Determinacin colorimtrica de Almidn en tejido vegetal

ABSTRACT: El almidn es el polisacrido de almacenamiento de carbohidratos importante en las plantas superiores, siendo el producto final de la fotosntesis. Para la determinacin colorimtrica de almidn se hace mediante la utilizacin de la prueba de antrona la cual ha sido utilizada muchas veces en la determinacin de hexosas en medio cido (de cido sulfrico), sin embargo tambin las pentosas y metil pentosas reaccionan con la antrona de forma similar, un color verde-azulado es caracterstico de esta prueba con un calentamiento estable1. El anlisis cuantitativo, se realiza espectrofotomtricamente gracias a que los compuestos orgnicos son capases de absorber radiacin electromagntica, ya que contienen electrones de valencia que pueden ser excitados a niveles superiores de energa2 Se obtuvo 29.62 0.01 g / mL de glucosa para una muestra de yuca y se obtuvo 68.04 0.01 g / mL para papa. Y la concentracin de almidn para yuca fue de 133.29 mg / 0.2097 g yuca y en la papa fue de 244.93 mg /0.2042 g papa. Donde se not que la muestra de papa contiene ms glucosa y por tanto ms almidn que la muestra de yuca.
compuesto fenolico (el reactivo de antrona en medio fuertemente acido)3

Figura 1 determinacion de la pureza del almidon utilizando el reactivo de antrona.

INTRODUCCIN El almidn es el carbohidrato de reserva ms abundante en los tejidos vegetales. Se encuentra en grandes cantidades en los tubrculos y semillas de cereales y leguminosas, de donde pueden obtenerse fcilmente en forma de grnulos, caractersticos por su forma y tamao. Despus de un proceso de molienda o trituracin adecuado, el almidn se puede extraer por arrastre con agua, aprovechando la diferencia en densidad presentada por los grnulos de almidn respecto a la fibra, lpidos y protenas del tejido vegetal. El almidn es un polisacrido que contiene alrededor de un 20% de una fraccin insoluble en agua, llamada amilosa y un 80% de una fraccin soluble denominada amilopectina. Ambas fracciones estn constituidas por unidades de -DGlucosa, pero difieren en el tamao y la configuracin molecular. El almidn es el carbohidrato de reserva de los vegetales y est constituido por dos polisacridos que ya se mencionaron, la amilosa es un polisacrido lineal, perfecto, formando enlace 1-4 entre la glucosa, lo cual favorece la formacin de estructuras helicoidales. Las ramificaciones presentes se realizan por enlaces 1-6 con un punto de ramificacin cada 15-30 unidades de glucosa. Cuando un carbohidrato se calienta en presencia de un acido fuerte, se lleva a cavo una serie sucesiva de reacciones de deshidratacin. Las pentosas producen el furfural y las hexosas el hidroximetilfurfural. La base del mtodo consiste en una medida fotomtrica del color, a una longitud de onda de 630 nm, producido por la condensacin del grupo carbonilo del furfural o hidroximetil furfural, con un

El almidn presente en la yuca es cerca de un 84,5% de la raz seca. En comparacin con otras races y tubrculos tropicales, almidn de yuca y su biosntesis han sido bien estudiados. Los grnulos de almidn son generalmente redondos con una superficie plana en un lado. El tamao de grnulos individuales vara de 5 a alrededor de 40 micras. Los almidones de yuca y papa comparten algunas similitudes: producen pastas relativamente suaves, con mayor viscosidad, mayor claridad, y menores tasas de retrogradacin que almidones de cereales. Tambin poseen menores niveles de protenas y lpidos. Por otra parte, las propiedades funcionales del almidn de papa estn influenciados por la presencia de fosfato grupos monosteres en su amilo pectina y su grnulo de gran tamao. En la industria se aplica para adhesivos, agroqumicos, cosmticos, detergentes, alimentos, petrleo y gas mdico, papel y cartn, productos farmacuticos, plsticos, purificacin, bebidas, textil.4 MTODOS El anlisis de determinacin colorimtrica de almidn en tejido vegetal se realiz conforme a lo estipulado en Introductory practical biochemistry. RESULTADOS La concentracin de glucosa en las muestras que se obtuvo fue de 29.62 0.01 g / mL de glucosa para una muestra de yuca y se obtuvo 68.04 0.01 g / mL para papa. Y la concentracin de almidn para yuca fue de 635.6 mg / g de yuca y en la papa fue de 1199.4 mg / g papa. TABLAS Y GRFICOS
Tabla 1. Determinacin de la absorbancia para la curva de calibracin de los patrones de glucosa a partir de una disolucin patrn de glucosa 1.002 0.0005 g /mL a una longitud de onda de 630.0 0.05 nm

CONCENTRACIN

ABSORBANCIA 0.002 A 0.000 0.053 0.151 0.394 0.454 0.630 0.782 1.560

MUESTRA

ABSORBANCIA 0.002 A

g / mL
Blanco 5.0010.004 g / mL 10.000.01 g /m L 20.00 0.01

CONCENTRACI N GLUCOSA (0.01

g / mL )

YUCA YUCA PAPA PAPA PAPA

0.504 0.432 1.060 1.025 1.140

31.90 27.34 67.09 64.87 72.15

g / mL g /m L g /m L g / mL g /m L

30.006 0.003 40.008 0.007 50.010 0.004 100.02 0.003

Tabla 4. Determinacin de la glucosa en muestra seca de yuca y de papa

MUESTRA
Tabla 2. Determinacin de la masa de una muestra de yuca y de papa

g / mL
15950 13670 26836 25948 28861

YUCA YUCA PAPA PAPA

MASA 0.0001 g MASA DE LA MUESTRA DE YUCA MASA DE LA MUESTRA DE PAPA

1 0.2097 0.2042

PAPA

Tabla 5. Determinacin de almidn en muestra seca de yuca y de papa

MUESTRA YUCA PAPA

mg 133.29 244.93

Tabla 3. Determinacin de la absorbancia y la concentracin de una alcuota de 5.00 mL 0.01 mL de una muestra incognita de papa y yuca a 630 0.05 nm

MUESTRA YUCA PAPA

g / mL
635.6 1199.48
Cuadro 6. Determinacin de almidn en un gramo de muestra en polvo en base seca de yuca y de papa

Grfica 1. Determinacin de la curva de calibracin de los

patrones de glucosa a partir de la disolucin madre de glucosa 1000,2 g/mL 0,0005 a una longitud de onda de 630 nm 0,002
1.8 Absorbancia 0,002 (A) 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 20 40 60 80 100 120 y = 0,0158x - 0,0136 R = 0,9997

Se dio una variacin en los datos obtenidos de la yuca, debido a que al agregar la antrona a la solucin esta estaba descompuesta, deben tenerse ciertos cuidados a la hora de realizar la determinacin ya que la antrona es un compuesto que al dejarlo cierto tiempo a temperatura ambiente se descompone lo que provoca una variacin en los datos obtenidos. Se recomienda que al agregar la antrona a los patrones y a las muestras estas se hagan en refrigeracin y as evitar una variacin por la rpida descomposicin de la misma, asimismo diluir ms las soluciones de las muestras de papa y yuca, ya que al hacer solo una dilucin estas forman el complejo con la antrona de un color muy fuerte que al analizarse inducira a salirse de la curva y no lograr determinar la concentracin de almidn.

Concentracin g/mL 0,01

CONCLUSIONES La tcnica de colorimetra da un valor cercano al real en la determinacin de almidn de tubrculos como la papa y yuca, ya que se utiliza una curva de calibracin para obtener la concentracin de la glucosa en ellas, esto facilit que por medio de la recta a partir de la curva se pudiera obtener dicha concentracin. La determinacin cuantitativa de almidn en la papa y yuca suministr claramente el porcentaje de diferencia entre las dos, el cual se compar con datos obtenidos en otros anlisis.

DISCUSIN DE RESULTADOS La concentracin de almidn en la papa y yuca se obtuvo por el mtodo colorimtrico, esto gracias a que la dispersin de los grnulos de almidn tratados con etanol, cido perclrico y con la antrona me forma un compuesto coloreado, que determin la cantidad de glucosa en el almidn. Las concentraciones se determinaron a partir de una curva estndar, hecha a partir de una solucin madre de glucosa. Se determin que el contenido de almidn en la papa es considerablemente alta en comparacin a la yuca, esto puede deberse al alto valor de amilosa de la papa y al tamao de grnulo, que en el caso de la papa es ms grande. Segn anlisis anteriores de determinacin de amilosa en los tubrculos la cantidad de amilosa en la papa es de un 23% en comparacin con la yuca de un 18%.5 El alto valor de amilosa contenido en la papa, indica que esta es de digestin lenta, mientras que el de la yuca al ser baja es alta digestin, estas propiedades son de gran importancia, ya que los grnulos del almidn de la papa y yuca tienen un porcentaje pequeo de grasas, las cuales forman un complejo con la amilosa, estas reducen el hinchamiento y la solubilizacin de los grnulos, lo que provoca que no se pueda romper el enlace que forma la amilosa con los lpidos, sin embargo al ser consumido tiende a ranciarse en al almacenarse en el cuerpo.6

REFERENCIAS
1 2 3 4 Bailey, R.W. Biochemical Journal. 68. (1953). 669. Skoog, D.A.; Leary, J.J. Anlisis instrumental. IV edicin. McGraw-Hill/Interamericana de Espaa, S.A.U. Espaa, Madrid 1994. Pg. 174-175 Ramirez H, Quimica de alimentos Editorial Universidad de Costa Rica 2003. Pg. 76 Dominique D, et all Comparison of Pasting and Gel Stabilities of Waxy and Normal Starches from Potato, Maize, and Rice with Those of a Novel Waxy Cassava Starch under Thermal, Chemical, and Mechanical Stress, Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT), Cali, Colombia, 2012 CIP. Programa Colaborativo Biodiversidad de Raices y tubrcu los andinos. 1995. Pg. 330 Ospina, B;Ceballos, H. La Yuca en el Tercer Milenio. 2002. Cali, Colombia. Pg.30

5 6

Apndice

Clculos. Concentracin de glucosa en el patrn 1

0.5 mL x 1000.2 g /mL = 500.1g

500.1 g / 100 mL = 5.001 g / mL glucose

Incertidumbre para el patrn 1 sy = ((0.0005/1000.2)2 + (0.002/0.500)2+(0.01/100.0)2)1/2= (0.004) g / mL

*Siguiendo el procedimiento anterior se realiza el clculo de incertidumbre para las otras disoluciones patrn. Concentracin de las disoluciones patrn: Concentracin de la disolucin patrn 1= 5.0010.004 g / mL Concentracin de la disolucin patrn 2 = 10.00 0.01 g / mL Concentracin de la disolucin patrn 3 = 20.00 0.01 g / mL Concentracin de la disolucin patrn 4 = 30.006 0.003 g / mL Concentracin de la disolucin patrn 5 = 40.008 0.007 g / mL Concentracin de la disolucin patrn 6 = 50.0100.004 g / mL Concentracin de la disolucin patrn 7 = 100.020 0.003 g / mL

Datos obtenidos segn la curva de calibracin g / mL realizada en Excel:

Ecuacin de la lnea de tendencia: y = 0.0158x-0.0136 R2 = 0.997

Concentracin de glucosa en la muestra 1 yuca a partir de la curva de calibracin Concentracin = (0.432/0.0158) = 27.34 g / mL

27.34 g / mL x (100 mL/5 mL) (100 mL/4 mL) (10 mL) /1000 = 136,70 mg *Siguiendo el procedimiento anterior se realiza el clculo de las concentraciones para las otras muestras para papa. Concentracin de almidn en la muestra 1 yuca a partir de la curva de calibracin

136.70+159.50 /2 = 148.10 mg * 0.9 = 133.29 mg Determinacin del almidn en muestra seca de yuca en un gramo de muestra en polvo en base seca

133.29 mg* 1.0 g/0.2097 g = 635.62 mg