El estudio de los Fluidos Seminales en la Escena del Crimen se encuentra directamente ligado a los Crmenes de ndole Sexual y sern

de vital importancia al momento de realizar la reconstruccin del hecho y el establecimiento de identidad del agresor o agresores. El Semen es la sustancia que segregan los rganos reproductores masculinos y en la cual se encuentran los espermatozoides. Donde puede ser encontrado: Manchas en vestimenta, sbanas, almohadas, camisones, muebles, alfombras, pisos, vehculos, tapizados de automviles, etc. El semen antes de secarse, posee un olor alcalino caracterstico, y contiene millones de espermatozoides. Al secarse, la mancha pierde su olor, los espermatozoides mueren, adquiere un color blanco grisceo, y a veces amarillento, e imparte a las telas un efecto almidonado. Qu se estudia en el Semen: ( en este informe solo se desarrollar el primer punto) Si de hecho es semen Si de serlo es o no humano Muchas veces el grupo sanguneo Si hubo eyaculacin interna o externa Si el agresor haba consumido drogas

Composicin del semen

El semen es un lquido de aspecto lechoso, opalescente, ligeramente amarillo. Posee un pH de 7.2 7.3 y est compuesto por el plasma seminal y los espermatozoides que pueden ser separados por centrifugacin. Es importante tener en cuenta que el esperma es producto de tres porciones distintas del sistema genital y sus composiciones son diferentes. La primera proviene de las glndulas de Cowper , de ph 8.4 que neutraliza la acidez de la uretra. La fraccin prosttica y por ltimo los espermatozoides junto con el lquido segregado por las vesculas seminales. Los espermatozoides: Son clulas mviles constituidas por una cabeza, cuello, cuerpo y cola con una longitud que vara de las 50 a 70 micras Se calcula que en el producto normal de una eyaculacin se encuentran alrededor de 60.000.000 de espermatozoides por ml de semen. Y sus acepciones son la oligozoospermia (menor cantidad) y azoospermia (falta de espermatozoides). La cabeza del espermatozoide es ovalalada piriforme y representa alrededor del 10% del total del largo. En la misma se distinguen una parte anterior ( acrosoma ) y otra posterior (ncleo) y se encuentra cubierta por una tenue membrana, la galea capitis . Transporte y Cuidado de las manchas como evidencia: Dado que los estudios de semen se realizan principalmente en base a la presencia de espermatozoides, es de cabal importancia el proteger las prendas que contengan a los mismos. Muchos expertos consideran que la presencia de un espermatozoide completo es la nica prueba irrefutable de la presencia de semen. Por esta razn, los artculos debern manejarse con mucho cuidado, no deber doblarse ni enrollarse la parte manchada y definitivamente no deber someterse a friccin. Estudios que se realizan en el semen. Existen para la investigacin de las manchas seminales una cierta variedad de estudios que a continuacin sern desarrollados. Es importante destacar que para muchos laboratorios periciales, la nica prueba irrefutable de presencia de semen en la muestra es la observacin microscpica de un espermatozoide completo. Por esta razn se mencionaran una serie de anlisis recordando que en su mayora son nicamente de carcter Preliminar.

1. Mtodos Fsicos: Examen UV Los mtodos fsicos consisten en la exposicin de la mancha ala radiacin ultravioleta, la cual inducir una fluorescencia caracterstica con una intensidad mxima de cerca de 4200mu. De todas formas, el gran problema que presenta la fluorescencia es que no es especfica del semen, sino que producir la misma reaccin con otros fluidos biolgicos. Esta tcnica es de utilidad principalmente para el estudio de grandes superficies donde se sospecha que ha habido un delito de ndole sexual y no ha podido ser determinado el sitio donde presuntamente se encontraran las manchas. Estas ultimas fluorescern sobre fondos no fluorescentes, por lo que en algunos casos donde las prendas contienen fibras de blancos pticos, se obtiene el efecto inverso donde las manchas fluorescern con menor intensidad al resto de la tela. Los autores A. R. Calloway y sus colaboradores aconsejan la siguiente aplicacin de luces para el anlisis de las manchas: Examen directo con luz ultravioleta de longitud de onda 254nm a temperatura ambiente. Aqu se deberan observar bien salvando sobre tejitos fluorescentes. Examen directo con luz de longitud de onda 365nm que en general es poco efectiva. Examen a lux UV previa refrigeracin (nitrgeno a temperatura de ebullicin, -195 C ) ,pero la observacin ser satisfactoria si el material es colocado dentro de un bloque de hielo seco. Las manchas de semen presentaran una fosforescencia qie persistir por 20 segundos luego de retirada la fuente UV.

2. Mtodos Cristalogrficos: La Reaccin de Florence

Este mtodo se basa en la formacin de cristales de yoduro de colina, la cual se encuentra presente en el esperma en forma de fosforil -colina y lecitina. El reactivo de Florence se constituye de 2.54 gr. de Iodo metlico, 1.56 gr. de Ioduro de potasio y 30 mililitros de agua destilada. Si la mancha se encuentra en una superficie dura se proceder a rasparla y colocar los residuos en el portaobjetos. Si por el contrario la mancha est en una sup. Blanda, la misma se extraer con la ayuda de agua destila, colocandolo en un porta objetos y secando a Bao Maria. Se colocar un cubreobjetos y una o dos gotas del reactivo de florence , para que por capilaridad corra entre el porta y el cubre. Se lo deja en reposo por no mas de 20 minutos, para que los cristales no se disuelvan, y se observa al microscopio. Los cristales de Ioduro de Colina son lminas romboidales de color pardo. Deber recordarse que, como mencionado anteriormente, la colina no es exclusiva del semen, pero resultar de gran importancia en el anlisis de muestras de esperma asprmicas , principalmente porque no se conocen otros fluidos que registren simultneamente una alta presencia de colina junto con fosfatasa cida como en el esperma.

3. Mtodos Microscpicos
Como fue destacado anteriormente, la presencia de un espermatozoide completa es la prueba innegable de semen como parte constitutiva de la mancha. Si la mancha se encuentra todava hmeda, o por lo menos es de reciente data, por lo general esta determinacin no ser muy compleja, pero puede complicarse con el paso sucesivo del tiempo, la contaminacin adquirida y la superficie en la que se encuentra la muestra. Es muy comn que en las muestras puedan detectarse parciales de espermatozoides, ya sean cabeza o cola, pero debido a la contaminacin con la que generalmente se encuentran estos restos, muchas veces estas clulas pueden ser confundidas con esporas y bacterias. Y no debe olvidarse tambin el caso de los sujetos azoosprimicos , en los que no habr secrecin de espermatozoides en lo absoluto. Del libro Tratado de Criminalstica Tomo II de la Polica Federal Argentina citaremos las tcnicas recomendadas para la mejor observacin de estas clulas. En un tubo de colocar una pequea fraccin de la zona maculada cubierta con la menor cantidad posible de agua destilada y se colocar en una centrfuga. Se centrifugar por 5 minutos y a continuacin se retirar el trozo de genero soporte escurrindolo cono una varilla de extremo plano. Se centrifugar a 1200 rpm por 5 minutos Decantar el liquido sobrenadante y agitar enrgicamente el residuo slido del fondo del tubo

 Finalmente se tomara una gota del residuo y ponindolo en porta objetos y cubrindolo ose observar a l microscopio. Una alternativa a la centrifugacin es la colocacin de la tela con la mancha hacia abajo sobre un vidrio de reloj. Luego de agregar unas gotas de agua destilada, el vidrio se cubrir con un cristalizador con un tiempo dependiente de la antigedad de la mancha. Para un manchar de varias horas se recomiendan 30 minutos. Luego, se tomara el soporte con una pinza y transferir el contenido a un portaobjeto por contacto. Para los casos en lo que hay contaminacin sangunea, se recomienda utilizar una solucin de saponina en el preparado, la cual alisara los hemates. Un dato importante es la supervivencia que presentan los espermatozoides en fluido vaginal, en el que fueron encontrados inmviles hasta 100 das despus de ser eyaculados. Para la coloracin de los preparados se recomienda la tcnica de May- Grnwald , May- Grnwald - Giemsa , azul de Loeffler , Hematoxilina-eosina, etc.

4. Mtodos Cromatograficos : TLC

Los mtodos de cromatografa en capa delgada son utilizados principalmente cuando no es posible visualizar un espermatozoide completo. En este caso se tomara como determinante la negativa y como orientativa la reaccin positiva. En la cromatografa se analizaran las bases nitrogenadas colina y espermita y la enzima fosfatasa cida. Aqu describiremos la tcnica desarrollada por D. Hessel y F. Medgalin : Para la toma de muestra se recomienda cortar 1cm2 del soporte y centrifugarlo con 0.5 ml de solucin 1 N de c clorhdrico. Si la muestra es producto de un raspado, se tomara la cantidad encontrada en 1 cm2 y se proceder de la misma manera. Agitar bien para la disolucin y salificacion de las bases y centrifugar. Sembrar 20ul del extracto y 10ul de semen testigo. De poseerlas, es recomendable sembrar 10ul de colina y 10 de espermita. La corrida se realizar en clorhdrico 1N. Cubrir adecuadamente el tercio superior de la zona de la corrida cromatogrfica y revelar el resto con el reactivo de Dragendorff : Solucin A: Subnitratote bismuto = 850 mg cido Actico = 10 ml Agua destilada = 40 ml Solucion B Ioduro de postasio = 40 gr Agua destilada = 100 ml Se mezclan 5 ml de la solucin A con 5 ml de la solucin B en 100 ml de agua en que se habrn disuelto 20 ml de cido actico glacial. Resultado positivo de colina: rosado de Rf :0.5 Cubrir la zona revelada y utilizar ahora Iodoplatinico , que en caso de espermita positiva dar color prpura con relacin de frentes 0.85 Yodo Platinico : Cloruro de platino al 10% p/v = 1 ml Ioduro de potasio al 4% p/v = 25 ml Agua destilada c.s.p = 100ml Standards : Colina: 10 mg de clorhidrato de colina + 10 ml de agua destilada Espermita: 1 mg de tetraclorhidrato de espermita + 1 ml de agua destilada Semen: 1ml de semen humano fresco + 4 ml de ClH 1 N

5. Mtodos Electroforticos
Este es un mtodo bidimensional que se realiza sobre papel combinando mtodos electroforticos con cromatogrficos que permite la separacin de la espermina de los aminocidos del semen. Primero se realiza la resolucin electrofortica en una solucin de piridina-cido actico-agua ph 3.9 (3:10:488) Luego se realiza la corrida cromatogrfica en papel con un lquido resolutivo compuesto der n butranol -cido actico-agua (12:3:5) y el revelado con una solucin acetnica de nihidrina al 0.25% con calentamiento a estufa de 80 C luego de la aspersin. La desventaja que presenta este mtodo es que no analizara simultneamente la colina, para lo que se debera realizar otra corrida electrofortica con igual solvente y testigos de colina y espermina . Revelando con el reactivo de Dragendorff como fue explicado anteriormente. El punto interesante en esta tcnica es la constancia numrica de 11 aminocidos entre los cuales esta la presencia cuantitativa de la ornitina , que debe provenir de la arginina , ya que la ornitina no es proteno gentica. Un mtodo electrofortico para la identificacin de la fosfatasa cida consiste en la investigacin de esta banda con el fosfato de 4- metil umbeliferol que se agrega sobre la placa en un papel impregnado con el reactivo en solucin buffer de ph 3. La fosfatasa cida catalizar la hidrlisis liberando la metil umbeliferota, que es fuertemente fluorescente en azul plido. A diferencia de otras fosfatasas cidas, la prosttica presenta mayor movilidad y actividad, por lo que su fluorescencia ser muy superior a las dems. En el caso de la sangunea, gracias a la composicin de la archilamida se provoca la inhibicin de la fosfatasa eritrocitaria .

6. Mtodos Enzimticos sobre la Fosfatasa cida:

Fosfatasa cida es cualquier enzima capaz de hidrolizar un fosfato orgnico en medio cido. La proporcin de esta enzima encontrada en el esperma no es comparable con la encontrada en ninguna otro fluido biologico . La fosfatasa cida prosttica produce la hidrlisis de la fosforil colina en cido fosfrico y colina. Esta enzima acta entre un ph 4.5 5. El mtodo prctico para medir la cantidad de fosfatasa cida fue derivado del trabajo de King y Armstrong quienes encontraron que el clculo de la cantidad de fenol liberado por un subestrato de disodio - fenil fosfato proporciona una medida fehaciente del grado de hidrlisis del subestrato producido por la fosfatasa . Los valores de esta enzima en fluido seminal se expresarn en valores King - Armstrong y debern ser superiores a 30 unidades.

Semen y fluidos vaginales Luego de una denuncia de ataque sexual o violacin, es usual que la victima sea examinada por un medico legista. Durante este examen, se obtienen muestras para estudio forense detallado. Hisopos con material obtenidos de orificios vaginal, anal y oral, vellos combinados obtenidos de la zona genital, material bajo las uas e incluso material proveniente de las fosas nasales son algunos de los ejemplos de material a comparar. Las ropas de la victima son tambien tomadas para estudio detallado (fluidos corporales, ADN, cabellos, fibras, etc.). Durante un ataque sexual o violacin (hombre a mujer) el semen del atacante puede o no ser transferido ya sea si tuvo lugar la penetracin. Durante la investigacin del caso denunciado, el perito examinara (quimica y microscopicamente) los hisopos obtenidos y ropa de la victima en busca de trazas de semen. El semen no siempre es detectado, por ejemplo, el asaltante puede haber utilizado un preservativo, puede no ocurrir la eyaculacion, o el donante se pudo haber hecho la vasectomia o tener un bajo recuento de esperma. (Si se utilizo un condon pueden analizarse los hisopos en busca de lubricantes de preservativos). Si ocurrio la eyaculacin la deteccin de semen depende de varios factores tal como si la victima se bao luego del incidente denunciado o si ha transcurrido cierto tiempo antes del examen

medico. El material vaginal tambin puede transferirse durante el coito. el material vaginal contiene celulas epitaliales de la pared vaginal el cual las cuales se parecen microscopicamente a las celulas presentes en una eyaculacin de semen. En casos de penetracin sexual, la perfilacin gentica puede ayudar si se obtiene una mezcla de un hisopado peneano del sospechoso y nuestros cientificos estan altamente entrenados en la interpretacin de estas mezclas compleja. Otras secreciones corporales tales como orina y heces pueden ser utilizadas como evidencia forense, y pueden ser buscadas y analizadas por la fiscalia. Como puede verse, la ciencia forense utilizada en estos casos puede ser compleja y detallada con variedad de tecnicas cientificas aplicadas. Algunas de estas tecnicas, como la perfilacion genetica, son extremadamente sensibles, y potencialmente abiertas a contaminacin. Por supuesto, encontrar fluidos corporales es una cosa, e interpretar de quien proviene y como llego alli puede ser muy complejo. En muchos casos violentos existe presencia de sangre, la cual puede ser sometida a analisis de patrones de manchas de sangre. Otros tipos de evidencia tal como el examen de pruebas de transferencia de fibras textiles, pueden estar presentes en casos de ataque sexual. Al contrario de las creencias populares, las trazas identificables de semen en los hisopados vaginales no siempre son concluyentes. Los cientificos forenses tienden a usar una combinacin de estudios quimicos y microscopicos para este proposito. Los estudios quimicos se aplican primero, y detectan la presencia de una substancia hallada en niveles particularmente altosen el semen humano conocido como fosfatasa acida prostatica. La dificultad radica en que el material vaginal en si mismo contiene cierta actividad de fosfatasa acida prostatica de por si y, aunque usualmente da un resultado ligeramente diferente en el test, puede en ocasiones ser confundido con lo que puede esperarse de trazas de semen. Los test microscopicos involucran tratar algunos materiales estraidos de los hisopos con una combinacin de tintas biologicas las cuales reaccionan con diferentes partes del espermatozoide, para luego buscar las cabezas de espermatozoide bajo el microscopio (las colas de los espermatozoides son particularmente fragiles y tienden a desprenderse de las cabezas). Las dificultades aqu pueden involucrar que identificar lo que es, y no es un esperma donde que hay muy pocos y, por una razn u otra, pueden ser de mala calidad y no tan fcilmente identificados o teidos tan caractersticamente como podra ser el caso. Nuestros peritos tienen amplia experiencia tratando con estos complejos casos de ataque sexual desde el punto de vista de la fiscalia y la defensa y pueden utilizar su experiecia para examinar un caso en detalle. Por ejemplo, pueden:

Re-examinar las evidencias previamente examinadas por la fiscalia, buscando fluidos no hallados previamente y asegurarse que no se pierda ninguna otra evidencia. Pueden existir trazas de ADN de otras personas, diferentes al acusado, que no han hallados previamente; Examinar los tipos de fluidos corporales hallados, y donde fueron hallados y la interpretacion hecha por la fiscalia, hallados e interpretarlos para probar las distintas hipotesis producidas. Determinar la posibilidad de un escenario alternativo y realista respecto a como se transfirieron

estos fluidos

hequar si los procedimientos utilizados para examinar la evidencia y cualquier perfilacion genetica; comprobando si cumplen con los requisitos de laboratorio, trazabilidad de las muestras, registro adecuado y validez juridica; Chequear si existe cualquier posibilidad de contaminacin de las evidencias. La perfilacion genetica y deteccion de semen y material vaginal son tecnicas muy sensibles; discutir la interpretacion de los patrones con el perito oficial, explorando debilidades y fortalezas de la interpretacin; Chequear y valorar la credibilidad de los metodos y pruebas volcados en el informe oficial; Observar y explorar alternativas realistas y viables a la interpretacion de la evidencia y trasladarlo en como/cuando ocurrieron los eventos y como se produjeron cualquiera de los fluidos corporales transferidos a la evidencia; producir detallados informes de los hallazgos incluyendo fotografias y diagramas cuando fuera apropiado