-GLUTAMILTRANSFERASE

BIOQUMICA CLNICA

FINALIDADE APRESENTAO 1 x 10 flaconetes* Sistema colorimtrico para quantificao da Substrato Tampo 1 x 14mL -Glutamiltransferase no soro ou plasma. Soluo inibidora 1 x 60mL Somente para uso diagnstico in vitro. Nitrito de Sdio 1,5% 1 x 5mL Sulfamato Amnio 10% 1 x 4mL PRINCPIO 1 x 25mL A -Glutamiltransferase ( GT) uma enzima Reagente de cor Soluo padro 1 x 3mL que catalisa a transferncia do grupo Glutamil, da -Glutamil-p-Nitroanilida (substrato), para a Glicilglicina (receptor), com liberao de * Cada flaconete contm 26mg de slidos. p-Nitroanilina, de acordo com a seguinte reao:
Glutamil-p-Nitroanilida + Glicilglicina GT -Glutamil-Glicilglicina + p-Nitroanilina

NMERO DE TESTES 10 testes

EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS A p-Nitroanilina liberada diazotada atravs da reao de Espectrofotmetro ou fotocolormetro capaz de medir a absorvncia em 530nm ou filtro verde. Bratton-Marshal modificada: Tubos de ensaio. Pipetas graduadas. p-Nitroanilina + NaNO2 meio cido composto diazo Pipetas semiautomticas 50L. Ponteiras descartveis. gua destilada ou deionizada. Composto diazo + N - (1-Naftil)-Etilenodiamina Banho maria (37oC). composto final de cor rsea Cronmetro. A absorvncia do composto final medida em ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS 530nm ou filtro verde. REAGENTES Substrato: armazenar temperatura de 2-8oC. PARTICULARIDADES DO SISTEMA Estvel at a data de vencimento indicada no O substrato e o receptor, liofilizados para testes rtulo do frasco, obedecidas as condies de individuais, apresentam-se otimizados, permitindo armazenamento. um tempo de incubao de 10 minutos e linearidade Tampo: armazenar temperatura de 2-8 oC. at a concentrao de 175 U.I./L. Estvel at a data de vencimento indicada no Tempo total gasto no teste : 20 minutos. rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. METODOLOGIA Soluo inibidora: armazenar temperatura ambiente (2-30oC). Estvel at a data de vencimento Naftalin modificado. indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. REAGENTES Substrato: cada frasco contm, sob forma Nitrito de Sdio 1,5%: armazenar temperatura o liofilizada, 5,38mol de -Glutamil-p-Nitroanilida e de 2-8 C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de 100mol de Glicilglicina. armazenamento. Tampo: soluo tampo de Tris 0,1M, pH 8. Sulfamato de Amnio 10%: armazenar Soluo inibidora: soluo de cido Actico 1M. temperatura de 2-8 oC. Estvel at a data de Nitrito de Sdio 1,5%: cada frasco contm 1,09 vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas mmol de Nitrito de sdio em soluo. as condies de armazenamento. Sulfamato de Amnio 10%: soluo aquosa de Reagente de cor: armazenar temperatura de Sulfamato de Amnio a 10%. 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada Reagente de cor: soluo 50mg/dL de N-1-Naftil- no rtulo do frasco, obedecidas as condies de Etilenodiamina. armazenamento. Soluo padro: soluo de p-Nitroanilina em Soluo padro: armazenar temperatura de cido Clordrico 0,1M. Cada 0,5mL corresponde 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada a 100U.I./L de -Glutamiltransferase, dentro da no rtulo do frasco, obedecidas as condies de metodologia adotada. armazenamento.

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CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitandose o contato com pele e mucosas. Em caso de contaminao acidental, lavar a rea afetada com gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar ainda a simbologia constante nos rtulos do produto:

Homogeneizar e ler a absorvncia de T em espectrofotmetro ou fotocolormetro, em 530nm ou filtro verde, zerando o aparelho com o tubo B. A cor final permanece estvel por 40 minutos, temperatura ambiente (20-30oC). Como a reao colorimtrica segue estritamente a lei de Beer, basta a determinao de um fator (F). Rotular 3 tubos com P (padro). Proceder como segue:
P 500L 2,5mL 2 gotas P 500L 2,5mL 2 gotas P 500L 2,5mL 2 gotas

Corrosivo

Irritante

Soluo padro Soluo inibidora Nitrito de Sdio 1,5%

AMOSTRA Soro ou plasma (colhido com EDTA ou heparina). A enzima permanece estvel por 12 dias, conservada entre 2-8oC, ou por 3 meses (aproximadamente), a 20oC negativos. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. PROCEDIMENTO TCNICO Preparo do substrato de uso: A um frasco de substrato, adicionar 1,2mL de tampo. Agitar. O substrato se dissolve. Alguns cristais em suspenso no interferem com o desenvolvimento da tcnica. Aps reconstituio, sua estabilidade de 5 dias, sob refrigerao (28oC), ou 15 dias, a 10oC negativos. Identificar dois tubos de ensaio com B (branco) e T (teste). Proceder como segue:
Substrato de uso B 0,5mL T 0,5mL

Agitar e deixar repousar durante 3 minutos.

Sulfamato de Amnio 10% 2 gotas

2 gotas

2 gotas

Agitar e repousar durante 2 minutos. Reagente de cor 1,0mL 1,0mL 1,0mL

Homogeneizar e ler as absorvncias de P em espectrofotmetro ou fotocolormetro, em 530nm ou filtro verde, zerando o aparelho com gua destilada. Anotar as respectivas absorvncias e tirar a mdia aritmtica. CURVA DE CALIBRAO
Padro Absorvncia Conc. (U.I/L)

Colocar em banho maria, 37oC, durante 2 minutos. Amostra Incubar a 37oC, durante 10 minutos. Soluo inibidora Retirar do banho maria. Amostra Nitrito de Sdio 1,5% 50L 2 gotas 2 gotas 2,5mL 2,5mL 50L

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

0.000 0.033 0.060 0.121 0.251 0.376 0.615 0.932 1.076 1.140 1.205

0 5 10 20 40 60 100 150 175 200 250

Agitar e deixar repousar durante 3 minutos. Sulfamato de Amnio 10% 2 gotas 2 gotas

Agitar e deixar repousar durante 2 minutos. Reagente de cor 1,0mL 1,0mL

Obs.: No utilizar esta curva para determinar o resultado de seu ensaio. A curva de calibrao a representao grfica da relao entre os valores das absorvncias com os valores das concentraes de um conjunto de solues padro. A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear at 175U.I./L. Obtendo-se valores mais elevados, dilui-se a amostra com soluo fisiolgica e procede-se a nova

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dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. O kit de -glutamiltransferase Doles possui padro no intervalo de linearidade da metodologia adotada. O laboratrio deve realizar o ensaio com o padro que acompanha o kit e calcular seu fator de calibrao (F), a exemplo do demonstrado nos clculos abaixo. O fator deve ser refeito periodicamente e a cada lote do produto. Os padres utilizados na montagem da curva de calibrao foram ajustados conforme descrito em A Routine Procedure for Estimating Serum g-Glutamyltranspeptidase Activity, Naftalin, Margaret Sexton, J.F. Whitaker e D. Tracey, Clin. Chim. Acta, 26 (1969) pag. 293-296. CLCULOS
100 Fator (F) = Mdia aritmtica das absorvncias de P Teste (T): 0,100

CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2.A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade. 3.Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4.As pipetagens devem ser precisas. 5.O nvel da gua do banho maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. A temperatura (37 o C) deve ser rigorosamente observada. 6.O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomendase utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles). VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao, sugerimos os seguintes valores: Homens 4 - 26 U.I./L Mulheres 4 - 22 U.I./L SIGNIFICADO CLNICO A dosagem de -GT pode ser vista como uma prova de estudo da capacidade excretora do fgado. Embora a enzima se apresente aumentada nas hepatites agudas, principalmente nas formas colestticas que mostra aumentos considerveis. Seu estudo de grande ajuda nas colestases intra e extra hepticas, nas quais se encontra grandemente aumentada. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados 41 testes em amostras cujos teores de -glutamiltransferase situavam-se no intervalo de 4 a 236 U.I./L. Esses ensaios foram realizados em paralelo com uma metodologia de referncia. A comparao do kit de -Glutamiltransferase Doles (Y) com a metodologia mencionada (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 1,568 + 1,021X, sendo o coeficiente de correlao 0,99. Adio de -Glutamiltransferase (proveniente de extrato de rim de porco), na concentrao de 50U.I/L, a 8 amostras de soro cujos valores de -Glutamiltransferase oscilavam entre 14 e 110 U.I./L, mostrou um ndice de recuperao situado entre 97 e 102%. O erro da mdia foi de 2,95%.

Exemplo: Padro (P): 0,600; 0,598; 0,602

0,600 + 0,598 + 0,602 Mdia aritmtica das absorvncias de P = = 0,600 3 Fator (F) = 100 = 167 0,600

GT (U.I./L) = absorvncia T x F = 0,100 x 167 = 16,7 Uma U.I. de -Glutamiltransferase a quantidade de enzima que libera 1mol de p-Nitroanilina/ litro de soro/ minuto / 37oC. LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder levar a resultados errneos. Algumas drogas como: lcool, fenitona e fenobarbital, podem provocar valores elevados de GT. Valores artificialmente elevados de GT podem ser encontrados em pacientes no uso teraputico de sulfas. Algumas drogas, como os anticoncepcionais orais, podem provocar valores reduzidos de GT. Os nveis de GT tambm se elevam na doena heptica alcolica aguda ou crnica e nas neoplasias hepticas, primrias ou metastticas. Para uma melhor investigao, sugere-se a dosagem em paralelo de TGO, TGP, fosfatase alcalina e eletroforese de protenas.

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Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 3 amostras, obtendo-se os seguintes resultados:

Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3

Concentrao (U.I./L)

9,08 0,43 4,73

22,21 0,67 3,02

83,03 1,03 1,24

Desvio padro

Coeficiente de variao (%)

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguintes resultados:

Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3

Concentrao (U.I./L)

9,77 0,47 4,81

19,12 0,79 4,13

75,04 1,22 1,63

Desvio padro

Coeficiente de variao (%)

Especificidade: a presente metodologia especfica para determinao de -Glutamiltransferase no soro ou plasma. Sensibilidade: a absorvncia encontrada, de 0.006, corresponde a 1U.I./L de concentrao de -Glutamiltransferase, quando realizados os testes em espectrofotmetro, a 530nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio. O substrato e o receptor esto em concentraes otimizadas, permitindo assim a atividade enzimtica mxima da -Glutamiltransferase. Diluio da matriz: estudos sucessivos de diluio da matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia de Naftalin modificado. Substncias interferentes: o plasma utilizado na dosagem da -Glutamiltransferase poder ser colhido somente com EDTA ou heparina. Estudos realizados comprovam que o uso de anticoagulante contendo fluoreto, oxalato e citrato, em concentrao de 1g/L, inibem a -Glutamiltransferase em aproximadamente 15%. A hemlise e o contato prolongado com os eritrcitos no interferem na anlise. Certas drogas alteram os nveis de -Glutamiltransferase. Para controle de tal interferncia recomenda-se que o paciente seja questionado quanto ao uso de medicamentos.

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Naftalin L., Sexton M. Whitaker JF, Tracey D.: Clin. chem. Acta 26: 293, 1969. Rosalki S. B.: Advances in clinical chemistry, vol. 17, 53-107; Academic Press. 1975. Pagana, K.D.: Mosbys diagnostic and laboratory test reference, 362-363; 1992. Chernecky, C.C.; Krech, R.L.; Berger, B.J.: Laboratory tests and diagnostic procedures, 524-525; 1993. Noe B.A; Reck R.C.: Laboratory medicine, the selection and interpretation of clinical laboratory Studies, 554 - 561; 1994. Tibrcio H.M.: Controle interno da qualidade analtica - 1a. ed, maro/1995. Doles: dados de arquivo TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: n0 10231810013 Reviso: 17 (07/2010)

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