ISSN 15174980

Mtodos para Coleta de Parasitos de Peixes

Circular Tcnica
Macap, AP Maio, 2011 Autores
Gabriela Tomas Jernimo
Engenheira de Aquicultura, Doutoranda, Universidade Federal de Santa Catarina, Florianpolis, SC. gabriela@cca.ufsc.br

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Introduo
Entre as metodologias para diagnstico de doenas em peixes podem ser ressaltadas as anlises parasitolgicas, sendo importante coletar e processar os parasitos de maneira correta, para obteno de material que possa ser identificado. Para obteno dos parasitos necessrio realizar uma necropsia do peixe, ou seja, importante retirar e analisar todas as partes do peixe onde podemos encontrar os parasitos. ento necessrio seguir uma sequncia de procedimentos que facilite a execuo e garanta a preservao dos parasitos (EIRAS et al., 2006). Sempre que possvel, os peixes devero ser examinados imediatamente aps sua coleta e morte, para observao de parasitos externos (ectoparasitos) e internos (endoparasitos). O objetivo desta circular orientar tcnicos, estudantes e profissionais da rea sobre as metodologias adequadas para coleta de parasitos de peixes, principalmente na piscicultura.

Maurcio Latera Martins

Bilogo, Doutor, Universidade Federal de Santa Catarina, Florianpolis, SC. mlaterca@cca.ufsc.br

Mrcia Mayumi Ishikawa

Mdica Veterinria, Doutora, Embrapa Agropecuria Oeste, Dourados, MS. marcia@cpao.embrapa.br

Arlene Sobrinho Ventura

Acadmica de Medicina Veterinria, Faculdade Anhanguera, Dourados, MS. arlene_s_ventura@hotmail.com

Marcos Tavares-Dias
Bilogo, Doutor, Embrapa Amap. Caixa Postal: 10, 68903-419, Macap, AP. marcostavares@cpafap.embrapa.br

Insensibilizao dos Peixes

Para conter e sacrificar os peixes podem ser utilizados alguns anestsicos sintticos como a tricana metano sulfonato (MS-222) e a benzocana, os quais so muito utilizados. Estes anestsicos podem causar efeitos indesejados em algumas espcies de peixes, tais como a perda de muco, irritao das brnquias e danos na crnea (INOUE et al., 2003), alm da perda de ectoparasitos.

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Outra alternativa a utilizao do leo de cravo que apresenta algumas vantagens como a praticidade, baixo custo, eficincia em baixas concentraes e rpida metabolizao e depurao (CHO; HEAT, 2000; MUNDAY; WILSON, 1997; WATERSTRAT, 1999). Em geral, os anestsicos no so recomendados para estudos e coletas de ectoparasitos, mas quando o objetivo coletar ectoparasitos no h inconvenincia no uso de anestsicos (EIRAS et al., 2006). Assim, para estudos e coletas de ectoparasitos, a maneira simples e eficaz de causar a morte dos peixes consiste em perfurar a parte superior da cabea com um instrumento pontiagudo. Um pequeno movimento lateral nesta posio causa a comoo cerebral, provocando a morte do peixe.

Dados Biomtricos
A biometria realizada para complementar as informaes referentes ao diagnstico de doenas parasitrias no peixe. Na biometria, so realizadas algumas medidas do peixe tais como seu peso (g) e comprimento (cm). O comprimento pode ser o total, que vai da boca at a cauda ou o comprimento padro, quando se mede da boca at o incio do pendculo caudal.

Sequncia de Procedimentos para Coleta de Parasitos de Peixe

A) Coleta de ectoparasitos de peixes de pequeno porte 1. Colocar o peixe em um frasco com formol 1:4000. 2. Esperar duas horas e completar com formaldedo 37%-40% at atingir uma concentrao aproximada de 5%. 3. Etiquetar o frasco identificando a espcie, data e informaes do proprietrio.

B) Coleta de ectoparasitos do tegumento 1. Fazer uma inspeo macroscpica com objetivo de detectar possveis parasitos visveis a olho nu. 2. Realizar raspagem do tegumento no sentido cabea-cauda, no se esquecendo das nadadeiras. 3. Colocar o contedo do tegumento em um frasco. 4. Adicionar formol a 10% at alcanar a concentrao de 5% sobre esse contedo. 5. Etiquetar o frasco, contendo o rgo, peixe analisado e data.

C) Coleta de ectoparasitos das narinas 1. As narinas devem ser abertas com auxlio de uma tesoura de ponta fina e deve-se realizar a lavagem das suas cavidades com soro fisiolgico 0,65% ou formol 1:4000. 2. O contedo deve ser colocado em um frasco. 3. Adicionar formol a 10% at alcanar a concentrao de 5% sobre o contedo. 4. Etiquetar o frasco contendo o rgo e identificlo com informaes sobre espcie, local e data de coleta.

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D) Coleta de ectoparasitos de brnquias (guelras) 1. Levantar o oprculo, expondo as brnquias, retirlas com cuidado e separar os arcos. 2. Colocar em frasco e banh-las com gua a 55 C, e aps aproximadamente 30* minutos, completar o frasco com formol a 10%. 3. Etiquetar o frasco, contendo o rgo, espcie, data e informaes do proprietrio. *Em regies que registram altas temperaturas ambientais, como as que ocorrem na Amaznia, no necessrio expor as brnquias gua quente por longo perodo. Cerca de 10-15 minutos so o suficiente.

E) Coleta de endoparasitos de olhos de peixes 1.Com auxlio de instrumento pontiagudo, externar o globo ocular do peixe. 2.Retirar os dois globos oculares. 3.Estourar os globos oculares dentro de um frasco. 4.Adicionar AFA frio ou formol 10%. 5.Etiquetar o frasco contendo o rgo, com dados do peixe analisado e a data de coleta.

F) Necropsia para coleta de endoparasitos A necropsia dos peixes consiste na abertura da cavidade visceral e exposio dos rgos. 1. Fazer uma inciso ventral, comeando na regio do nus e prolongando-a at a regio anterior. 2. A seguir, rebater as paredes laterais da cavidade visceral. 3. Expor os rgos internos e observar se h parasito aderido superfcie dos rgos ou na prpria cavidade visceral. 4. Retirar o rgo desejado.

G) Coleta de endoparasitos de rgos de peixes 1. Retirar o rgo desejado (estmago e/ou intestino). 2. Individualiz-los em placa de Petri. 3. Os rgos devem ser abertos cuidadosamente.

h) Processamento dos rgos para coleta de endoparasitos 1.Os rgos devem ser banhados em gua a 55 C (estmago e/ou intestino). 2.Aps 30 minutos completar o frasco com formol 10% ou AFA aquecido a 60 C. O intestino e o estmago devem ser abertos e fixados diretamente no frasco com formol 10% ou AFA aquecido a 60C. 3.Etiquetar identificando qual rgo, data, espcie e informaes do proprietrio. 4.Para facilitar a coleta, o contedo do estmago e/ou intestino podero ser lavados em peneiras com malha de 100-150m de abertura. 5.Observar o rgo em estereomicroscpio. OBS: Se a coleta for realizada em laboratrio, pode seguir direto para o passo 4.

Deteco e Mtodos de Fixao de Parasitos de Peixes (EIRAS et al. 2006)

Nos peixes de cultivo podem ser encontrados diferentes parasitos pertencentes aos vrios grupos, em rgos distintos (Tabela 1). Assim, so necessrias as seguintes recomendaes para deteco e fixao: Protozorios A deteco efetuada atravs da observao microscpica de raspados de brnquias e tegumento, ou de pequenos fragmentos de brnquias colocados entre lmina e lamnula. A fixao pode ser feita diretamente em lmina ou aps remoo dos arcos branquiais e raspado do tegumento usando formol a 5%. Myxozoa Podem ser encontrados nas brnquias, rins, fgado, bao, corao e ovrios. So caracterizados, na sua fase de parasito de peixes, por possurem esporos, podendo ter formas e dimenses muito diferentes. A sua observao deve ser feita, tanto quanto possvel, imediatamente depois de coletados, colocando-se entre lmina e lamnula. Se for impossvel observar os esporos a fresco, ento pode proceder-se a fixao dos mesmos em formol tamponado a 4%-10%. Monogenoides Se encontram nas brnquias, narinas e superfcie do corpo dos peixes (tegumento). Pode-se detectar tambm no estmago, cavidade visceral, ovidutos e canais urinrios. A verificao da parasitose causada por Monogenoidea pode ser feita analisando-se peixes vivos, atravs de raspados de tegumento e brnquias, ou de pequenos fragmentos de brnquias colocados entre lmina e lamnula. Para visualizao dos mesmos nos rgos internos, necropsia-se o peixe, retirando o rgo desejado. Para fixao do parasito, recomenda-se banhar as brnquias em gua aquecida (a 60 C) at cobrir seu volume, e aproximadamente 30 minutos aps, adicionar formol 5%-10%. Digenticos Podem ser coletados no tratogastrointestinal (estmago e/ou intestino), rgos ocos, sistema circulatrio ou tecido conjuntivo. J em sua forma larval (metacercrias) podem localizarse nas brnquias, olhos, encfalo, pericrdio, musculatura, cavidade geral, parede interna e vrios rgos e mesentrio. Os adultos devem ser comprimidos entre lminas ou entre lmina e lamnula e fixados com formol 5% ou AFA. Cestoides e nematoides Em geral, os cestoides e nematoides so encontrados na fase adulta parasitando intestino e/ou a cavidade do corpo dos peixes. Estes devem ser fixados com formol 5% ou AFA quente, para distenso do corpo. Acantocfalos Os parasitos adultos so quase sempre encontrados no intestino dos peixes; j as larvas podem ser detectadas em vrios rgos,

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Tabela 1. Principais rgos onde parasitos de peixes podem ser encontrados.
Muco e nadadeiras

Local de preferncia
Brnquias Olhos Msculo e mesentrio Intestino

Parasitos

Demais rgos internos

Ichthyophthirius multifiliis Piscinoodinium pillulare Tricodindeos Mixospordeos Monogenoideos Lernaea (larvas e adultos) Argulus/Dolops Larvas de molusco Larvas de digenticos Larvas de cestoides Larvas de nematoides Digenticos, cestoides e nematoides adultos

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Preparao dos Reagentes Fixadores de Parasitos

A) Formol 1:4000 Formol (37-40%).............................1 mL gua destilada .......................... 4000 mL B) Formol a 5%: Formol (37-40%)........................... 50 mL gua destilada .......................... 950 mL C) Formol 10%: Formol (37-40%).........................100 mL gua destilada........................... 900 mL D) Formol 10% tamponado: Formol (37-40%)............................100 mL gua destilada............................900 mL Fosfato de sdio dibsico............6,5g (Na2HPO4) Fosfato de sdio monobsico......4,0g (NaH2PO4) E) lcool 70% lcool absoluto................................700 mL Completar com gua destilada.......300 mL F) AFA lcool 70o GL..........................930 mL Formol (37-40%)..........................50 mL cido actico glacial.................20 mL OBS: Deve ser armazenado em geladeira (4 C), para na everso da probscide de acantocfalos.
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So necessrios cuidados bsicos na manipulao dos reagentes indicados para fixao dos rgos e/ou parasitos de peixes. Recomenda-se a utilizao de luvas e mscaras para manipulao dos reagentes, visto que formol e cido actico so altamente txicos, cancergenos e irritantes para as vias respiratrias. Esses produtos quando entram em contato com a pele, podem causar irritao nos olhos, nariz e mucosas, mas em altas concentraes pode causar ainda bronquite, pneumonia e laringite. Os sintomas mais frequentes no caso de inalao so: forte dor de cabea, tosse, falta de ar, vertigem e dificuldade para respirar. O contato com o vapor ou com a soluo pode deixar a pele esbranquiada, spera e causar forte sensao de anestesia e necrose na pele superficial. O cido actico quando concentrado pode causar queimaduras graves na pele e nos olhos.

Consideraes Finais
A coleta de parasitos de peixe pode ser realizada, preferencialmente, no Laboratrio, no entanto, pode tambm ser realizada na piscicultura ou no campo. No primeiro caso, o material deve estar acondicionado adequadamente em frasco, seguindo as recomendaes acima e de tal maneira que a amostra fique coberta, pelo fixador (formol), 5 a 10 vezes o seu volume. Junto com a amostra dever ser encaminhado para o Laboratrio algumas informaes complementares sobre o material que est sendo enviado: > Nome, endereo e telefone da propriedade; > Data da coleta dos parasitos; > Nome e espcie do peixe que foi feita a coleta os parasitos; > Rao utilizada e a frequncia com que os peixes estavam sendo alimentados; > Data que iniciou a mortalidade; > Descrio do tratamento (produto, quantidade e freqncia) caso tenha sido utilizado.

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Agradecimentos
Os autores agradecem ao CNPq e Ministrio da Pesca e Aquicultura (MPA), pelo apoio financeiro ao Projeto Aquabrasil e Projeto MAPA/CNPq (Proc. 578159/2008-2).

Referncias
CHO, G. K.; HEAT, D. D. Comparison of tricaine methanesulphonate (MS222) and clove oil anaesthesia effects on the physiology of juvenile Chinook salmon Oncorhynchus tshawytscha (Walbaum). Aquaculture Research, Oxford, n. 31, p. 537-546, 2000. EIRAS, J. C.; TAKEMOTO, R. M.; PAVANELLI, G. C. Mtodos de estudo e tcnicas laboratoriais em parasitologia de peixes. 2. ed. Maring: Eduem, 2006.199 p. INOUE, L. A. K. A.; SANTOS-NETO, C.; MORAES, G. Clove oil as anaesthetic for juveniles of matrinx Brycon cephalus (Gnther, 1869). Cincia Rural, Santa Maria, v. 33, n. 5, p. 943-947, 2003. MUNDAY, P. L.; WILSON, S. K. Comparative efficacy of clove oil and other chemicals in anaesthetization of Pomacentrus amboinensis, a coral reef fish. Journal of Fish Biology, London, v. 51, p. 931-938, 1997. WATERSTRAT, P. R. Induction and recovery from anaesthesia in channel catfish Ictalurus punctatus fingerlings exposed to clove oil. Journal of World Aquaculture Society, Baton Rouge, v. 30, n. 2, p. 250-255, 1999.

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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

Exemplares desta edio podem ser adquiridos na: Embrapa Amap Endereo: Rodovia Juscelino Kubitschek, Km 5, N 2600, CEP 68903-419, Macap, AP. Caixa Postal 10, CEP 68906-970 Fone: (96) 4009-9500 Fax: (96) 4009-9501 E-mail: sac@cpafap.embrapa.br
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Comit de Presidente: Rogrio Mauro Machado Alves Publicaes Secretria: Elisabete da Silva Ramos

Membros: Marcelino Carneiro Guedes, Raimundo Pinheiro Lopes Filho, Valria Saldanha Bezerra, Ricardo Adaime da Silva, Adilson Lopes Lima.

Expediente

Supervisor Editorial: Rogrio Mauro Machado Alves Normalizao: Adelina do Socorro SerroBelm Reviso de Texto: Elisabete da Silva Ramos Fotos: Gabriela Tomas Jernimo e Marcos Tavares Dias

1 edio 1 impresso (2011): 500 exemplares

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