FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGA AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE CIANOBACTERIAS, BACTERIAS PRPURAS, BACTERIAS VERDES PREPARACIN DE LA COLUMNA DE WINOGRADSKY

CURSO

: MICROBIOLOGA ACUATICA

DOCENTE

: M.Sc. OLGA FANCIA ARANA

NOMBRE

UGAZ UGAZ ZINA ANANY

CDIGO

: 082233 - E

CICLO

: 2012-II
Lambayeque, Mayo del 2013

INTRODUCCIN

La columna de Winograsky es una demostracin de cmo los microorganismos ocupan microespacios altamente especficos de acuerdo con sus tolerancias medioambientales y sus necesidades vitales (requerimientos de carbono y energa) y que, adems, ilustra como diferentes microorganismos desarrollan sus ciclos, y la interdependencia que llega a existir entre ellos (las actividades de un microorganismo permite el crecimiento de otro y viceversa).

Esta columna es un sistema completo y autnomo de reciclamiento, mantenido solo por la energa de la luz. La columna aqu descrita se enfoca directamente al ciclo del Azufre, pero se podra realizar con los otros ciclos biogeoquimicos tales como del nitrgeno, carbono y otros elementos. Entre cuatro y seis semanas despus de su instalacin, la columna debe estabilizarse en tres ambientes bsicos distintos en los que se desarrollarn comunidades bacterianas especficas en funcin de sus requisitos medioambientales. Comenzando desde la parte ms profunda de la columna:

Zona anaerobia (sin Oxgeno); Zona aerobia (rica en Oxgeno).

OBJETIVOS: Preparacin de la columna de winogradsky Aislamiento e identificacin de cianobacterias, bacterias prpuras, bacterias verdes.

MARCO TERICO: Columna De Winogradsky Esta tcnica fue desarrollada inicialmente por el microbilogo ruso Sergei Winogradsky(1856-1953), quien us la columna para estudiar los microorganismos del suelo. La columna de Winogradsky es un sistema que permite observar en el laboratorio el proceso evolutivo de los microorganismos, es decir, el proceso de adaptacin a los diferentes ambientes empleando diferentes estrategias para la obtencin de energa. Una vez que se prepare la columna y se exponga a la luz solar, se desarrollar una sucesin de comunidades bacterianas interrelacionadas metablicamente, de un modo similar a lo que ocurre en la naturaleza, que se podrn observar fcilmente por su distinta coloracin. Adems, la columna es un sistema anxico en miniatura que puede usarse como suministro a largo plazo de bacterias para cultivos de enriquecimiento Microorganismos de la columna de Winogradsky

Una vez establecida la columna, se pueden diferenciar tres zonas caractersticas en base a su concentracin relativa de oxgeno: 1) zona aerbica, es la ms superficial, dispone de una alta concentracin de oxgeno

2) zona microaerfila, inmediatamente debajo de la anterior, con una menor concentracin de oxgeno 3) zona anaerbica, que constituye el lecho de lodo.

Las algas y cianobacterias forman una capa superficial de color verde brillante, y al producir oxgeno ayudan a mantener la aerobiosis en la zona superior de la columna. Mientras que, en el fondo de la columna, las bacterias reductoras del sulfato producensulfuro, que provoca el crecimiento de bacterias rojas y verdes del azufre (fottrofosanoxignicos). De modo que se establecen dos gradientes en la columna, uno de oxgeno y otro de sulfuro de hidrgeno (H2S) Comenzando desde la parte ms profunda de la columna, tenemos: Zona anaerobia (sin Oxgeno) Zona microaerofila Zona aerobia (rica en Oxgeno). Zona anaerbica Estazona contiene H2S (procedente del fondo), en la zona anaerbica superior predominan las bacterias fotosintticas anaerobias, y en la columna se observan una serie de bandas de colores rojo y verde:
Bacterias rojas no del azufre:

Rhodospirillum Rhodomicrobium Rhodopseudomonas

Son Bacterias anaerobias fotoorgantrofas,

que slo pueden realizar la fotosntesis en presencia de una fuente de carbono orgnico

Forman una capa de color rojo-anaranjado. Las bacterias verdes no del azufre son termfilas y, por lo tanto, no crecen en la columna a temperatura ambiente. Bacterias rojas del azufre Chromatium Thiospirillum Forman una capa de color rojo-prpura Thiocapsa
Bacterias verdes del azufre

Chlorobium Pelodyctium Estas bacterias son fotolittrofas y realizan una fotosntesis anoxignica, no producen oxgeno ya que no utilizan H2O como elemento reductor sino H2S, generando en este proceso sulfatos

La reaccin que tiene lugar es la siguiente:

Estos microorganismos aparecen como zonas decrecimiento en el lodo de la columna, pero tambin pueden desarrollarse en el agua si los fottrofos oxignicos son escasos. En la zona anaerobia ms profunda, de color negro intenso, aparecen microorganismos capaces de realizar respiracin anaerbica y fermentacin.
Bacterias reductoras del sulfato (BRS):

Desulfovibrio Desulfobacter Desulfotomaculum Desulfomonas

Usan el sulfato, u otras formas parcialmente oxidadas de azufre como el tiosulfato y generan grandes cantidades de H2S en el proceso.

La reaccin de reduccin bacteriana del sulfato es la siguiente:

Este H2S reaccionar con el hierro presente en el sedimento, produciendo sulfuro de hierro (II), que precipita y da el color negro. Es por esto que, en la naturaleza, los sedimentos acuticos son frecuentemente negros. La reaccin sera la siguiente: Sin embargo, no todo el H2S reacciona con el hierro (II), parte de ste difunde hacia arriba a lo largo de la columna de sedimentos y es utilizado por las bacterias verdes y rojas del azufre que crecen en las zonas superiores.

Bacterias fermentadoras

Utilizan la celulosa del papel aportado como fuente primaria para su metabolismo, aparecen las bacterias del gnero Clostridium Clostridium :
Son anaerobias estrictas, y no empiezan a crecer hasta que el oxgeno desaparece del sedimento. Estas bacterias degradan la celulosa hasta residuos de glucosa y, a continuacin, fermentan la glucosa para obtener la energa que necesitan, produciendo una serie de compuestos orgnicos simples (etanol, cido actico, cido lctico, cido succnico, etc.) como productos finales de esa fermentacin. Estos compuestos orgnicos sern, a su vez, respirados por las bacterias reductoras del sulfato. Cuando la celulosa se agote, usarn la materia orgnica producida por el resto de bacterias.

Zona microaerfila Esla zona en la que solapan ambos gradientes, el de oxgeno y el de sulfuro de hidrgeno. Aparecen bacterias oxidadoras del azufre como Beggiatoa Thiothrix Thiobacillus
Usan como fuente de carbono la materia orgnica y oxidan el H2S que llega por difusin desde las capas inferiores a azufre elemental.

La reaccin qumica que se lleva a cabo es la siguiente (reaccin de Bunsen):

Son, por lo tanto, microorganismos mixtrofos. Estos gneros acumulan grnulos de azufre en sus citoplasmas por oxidacin del H2S. Si se deja evolucionar el sistema, cuando la concentracin de H2S es muy baja, los grnulos de azufre elemental intracitoplasmtico presentes en estas bacterias empiezan a desaparecer por oxidacin total a sulfato: Zona aerbica Esta es la parte de la columna ms rica en oxgeno y ms pobre en azufre. El agua de la parte superior de la columna contiene abundantes poblaciones de microorganismos aerobios, que aparecen normalmente en hbitats acuticos ricos en materia orgnica (estanques poco profundos, arroyos, etc.)

Suelen ser microorganismos flagelados, lo que les permite moverse y establecerse en nuevas reas, as como microorganismos fotosintticos: algas (diatomeas) y cianobacterias filamentosas. El oxgeno que producen estos productores primarios difunde desde la superficie, creando condiciones similares a las que existen en un lago con sedimentos ricos en nutrientes

Bacterias que encontramos en la columna

Para el estudio de las bacterias de la columna de Winogradsky, se puede introducir una pipeta larga para recoger una pequea muestra de lodo o agua, que puede ser usada en microscopa y para inocular medios de cultivo de enriquecimiento para aislamiento y caracterizacin MATERIALES Y REACTIVOS Muestra: Agua residual Lodo residual

De la columna: Tubo o probeta de 200 x 20 mm. Aserrn fino. Hojas secas. Alas de insectos. Yema de huevo cocido. Papel peridico remojado y desmenuzado. Mortero, piln. Cuchara. Reactivos Extractos de levadura. CaCO3 (carbonato de calcio) como agente reductor. CaSO4 (sulfato de calcio)

PROCEDIMIENTO Preparacin de lodo residual enriquecido. Colocar en el mortero la yema de huevo ms el polvo de las alas de insecto y hojas secas.

Homogenizar el contenido. Agregar aserrn fino, y homogenizar lo mejor posible. Luego agregar el papel peridico y mezclar.

Agregar luego lodo residual, formando una mezcla homognea.

Agregar reactivos.

Preparacin de la columna de Winogradski. Agregar el lodo residual enriquecido a la probeta, hasta 1/3 de ella, tratando de no manchar las paredes ni formando burbujas. Agregar luego lodo residual no enriquecido, unos 3cm aproximadamente, siguiendo el mismo proceso anterior. Agregar agua residual, aproximadamente un tercio de la probeta. Cubrir luego con una tapa de vaselina, evitando la formacin de burbujas.

Cubrir la probeta con doble papel de aluminio y amarar fuertemente para asegurar un ambiente anaerobio.

Incubacin: Colocar el tubo en posicin vertical con luz artificial continua, por 2 semanas. Del aislamiento e identificacin: Retirar cuidadosamente el papel aluminio de la probeta, retirar la vaselina. Sacar muestra de agua, de las paredes de la probeta (muestra 1) a viales estriles.

De la capa de bacterias verdes hacer un raspado de las paredes y colocar a viales con agua esteril o solucin salina fisiolgica esteril.

Del fondo de la probeta, tambin realizar el mismo procedimiento (Bacterias sulfito reductoras) Hacer tincin gram de cada muestra (2 laminas). Identificar por morfologa.
Identificacin y Resultados

RESULTADO FINAL DE NUESTRA COLUMNA- Grupo 1

Zona A Zona B

Zona C

Zona D

ZONA A
No se logr identificar especies de esta zona.

ZONA B
Se logr identificar las siguientes especies

ESPECIE: Beggiatoa sp. .(bacteria sulfito oxidasa)

Fotografas de internet

Fotografa tomada de nuestra columna

ESPECIE: Thiobacillus sp.

Fotografas de internet

Fotografa tomada de nuestra columna

ZONA C
Se logr identificar las siguientes especies ESPECIE: Chromatium sp .(bacteria prpura)

Fotografas de internet

Fotografa tomada de nuestra columna

ESPECIE: Rhodospirillum sp

Fotografas de internet

Fotografa tomada de nuestra columna

ZONA D
Se logr identificar las siguientes especies

ESPECIE: Clostridium

Fotografa de internet

Fotografa tomada de nuestra columna

ESPECIE: Desulfovibrio (bacteria reductora de sulfatos)

Fotografas de internet

Fotografa tomada de nuestra columna

CONCLUSIN.
Se logro el estudio microbiolgico de cada estrato y el aislamiento de un

determinado tipo de bacterias.

La columna de Winogradsky es una demostracin de cmo los microorganismos

ocupan micrositios muy especficos de acuerdo a su medio ambiente y sus tolerancias de carbono y las necesidades de energa.
Cada capa formada en este ecosistema representa el nicho ecolgico de un grupo

de microorganismos, que se adapta a tales condiciones por el sustrato que metaboliza.

RECOMENDACIONES
Se recomienda que mientras ms expuesto a la luz se encuentre la columna el desarrollo de los microorganismos ser mucho ms rpido.

LINKOGRAFA
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioBiodiversidad.htm http://microilustres.blogspot.com/2007/01/winogradsky-sergei-1856-1953.html
http://redalyc.uaemex.mx/pdf/920/92050311.pdf