAPALAPA
ACADEMIA DE PROFESORES DE BIOLOGIA CELULAR
TEMA 1 : ANTECEDENTES Y GENERALIDADES . -
1. Datos histricos : Importancia de la microscopa en el estudio de
la clula .
a .- mtodos de estudio de la clula.- microscopa, tcnicas de
cultivo, tcnicas qumicas .
2. Teora celular : analizar y discutir los postulados de esta teora
BIOLOGA CELULAR
OBJETIVOS:
1). Que los alumnos se familiaricen con los microscopios.
2). Que los alumnos conozcan algunas tcnicas para
estudiar y observar a las clulas.
3). Que los alumnos correlacionen el tipo de estudio celular,
con el microscopio idneo.
4). Que el alumno relacione el avance en el conocimiento de
la clula con los avances en la microscopa.
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NIVELES DE ORGANIZACIN BIOLOGICA:
Se representa desde el molecular hasta el macroscopico pluricelular, vegetal y
animal.
MICROSCOPIA Y LOS MICROSCOPIOS:
Microscopio compuesto fabricado hacia 1751 por Magny.
AVANCES DEL MICROSCOPIO , (HASTA LA FECHA) :
M. ESTEROSCOPICO.
Una variedad de los pticos
compuestos
M. OPTICO
MONOCULAR.
Su forma ms
simple, como la
utilizada por R.
Hooke. Ambos
monoculares
(Una variedad del
compuesto).
M. OPTICO
BINOCULAR Con
Aditamento para
cmara fotogrfica

Cmara fotogrfica
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MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
MEJI MODELO MX6200H M. CON
ILUMINACION DE FLUORESCENCIA
M. Petrogrfico o de polarizacin.
Utilizado en investigaciones geolgicas.
[Proviene del laboratorio del duque de
Chaulnes y pertenece al Museo de Artes y
Oficios, Pars] .
M. Electrnico de barrido , (de: Tovar
Franco, J.A. 2004, No.5).
DIFERENTES TIPOS DE MICROSCOPIOS: su sistema ptico.
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Principales elementos de un microscopio compuesto bsico:
* Los microscopios de este tipo suelen ser complejos, con varias lentes en
el objetivo como en el ocular. El propsito de stas lentes es el de reducir
la aberracin cromtica y la aberracin esfrica.
Los microscopios compuestos se utilizan para estudiar especmenes
delgados, puesto que su profundidad de campo es muy limitada. Por lo
general, se utilizan para examinar cultivos, preparaciones trituradas o una
lmina muy fina. Depende de que la luz atraviese la muestra desde abajo y
usualmente son necesarias tcnicas especiales para aumentar el contraste
de la imagen.
desarrollan el microscopio de fuerza atmica Binnig y Rohrer 1985
desarrollan el microscopio de efecto tnel G. Binnig y H.
Rohrer
1981
desarrolla el primer microscopio electrnico de barrido Ernst Ruska y Knoll 1942
construye el primer microscopio electrnico Ernst Ruska y Knoll 1931
(por encargo de Carl Zeiss) , mejora la microscopa de inmersin
sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener
aumentos de 2000.
Abbe 1877
Inventa el microscopio simple .
Describi por primera vez protozoos, bacterias, esperma -
tozoides y glbulos rojos.
Anton van
Leeuwenhoek
1674
Publica Micrographia, una coleccin de micrografas biolgicas. Acua
la palabra clula para las estructuras que descubre en una corteza
de corcho.
Roberto Hooke 1665
Primero en estudiar tejidos vivos al microscopio , Prueba la teora de
Harvey sobre la circulacin sangunea al observar al microscopio
los capilares sanguneos
Malpighi 1660 y 1665
Presenta en Londres, un microscopio compuesto de dos lentes
convexas.
Cornelius Drebbel 1619
Desarrolla un occhiolino o microscopio compuesto de una lente
convexa y una cncava.
Galileo Galilei 1609
Inventaron el microscopio simple, al combinabar dos lentes simples
convergentes: una operaba de "objetivo" y la otra de "ocular".
Hans y Zacarias
Janssen
1590
Fabricantes holandeses de anteojos Pierre y Willem
Boreel
1590
INVENTO Y/O TIPO DE MICROSCOPIO AUTOR (ES) AO
CRONOLOGIA DEL DESARROLLO DEL MICROSCOPIO .
MICROGRAFIA OBTENIDA CON EL MICROSCOPIO OPTICO
Microscopio ptico
Permite examinar las clulas vivas, sin ningn tipo
de fijacin ni congelacin.
Micrografa de sangre, con H.E. a 100x
Se observan glbulos rojos y blancos.
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Micrografa de micorrizas.
Bajo M.O. a 100x , con fast green;
de cellsalive.com
Micrografa de microorganismos de una
muestra de agua dulce (Chaetoceros sp.)
tratada con H.E. bajo M.O. a 100x
Resolucin: 416x346x16M; (de:
cellsalive.com) .
MICROSCOPIO COMPUESTO:
Esquema del microscopio construido por
Hooke, (1665); base para la construccin y
evolucin de otros. [a la der., la lmina de
corcho a diferentes aumentos, observado
por el autor].
(Tomado de Curtis, H. y col, 1995; No.1)
1 ocular
2 revlver
3 objetivo
4 mecanismo de enfoque
5 tornillo de enfoque fino
6 platina
7 espejo
8 condensador
MICROSCOPIO ESTEREOSCOPICO:
Observacin de ovocitos
ambas fig. de:
http://scriptusnaturae.8m.com
(otro microscopios compuestos)
Detalle de la caja
de cultivo.
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CONTINUAN MICROSCOPIOS COMPUESTOS :
Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un fondo oscuro.
Aqu aparece conectado a una TV , para facilitar el anlisis de resultados.
Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos
transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal.
Microscopio de campo oscuro:
Fotografa de treponemas bucales
( a mayor aumento)
Treponemas bucales
(conjunto a menor aumento)
CONTINUAN MICROSCOPIOS COMPUESTOS,
M. de Campo Oscuro:
(Ambas figuras de cellsalive.com)
CONTINUAN DIFERENTES TIPOS DE MICROSCOPIOS COMPUESTOS :
2 c) Microscopio de fluorescencia , (M.F.) : se logran obtener preparaciones
fijas con este tipo de imgenes : Amibas con seudpodos, algunas fagocitan.
(las dos fig. de: http://micro.magnet.fsu.edu/primer/techniques/fluorophase.html)
FIG. 2: Micrografa de un microoorganismo
en una muestra de agua corriente,
(Euglena sp.) ; tratada con las tecnicas
adecuadas; (bajo M.F., a 100x ;
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IMGENES EN EL MICROSCOPIO DE INMUNOFLUORESENCIA
Clulas preparadas con isocianato de
fluorescena y el DANS, muestran una
fluorescencia verde manzana bajo la
luz ultravioleta y la rodamina
anarajando brillante
Se conjugan los anticuerpos con colorantes
fluorescentes; (Croons 1942)
(Fig. 1 y 2: tomadas de
http://micro.magnet.fsu.edu/primer/techniques/fluorophase.htl
.
MICROSCOPIO DE INMUNOFLUORESCERNCIA :
Las preparaciones deben teirse
adecuadamente para su observacin.
Se observa una mitosis con esta tcnica de tincin.
(de: micro.magnet.fsu.edu/
primer/techniques/fluorophase.htlm
(otro de los microscopios compuestos)
2 d) Microscopio de contraste de fases , (M.C.F.) : se utiliza cuando se
requiere observar preparaciones en fresco, u organismos vivos e incoloros. (Si se
aade una gota de azul de metileno diludo, se podr obtener una mejor resolucin).
Fig. 1. :
Objetivos de un microscopio moderno, con anillos de
d diferente color, por ser del M.C.F.
d
Fig.2.:
Amibas observadas bajo M.C.F.
(imgenes de las clulas tomadas de:
Maniak y col. Cell 83, 915-924, 1995)
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El microscopio electrnico de barrido .-
est situado a la izquierda del operador, y
las imgenes computariza- das de la
muestra se ven en la pantalla de la
derecha. Aunque un microscopio
electrnico de transmisin puede resolver
objetos ms pequeos que uno de barrido,
este ltimo genera imgenes ms tiles
para conocer la estructura tridimensional
de objetos minsculos.
MICROSCOPIO ELECTRONICO, (M.E.) : Micrografias electrnicas, tienen muchos
usos en las ciencias biolgicas y medicas.
VARIAS MICROGRAFIAS ELECTRONICAS:
Fig. 1 : Un bacterifago T4
(de: Tovar Franco, J.A.
2004).
Fig. 2 : Esta micrografa electrnica de transmisin,
clula de levadura (Rhodosporidium toryloides), tratada
por el mtodo de congelacin-fractura. Muestra varios
orgnulos suspendidos la matriz citoplsmica. (de
Tovar Franco, J.A. 2004)
Fig. 3: Superficie del retculo
endoplasmtico rugoso (RER).
(de Fawcett, W.D., Science
Source/Photo Researches
Inc., en Tovar Franco, J.A.
2004)
8. MICROSCOPIO QUIRURGICO :
Una operacin que pareca imposible. (de: chimera.javierana.edu.co)
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Se ilustra el proceso de engullimiento efectuado por un leucocito polimorfo- - - nuclear ,
(in vitro), que ingiere una partcula de levadura, (b: Segn J. Boyles y Dotothy F.
Bainton. Cell 24: 906, 1981; con permiso de Cell Press). [ Tomado de : Karp, G. 1998.
Biologa celular y molecular * No.2 ]
Preparaciones fijas:
Micrografa de diatomeas, tratadas con azul de metileno; a 40x. Se
observa la pared celular de slice. (tomada por Peter Parks/Oxford
Scientific Films; en: cellsalive.com)
c) Microscopio electrnico:
Electromicrografia de una clula de
ratn, muestra aparato de Golgi.
(de: scriptusnaturae.8m.com)
Electromicrografia de una bacteria en
divisin, (de: scriptusnaturae.8m.com )
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II.TECNICAS PARA EL ESTUDIO DEL CONTENIDO QUIMICO:
Con clulas vivas, se usa a) resonancia magntica nuclear y b)
microelectrodos de vidrio:
a) Resonancia magntica nuclear: para observacin de las molculas
mas pequeas y su concentracin en solucin. La desventaja es que se
requieren grandes cantidades de muestra.
b) Microelectrodos de vidrio: para el estudio de potenciales elctricos
en la membrana celular y otras membranas contra la concentracin de iones
orgnicos. (como puede observar en las figuras adjuntas, en las
siguientes transparencias): se aprecia un crustceo, (cacerolita de mar o
Lymulus polyphemus) .
III. CULTIVOS CELULARES:
Se iniciaron en 1907 utilizando fragmentos pequeos de tejido.
Actualmente se hacen a partir de clulas disociadas, que ya han proliferado y
crecido en un medio adecuado en laboratorios; o con muestra en un volumen
adecuado para cumplir con los objetivos; por ejemplo sangre perifrica para
caritipos, o de lquido amnitico para estudios genticos.
Para estudiar tejidos, saber cuntos y cules tipos diferentes de clulas los forman.
Hacerlos crecer sobre placas de cultivo o en recipientes especiales con medios de
cultivo especficos para ellos.
FIG: Se muestra una
de la tcnicas utiliza-
das para cultivo
celular.
CULTIVO Y PROPAGACION DE DIFERENTES TIPOS CELULARES :
FIG. 1: Se muestra la propagacin de fibroblastos de
ratn, que primero se unen, y despus se propagan.
(Segn: Rosen H. y L.A. Culp. Exp.Cell Res.107: 141,
1977) .
FIG. 2: Abajo. Se muestra un ovocito de erizo de mar,
en contacto con espermatozoides, para estudiar los
procesos de fertilizacin y division celular in vitro.
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IV. TECNICAS DE FRACCIONAMIENTO DEL CONTENIDO CELULAR:
Se aislan orgnulos y macromolculas funcionales en las clulas, por diferentes
mtodos:
a) Por centrifugacin: utilizado en la metodologa para la obtencin de
cariotipos a partir de las clulas sanguneas.
c) Por disgregacin :
Usando morteros, u homogenizadores, (ya los hay tambin de tubo).
b) Por centrifugacin y Ultra centrifugacin: para estudiar y determinar
organelos celulares; o la sntesis proteica ; o la replicacin del ADN ; o bien,
la maduracin del ARN .
T E O R I A C E L U L A R :
Despus de la invencin de las lentes y de la construccin de los microscopios,
que permitieron observar y estudiar a las clulas; y con los avances cientficos
que hubo en 1838 , permitieron al botnico alemn M. Schleiden y al zologo
Schwann, postular la teora celular ; segn la cual , se deca que :
- La celula es la unidad estructural y funcional de los seres vivos , capaz de
mantener una existencia propia e independiente -
En 1858 , Virchow complemento la teoria celular ; con otro postulado:
- Todas las celulas se originan a partir de una preexistente -
En 1876 , Herwing concluyo que para que en un huevo se desarrolle un embrion,
deben fusionarse los nucleos.
Asi se demostro la semejanza que hay entre los vegetales y los animales, y la
importancia del nucleo en la transmision del material hereditario.
Santiago Ramon y Cajal en 1889 , dio su valor universal a la teoria celular , al
demostrar que las neuronas tienen una individualidad .
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Resumiendo , los postulados de la teora celular son:
1. Todos los seres vivos estn compuestos por una o varias clulas
funcionales.
2. Las clulas son capaces de mantenerse en forma independiente .
3. Cada clula procede de otra existente , lo que permite la transmisin de
caracteres de una generacin a la siguiente.
4. La clula es la unidad de vida mas pequea que existe .
LA HISTORIA Y APLICACIN DE LOS
DIFERENTES TIPOS DE MICROSCOPIOS:
Interesante y til es que los educandos
de Biologa Celular conozcan el desarrollo
que se ha tenido en este aspecto, aunque
los aparatos no estn fsicamente el el rea
del laboratorio docente, ya que el anlisis
celular y microoperaciones se realizan
cotidianamente en diferentes laboratorios
clnicos y de investigacin.
BIBLIOGRAFIA:
1. Curtis, H. y S. Barnes. 1995. Invitacin a la Biologa. 5Ed.: Medica-
Panamericana, Madrid: 880 pp.
2. Karp, G. 1998. Biologa celular y molecular. Ed. McGraw - Hill
Interamericana, Mxico: 800 pp.
LIBROS Y REVISTAS ELECTRONICOS:
1. http://www.cellsalive.com
2. http://chimera.javierana.edu.co/b303/
3. http://danival.org/4000notasbio/bio/html
4. http://micro.magnet.fsu.edu/primer/techniques/fluorophase.html
5. http://scriptusnaturae.8m.com
6. Maniak, l. y col. 1995. Cell83, 915-924.
7. Prez, S. y col. 1998. Aplicacin de mtodos moleculares en taxonomia y
filogenia. Seminario Microbiologa Ambiental, 23.04. Facultad Biologa
Oviedo.
8. Tovar Franco, J.A. 2004. Biologa celular: curso bsico . Pontificia
Universidad Javierana. Facultad de Ciencias. Programa de
postgrado.
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Congresos en lnea :
1. Escobar S. J. y col. 2001. MIOSARCOMA DE AURICULA IZQUIERDA. V
Congreso Virtual Hispanoamericano de Anatoma Patolgica; II/*Ciruga
Cardiaca.Hospital Central de Asturias, Celestino Villamil s/n Oviedo.33006
Asturias.
2. Katie Prout Matias. 2004. Bombas inteligentes: Las terapias
dirigidas localizan los blancos cada vez mejor definidos. OncoLog,
junio 2004, Vol. 49, No. 6