(Universidad Del Per, DECANA DE AMRICA)

GENETICA BACTERIANA Tipos de recombinacin gentica: conjugacin, transformacin y transduccin

Mg. Sc. Estela Memenza Z. 2013 - II

RECOMBINACIN GENTICA

VS

TRANSFERENCIA GENTICA

ADN mvil

Bacteria Donante Pili

Bacteria Receptora

Donante

Nuevo Donante

RECOMBINACIN GENTICA BACTERIANA

Transferencia de una porcin de ADN de una bacteria donante que se incorpora al ADN de una clula receptora que recibe el nombre de recombinante (Transferencia horizontal).

CONJUGACIN

TRANSFORMACIN

TRANSDUCCIN

DIVERSIDAD GENTICA, SUPERVIVENCIA Y ADAPTACIN

1. Conjugacin
Transferencia de un segmento de ADN contenido en un plsmido mediante el contacto clula a clula.
Ejem.: Salmonella Escherichia coli Pseudomonas Vibrio

Plsmido

Pili sexuales otros

2. Transformacin
Experimento de Frederick Griffith
Bacterias vivas encapsuladas Bacterias vivas no encapsuladas Bacterias muertas encapsuladas Mezcla de bacterias patgenas muertas y vivas avirulentas

Colonias de bacterias encapsuladas

Colonias de bacterias no encapsuladas

Sin aislamiento

Colonias de bacterias encapsuladas

2. Transformacin
Transferencia de un segmento de ADN de una clula (lisada) a otra clula competente sin requerir contacto entre ellas o de ni ningn mediador.
Ejem.: Streptococcus Staphylococcus Haemophilus Bacillus Neisseria Pseudomonas Otros gneros.

Competent cell

3. Transduccin
Transferencia de un segmento de ADN de una clula a otra mediante un virus bacteriano (bacterifago).

TRANSDUCCIN GENERALIZADA Ciclo Ltico

TRANSDUCCIN ESPECIALIZADA Ciclo Lisognico

a. Transduccin Generalizada Ciclo Ltico

a. Transduccin Especializada Ciclo Lisognico

Profago lisognico

BIOTECNOLOGA
Karl Ereky (1919): Todos los mtodos utilizados para convertir materia prima en bienes utilizando en alguna etapa organismos vivos o sus productos. Gutirrez Correa (2005): Aplicacin de los procesos biolgicos desarrollados por clulas microbianas, animales y vegetales, por sus componentes o por sus enzimas en ingeniera para la obtencin de bienes y servicios.

Tecnologa del ADN recombinante

ADN Recombinante
Molcula artificial formada por la unin de secuencias de ADN provenientes de dos organismos de especies diferentes que normalmente no se encuentran juntos. Se produce una modificacin gentica por la adicin de un nuevo segmento de ADN al organismo, con modificacin de rasgos existentes o la expresin de nuevos rasgos (protenas recombinantes).

Tecnologas del ADN recombinante

Diversas tcnicas que permiten manipular las molculas de ADN y difieren de la recombinacin gentica que ocurre sin intervencin dentro de la clula. El proceso consiste en tomar una molcula de ADN de un organismo (virus, animales, plantas, bacterias) y colocarla dentro de otro organismo. Permite estudiar la expresin de un gen, para producir protenas en el tratamiento de una enfermedad gentica, vacunas o con fines econmicos y cientficos.

Tecnologas del ADN recombinante

Las ms importantes son:
Clonacin del ADN mediante el cual se consigue que un fragmento de ADN se integre a un gnico autorreplicante (plsmido) que habita en una bacteria, de tal manera que se generen muchos miles de millones de copias idnticas.
Plsmido circular de la Molcula de ADN Plsmido de ADN lineal con extremos cohesivos

Clivaje por la nucleasa de restriccin

Unin covalente por la ADN ligasa

Molcula del plsmido de ADN conteniendo el ADN cromosmico insertado Uno de muchos fragmentos de ADN producidos por el corte del ADN cromosmico con la misma enzima de restriccin

Plsmido - Vector de Clonacin

Ingeniera Biolgica
Metodologa del ADN recombinante. Herramientas y mtodos que permiten la manipulacin del material gentico in vitro: - Extraccin de cidos nucleicos - Clonacin del gen de inters - Transformacin de bacterias - Seleccin de bacterias recombinantes

Ingeniera Biolgica
Objetivo: Aislar, Caracterizar y Manipular el ADN (secuenciacin, sntesis de oligonucletidos, PCR, etc.) Enzimas fundamentales: - Endonucleasas de restriccin - Ligasas - Polimerasas - Transcriptasa reversa

Proceso de clonacin de un gen en bacterias

1. Obtencin de plsmido
recombinante

2. Transformacin de bacterias

3. Seleccin de bacterias transformadas

4. Crecimiento de bacterias transformadas

5. Aislamiento de los plsmidos recombinantes

Produccin de protenas recombinantes

1. Obtencin del gen de inters 2. Clonacin del vector 3. Transformacin de la bacteria o levadura que producir la levadura. 4. Seleccin de la cepa pura 5. Proceso de produccin 6. Extraccin de la protena recombinante 7. Purificacin del producto 8. Formulacin

Obtencin de gen de inters

Clonacin del vector

Introduccin del plsmido en las clulas

Seleccin de bacterias recombinantes

Extraccin y Purificacin
Extraccin del producto: Protena recombinante intracelular Protena recombinante extracelular Metabolismo celular
Purificacin del producto: Medio del cultivo Biomasa celular

Produccin de insulina recombinante

Discos tomados de hojas de tabaco

Discos de hoja incubados con Agrobacterium modificada por ingeniera durante 24 h

INGENIERA GENTICA: PLANTA TRANSGNICA

El medio selectivo solo permite proliferar a las clulas vegetales que han adquirido el ADN de la bacteria

Callo

Tallos

Medio inductor de tallos Cambio del medio inductor de tallos a medio inductor de races Crecimient o de la planta enraizada

Planta adulta que porta el transgn que estaba originalmente en la bacteria

Clula bacteriana

Clula vegetal

Citosol
Transgn de inters Plsmido recombinante en Agrobacterium Repeticiones de 25 pares de nucletidos del T-ADN Gen marcador seleccionable

Cromosoma vegetal

Enzimas recombinantes en la industria alimentaria

Enzima -Amilasa Microorgaanismos Bacillus subtilis Uso Licua el almidn en dextrina en la produccin de jarabes Tratamiento de textiles Clarificacin de jugos concentrados al degradar pectinas provenientes de restos de semillas Eliminar azcares de huevos y evitar la aparicin de olores anormales durante su deshidratacin

Pectinasas

Aspergillus oryzae

Glucosa oxidasa y catalasa

Aspergillus niger

Lipasa

Aspergillus oryzae

Fabricacin de concentrados de aceites de pescado. Fabricacin de detergentes

Obtencin de jarabes ricos en fructuosa a partir de glucosa

Glucosa isomerasa

Streptomyces lividens

-Glucanasa

Levaduras cerveceras

Favorece la filtracin del producto.

Protenas recombinantes de uso teraputico

Protenas
Insulina Hormona de crecimiento Eritropoyetina FactorVIII-C Activador del plasminogeno Interferon alfa2

Microorgaanismos
E. coli recombinante E. coli recombinante o celulas de mamfero recombinante celulas de mamfero recombinante celulas de mamfero recombinante E. coli recombinante

Produccin de productos naturales